LAPORAN PRAKTIKUM KIMIA KLINIK PEMERIKSAAN KADAR UREUM

Transkripsi

1 LAPORAN PRAKTIKUM KIMIA KLINIK PEMERIKSAAN KADAR UREUM OLEH : 1. NI KOMANG NESA WIARTINI (P ) 2. IGA PUTU WIDIA SATIA PADMA (P ) 3. NI WAYAN GEK GITA ULANDARI (P ) 4. DESAK GEDE DIAN PURNAMA D (P ) 5. I GEDE ANGGA MARDIKA (P ) KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA POLITEKNIK KESEHATAN DENPASAR JURUSAN ANALIS KESEHATAN 2016

2 Hari, Tanggal : Kamis, 06 Oktober 2016 Tempat : Laboratorium Kimia Klinik JAK Poltekkes Denpasar I. TUJUAN a. Mahasiswa dapat mengetahui cara penentuan kadar urea b. Mahasiswa dapat melakukan penentuan dan pemeriksaan kadar urea pada sampel c. Mahasiswa dapat mengetahui kadar urea pada sampel II. METODE Kinetik enzimatik Talke and Schubert,Tifany et all III.PRINSIP Urea + 2H 2 O 2NH4 + + CO 3 2- NH oxoglutarate + NADH L-Glutamate + NADH + H 2 O Rentang milai absorbansi berubah pada panjang gelombang 340 nm,panjang gelombang ini sesuai untuk konsentrasi urea dalam serum IV. DASAR TEORI Ginjal Ginjal merupakan sepasang organ yang terletak di dalam pinggang, tepatnya di daerah retroperitoneal di regio lumbal superior setinggi vertebra torak12 lumbal 3. Ginjal kanan terdesak hati sehingga terletak lebih rendah dari ginjal kiri. Ginjal berbentuk seperti kacang (bean shaped). Pada orang dewasa, berat ginjal kanan sekitar gram dan ginjal kiri sekitar gram. Jika ginjal dipotong sagital, maka akan terdapat 2 bagian, yaitu bagian luar yang disebut korteks dan bagian dalam yang disebut piramida ginjal (medulla ginjal). ( Juwita Sesmiaty.2016 ). Ginjal normal mempunyai 3 fungsi pokok yaitu: ultrafiltrasi oleh glomerulus, reabsorbsi air dan padatan yang difiltrasi dalam tubulus, serta sekresi ion-ion organik dan non-organik tubulus. Dalam menangani penderita penyakit ginjal diperlukan bantuan pemeriksaan laboratorium. Disamping untuk menetapkan diagnosis penyakitnya, pemeriksaan laboratorium juga berperan untuk memantau fungsi ginjal. Pemeriksaan laboratorium fungsi ginjal mempunyai arti penting agar dokter tidak hanya mampu mengatasi penyakitnya, tetapi juga untuk mengevaluasi fungsi ginjal penderita tidak bertambah parah.fungsi ginjal dapat dievaluasi dengan berbagai uji laboratorium secara mudah. Langkah awal dimulai dengan pemeriksaan urinalisis lengkap, termasuk pemeriksaan sedimen urin. Berbagai informasi penting mengenai status fungsi ginjal dapat diperoleh dari urinalisis. Pengukuran kadar

3 nitrogen urea darah (BUN) dan kreatinin serum berguna untuk evaluasi gambaran fungsi ginjal secara umum.( Lailani Nuur Shabrina.2014 ). Setiap hari manusia menukar atau menggunakan 1 2 % dari total protein tubuh. Khususnya protein otot dan asam amino yang dibebaskan 75 80% digunakan kembali untuk sintesis protein yang baru. Nitrogen pada 20-25% dari asam amino sisanya membentuk ureum.( Yazhid Bashar.2013 ). Ureum Ureum adalah produk degradasi akhir,protein asam amino dan deaminasi. Amonia yang terbentuk dalam proses ini dimetabolisme menjadi urea di hati. Ini adalah jalur katabolisme yang paling penting untuk menghilangkan kelebihan-kelebihan nitrogen dalam tubuh manusia. Pada tahun 1914 Marshal memperkenalkan pengujian berdasarkan pada enzim urease untuk menentukan urea dalam darah. Amonia dilepaskan dari urea oleh urease diukur titrymetrically. Banyak teknik lain digunakan untuk mengukur amonia yang dihasilkan. Ini termasuk uji Indophenol Bertholoth dan reaksi dari amoniak dengan pereaksi nesller itu. Modifikasi berikutnya telah diterbikan ole Fawcett,Scott,Chaney dan Morbacth. Pada tahun 1995 Talke dan schubert menerbitkan prosedur yang benar-benar enzimatik untuk penentuan urea menggunakan urease atau glutamat dehidrogenase yang digabungkan (GLDH) sistem enzim. Uji analition urea didasarkan pada metode Berthelot.Hampir seluruh ureum dibentuk di dalam hati, dari metabolisme protein (asam amino). Urea berdifusi bebas masuk ke dalam cairan intra sel dan ekstrasel. Zat ini dipekatkan dalam urin untuk diekskresikan. Pada keseimbangan nitrogen yang stabil, sekitar 25 gram urea diekskresikan setiap hari. Kadar dalam darah mencerminkan keseimbangan antara produksi dan ekskresi urea. Ureum berasal dari penguraian protein, terutama yang berasal dari makanan. Pada orang sehat yang makanannya banyak mengandung protein, ureum biasanya berada di atas rentang normal. Kadar rendah biasanya tidak dianggap abnormal karena mencerminkan rendahnya protein dalam makanan atau ekspansi volume plasma. Namun, bila kadarnya sangat rendah bisa mengindikasikan penyakit hati berat. Kadar urea bertambah dengan bertambahnya usia, juga walaupun tanpa penyakit ginjal.kadar ureum (BUN) diukur dengan metode kolorimetri menggunakan fotometer atau analyzer kimiawi. Pengukuran berdasarkan atas reaksi enzimatik dengan diasetil monoksim yang memanfaatkan enzim ureaseyang sangat spesifik

4 terhadap urea. Konsentrasi urea umumnya dinyatakan sebagai kandungan nitrogen molekul, yaitu nitrogen urea darah (blood urea nitrogen, BUN).( Juwita Sesmiaty.2016 ). Masalah Klinis 1. Peningkatan Kadar Peningkatan kadar urea disebut uremia. Azotemia mengacu pada peningkatan semua senyawa nitrogen berberat molekul rendah (urea, kreatinin, asam urat) pada gagal ginjal. Penyebab uremia dibagi menjadi tiga, yaitu penyebab prarenal, renal, dan pascarenal. Uremia prarenal terjadi karena gagalnya mekanisme yang bekerja sebelum filtrasi oleh glomerulus. Mekanisme tersebut meliputi : 1) penurunan aliran darah ke ginjal seperti pada syok, kehilangan darah, dan dehidrasi; 2) peningkatan katabolisme protein seperti pada perdarahan gastrointestinal disertai pencernaan hemoglobin dan penyerapannya sebagai protein dalam makanan, perdarahan ke dalam jaringan lunak atau rongga tubuh, hemolisis, leukemia (pelepasan protein leukosit), cedera fisik berat, luka bakar, demam,.uremia renal terjadi akibat gagal ginjal (penyebab tersering) yang menyebabkan gangguan ekskresi urea. Gagal ginjal akut dapat disebabkan oleh glomerulonefritis, hipertensi maligna, obat atau logam nefrotoksik, nekrosis korteks ginjal. Gagal ginjal kronis disebabkan oleh glomerulonefritis, pielonefritis, diabetes mellitus, arteriosklerosis, amiloidosis, penyakit tubulus ginjal, penyakit kolagen-vaskular.uremia pascarenal terjadi akibat obstruksi saluran kemih di bagian bawah ureter, kandung kemih, atau urethra yang menghambat ekskresi urin. Obstruksi ureter bisa oleh batu, tumor, peradangan, atau kesalahan pembedahan. Obstruksi leher kandung kemih atau uretra bisa oleh prostat, batu, tumor, atau peradangan. Urea yang tertahan di urin dapat berdifusi masuk kembali ke dalam darah.beberapa jenis obat dapat mempengaruhi peningkatan urea, seperti : obat nefrotoksik; diuretic (hidroklorotiazid, asam etakrinat, furosemid, triamteren); antibiotic (basitrasin, sefaloridin (dosis besar), gentamisin, kanamisin, kloramfenikol, metisilin, neomisin, vankomisin); obat antihipertensi (metildopa, guanetidin); sulfonamide; propanolol, morfin; litium karbonat; salisilat. Sedangkan obat yang dapat menurunkan kadar urea misalnya fenotiazin. 2. Penurunan Kadar Penurunan kadar urea sering dijumpai pada penyakit hati yang berat. Pada nekrosis hepatik akut, sering urea rendah asam-asam amino tidak dapat dimetabolisme lebih lanjut. Pada sirosis hepatis, terjadipengurangan sintesis dan sebagian karena retensi air

5 oleh sekresi hormone antidiuretik yang tidak semestinya.pada karsinoma payudara yang sedang dalam pengobatan dengan androgen yang intensif, kadar urea rendah karena kecepatan anabolisme protein yang tinggi. Pada akhir kehamilan, kadar urea kadangkadang terlihat menurun, ini bisa karena peningkatan filtrasi glomerulus, diversi nitrogen ke fetus, atau karena retensi air. Penurunan kadar urea juga dijumpai pada malnutrisi protein jangka panjang. Penggantian kehilangan darah jangka panjang, dekstran, glukosa, atu saline intravena, bisa menurunkan kadar urea akibat pengenceran.untuk menilai fungsi ginjal, permintaan pemeriksaan BUN hampir selalu disatukan dengan kreatinin (dengan darah yang sama). Rasio BUN terhadap kreatinin merupakan suatu indeks yang baik untuk membedakan antara berbagai kemungkinan penyebab uremia. Rasio BUN/kreatinin biasanya berada pada rentang Peningkatan kadar BUN dengan kreatinin yang normal mengindikasikan bahwa penyebab uremia adalah nonrenal (prarenal). Peningkatan BUN lebih pesat daripada kreatinin menunjukkan penurunan fungsi ginjal. Pada dialysis atau transplantasi ginjal yang berhasil, urea turun lebih cepat daripada kreatinin. Pada gangguan ginjal jangka panjang yang paranh, kadar urea terus meningkat, sedangkan kadar kreatinin cenderung mendatar, mungkin akibat akskresi melalui saluran cerna.rasio BUN/kreatinin rendah (<12)>20) dengan kreatinin normal dijumpai pada uremia prarenal, diet tinggi protein, perdarahan saluran cerna, keadaan katabolik. Rasio BUN/kreatinin tinggi (>20) dengan kreatinin tinggi dijumpai pada azotemia prarenal dengan penyakit ginjal, gagal ginjal, azotemia pascarenal. ( Riswanto.2010 ). V. ALAT DAN BAHAN a. Alat 1. Tabung 2. Rak tabung 3. Mikropipet 4. Yellow dan blue tip 5. Spektrofotometer b. Bahan 1. Reagen R1 Tris buffer (ph 8 )100mmol/L Urease 10 KU/l GLDH 2,5 KU/l

6 2-oxoglutarate 5,49 mmol/l 2. Reagen R2 NADH 1,66 mmol/l 3. Urea calibrator 4. Standar Urea c. Sampel Serum atau plasma (EDTA dan Heparin) VI. CARA KERJA 1. Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan 2. Disiapkan 2 buah tabung serologis 3. Tabung I diisi dengan 500 µl reagen dan 5 µl standar 4. Tabung II diisi dengan 500 µl reagen dan 5 µl sampel 5. Dihomogenkan 6. Dilakukan pengukuran absorbansi dan konsentrasi sampel dan standar dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 340 nm. VII. VIII. NILAI RUJUKAN Serum / plasma : mg/dl HASIL PENGAMATAN Identitas sampel Nama : Mega Jenis kelamin : Perempuan Usia : Dewasa Hasil Panjang gelombang : 340 nm Absorbansi standar : -0,0621 Absorbansi sampel : -0,0435 Konsentrasi sampel : 15,38 mg/dl Foto-foto hasil pengamatan : Konsentrasi sampel Absorbansi sampel

7 Absorbansi standar IX. PEMBAHASAN Ureum adalah hasil akhir metabolisme protein yang bersifat racun biasanya diekskresikan rata rata 30 gram sehari dalam urine. Ureum merupakan suatu zat hasil metabolisme nitrogen pada manusia yang disintesis dari ammonia, karbondioksida dan nitrogen amida aspartate. Ditemukannya ureum dalam tubuh manusia merupakan suatu keadaan yang normal, biasanya ureum dapat ditemukan dalam darah dan urine. Bila ginjal rusak atau kurang baik fungsinya maka kadar ureum akan meningkat dan meracuni sel-sel tubuh. Keadaan tersebut disebut dengan uremia. Pemeriksaan kadar ureum dalam darah saat ini menjadi acuan untuk mengetahui adanya penyakit disfungsi ginjal (Mummarridhun, 2010). Pada praktikum ini dilakukan pemeriksaan kadar ureum dalam sampel serum pasien. Prinsip dari pemeriksaan ureum adalah dimana sampel serum yang mengandung urea akan dihidrolisa dengan adanya urase menjadi ammonia dan CO 2. Amonia yang dihasilkan dengan 2-oxoglutarate dan NADH dan GLDH akan membentuk glutamat dan NAD. Hasil reaksi yang terbentuk kemudian dibaca absorbansinya dengan menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 340 nm sehingga didapatkan nilai absorbansi yang kemudian dikalkulasikan secara otomatis oleh alat dalam bentuk angka konsentrasi ureum dalam sampel. Menurut insert kit pemeriksaan urea dengan merck ERBA, untuk mengukur kadar ureum dapat dipergunakan sampel serum atau plasma heparin dan EDTA. Namun hasil pemeriksaan kadar ureum dengan menggunakan plasma akan memberikan hasil yang sedikit berbeda. Pemeriksaan kadar ureum dengan menggunakan plasma akan memberikan hasil 3% hingga 5% lebih rendah dibandingkan dengan menggunakan serum (Mummarridhun, 2010). Syarat dari sampel untuk pemeriksaan ureum adalah sampel tidak boleh hemolisis karena akan mempengaruhi hasil pemeriksaan. Penggunaan sampel yang lisis akan mempengaruhi absorbansi dari spektrofotometer atau fotometer yang digunakan. Kadar urea dalam sampel serum dapat tetap stabil selama 7 hari

8 apabila disimpan pada suhu 2 8 o C. Tetapi sebaiknya pemeriksaan dilakukan dengan menggunakan sampel yang masih segar. Kadar BUN diukur dengan metode kinetik, enzimatik menggunakan fotometer atau analyzer kimiawi. Pengukuran berdasarkan atas reaksi enzimatik dengan bantuan enzim urease. Fotometer yang digunakan adalah merck Erba Mannheim. Prinsip dari fotometer yaitu jika suatu molekul dikenai suatu radiasi elektromagnetik pada frekuensi yang sesuai sehingga energi molekul tersebut ditingkatkan ke level yang lebih tinggi, maka terjadi peristiwa penyerapan (absorpsi) energi oleh molekul. Reagen yang digunakan adalah reagen dengan merck Erba. Reagen ini terdiri dari 2 buah reagen yaitu reagen 1 yang mengandung tris buffer (ph 8), urease, GLDH, dan 2-oxoglutarate. Sedangkan reagen 2 mengandung NADH. Kedua reagen ini harus disimpan pada suhu 2-8 o C agar kondisinya stabil dan dapat bertahan hingga batas kadaluarsanya. Sebelum digunakan kedua reagen ini harus dikondisikan pada suhu ruang terlebih dahulu yaitu (15 30 O C), setelah itu dilakukan pembuatan monoreagen dengan cara mencampurkan kedua reagen tersebut. Perbandingan pembuatan monoreagen adalah 4R1 : 1R2, dimana monoreagen ini akan tetap stabil selama 30 hari apabila disimpan pada suhu 2-8 o C dan penyimpanannya harus terhindar dari kontaminasi dan sinar matahari langsung. Sampel yang digunakan dalam praktikum ini yaitu sampel serum wanita dewasa atas nama Mega yang berasal dari RSUP Sanglah Denpasar. Pemeriksaan ini dilakukan dengan cara mempersiapkan alat dan bahan terlebih dahulu dan mengkondisikan reagen pada suhu ruang agar reaksi dapat berlangsung secara optimal. Setelah itu disiapkan 2 buah tabung yang bersih dan kering dimana tabung 1 untuk standard an tabung 2 untuk sampel. Penggunaan tabung yang tidak bersih dan kering akan mempengaruhi nilai absorbansi sehingga hasil yang didapatkan tidak akan sesuai dengan kadar sebenarnya. Setelah itu dipipet 500 mikron reagen ke dalam tabung 1 dan 2, kemudian tabung 1 ditambahkan dengan 5 mikron standard. Campuran keduanya dihomogenkan agar tercampur dengan baik dan langsung dibaca dengan menggunakan fotometer. Tujuan dari pengukuran standar adalah untuk mengetahui keadaan alat fotometer dan reagen yang digunakan, dimana hasil yang ditunjukkan oleh alat harus sama dengan konsentrasi dari standar yang telah diketahui tersebut. Standar yang digunakan harus diperhatikan tanggal kadaluarsanya dan disimpan pada suhu C untuk menghindari terjadinya kerusakan pada standar. Setelah hasil standar keluar, pemeriksaan dilanjutkan pada sampel. Pemeriksaan sampel mirip dengan pemeriksaan standar dimana tabung 2 yang telah berisi reagen ditambahkan dengan 5 mikron sampel dan dihomogenkan. Saat proses homogenisasi

9 hindari terbentuknya gelembung, karena apabila gelembung masuk ke dalam alat fotometer dan dibaca oleh alat maka gelembung akan pacah dan memancarkan cahanya dengan banyak warna sehingga cahaya yang ditangkap dan diteruskan tidak sesuai dengan keadaan sampel. Panjang gelombang yang digunakan adalah 340 nm, karena pada panjang gelombang tersebut menunjukkan nilai absorpsi maksimum pengukuran ureum. Berdasarkan hasil praktikum pemeriksaan kadar ureum pada sampel, didapatkan hasil kadar ureum sebesar 15,38 mg/dl dengan absorbansi -0,0435 pada sampel atas nama Mega. Jika dibandingkan dengan nilai normal, hasil kadar ureum pada sampel pasien adalah normal. Hal tersebut dapat menggambarkan bahwa keadaab dan fungsi ginjal pasien masih bekerja dengan baik. Adapun faktor faktor yang mempengaruhi temuan laboratorium, antara lain : 1. Status dehidrasi dari penderita harus diketahui. Pemberian cairan yang berlebihan dapat menyebabkan kadar BUN rendah palsu dan sebaliknya, dehidrasi dapat memberikan temuan kadar tinggi palsu. 2. Diet rendah protein dan tinggi karbohidrat dapat menurunkan kadar ureum. Sebaliknya, diet tinggi protein dapat meningkatkan kadar ureum, kecuali bila penderita banyak minum. 3. Pengaruh obat seperti antibiotic, diuretic, antihipertensif sehingga dapat meningkatkan kadar BUN. (Riswanto, 2013) X. SIMPULAN

10 DAFTAR PUSTAKA Bashar,Yazhid Makalah Ureum. [online]. Tersedia : [diakses : 09 Oktober 2016, wita]. Insert Kit. _. Urea. Germany : Erba Diagnostics Mannheim Juwita, Sesmiaty Laporan Pemeriksaan Ureum. [online]. Tersedia : [diakses pada 9 Oktober 2016, wita] Lailani Nuur Shabrina Tes Fungsi Ginjal. [online]. Tersedia : [diakses pada 9 Oktober 2016, wita] Mumarridhun, Al Ureum dan Kreatinin. [online]. Tersedia : [diakses : 12 Oktober 2016, wita] Riswanto Ureum Darah Serum. [online]. Tersedia : [diakses pada 9 Oktober 2016]