AKTIVITAS ANTIBAKTERI KOMBINASI EKSTRAK ETANOL KULIT BUAH DELIMA

Transkripsi

1 AKTIVITAS ANTIBAKTERI KOMBINASI EKSTRAK ETANOL KULIT BUAH DELIMA (Punica granatum L.) DAN SIPROFLOKSASIN TERHADAP Pseudomonas aeruginosa SENSITIF DAN MULTIRESISTEN ANTIBIOTIK NASKAH PUBLIKASI Oleh : SANI FITRIATI K FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA SURAKARTA

2 2

3 AKTIVITAS ANTIBAKTERI KOMBINASI EKSTRAK ETANOL KULIT BUAH DELIMA (Punica granatum L.) DAN SIPROFLOKSASIN TERHADAP Pseudomonas aeruginosa SENSITIF DAN MULTIRESISTEN ANTIBIOTIK ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF THE COMBINATION ETHANOL EXTRACT OF POMEGRANATE PEEL (Punica granatum L.) AND CIPROFLOXACIN AGAINST Pseudomonas aeruginosa BACTERIA AND MULTIRESISTANT ANTIBIOTIC Sani Fitriati, Ratna Yuliani, dan Peni Indrayudha Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta Jl. A Yani Tromol Pos I, Pabelan Kartasura Surakarta ABSTRAK Salah satu cara penanggulangan resistensi bakteri adalah kombinasi produk tanaman alam dengan antibiotik. Siprofloksasin merupakan antibiotik pilihan pertama untuk mengobati infeksi Pseudomonas aeruginosa. Kulit buah delima terbukti memiliki aktivitas antibakteri terhadap Pseudomonas aeruginosa. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri dan efek kombinasi ekstrak etanol kulit buah delima (Punica granatum L.) dengan antibiotik siprofloksasin terhadap Pseudomonas aeruginosa sensitif dan multiresisten antibiotik. Kulit buah delima diekstrasi dengan metode maserasi menggunakan penyari etanol 96%. Uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan metode difusi disk. Perbandingan kombinasi yang dilakukan yaitu 75:25 (7,5 µl ekstrak dan 2,5 µl siprofloksasin), 50:50 (5 µl ekstrak dan 5 µl siprofloksasin), dan 25:75 (2,5 µl ekstrak dan 7,5 µl siprofloksasin) pada kosentrasi ekstrak etanol kulit buah delima 3 mg/disk dan siprofloksasin 1,96 µg/disk. DMSO 100% digunakan sebagai kontrol negatif, ekstrak etanol kulit buah delima 3 mg/disk dan siprofloksasin 1,96 µg/disk digunakan sebagai kontrol positif. Pengamatan hasil dilakukan dengan mengukur besarnya diameter zona hambatan di sekitar disk. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kombinasi ekstrak etanol kulit buah delima dan siprofloksasin pada perbandingan 75:25; 50:50; dan 25:75 memiliki aktivitas antibakteri dan berefek antagonis terhadap Pseudomonas aeruginosa sensitif dan multiresisten antibiotik. Kata kunci : Punica granatum L., siprofloksasin, Pseudomonas aeruginosa, kombinasi antibakteri. ABSTRACT One way to overcome bacterial resistance is combining natural plants with antibiotics. Ciprofloxacin is the first line antibiotic against infection caused 1

4 by Pseudomonas aeruginosa. Pomegranate peel is proven having antibacterial activity against Pseudomonas aeruginosa. The purpose of this research is to investigate antibacterial activity and the effect combination of pomegranate peel (Punica granatum L.) extract with ciprofloxacin against sensitive and multiresistant Pseudomonas aeruginosa. Pomegranate peel was extracted with maceration method by ethanol 96%. Antibacterial activity test was done by disc diffusion methode. The ratio of ethanol extract of pomegranate peel and ciprofloxacin were 75:25 (7,5 µl extract and 2,5 µl ciprofloxacin), 50:50 (5 µl extract and 5 µl ciprofloxacin), and 25:75 (2,5 µl extract and 7,5 µl ciprofloxacin). The concentration of ethanol extract of pomegranate peel was 3 mg/disc and ciprofloxacin was 1,96 µg/disc. DMSO 100% was used as negative control, and ethanol extract of pomegranate peel 3 mg/disc and ciprofloxacin 1,96 µg/disc was used as positive control. The observation of the results was done by measuring diameter of inhibition zone around disc. The results of this observation show that the combination ethanol extract of pomegranate peel and ciprofloxacin in ratio of 75:25, 50:50, and 25:75 have antibacterial activity and antagonist effect against sensitive and multiresistant Pseudomonas aeruginosa. Keywords: Punica granatum L., ciprofloxacin, Pseudomonas aeruginosa, antibacterial combination. PENDAHULUAN Penyakit infeksi merupakan jenis penyakit yang paling banyak diderita oleh penduduk negara berkembang, termasuk Indonesia (Radji, 2011). Penyakit ini merupakan penyakit yang patogen atau agennya memiliki kemampuan untuk masuk, bertahan, dan berkembang biak di dalam tubuh (Timmreck, 2005). Infeksi salah satunya dapat disebabkan oleh bakteri, misalnya bakteri Pseudomonas aeruginosa (Radji, 2011). Pseudomonas aeruginosa sangat penting diperhatikan karena merupakan bakteri utama dalam infeksi nosokomial. Bakteri ini menyebabkan beberapa penyakit infeksi yaitu dermatitis, otitis eksterna, folikulitis, infeksi pada mata, infeksi pada luka bakar, infeksi pada saluran napas bagian bawah, saluran kemih, dan organ lain. Di bangsal luka bakar atau unit perawatan penyakit kanker, prevalensi bakteri P. aeruginosa mencapai lebih dari 30% dari semua penyebab infeksi (Radji, 2011). 2

5 Upaya penanggulangan penyakit infeksi dapat dilakukan dengan antibiotik (Radji, 2011). Siprofloksasin merupakan salah satu obat antibiotik pilihan pertama untuk penanganan terhadap infeksi P. aeruginosa (Goodman dan Gilman, 2008). Hasil uji sensitivitas siprofloksasin menunjukkan bahwa rata-rata diameter zona hambat P. aeruginosa (4,72 cm) lebih tinggi dibandingkan terhadap Staphylococcus aureus (3,73 cm) dengan konsentrasi siprofloksasin sebesar 0,3% (Ikonne and Odozor, 2009). Semakin luasnya penggunaan antibiotik, menimbulkan masalah baru yaitu meningkatnya resistensi bakteri terhadap antibiotik (Mardiastuti dkk., 2007). Jombo et al. (2008) menyebutkan bahwa 100% isolat P. aeruginosa dari sampel urin di UTH (University Teaching Hospital) Nigeria telah resisten terhadap penisilin, kloksasilin, tetrasiklin, nitrofurantoin, dan asam nalidiksat. Meningkatnya resistensi bakteri terhadap antibiotik yang telah ada, harus diimbangi dengan penemuan obat baru. Hal ini mendorong untuk ditemukannya produk alternatif pengganti yang lebih poten, murah, dan memiliki efek samping yang lebih kecil sehingga resistensi bisa diatasi. Salah satu alternatif untuk mengatasi masalah resistensi antibiotik yaitu kombinasi produk tanaman alam dengan antibiotik (Jayaraman et al., 2010). Penelitian Nweze dan Eze (2009) menyatakan bahwa kombinasi antara ekstrak etanol daun Ocimum gratissimum L. dengan siprofloksasin memberikan hasil sinergis dalam menghambat P. aeruginosa. Ekstrak etanol daun Ocimum gratissimum L. menaikkan aktivitas antibiotik siprofloksasin memperlebar diameter zona hambat yang awalnya 29 mm menjadi 35 mm. Selain daun Ocimum gratissimum L., tanaman yang memiliki aktivitas antibakteri terhadap P. aeruginosa yaitu delima (Punica granatum L.). Penelitian Khan dan Hanee (2011) menunjukkan bahwa ekstrak etanol kulit buah delima pada konsentrasi 500 mg/ml memiliki aktivitas antibakteri terhadap P. aeruginosa dengan diameter zona hambat sebesar 25,5 mm. Senyawa yang bertanggung jawab terhadap aktivitas antimikroba pada kulit buah delima yaitu elagitanin punicalagin (Machado et al., 2002). 3

6 Berdasarkan hal tersebut, menarik untuk diteliti aktivitas antibakteri kombinasi ekstrak etanol kulit buah delima (Punica granatum L.) dan siprofloksasin terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa sensitif dan multiresisten antibiotik dengan metode difusi. METODOLOGI PENELITIAN Alat dan Bahan Alat. Alat yang digunakan yaitu timbangan (Precisa), corong Buchner, rotary evaporator (Heidolph), penangas air (Memmert), ose, glassware (Pyrex), inkubator (Memmert), mikroskop (Olympus model CKX41), Laminar Air Flow (LAF) (CV.Srikandi), autoklaf (My Life), oven (Memmert), cawan petri (Pyrex), mikropipet (Socorex), spreader glass, vortek (Thermolyne Corporation), dan shaker incubator (Exella 24 New Brunswick Scientific). Bahan. Bahan yang digunakan yaitu kulit buah delima (Punica granatum L.) yang diperoleh dari Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Tanaman Obat dan Obat Tradisional (B2P2TOOT) Tawangmangu Karanganyar, etanol 96%, Pseudomonas aeruginosa sensitif dan multiresisten antibiotik yang diperoleh dari Laboratorium Biologi Farmasi Fakultas Farmasi UMS, cat Gram (A, B, C, dan D), media KIA (Kligler Iron Agar) (Oxoid), media LIA (Lysine Iron Agar) (Oxoid), media MIO (Motility Indole Ornithine) (Oxoid), antibiotik siprofloksasin infusion 2,0 mg/ml (PT. Dexa Medica), sterilised water for injection (Otsuka), media Mueller Hinton (MH) (Oxoid), media Brain Heart Infusion (BHI) (Oxoid), NaCl (Merck), akuades, DMSO 100% (Merck), disk kosong, disk antibiotik (kloramfenikol, eritromisin, tetrasiklin, siprofloksasin, dan ampisilin), alkohol, dan spiritus. Jalannya penelitian Determinasi Tanaman. Tahap pertama penelitian adalah melakukan determinasi tanaman delima (Punica granatum L.) dengan menggunakan buku acuan Flora of Java karangan Backer dan Van den Brink (1965) dan An Integrated System of Classification of Flowering Plants karangan Cronquist, A. (1981). Determinasi tanaman dilakukan di Laboratorium Biologi Farmasi Fakultas Farmasi UMS. 4

7 Penyiapan Bahan. Buah delima tersebut dikupas kulitnya, kemudian kulitnya dicuci bersih dan dikeringkan di bawah sinar matahari dengan ditutupi kain hitam. Kulit buah delima yang sudah kering, diserbuk dengan menggunakan blender kemudian diayak. Pembuatan Ekstrak Etanol Kulit Buah Delima. Metode penyarian yang digunakan ialah maserasi. Simplisia kulit buah delima sebanyak 1500 gram direndam dengan 7 liter etanol 96% sampai terendam kira-kira di atas permukaan di dalam wadah toples kaca yang ditutup rapat dan disimpan selama 3 hari terlindung dari cahaya langsung sambil sesekali diaduk. Setelah itu, hasil penyarian disaring dengan corong Buchner, kemudian dipekatkan dengan menggunakan rotary evaporator pada suhu 60. Selanjutnya, diuapkan di atas penangas air hingga didapatkan ekstrak kental kulit buah delima. Sterilisasi alat dan bahan. Alat-alat gelas berupa gelas ukur, tabung reaksi, cawan petri dicuci bersih dan dikeringkan. Kemudian alat-alat dibungkus kertas, dan disterilkan dengan oven pada suhu 170 C selama 1 jam. Alat dan bahan yang tidak tahan pemanasan kering seperti media, akuades, blue tips, yellow tips, white tips, dan eppendorf disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121 C selama 20 menit. Pembuatan media. Media ditimbang dan dilarutkan dalam akuades. Banyaknya media yang ditimbang untuk tiap liternya adalah sebagai berikut : media MH 38 gram, media BHI 37 gram, media KIA 55 gram, media LIA 34 gram, media MIO 31 gram, dan NaCl 9 gram. Pengecatan Gram. Koloni bakteri diambil 1 ujung mata ose steril dan diratakan pada gelas obyek lalu dipanasi di atas nyala bunsen hingga kering, kemudian ditetesi formalin 1% ditunggu 5 menit, dikeringkan lagi dan preparat siap dicat. Preparat digenangi dengan cat Gram A selama 1-3 menit, kemudian cat dibuang tanpa dicuci dengan air. Preparat selanjutnya digenangi cat Gram B selama 0,5 1 menit, setelah itu cat dibuang dan preparat dicuci dengan air. Preparat kemudian ditetesi cat Gram C sampai warna cat tepat dilunturkan. Setelah itu preparat digenangi cat Gram D selama 1 2 menit kemudian dicuci dan dikeringkan dalam udara kamar. Preparat diperiksa di bawah mikroskop dengan pembesaran 100x. 5

8 Uji Biokimiawi. Bakteri ditanam pada media KIA (Kligler Iron Agar), LIA (Lysine Iron Agar), dan MIO (Motility Indole Ornithine), selanjutnya diinkubasikan pada 37 C selama jam. Pembuatan suspensi bakteri. Bakteri dari stok bakteri diambil sebanyak dua sampai tiga koloni dengan menggunakan ose, kemudian dimasukkan pada media BHI single strength 5 ml dan diinkubasi menggunakan shaker incubator pada suhu 37 C selama 2-5 jam. Bakteri kemudian disamakan konsentrasinya dengan standar Mc Farland (10 8 CFU/mL) dengan cara manambahkan larutan salin hingga didapat kekeruhan yang sama dengan standar Mc Farland. Uji sensitivitas bakteri P. aeruginosa. Suspensi bakteri sebanyak 300 µl dengan konsentrasi 10 8 CFU/mL diinokulasi pada cawan petri berisi media MH dan beberapa disk antibiotik (kloramfenikol, ampisilin, tetrasiklin, eritromisin, dan siprofloksasin) diletakkan di atasnya. Selanjutnya diinkubasi selama jam pada suhu 37 C. Kemudian diameter zona hambat pada tiap-tiap disk diukur dan dibandingkan dengan standar resistensi bakteri terhadap masing-masing antibiotik. Pembuatan seri konsentrasi ekstrak etanol kulit buah delima. Seri konsentrasi ekstrak etanol kulit buah delima dibuat dengan mengambil ekstrak masing-masing 100 mg, 125 mg, dan 150 mg, kemudian dilarutkan dalam DMSO sampai 500 µl sehingga seri konsentrasi masing-masing 20% (2 mg/disk), 25% (2,5 mg/disk), dan 30% (3 mg/disk). Pembuatan seri konsentrasi siprofloksasin. Larutan stok 0,2% siprofloksasin diambil masing-masing 125 µl, 250 µl, dan 500 µl, kemudian dilarutkan dalam akua proinjeksi sampai 1 ml sehingga seri konsentrasi masing-masing 0,025% (1,96 µg/disk); 0,05% (3,75 µg/disk); dan 0,1% (7,85 µg/disk). Seri perbandingan kombinasi ekstrak etanol kulit buah delima dan siprofloksasin. Kombinasi ekstrak etanol kulit delima dan siprofloksasin yang diuji pada bakteri P. aeruginosa sensitif dan multiresisten antibiotik dibuat dengan perbandingan 75:25; 50:50; dan 25:75 hingga volume total di dalam disk sebesar 10 µl. Pengambilan ekstrak etanol kulit buah delima dan siprofloksasin berturut-turut adalah 7,5 µl:2,5 µl (2,25 mg:0,49 µg); 5 µl:5 µl (1,5 mg:0,98 µg); dan 2,5 µl:7,5 µl (0,75 mg:1,47 µg). 6

9 Uji aktivitas antibakteri metode difusi padat. Suspensi bakteri diambil sebanyak 300 µl dengan konsentrasi 10 8 CFU/mL diteteskan ke permukaan media MH dalam cawan petri dan diratakan menggunakan spreader glass steril. Kemudian tiga seri perbandingan konsentrasi kombinasi ekstrak etanol kulit delima dan siproflokasasin, siprofloksasin (kontrol positif), ekstrak etanol kulit buah delima (kontrol ekstrak), dan DMSO (kontrol pelarut) diambil sebanyak 10 µl dan diteteskan pada disk kosong 6 mm, lalu setelah disk kering diletakkan di atas media. Selanjutnya dipreinkubasi pada suhu kamar selama 30 menit. Setelah itu diinkubasi pada temperatur 37 C selama jam, kemudian dilakukan pengamatan dengan menentukan diameter zona hambatnya. HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN Hasil Determinasi Tumbuhan. Determinasi bertujuan untuk menetapkan kebenaran yang berkaitan dengan ciri-ciri morfologi secara makroskopis tanaman delima (Punica granatum L.) terhadap kepustakaan, serta menghindari terjadinya kekeliruan terhadap tanaman yang digunakan. Pustaka yang digunakan yaitu Flora of Java karangan Backer dan van den Brink, 1965 dan An Integrated System of Classification of Flowering Plants karangan Cronquist, A., Determinasi dilakukan di Laboratorium Biologi Farmasi, Fakultas Farmasi UMS. Hasil dari determinasi ini dapat disimpulkan bahwa tanaman yang digunakan dalam penelitian ini benar spesies Punica granatum L. Hasil Pembuatan Ekstrak Etanol Kulit Buah Delima. Kulit buah delima diekstraksi dengan metode maserasi. Keuntungan dari metode maserasi yaitu pengerjaan dan peralatan yang digunakan sederhana, tetapi metode ini memiliki kerugian yaitu pengerjaannnya lama, butuh waktu beberapa hari untuk mendapatkan ekstrak kental, dan penyariannya kurang sempurna (Depkes RI, 1986). Hasil ekstrak etanol kulit buah delima diperoleh rendemen sebesar 5,75%, yaitu dari 1500 g serbuk kulit buah delima diperoleh 86,27 g ekstrak. Identifikasi Bakteri. Identifikasi bakteri ini dilakukan dengan cara pengecatan Gram dan uji biokimiawi. Pengecatan Gram bertujuan untuk mengetahui bakteri tergolong Gram positif atau Gram negatif. Hasil pengecatan Gram menunjukkan 7

10 bahwa bakteri P. aeruginosa sensitif dan multiresisten termasuk Gram negatif, berwarna merah dan berbentuk batang yang menggerombol. Bakteri Gram negatif mengandung kadar lipid tinggi yang larut dengan alkohol 96% (cat Gram C), sehingga pori-pori dinding sel membesar. Warna ungu dan kompleks kristalyodium dari Cat Gram A dan B dilepaskan akibatnya bakteri menjadi tidak berwarna. Sel akan menyerap zat warna kontras air fuksin atau safranin (cat Gram D) yang menyebabkan bakteri Gram negatif berwarna merah (Radji, 2010). Uji biokimiawi dilakukan untuk memastikan bahwa bakteri yang akan diuji benar bakteri P. aeruginosa. Uji biokimiawi yang digunakan yaitu media KIA, LIA, dan MIO. Identifikasi sifat biokimia terhadap bakteri P. aeruginosa sensitif maupun multiresisten pada media KIA dihasilkan warna merah, hal ini menunjukkan bakteri tidak memfermentasi glukosa maupun laktosa sehingga media tetap bersifat alkali. Posisi media tidak terangkat dari dasar tabung dan tidak terbentuknya warna hitam, hal ini berarti tidak terbentuk gas dan H 2 S. Pada media LIA dihasilkan warna ungu, hal ini menunjukkan bakteri mengalami reaksi dekarboksilasi lisin menghasilkan reaksi basa. Hasil uji pada media MIO juga dihasilkan warna ungu, karena bakteri dapat mendekarboksilasi ornitin yang menghasilkan reaksi basa. Selain itu juga di daerah tusukan membentuk adanya kabut yang menyebar, sebab bakteri mempunyai sifat motil atau bergerak (John, 2012). Hasil Uji Sensitivitas Bakteri. Uji sensitivitas bakteri P. aeruginosa multiresisten terhadap beberapa antibiotik dilakukan untuk memastikan bahwa bakteri yang digunakan benar bersifat multiresisten. Pengujian dilakukan dengan metode Kirby Bauer atau difusi disk dengan lima macam antibiotik, yaitu siprofloksasin (CIP), ampisilin (AMP), tetrasiklin (TE), kloramfenikol (C), dan eritromisin (E). Hasil uji didasarkan pada pengukuran diameter zona hambatan di sekitar disk antibiotik atau disebut zona radikal dan dibandingkan dengan standar diameter antibiotik. Hasil yang diperoleh dari uji sensitivitas P. aeruginosa sensitif dapat disimpulkan bahwa bakteri bersifat sensitif terhadap antibiotik siprofloksasin, tetrasiklin, kloramfenikol, eritromisin, dan telah resisten terhadap ampisilin (Tabel 1). Uji sensitivitas pada P. aeruginosa multiresisten memberikan 8

11 hasil bakteri telah resisten terhadap ampisilin dan eritromisin (Tabel 1). Sehingga dapat disimpulkan bahwa bakteri P. aeruginosa multiresisten benar bersifat multiresisten karena resisten terhadap 2 antibiotik. Bakteri telah resisten terhadap ampisilin terjadi karena bakteri memiliki kemampuan untuk memproduksi β-laktamase yang akan menghidrolisis ikatan pada cincin β-laktam molekul ampisilin dan mengakibatkan inaktivasi antimikroba, sedangkan resistensi terhadap eritromisin akibat mutasi pada target antibiotik (Pratiwi, 2008). Tabel 1. Hasil uji sensitivitas bakteri P. sensitif dan P. aeruginosa multiresisten terhadap siprofloksasin (CIP), ampisilin (AMP), tetrasiklin (TE), kloramfenikol (C), dan eritromisin (E) Disk antibiotik Standar resistensi zona hambat bakteri (mm) P. aeruginosa sensitif P. aeruginosa multiresisten Diameter Diameter zona hambat (mm) Keterangan zona hambat (mm) Keterangan CIP 5 µg Sensitif 19,875 Intermediet AMP 30 µg 14 8,25 (irradikal) Resisten 8 Resisten TE 30 µg 19 19,25 Sensitif 17,625 Intermediet C 30 µg Sensitif 15,375 Intermediet E 15 µg Intermediet 12,75 Resisten Uji Pendahuluan. Uji pendahuluan dilakukan untuk mengetahui besarnya konsentrasi ekstrak etanol kulit buah delima dan konsentrasi antibiotik siprofloksasin yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri P. aeruginosa sensitif dan multiresisten. Konsentrasi tersebut yang nantinya digunakan untuk kombinasi ekstrak dengan antibiotik. Metode yang digunakan dalam uji ini yaitu metode Kirby Bauer atau difusi disk. Hasil yang diamati adalah diameter zona hambat yang jernih di sekitar disk setelah inkubasi 37 C selama 18-24jam. Tabel 2. Hasil uji pendahuluan aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit buah delima terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa sensitif (A) dan bakteri Pseudomonas aeruginosa multiresisten (B), dan uji pendahuluan siprofloksasin pada bakteri Pseudomonas aeruginosa sensitif (C) dan Pseudomonas aeruginosa multiresisten (D) Bahan uji Diameter zona hambat (mm) P. aeruginosa sensitif P. aeruginosa multiresisten Ekstrak 2 mg/disk 9,17±0,28 10,58±0,14 Ekstrak 2,5 mg/disk 10,17±0,28 11,08±0,38 Ekstrak 3 mg/disk 11±0,00 11,75±0,00 DMSO - - Siprofloksasin 1,96 µg/disk 14,91±0,38 14,75±0,43 Siprofloksasin 3,75 µg/disk 16,25±0,25 16,17±0,52 Siprofloksasin 7,85 µg/disk 18,08±0,72 17,75±0,66 Akua pro injeksi - - 9

12 Pada uji pendahuluan terhadap ekstrak etanol kulit buah delima digunakan kontrol negatif DMSO 100%, sedangkan uji pendahuluan antibiotik siprofloksasin kontrol negatifnya yaitu akua pro injeksi. Hasil dari uji ekstrak etanol kulit buah delima pada konsentrasi 2 mg/disk; 2,5 mg/disk; dan 3 mg/disk terhadap P. aeruginosa sensitif diperoleh rata-rata diameter zona hambat berturut-turut 9,17 mm; 10,17 mm; dan 11 mm. Sedangkan pada P. aeruginosa multiresisten dengan konsentrasi yang sama diperoleh rata-rata diameter zona hambat berturut-turut 10,58 mm; 11,08 mm; dan 11,75 mm. Hasil uji antibiotik siprofloksasin dengan konsentrasi 1,96 µg/disk; 3,75 µg/disk; dan 7,85 µg/disk pada P. aeruginosa sensitif diperoleh rata-rata diameter zona hambat berturut-turut 14,91 mm; 16,25 mm; dan 18,08 mm. Sedangkan terhadap P. aeruginosa multiresisten menghasilkan rata-rata diameter zona hambat sebesar 14,75 mm; 16,17 mm; dan 17,75 mm. Dari hasil tersebut maka konsentrasi yang digunakan untuk uji kombinasi yaitu ekstrak etanol kulit buah delima 3 mg/disk dan siprofloksasin 1,96 µg/disk, karena diameter zona hambat yang diharapkan untuk uji kombinasi yaitu rentang antara mm. DMSO 100% dan akua pro injeksi tidak memiliki aktivitas antibakteri sehingga tidak mempengaruhi hasil uji. Uji Kombinasi Ekstrak Etanol Kulit Buah Delima dengan Antibiotik Siprofloksasin. Uji kombinasi ekstrak etanol kulit buah delima dengan antibiotik siprofloksasin bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri yang dihasilkan setelah dikombinasikan. Hasil yang diperoleh dapat berefek sinergis atau antagonis. Uji kombinasi dilakukan dengan menggunakan 3 perbandingan antara ekstrak dan antibiotik yaitu 75:25; 50:50; dan 25:75 dengan total volume disk 10 µl. Aktivitas antibakteri kombinasi pada perbandingan 75:25, 50:50, dan 25:75 pada P. aeruginosa sensitif dan multiresisten memberikan hasil rata-rata diameter zona hambat lebih kecil dari pada kontrol positifnya yaitu ekstrak dan siprofloksasin tunggal (Tabel 3), maka aktivitas antibakteri setelah dikombinasikan bersifat antagonis. Hasil kontrol negatif yaitu DMSO tidak terdapat diameter zona hambat, sehingga dapat dikatakan DMSO tidak 10

13 mempengaruhi hasil uji. Penelitian yang dilakukan oleh Nweze dan Eze (2009) yaitu kombinasi antara ekstrak etanol daun Ocimum gratissimum L. dengan siprofloksasin memberikan hasil sinergis dalam menghambat Pseudomonas aeruginosa. Hal ini ditunjukkan dengan kenaikan diameter zona hambat yang sebelumnya 29 mm menjadi 35 mm. Ekstrak daun Ocimum gratissimum L. dimungkinkan berpotensi sebagai efflux pump inhibitor (EPI) (Coutinho et al., 2011) dengan cara menghambat siprofloksasin sehingga tertahan dan konsentrasinya meningkat dalam sel bakteri. Selain itu Ocimum gratissimum L. bersifat bakterisida (Oussou et al., 2008) dan siprofloksasin juga bersifat bakterisida (Tambayong, 2002), sehingga didapatkan hasil sinergis karena keduanya sama-sama sebagai agen bakterisida. Kombinasi dua obat agen bakterisida cenderung bersifat sinergis (Goodman dan Gilman, 2008). Tabel 3. Hasil uji aktivitas antibakteri kombinasi ekstrak etanol kulit buah delima dengan siprofloksasin pada Pseudomonas aeruginosa sensitif dan multiresisten Bahan uji DMSO Ekstrak 3 mg/disk Siprofloksasin 1,96 µg/disk Kombinasi 75:25 Kombinasi 50:50 Kombinasi 25: 75 Keterangan : Kombinasi 75:25 = 7,5 µl ekstrak : 2,5 µl antibiotik (2,25 mg : 0,49 µg) Kombinasi 50:50 = 5 µl ekstrak : 5 µl antibiotik (1,5 mg : 0,98 µg ) Kombinasi 25: 75 = 2,5 µl ekstrak : 7,5 µl antibiotik (0,75 mg : 1,47 µg) Diameter zona hambat (mm) P. aeruginosa sensitif P. aeruginosa multiresisten ,83±0,3 11,33±0,4 15,58±0,1 15,08±0,1 9,50±0,0 9,50±0,3 9,92±0,1 10,00±0,3 10,42±0,1 10,75±0,3 Kombinasi ekstrak etanol kulit buah delima dan siprofloksasin terhadap P. aeruginosa sensitif maupun multiresisten pada penelitian ini menunjukkan efek tidak sinergis atau antagonis, hal ini kemungkinan karena ekstrak delima mekanisme kerjanya dapat sebagai agen bakteriostatik (Voss-Rech et al., 2011), sedangkan siprofloksasin bersifat bakterisida (Tambayong, 2002). Antibakteri yang bersifat bakteriostatik sering kali mengantagonis kerja antibakteri yang bersifat bakterisid, karena antibakteri bakteriostatik bekerja menghambat pembelahan sel dan sintesis protein, yang diperlukan untuk efek bakterisid sebagian besar senyawa bakterisida (Goodman dan Gilman, 2008). Hasil penelitian ini sama dengan penelitian yang dilakukan oleh Nweze dan Eze (2009) 11

14 yaitu kombinasi ekstrak etanol daun Ocimum gratissimum L. dan septrin memberikan hasil antagonis dalam menghambat P. aeruginosa. Hal tersebut ditunjukkan dengan diameter zona hambat septrin sebesar 23 mm, sedangkan ketika dikombinasikan dengan ekstrak etanol Ocimum gratissimum L. diameter zona hambatnya menjadi 12 mm. Septrin yang bersifat bakteriostatik (The Leeds Method of Menejement, 2008) mengantagonis kerja Ocimum gratissimum L. yang bersifat bakterisida (Oussou et al., 2008). Hasil kombinasi yang diperoleh menunjukkan semakin besar konsentrasi siprofloksasin, maka semakin besar diameter zona hambatnya. Hal ini dikarenakan siprofloksasin lebih poten dalam menghambat P. aeruginosa dibandingkan ekstrak etanol kulit buah delima. Siprofloksasin merupakan golongan floroquinolon yang mempunyai aktivitas antibakteri terhadap P. aeruginosa. Antibiotik ini bekerja dengan menghambat enzim girase DNA atau topoisomerase II, dengan cara menghambat replikasi DNA dan transkripsi (Mansoor, 2009). Penelitian yang dilakukan oleh Machado et al. (2002) menyatakan bahwa zat yang bertanggung jawab terhadap aktivitas antimikroba pada kulit buah delima yaitu elagitanin punicalagin. Elagitanin punicalagin termasuk dalam golongan senyawa tanin (Hernawan dan Setyawan, 2003), yang mekanisme kerjanya mengkerutkan dinding sel atau membran sel sehingga mengganggu permeabilitas sel itu sendiri. Akibat terganggunya permeabilitas, sel tidak dapat melakukan aktivitas hidup sehingga partumbuhannya terhambat atau bahkan mati (Ajizah, 2004). Selain itu mekanisme antibakteri dari elagitanin yaitu mengikat protein, mengikat pada adhesin, menghambat enzim, mengikat substrat, mengganggu kompleks dinding sel, merusak membran sel, dan metal ion complexation (Cowan, 1999). Hasil antagonis pada penelitian ini juga dimungkinkan karena mekanisme kerja yang berbeda antara ekstrak etanol kulit buah delima dan siprofloksasin. Hasil penelitian dimungkinkan dapat bersifat sinergis jika dikombinasikan dengan antibiotik yang sifatnya sama dengan ekstrak etanol kulit buah delima yaitu sebagai agen bakteriostatik, misalnya eritromisin. Selain itu juga kombinasi dimungkinkan akan bersifat sinergis jika dikombinasikan dengan antibiotik yang 12

15 memiliki mekanisme kerja yang sama dengan kandungan utama kulit buah delima elagitanin punicalagin, yaitu mengganggu atau merusak dinding sel, misalnya dikombinasikan dengan antibiotik golongan makrolida (eritromisin). Mekanisme aksi yang sama dapat menjadikan efek sinergis, seperti halnya pada penelitian Zhao et al. (2001) dengan mengkombinasi komponen epigallocatechin gallate dan antibiotik β-laktam terhadap Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus menghasilkan efek sinergis. Keduanya memiliki mekanisme kerja yang sama, yaitu menyerang peptidoglikan dalam dinding sel. Kesimpulan 1. Kombinasi ekstrak etanol kulit buah delima 30% dan siprofloksasin 0,025% pada perbandingan 75:25; 50:50; dan 25:75 memiliki aktivitas antibakteri terhadap Pseudomonas aeruginosa sensitif dan multiresisten antibiotik. 2. Kombinasi ekstrak etanol kulit buah delima dan siprofloksasin menunjukan efek antagonis dalam menghambat pertumbuhan Pseudomonas aeruginosa sensitif dan multiresisten antibiotik. Saran 1. Perlu dilakukan uji bioautografi untuk mengetahui senyawa dalam ekstrak etanol kulit buah delima yang beraktivitas sebagai antibakteri. 2. Perlu dilakukan penelitian lain tentang uji aktivitas antibakteri kombinasi ekstrak etanol kulit buah delima dengan antibiotik yang sifatnya sama dan mempunyai mekanisme kerja yang sama, misalnya eritromisin. DAFTAR ACUAN Ajizah, A., 2004, Sensitivitas Salmonella typhimurium Terhadap Ekstrak Daun Psidium guajava L. Bioscientiae, 1 (1), Backer, C.A. & den Brink, R.C.B., 1965, Flora of Java: Spermatophytes only Volume I, N.V.P. Noordhoff-Groningen-The Netherlands, 259. Coutinho, H. D. M., Matias, E. F. F., Santos, K. K. A., Santos, F. A. V., Braga, M. F. B. M., Souza, T. M., et al., 2011, Modulation of the norfloxacin 13

16 resistance in Staphylococcus aureus by Croton campestris A. and Ocimum gratissimum L., Biomedica, 31, Cowan, M. M., 1999, Plant Products as Antimicrobial Agents, American Society for Microbiology, 12 (4), Cronquist, A., 1981, An Integrated System of Classification of Flowering Plants, New York, Colombia University Press, 477. Depkes RI, 1986, Sediaan Galenik, 6, Jakarta, Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Goodman & Gilman, 2008, Dasar Farmakologi Terapi, Volume 2, diterjemahkan oleh Tim Alih Bahasa Sekolah Farmasi ITB, 1126, 1133, 1137, Jakarta, Penerbit Buku Kedokteran EGC. Hernawan, U. E. & Setyawan, A. D., 2003, Ellagitannin; biosynthesis, isolation, and biological activities, Biofarmasi, 1 (1), Ikonne, E. U. & Odozor, P. J., 2009, Comparative Efficacy of Topical Ciprofloxacin on Staphylococcus aureus and Pseudomonas aureginosa In Vitro, JNOA, 15 (8-15). Jayaraman, P., Sakharkar, M. K., Lim, C. S., Tang, T. H., & Sakharkar, K.R., 2010, Activity and Interaction of Antibiotic and Phytochemical Combination Againts Pseudomonas aeruginosa, International Journal of Biological Sciences, 6 (6), John, 2012, Differential Media: KIA, LIA, and MIO, (online), ( diakses tanggal 14 Mei 2012). Jombo, G. T. A., Jonah, P. & Ayeni, J. A., 2008, Multidrug Resistant Pseudomonas aeruginosa in Contemporary Medical Practice: Findings from Urinary Isolates at A Nigerian University Teaching Hospital, Nigerian Journal of Physiological Sciences, 23 (1-2), Machado, T. D., Leal, I. C. R., Amaral, A. C. F., dos Santos, K. R. N., da Silva, M. G. & Kuster, R. M., 2002, Antimicrobial ellagitannin of Punica granatum fruits, Journal of the Brazilian Chemical Society, 13, Mansoor, T., Musani, M. A., Khalid, G. & Kamal, M., 2009, Pseudomonas aeruginosa in Chronic Suppurative Otitis Media: Sensitivity Spectrum Against Various Antibiotics in Karachi, J Ayub Med Coll Abbottabad, 21 (2). 14

17 Mardiastuti, H. W., Karuniawati A., Kiranasari A., Ikaningsih, & Kadarsih R., 2007, Emerging Resistance Pathogen: Situasi Terkini di Asia, Eropa, Amerika Serikat, Timur Tengah dan Indonesia, Majalah Kedokteran Indonesia, 57 (3), Nweze, E. I. & Eze, E. E., 2009, Justification for the use of Ocimum gratissimum L. in herbal medicine and its interaction with disc antibiotics, BMC Complementary and Alternative Medicine, 9 (37). Oussou, K. R., Yolou, S., Boti, J. B., Guessennd, K. N., Kanko, C., Ahibo, C. & Casanova, J., 2008, Etude Chimique et Activite Antdiarrheique des Huiles Essentielles de Deux Plantes Aromatiques de la Pharmacopee Ivoirienne, European Journal of Scientific Research, 24 (1), Pratiwi, S. T., 2008, Mikrobiologi Farmasi, 164, 168, 170, 190, Jakarta, Erlangga. Radji, M., 2011, Buku Ajar Mikrobiologi Panduan Mahasiswa Farmasi dan Kedokteran, 68, 69, 99, 107, 201, , Jakarta, Penerbit Buku Kedokteran EGC. Sukandar, E. Y., Andrajati, R., Sigit, J. I., Adnyana, I. K., Setiadi, A. A. P. & Kusnandar, 2009, Iso Farmakoterapi, 947, Jakarta, PT. ISFI Penerbitan. Tambayong, J., 2002, Farmakologi Untuk Keperawatan, 143, Jakarta, Widya Medika. The Leeds Method of Management, 2008, Intravenous antibiotics and Pseudomonas aeruginosa, (online), ( diakses tanggal 6 juni 2012). Tjay, T. H. & Rahardja, K., 2007, Obat-obat Penting, Edisi 6, 43, Jakarta, PT. Gramedia. Timmreck, T. C., 2005, Epidemiologi Suatu Pengantar, Edisi 2, diterjemahkan oleh Fauziah, M., Apriningsih, Widyaastuti, Widyastuti, P., Sugiarti, M. & Ratnawati, 28, Jakarta, Penerbit Buku Kedokteran EGC. Voss-Rech, D., Klein, C. S., Techio, V. H., Scheuermann, G. N., Rech, G. & Fiorentin, L., 2011, Antibacterial activity of vegetal extracts against serovars of Salmonella, Ciencia Rural, 41 (2), Zhao, W. H., Hu, Z. Q., Okubo, S., Hara, Y., Shimamura, T., 2001, Mechanism of Synergy Between Epigallocatechin Gallate and B-Lactams Against Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 45 (6),