BAB I PENDAHULUAN. A. Latar Belakang. mikroorganisme penyebab penyakit infeksi. Peningkatan sistem imun penting

Transkripsi

1 BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang Tubuh memerlukan sistem imun yang kuat agar dapat terlindung dari mikroorganisme penyebab penyakit infeksi. Peningkatan sistem imun penting untuk dilakukan untuk mempertahankan sistem imun agar tetap dapat bekerja maksimal (Baratawidjaja, 2004). Sistem imun dapat ditingkatkan dengan menggunakan senyawa-senyawa imunostimulan. Senyawa imunostimulan dapat diperoleh dari tanaman (Wagner dkk., 1999). Beberapa jenis tanaman obat yang dapat digunakan sebagai adjuvant untuk mempengaruhi sistem imun tubuh yang meliputi sistem imun spesifik dan nonspesifik. Sistem imun tubuh mempunyai peranan penting dalam pencegahan maupun pengobatan berbagai penyakit infeksi. Penurunan sistem imun dapat disebabkan karena terganggunya mekanisme respon imun. Maka, diperlukan usaha untuk menjaga sistem imun agar selalu dalam keadaan normal. Salah satu cara untuk mengatasi penurunan imunitas ini adalah dengan pemberian obat yang bersifat imunomodulator (Abbas dan Litchman, 2005). Indonesia merupakan negara tropis yang memiliki potensi kekayaan alam yang tinggi. Berbagai jenis tanaman, baik yang sudah dikenal sebagai tanaman obat selama ratusan tahun, maupun jenis tanaman yang berpotensi sebagai tanaman obat dan belum dieksplorasi secara ilmiah dapat ditemukan di wilayah ini. Aktivitas

2 penelitian tanaman obat mulai meningkat sejalan dengan pembangunan sejak tahun Saat ini, industri obat tradisional di Indonesia termasuk industri dengan struktur yang tergolong kuat, dengan industri obat tradisional yang berjumlah ratusan, serta usaha kecil dan mikro obat tradisional yang berjumlah ribuan (Anonim, 2013). Obat tradisional dibagi dalam 3 segmentasi, yaitu jamu, obat herbal terstandar, dan fitofarmaka. Jamu adalah obat tradisional asli Indonesia yang telah turun temurun digunakan berdasarkan pengalaman empiris. Pada segmen kedua, bentuk-bentuk pengembangan lebih lanjut dari jamu yaitu bahan dalam bentuk ekstrak yang sudah terstandarisasi dibuat untuk memenuhi kebutuhan konsumen yaitu obat herbal terstandar. Obat herbal terstandar telah dibuktikan keamanan dan khasiatnya secara ilmiah dengan uji praklinik. Fitofarmaka sebagai segmen ketiga dikembangkan untuk memenuhi kebutuhan pelayanan kesehatan, suatu sediaan obat harus sudah terstandarisasi, terbukti aman, dan berkhasiat melalui serangkaian penelitian, yaitu teknologi farmasi, uji pra-klinik, dan uji klinik (Anonim, 2014). Salah satu uji praklinik yang penting adalah uji toksisitas akut, karena dalam uji ini dapat ditentukan efek toksik dari suatu senyawa dalam waktu yang singkat setelah pemejanan dalam takaran tertentu. Parameter kuantitatif yang digunakan untuk mengukur toksisitas akut adalah LD50 (Lethal Dose 50), yaitu besarnya dosis yang menyebabkan kematian pada 50% populasi hewan uji. Dengan mengetahui LD50, suatu senyawa dapat digolongkan sebagai senyawa tidak toksik hingga sangat toksik dan dapat ditetapkan pemberian sediaan uji yang tidak menimbulkan ketoksikan akut pada manusia. Tujuan utama dilakukannya uji toksisitas akut 2

3 adalah untuk mendapatkan gambaran potensi toksisitas suatu zat beracun atau senyawa uji (Donatus, 2005). Uji toksisitas akut merupakan salah satu prasyarat formal keamanan calon fitofarmaka (obat) untuk digunakan manusia. Secara ideal uji toksisitas akut dilakukan kepada beberapa jenis hewan, minimal hewan pengerat dalam hal ini menggunakan tikus sebagai hewan uji. Spektrum efek toksik yang diamati pada sistem organ vital seperti kardiovaskuler, susunan saraf, gastrointestinal, pernafasan, dan lain-lain (Anonim, 1992). Tanaman obat seperti meniran (Phyllanthus niruri Linn), umbi keladi tikus (Typhonium flagelliforme (Lodd.) BL) dan daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz. & Pav.) telah banyak digunakan oleh masyarakat untuk pengobatan berbagai penyakit dan telah terbukti mempunyai aktivitas sebagai immunomodulator. Penelitian yang telah dilakukan tidak hanya pada ekstrak tunggal, tetapi juga kombinasi dari tiga ekstrak herba meniran, umbi keladi tikus, dan daun sirih merah. Menurut Sagala (2013), kombinasi ekstrak meniran, keladi tikus, dan sirih merah pada konsentrasi 1, 10, dan 100 μg/ml mampu meningkatkan nilai indeks dan kapasitas fagositosis makrofag mencit jantan galur Balb/c dibandingkan dengan kontrol media dan kontrol DMSO (pelarut ekstrak). Saat ini sudah tersedia produk kombinasi ketiga ekstrak tersebut berupa kapsul yang disebut produk SKM. Produk SKM dikonsumsi manusia untuk meningkatkan daya tahan tubuh, sehingga dapat dikonsumsi hanya pada saat tubuh mengalami penurunan daya tahan. Apabila masa penerapan klinis suatu sediaan 3

4 obat 1 minggu atau kurang, diperlukan uji toksisitas akut untuk mengkaji potensi ketoksikan sediaan (Anonim, 2014). Sebagian masyarakat Indonesia masih beranggapan bahwa tanaman obat tidak mengandung efek samping karena terbuat dari bahan-bahan alami, bukan dari bahan-bahan kimia. Padahal anggapan tersebut tidak sepenuhnya benar (Anonim, 2014). Sebelumnya, telah dilakukan penelitian untuk mengkaji potensi ketoksikan akut dari ekstrak tunggal masing-masing bahan namun belum dilakukan penelitian toksisitas akut produk kombinasi ketiga ekstrak. Maka, dalam penelitian ini dapat diketahui potensi ketoksikan yang ditimbulkan dari pemberian kombinasi produk ekstrak daun sirih merah, umbi keladi tikus, dan herba meniran secara akut, sehingga didapatkan data perkiraan potensi ketoksikan pada senyawa ini jika digunakan bagi manusia. B. Rumusan Masalah 1. Berapakah potensi ketoksikan akut (LD50) oral produk SKM pada tikus SD jantan? 2. Bagaimana gejala toksisitas akut yang muncul setelah pemberian per oral produk SKM pada tikus SD jantan? 3. Bagaimana spektrum efek toksik yang muncul setelah pemberian per oral produk SKM pada tikus SD jantan? 4

5 C. Tujuan Penelitian 1. Mengkaji potensi ketoksikan akut (LD50) produk SKM yang diberikan per oral pada tikus SD jantan. 2. Mengkaji gejala toksisitas akut yang timbul setelah pemberian per oral produk SKM pada tikus SD jantan. 3. Mengkaji spektrum efek toksik yang muncul setelah pemberian per oral produk SKM pada tikus SD jantan. D. Tinjauan Pustaka 1. Toksikologi a. Toksisitas Toksisitas biasa digunakan dalam memperbandingkan satu zat kimia dengan lainnya, hal seperti itu sangat tidak informatif. Oleh karena itu pendekatan toksikologi melihat efek zat kimia atas berbagai sistem biologi dengan penekanan pada mekanisme efek berbahaya zat kimia itu dan berbagai kondisi dimana efek berbahaya itu terjadi (Loomis, 1978). Definisi dari toksikologi adalah ilmu tentang racun. Racun adalah agen yang menimbulkan efek yang tidak diinginkan. Hal yang dapat mengubah senyawa kimia menjadi racun tergantung dari lamanya paparan senyawa, dosis atau konsentrasi senyawa, rute paparan, atau formulasi produk (Barile, 2004). Takrif toksikologi kemudian berkembang menjadi ilmu yang mempelajari pengaruh kuantitatif zat kimia atas sistem biologis, terfokus pada aksi berbahaya zat kimia itu (Donatus, 2005). 5

6 b. Asas Umum Toksikologi Berdasarkan atas alur timbulnya efek toksik suatu senyawa maka ada 4 asas utama yang perlu dipahami dalam toksikologi, yaitu kondisi pemejanan dan kondisi makhluk hidup, mekanisme aksi, wujud, dan sifat efek toksik. Keempat asas ini digunakan untuk menentukan keberbahayaan suatu zat dan kemudian dapat ditentukan batas amannya (Donatus, 2005). Kondisi efek toksik terdiri dari kondisi pemejanan dan kondisi makhluk hidup. Kondisi pemejanan terdiri atas jenis, jalur, lama, kekerapan, saat dan takaran pemejanan. Kondisi makhluk hidup merupakan keadaan fisiologi dan patologi yang mempengaruhi ketersediaan racun di sel sasaran dan keefektifan antaraksi (Donatus, 2005). Mekanisme aksi toksik dibagi menjadi dua berdasarkan sifat dan tempat kejadian awalnya, yaitu mekanisme luka intrasel dan mekanisme luka ekstrasel. Terdapat 3 mekanisme efek toksik, yaitu mekanisme berdasarkan sifat dan tempat kejadian, interaksi racun dan tempat aksinya, serta resiko penumpukan racun di dalam gudang penyimpanan tubuh (Donatus, 2005). Perubahan biokimia, fisiologi (fungsional) dan struktural merupakan wujud dari adanya efek toksik. Perubahan ini memiliki sifat yang khas, yaitu terbalikkan dan tak terbalikkan. Wujud efek toksik biokimiawi merupakan wujud efek toksik yang terbalikkan. Wujud efek toksik fisiologis (fungsional) merupakan interaksi senyawa racun dengan reseptor aktif enzim yang bersifat terbalikkan. Wujud efek toksik yang berupa perubahan struktural dapat 6

7 diawali dari proses perubahan biokimiawi ataupun fungsional (Donatus, 2005). Terdapat dua macam sifat efek toksik yaitu efek toksik terbalikkan (reversible) dan tidak terbalikkan (irreversible). Pada sifat yang terbalikkan bila kadar racun yang ada dalam tempat aksi atau reseptor tertentu telah habis maka reseptor tersebut akan kembali ke keadaan semula. Sifat yang tak terbalikkan memiliki ciri, bahwa kerusakan yang terjadi bersifat menetap (Loomis, 1978). c. Uji Toksikologi Dalam hakekatnya maksud obat tradisional diteliti dan dikembangkan adalah untuk dimanfaatkan sebagai obat untuk manusia, maka uji toksisitas obat tradisional harus mampu mengungkapkan keamanannya terkait dengan maksud penggunaannya (Anonim, 2014). Uji toksisitas dibagi menjadi dua yaitu uji ketoksikan tak khas dan uji ketoksikan khas. Uji ketoksikan tak khas adalah uji toksikologi yang dirancang untuk mengevaluasi keseluruhan atau spektrum efek toksik sesuatu senyawa pada aneka ragam jenis hewan uji. Yang termasuk dalam uji ketoksikan tak khas meliputi uji ketoksikan akut, sub kronis, dan kronis. Uji ketoksikan khas adalah uji toksikologi yang dirancang untuk mengevaluasi secara rinci efek toksik yang khas sesuatu senyawa atas fungsi organ atau kelenjar tertentu pada aneka ragam subyek atau hewan uji (Donatus, 2005). Dalam uji toksisitas perlu dibedakan obat tradisional yang dipakai secara singkat (short term use) dan dalam jangka waktu lama (long term use). 7

8 Untuk short term use dipentingkan uji toksisitas akut, sedangkan untuk long term use perlu diteliti juga toksisitas subkronik dan kronik. Uji toksisitas subkronik dapat dilakukan selama 30 hari atau 90 hari, sedangkan uji toksisitas kronik dilakukan selama 6 bulan dan 1 tahun. Uji toksisitas khas seperti teratogenik, karsinogenik, dan lain-lain disesuaikan dengan indikasi obat tradisional yang bersangkutan (Anonim, 2014). d. Ketoksikan Akut Uji toksisitas akut dilakukan dengan memberikan zat kimia yang sedang diuji sebanyak satu kali atau beberapa kali dalam waktu 24 jam. Sebagian besar penelitian semacam ini dirancang untuk menentukan dosis letal median (LD50) yaitu dosis tunggal suatu zat yang secara statistik diharapkan akan membunuh 50% hewan uji. Pengujian ini juga dapat menunjukkan organ sasaran yang mungkin dirusak dan efek toksik spesifiknya, serta memberikan petunjuk tentang dosis yang sebaiknya digunakan dalam pengujian yang lebih lama (Lu, 1995). Secara umum dalam penentuan LD50 digunakan tikus dan mencit. Hewan ini dipilih karena murah, mudah didapat, dan mudah ditangani. Selain itu, terdapat banyak data toksikologi yang menggunakan jenis hewan ini, suatu fakta yang mempermudah pembandingan toksisitas zat-zat kimia. Cara pemejanan suatu senyawa harus diberikan melalui jalur biasa digunakan pada manusia (Lu, 1995). 8

9 Potensi ketoksikan akut dapat diperkirakan berdasarkan harga LD50 yang diperoleh mengikuti kriteria Globally Harmonised Classification System (2001) di bawah ini: 1. Kategori mg/kgbb 2. Kategori mg/kgbb 3. Kategori mg/kgbb 4. Kategori mg/kgbb 5. Kategori mg/kgbb 6. Tidak terklasifikasi > 5000 mg/kgbb Selain dengan kriteria GHS, potensi ketoksikan akut juga dapat diperkirakan berdasarkan kategori menurut Peraturan Kepala BPOM nomor 7 tahun 2014 tentang Pedoman Uji Toksisitas Non-Klinik Secara In Vivo, yaitu meliputi: 1. Sangat toksik 1 mg/kg 2. Toksik 1-50 mg 3. Toksik sedang mg 4. Toksik ringan mg 5. Praktis tidak toksik 5-15 g 6. Relatif tidak membahayakan 15 g 2. Produk SKM Produk SKM adalah produk herbal yang mempunyai khasiat sebagai peningkat daya tahan tubuh dan diproduksi oleh PT. Swayasa Prakarsa. Sediaan berbentuk kapsul dengan ukuran 0 dan ciri-ciri cangkang kapsul berwarna putih 9

10 dan ungu. Kapsul berisi granul kombinasi 3 ekstrak yaitu ekstrak umbi keladi tikus (Typhonium flagelliforme (Lodd.) BL) 100 mg, ekstrak daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz. dan Pav.) sebesar 75 mg dan ekstrak herba meniran (Phyllantus niruri Linn) sebesar 75 mg. Masing-masing ekstrak ditambahkan zat pengisi sebesar 30% dari bobot ekstrak, kemudian campuran ketiga ekstrak ditambahkan dengan zat pengisi hingga bobot kapsul 500 mg. Zat pengisi yang digunakan yaitu Compercel yang merupakan mikrokristalin selulosa dan Amprotab yang merupakan amilum manihot. Surat keterangan produk dapat dilihat pada lampiran 8. Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Rosyida (2015), kombinasi ekstrak etanolik Phyllantus niruri, daun Piper crocatum dan umbi Thyponium flagelliforme berefek imunosupresan pada respon imun nonspesifik dan imunostimulan pada respon imun seluler, tetapi tidak mempengaruhi respon imun humoral tikus Sprague-Dawley yang diinduksi dengan vaksin hepatitis B. Secara in vitro, kombinasi tiga ekstrak tidak meningkatkan kemampuan fagositosis makrofag secara signifikan (Khoris, 2015). 3. Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz. dan Pav.) Klasifikasi Piper crocatum Ruiz. dan Pav. Kingdom Sub Kingdom Super Divisi Divisi Kelas : Plantae : Tracheobionta : Spermatophyta : Magnoliophyta : Magnoliopsida 10

11 Sub Kelas Bangsa Suku Marga Jenis : Magnoliidae : Piperales : Piperaceae : Piper : Piper crocatum Ruiz. dan Pav. (Backer & van Den Brink, 1963) Gambar 1. Daun Sirih Merah Tanaman sirih merah tumbuh menjalar seperti sirih hijau. Batangnya berwarna hijau keunguan dan berbentuk bulat. Tanaman sirih merah tidak berbunga. Daunnya bertangkai membentuk jantung dengan bagian atas meruncing, bertepi rata, dan permukaannya mengkilap. Panjang daunnya bisa mencapai cm. Warna daun bagian atas hijau bercorak putih keabu-abuan. Bagian bawah daun berwarna merah hati cerah. Daunnya berlendir, berasa pahit, dan beraroma wangi khas sirih. Batangnya bersulur dan beruas dengan jarak buku 5-10 cm di setiap buku tumbuh daun dan bakal akar. Secara empiris diketahui tanaman sirih merah dapat menyembuhkan penyakit batu ginjal, kolesterol, asam urat, serangan jantung, stroke, radang prostat, radang mata, 11

12 masuk angin dan nyeri sendi (Sudewo, 2005). Gambar daun sirih merah dapat dilihat pada gambar 1. Dalam ekstrak etanol sirih merah terkandung senyawa fitokimia golongan senyawa alkaloid, saponin, monoterpen, seskuiterpen, flavonoid, tannin, polifenol, neolignan, amilum, gula, pati, kuinon, minyak atsiri, dan steroid (Sudewo, 2005). Dari penelitian yang dilakukan oleh Kustiawan (2012) telah berhasil diisolasi dan diidentifikasi kandungan senyawa aktif daun sirih merah yang termasuk golongan neolignan sebagai imunostimulan, yaitu 2-allil- 4-(1 -(3,4,5 -trimetoksifenil) propan-2 yl)-3,5- dimetoksisikloheksa 3,5- dienon dan 2-allil-4-(1 asetil-1 -(3,4,5 -trimetoksi-fenil)propan-2 il)-3,5- dimetoksi-siklo-heksa-3,5-dienon. Kedua senyawa tersebut mampu meningkatkan fagositosis makrofag dan produksi nitrit oksida, namun tidak dapat meningkatkan proliferasi limfosit (Hartini, 2013). Pemberian ekstrak etanol daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz. dan Pav.) pada dosis 10, 100, dan 300 mg/kgbb dapat meningkatkan indeks fagositosis makrofag tikus yang diinduksi vaksin hepatitis B (Apriyanto, 2011). Senyawa yang berperan terhadap aktivitas fagositosis makrofag merupakan golongan alkaloid dan terpenoid (Kustiawan, 2012). Berdasarkan penelitian yang dilakukan Rachmawaty (2014), hasil uji toksisitas akut diperoleh nilai Lethal Dose 50 (LD50) ekstrak etanolik mg/kgbb, sehingga tergolong relatif tidak toksik menurut skala Loomis (1978). 12

13 4. Meniran (Phyllanthus niruri Linn) Klasifikasi Phyllanthus niruri Linn Divisi Sub Divisi Kelas Ordo Famili Genus Spesies : Spermatophyta : Angiospermae : Dicotyledonae : Euphorbiales : Euphorbiaceae : Phyllanthus : Phyllanthus niruri Linn. (Backer & van Den Brick, 1965) Gambar 2. Tanaman Meniran Tumbuhan ini berupa terna, tumbuh tegak, batang berwarna hijau pucat atau hijau kemerahan. Bentuk daun bundar telur sampai bundar memanjang, panjang daun 5 mm sampai 10 mm, lebar 2,5 mm sampai 5 mm, ujung bundar atau meruncing. Bunga keluar dari ketiak daun, bunga jantan terletak di bawah ketiak daun, berkumpul 2 bunga hingga 4 bunga, bunga betina sendiri, letaknya di bagian atas ketiak daun. Helaian mahkota bunga berbentuk bundar telur sampai bundar 13

14 memanjang, tepi berwarna hijau muda. Buah licin, garis tengah 2 mm sampai 2,5 mm (Depkes, 1978). Gambar tanaman meniran dapat dilihat pada gambar 2. Meniran telah banyak digunakan untuk berbagai tujuan dalam sistem pengobatan tradisional atau herbal. Dalam beberapa penelitian klinis tanaman ini menunjukkan kegunaan dalam hepatoprotektor, penghilang nyeri, hipotensi, antispasmodik, antiviral, antibakteri, diuretik, antimutagenik, dan aktivitas hipoglikemik (Taylor, 2003). Meniran juga bermanfaat untuk menghambat patogenesis infeksi Salmonella typhii yang diinduksikan pada mencit. Ekstrak meniran juga mampu meningkatkan secara signifikan produksi interferon-gama (IFN-gamma) dan interleukin-4 (IL-4), serta menunjukkan adanya kemampuan memodulasi nitrat oksida yang dilepaskan oleh makrofag secara in vivo. Kemampuan menstimulasi sistem imun oleh ekstrak meniran ini yang bertanggungjawab atas penggunaannya secara etnomedisin dalam mengatasi penyakit infeksi (Sunarno, 2009; Nworu dkk., 2010). Tanaman obat meniran, mempunyai bermacam-macam kandungan fitokimia dan kegunaan farmakologi. Flavonoid, alkaloid, terpenoid, lignin, polifenol, tannin, kumarin, dan saponin telah teridentifikasi dari beberapa bagian meniran (Paithankar dkk., 2011). Kandungan utama dalam meniran termasuk alkaloid, astragalin, bervifolin, asam karboksilat, korilagin, asam elagat, lignin, niruretin, nirurin, asam repandusinat, quersetin, quersetrol, quersitrin, rutin, dan saponin (Taylor, 2003). Flavonoid yang terkandung dalam meniran dapat menstimulasi respon imun, karena dapat meningkatkan aktivitas dan kapasitas 14

15 fagositosis tikus secara in vivo. Dosis flavonoid yang lebih tinggi menyebabkan sel leukosit (fagosit) menjadi lebih aktif untuk memfagosit sel bakteri (Zalizar, 2013). Pemberian ekstrak Phyllanthus niruri Linn dapat meningkatkan aktivitas dan fungsi beberapa komponen imunitas nonspesifik serta imunitas spesifik, baik humoral maupun selular. Efek terhadap respon imun nonspesifik berupa peningkatan fagositosis dan kemotaksis makrofag, kemotaksis neutrofil, sitotoksisitas sel NK serta aktivitas hemolisis komplemen. Terhadap imunitas seluler, dapat meningkatkan aktivitas limfosit T, limfosit B, meningkatkan sekresi TNFα, IFNγ dan Interleukin (Ogata dkk., 1992). Berdasarkan penelitian ketoksikan akut yang dilakukan oleh Halim (2010), ekstrak air meniran yang diberikan pada mencit Balb/c menunjukkan LD50 sebesar 1588,781 mg/kgbb, sehingga tergolong dalam kriteria sedikit toksik menurut skala Loomis (1978). 5. Keladi Tikus (Typhonium flagelliforme (Lodd.) BL) Klasifikasi Typhonium flagelliforme (Lodd.) BL Divisi Subdivisi Kelas Ordo Familia Genus Spesies : Spermatophyta : Angiospermae : Monocotyledonae : Arales : Araceae : Typhonium : Typhonium flagelliforme (Lodd.) Blume (Backer & van den Brink, 1968) 15

16 Gambar 3.Tanaman Keladi Tikus Tanaman keladi tikus adalah tanaman sejenis talas setinggi 25 cm hingga 30 cm, termasuk tumbuhan semak, menyukai tempat lembab yang tak terkena sinar matahari langsung. Daun berbentuk bulat dengan ujung runcing, seperti jantung. Berwarna hijau segar. Umbi berbentuk bulat rata sebesar buah pala (Harfia dan Lucie, 2006). Gambar tanaman keladi tikus dapat dilihat pada gambar 3. Senyawa yang terkandung dalam tanaman keladi tikus yaitu alkaloid, saponin, steroid, glikosida flavonoid, dan triterpenoid (Syahid, 2007). Identifikasi terhadap kandungan kimia dalam keladi tikus dilakukan juga oleh Lai dkk. (2010). Kandungan kimia yang teridentifikasi dalam studi ini di antaranya asam heksadekanoat, asam oleat, asam linoleat, asam linolenat, campesterol, stigmasterol, dan beta-sitosterol. Keladi tikus merupakan tanaman dengan multifungsi, di mana memiliki potensi sebagai antikanker, antibakteri, antioksidan, dan penekan batuk (Mankaran dkk., 2013), baik daun maupun umbi keladi tikus menunjukkan aktivitas antibakteri. Ekstrak heksan dari umbi keladi tikus mempunyai aktivitas melawan bakteri gram negatif, Pseudomonas aeruginosa dan Salmonella choleraesuis. 16

17 Menurut penelitian Nurrochmad dkk. (2015), menunjukkan bahwa ekstrak etanolik keladi tikus dapat menurunkan efek penekanan proliferasi limfosit dan meningkatkan secara signifikan proliferasi sel T CD8+ pada tikus terinduksi cyclophosphamide. Ekstrak keladi tikus dengan dosis 250, 500, dan 1000 mg/kgbb dapat meningkatkan fagositosis makrofag tikus yang terinduksi siklofosfamid (Sriyanti, 2012). Berdasarkan studi toksisitas akut yang dilakukan oleh Faiqoh (2011), menunjukkan bahwa dosis suspensi tanaman keladi tikus yang menyebabkan kematian 50% populasi (LD50) adalah 48,081 g/kgbb, sehingga tergolong relatif tidak toksik menurut skala Loomis (1978). Perubahan mikroskopis yang disebabkan oleh tanaman ini menunjukkan efek toksisitas, ditemukan adanya sumbatan, degenerasi, dan nekrosis pada sel hepar. Hal ini mengindikasikan bahwa suspensi tanaman keladi tikus pada uji toksisitas akut dapat menyebabkan efek toksik pada hepar mencit. 6. Histopatologi Organ Pemeriksaan histopatologi merupakan upaya menemukan dan mendiagnosis suatu penyakit berdasarkan hasil pemeriksaan jaringan. Pemeriksaan yang dilakukan meliputi pemeriksaan makroskopik jaringan disertai seleksi sampel jaringan untuk pengamatan mikroskopik. Sebagian besar diagnosis histopatologi berasal dari potongan jaringan dengan pewarnaan hematoksilin-eosin. Jaringan berasal dari biopsi atau eksisi bedah yang dimasukkan dalam larutan fiksasi dan dikirim ke laboratorium histopatologi (Underwood, 1996). 17

18 Suatu zat dicurigai dapat menimbulkan luka seluler melalui aksi langsung pada sel sasaran atau tak langsung pada lingkungan ekstra sel, menuju ke perubahan morfologi yang pada akhirnya terwujud sebagai kekacauan struktural (Donatus, 2005). Senyawa toksik tidak mempengaruhi semua organ secara merata. Pekanya organ dan tingginya kadar bahan kimia atau metabolit di organ sasaran tergantung dari mekanisme yang mendasarinya. Kadar yang lebih tinggi itu dapat meningkat pada berbagai keadaan (Lu, 1995). Respons histopatologi dasar sebagai tanggapan terhadap adanya luka seluler, meliputi degenerasi, proliferasi, inflamasi dan perbaikan. Ketiga respons tersebut menggambarkan urutan dari serangkaian peristiwa seluler setelah terjadi luka pada tingkat molekuler yang dapat diperiksa di bawah mikroskop. Berkaitan dengan golongan respons utama, yakni respons intrasel meliputi degenerasi dan proliferasi, dan respons ekstrasel berupa inflamasi dan perbaikan (Donatus, 2005). Dua golongan respon utama yakni respon intrasel yang meliputi degenerasi dan proliferasi, dan respon ekstrasel yang meliputi inflamasi atau perbaikan. Berbagai respon histologi tersebut, mendasari berbagai perubahan morfologi atau struktural dalam berbagai wujud atau bentuk seperti nekrosis, karsinogenesis, dan lain-lain. Degenerasi merupakan perubahan morfologi akibat luka yang tidak fatal, ragam respon yang ditunjukkan seperti pengecilan sel atau pengurangan jumah organel. Perubahan struktural yang dapat teramati di bawah mikroskop meliputi atrofi, akumulasi intrasel, dan kematian sel (nekrosis). Atrofi merupakan pengecilan atau berkurangnya jumlah sel, hal ini dapat menyebabkan penyusutan atau mengkerutan jaringan. Akumulasi intrasel dapat berupa penumpukan air yang 18

19 juga disebut perubahan hidropik, yang mengarah pada kematian sel (Glaister, 1986). Penumpukan lemak dalam jaringan tak berlemak juga merupakan wujud dari akumulasi intrasel dan tahap awal kematian sel. Bentuk degenerasi yang lainnya adalah nekrosis atau kematian sel. Respon ini seringkali dijumpai karena merupakan hasil dari berbagai mekanisme luka intrasel maupun ekstrasel. Nekrosis merupakan salah satu degenerasi yang tidak terbalikkan. Proliferasi disebabkan oleh adanya tekanan atau luka kimia yang memicu sel untuk meningkatkan pertumbuhan yang tidak terkendali pada tingkat molekular maupun struktural. Proliferasi dapat berupa hipertrofi dan hiperplasia. Hipertrofi merupakan respon yang berkaitan dengan perbesaran sel, sedangkan hiperplasia adalah pertambahan jumlah sel (Glaister, 1986). Selain itu, ada pula jenis proliferasi yang lain seperti metaplasia dan displasia. Metaplasia merupakan keadaan sel yang sedang mengalami diferensiasi diganti dengan jenis sel lain yang telah diferensiasi. Bentuk proliferasi yang paling kacau adalah displasia karena disertai hiperplasia dan metaplasia, hal ini mengakibatkan terjadi pembentukan sel yang melebihi normal dan beragam bentuk, ukuran, dan tingkat diferensiasi. Bentuk proliferasi yang terakhir adalah neoplastik yang memperlihatkan hilangnya respon terhadap kendali pertumbuhan normal. Inflamasi merupakan respon protektif yang berkaitan dengan sel, pembuluh darah, protein dan mediator lainnya yang berguna untuk menyingkirkan penyebab kerusakan sel. Proses inflamasi yang berlebihan dapat menyebabkan kerusakan jaringan. Inflamasi dibagi dua, inflamasi akut dan kronis. Inflamasi akut dapat 19

20 berujung pada perbaikan, abses, dan fibrosis. Inflamasi kronis tidak dapat mengalami perbaikan dan berujung pada fibrosis (Robbins, 2013). Proses perbaikan biasanya terjadi bersamaan dengan inflamasi dan terdiri dari dua proses yaitu regenerasi dan fibrosis. Regenerasi adalah suatu keadaan jaringan yang dapat mengganti sel-sel yang rusak dan kembali menjadi sel yang normal. Regenerasi terjadi pada sel yang berproliferasi dan sudah mencapai kapasitas pembelahan. Respon ini terjadi pada sel yang cepat membelah seperti epitel kulit dan saluran pencernaan atau organ parenkim, khususnya hepar. Fibrosis adalah terjadinya deposisi dari kolagen yang dapat terjadi pada paru-paru, hepar, ginjal, dan organ lainnya sebagai konsekuensi dari inflamasi kronis. Fibrosis dapat menyebabkan disfungsi organ atau bahkan kegagalan fungsi organ (Robbins, 2013). E. Landasan Teori Produk SKM digunakan sebagai peningkat daya tahan tubuh. Produk SKM terbuat dari kombinasi ekstrak etanolik 75 mg daun sirih merah, 75 mg herba meniran, dan 100 mg umbi keladi tikus, dengan zat pengisi yaitu Compercell dan Amprotab. Penelitian mengenai toksisitas akut terhadap masing-masing ekstrak penyusun produk SKM sudah pernah dilakukan sebelumnya. Hasil uji toksisitas akut ekstrak etanolik sirih merah diperoleh nilai Lethal Dose 50 (LD50) sebesar mg/kgbb, sehingga tergolong relatif tidak toksik menurut skala Loomis (Rachmawaty, 2014). Ekstrak air meniran yang diberikan pada mencit Balb/c menunjukkan LD50 sebesar 1588,781 mg/kgbb, sehingga tergolong dalam kriteria sedikit toksik menurut skala Loomis (Halim, 2010). Suspensi tanaman keladi tikus 20

21 yang menyebabkan kematian 50% populasi (LD50) adalah 48,081 g/kgbb, sehingga tergolong relatif tidak toksik menurut skala Loomis. Suspensi tanaman keladi tikus juga terbukti toksik terhadap hepar mencit (Faiqoh, 2011). Uji toksisitas akut dari masing-masing penyusun produk SKM sudah diketahui, tetapi uji toksisitas akut pada produk SKM belum pernah dilakukan. Oleh karena itu, perlu dilakukan uji toksisitas akut terhadap produk SKM. Uji toksisitas akut ini berguna untuk mengetahui potensi ketoksikan akut, mekanisme yang memperantarai kematian, dan spektrum efek toksik. F. Hipotesis 1. Pemberian produk SKM diduga tidak menimbulkan kematian pada tikus SD jantan. 2. Pemberian produk SKM diduga tidak menimbulkan gejala toksik pada tikus SD jantan. 3. Pemberian produk SKM diduga tidak menunjukkan efek toksik yang nyata pada organ-organ vital. 21