PERBANDINGAN TOKSISITAS REBUSAN DAUN SIRSAK

Transkripsi

1 PERBANDINGAN TOKSISITAS REBUSAN DAUN SIRSAK (Annona muricata L.) DAUN KENIKIR (Cosmos caudatus) DAN DAUN KELOR (Moringa oleifera L.) DENGAN METODE BRINE SHRIMP LETHALITY TEST ( BSLT ) Fitri Sofyani 1, Ike Yulia W 2 dan Sri Wardatun 3 1,2&3 Program Studi Farmasi, FMIPA, Universitas Pakuan, Bogor. ABSTRAK Penyakit kanker merupakan salahsatu ancaman utama terhadap kesehatan manusia. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan bahan obat herbal yang berpotensi sebagai anti kanker antara lain menguji toksisitas ekstrak daun sirsak (Annona muricata L.), daun kenikir (Cosmos caudatus) dan daun kelor (Moringa oleifera L.) dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) yang ditunjukkan dengan LC. Ekstraksi yang digunakan adalah metode rebusan dengan pelarut akuades. Hewan uji yang digunakan Artemia salina L. penelitian ini menggunakan 8 konsentrasi perlakuan (4 ppm, 2 ppm, ppm, ppm, 2 ppm, 12, ppm, ppm, dan ppm) dan 1 kontrol negatif dengan 3 kali pengulangan. Kematian larva dihitung setelah 24 jam perlakuan. Berdasarkan analisis probit, hasil uji toksisitas rebusan daun sirsak, daun kenikir dan daun kelor dengan nilai rata-rata LC berturut-turut sebesar 11,92±1,13 ppm; 3,88±2,94 ppm dan 99,148±8,3 ppm. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak memiliki potensi sitotoksik terhadap Artemia salina L karena nilai LC < ppm Kata Kunci : Daun sirsak (Annona muricata L.), daun kenikir (Cosmos caudatus), daun kelor (Moringa oleifera L.), Artemia Salina Leach, BSLT Nilai LC. ABSTRACK Cancer was one of the major threats to human s health. Conducting research to get a potential herbal medicine as anticancer by testied toxicity of soursop leaves (Annona muricata L.), kenikir leaves (Cosmos caudatus) and Moringa leaves (Moringa oleifera L.) ekstrak by Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) method as indicated by LC. The extraction that had been used has decoction method with aquades solvent. Animal sample used Artemia salina L larvae. this research ware using 8 treatment concentrate (4 ppm, 2 ppm, ppm, ppm, 2 ppm, 12. ppm, ppm, and ppm) and 1 negatif control with 3 times repetation. The mortality of the larvae was calculated after 24 hours treatment. Based on probit analysis, the result of toxicity test showed that the of soursop leaves, kenikir leaves and kelor leaves decoction with average consecutively were ± 1.13 ppm; 3.88 ± 2.94 ppm and ± 8.3 ppm. It showed that of all the extracts had the cytotoxic potential against Artemia salina L for LC < ppm. Keyword: Soursop leaves (Annona muricata leaves L.), kenikir leaves (Cosmos caudatus), Moringa leaves (Moringa oleifera L.), Artemia salina Leach, Brine Shrimp Lethality Test ( BSLT ), LC value

2 PENDAHULUAN Penyakit kanker merupakan merupakan salahsatu ancaman utama terhadap kesehatan manusia, yang ditandai dengan pertumbuhan sel terus-menerus secara tidak terkendali tidak terbatas dan tidak normal (abnormal) (Supriyanto, 214). Pengobatan kanker dapat dilakukan dengan berbagai cara, cara medis maupun tradisional. Operasi, kemoterapi dan radiasi merupakan cara medis, namun memiliki banyak efek samping sehingga masyarakat mulai menggunakan obat tradisional sebagai alternatif antikanker (Wijaya, 212). Usaha untuk mengobati penyakit kanker dengan obat tradisional semakin banyak dilakukan karena alasan biaya yang lebih murah, lebih mudah didapat, efek samping yang relatif kecil dan dapat diramu sendiri. Penelitian untuk mendapatkan obat yang berpotensi sebagai anti kanker antara lain dilakukan dengan menggali senyawa-senyawa alam yang berasal dari tumbuh-tumbuhan (Mangan, 23). Tanaman sirsak (Annona muricata L.) termasuk famili Annonaceae dan memiliki aktivitas farmakologi seperti antikanker. Mclaughlin (1991) melaporkan famili Annonaceae mengandung banyak senyawa acetogenins. Acetogenin merupakan senyawa metabolit sekunder yang secara alami terbentuk dalam tumbuhan, yang spesifik menyerang sel kanker tanpa mempengaruhi sel normal pada makhluk hidup.penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Hanifah (21) menunjukkan bahwa ekstrak metanol daun sirsak bersifat sitotoksis tinggi dengan nilai LC sebesar 4,187 ppm Daun kenikir (Cosmos caudatus) mempunyai beberapa senyawa kimia antara lain alkaloid, saponin, flavonoid, polifenol, dan minyak atsiri. Kandungan flavonoid pada daun kenikir diketahui mampu menginduksi terjadinya apoptosis, yakni suatu kematian sel terprogram dan berperan penting dalam proses penanganan perkembangan kanker (Tabak et al., 21). Penelitian Ratnawati (2) menunjukkan bahwa ekstrak metanol daun kenikir memiliki aktivitas biologis terhadap Artemia Salina L. dengan nilai LC sebesar 467,62 ppm Kelor (Moringa oleifera L.) adalah tanaman yang kaya nutrisi dan tersebar pada seluruh bagian tanaman kelor. Kelor mengandung lebih banyak vitamin, mineral, antioksidan, asam amino esensial dan senyawa lain yang bermanfaat (Krisnadi, 212). Hasil penelitian Anwar dkk., (27) menunjukkan bahwa bagian-bagian dari kelor mempunyai kandungan senyawa yang berfungsi sebagai antitumor. Penelitian Anwar dkk., (214) menunjukkan bahwa ekstrak akuades (suhu kamar) dan akuades panas (7 ) daun kelor memiliki nilai LC sebesar 26,977 ppm, dan 163,979 ppm. Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) adalah metode untuk menguji toksisitas suatu ekstrak atau senyawa. Keuntungan metode BSLT ini sederhana, cepat, murah, dan dapat dipercaya (Meyer 1982). Ekstrak dinyatakan bersifat toksik menurut metode BSLT ini jika memiliki LC kurang dari µg/ml.

3 Metode yang digunakan untuk ekstraksi adalah metode rebusan, yaitu metode yang umum digunakan oleh masyarakat karena proses pembuatannya sederhana. Pelarut yang digunakan adalah akuades. Diharapkan dari penelitian ini diperoleh toksisitas rebusan daun sirsak, daun kenikir dan daun kelor dengan metode BSLT. METODE PENELITIAN Pengumpulan Bahan Daun sirsak, daun kenikir, dan daun kelor yang digunakan dalam penelitian diperoleh dari Balai Penelitian Tanaman Rempah dan Obat (Ballitro), Bogor.. Pembuatan Ekstrak Kering Daun sirsak, kenikir dan kelor diekstraksi dengan cara perebusan dengan akuades, Pembuatan rebusan dilakukan sendiri dengan cara sebanyak g simplisia basah daun sirsak dimasukkan ke dalam bejana yang diisi dengan L akuades dan dipanaskan di atas api langsung sampai mendidih selama 3 menit kemudian disaring, filtratnya dipisahkan dan dimasukkan ke dalam wadah botol, lalu dibuat ekstrak kering dengan vacuum dryer pada suhu 6 C Penetasan Telur Artemia salina L. Penetasan telur Artemia salina L. dilakukan pada wadah bening menggunakan media air garam. Wadah penetasan dibagi menjadi dua bagian antara terang dan gelap oleh suatu sekat. Bagian gelap digunakan untuk meletakkan telur yang akan ditetaskan. Sekat yang terang menjadi jalan bagi larva yang lahir untuk bergerak secara alamiah ke arah terang. Selama penetasan telur larva berlangsung diberikan penerangan dengan cahaya lampu pijar atau neon 4-6 watt agar suhu penetasan 2-3 C tetap terjaga (Harmita dan Radji, 2) Uji Toksisitas Larutan induk dibuat ppm, kemudian dipipet masing-masing sebanyak 4, 2, 1,,,,2,,12,1 dan, ml dan dimasukkan ke dalam botol vial yang sudah ditara ml, lalu air laut ditambahkan ke dalam semua vial sampai 8 ml, kemudian dimasukkan larva udang sebanyak ekor dan ditambahkan air laut sampai volume batas vial. Konsentrasi pada masing-masing vial adalah 4, 2,,, 2, 12,,, dan ppm, kedalam masing-masing vial ditambahkan 1 tetes suspensi ragi (,6 mg/ml) sebagai makanan larva udang. Uji toksisitas dilakukan sebanyak 3 kali ulangan pada masing-masing ekstrak sampel. Pengamatan dilakukan selama 24 jam terhadap kematian larva udang. Analisa Data Pengolahan data hasil pengamatan dilakukan dengan cara analisis probit dari persen mortalitas kumulatif untuk mendapatkan nilai lethal concentration pada % hewan uji (LC) HASIL DAN PEMBAHASAN Metode BSLT digunakan untuk mendeteksi keberadaan senyawa toksik dan dipakai untuk memonitor dalam isolasi senyawa dari tumbuhan yang berefek sitotoksik, dengan menentukan LC dari senyawa aktif. Analisis probit digunakan untuk mengetahui nilai LC, jika nilai

4 Nilai Probit (y) Nilai Porbit (Y) LC ekstrak atau senyawa uji kurang dari µg/ml (ppm) maka dianggap menunjukkan adanya aktivitas biologi, sehingga pengujian ini dapat digunakan sebagai skrining awal terhadap senyawa bioaktif yang diduga berkhasiat sebagai anti kanker (Meyer et al., 1982). LC yang akurat dicari dengan memilih beberapa dosis yang mematikan sekitar %. Uji orientasi (trial) dilakukan terlebih dahulu untuk menentukan konsentrasi larutan uji sebenarnya yang akan digunakan. Setelah uji orientasi dilakukan, diperoleh konsentrasi larutan uji yang digunakan yaitu 4, 2,,, 2, 12,, dan ppm. Kontrol negatif berupa air laut dan larva udang tanpa adanya penambahan ekstrak untuk menguji pengaruh air laut maupun faktor lain yang berpengaruh terhadap kematian larva. Grafik nilai LC dapat dilihat dibawah ini : 1. Grafik nilai LC daun sirsak Nilai probit ( y) Ulangan 1 y = 1.892x R² = Ulangan 2 Log konsentrasi (x) y = 2.111x R² = Log konsentrasi (X) Ulangan y = 2.18x R² = Grafik nilai LC daun kenikir Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 y = 1.447x R² = y 1= 2.226x Log R² Konsentrasi =.992 (X) y = 2.22x R² = Grafik nilai LC daun kelor Ulangan 1 y = 1.447x R² 1 =

5 Ulangan 2 Ulangan 3 y = 1.37x R² = y = 2.16x R² = Rata-rata nilai LC pada setiap sampel dapat dilihat pada Tabel 1. Tabel 1. Nilai LC Ekstrak Kering Rebusan Daun Sirsak, Daun Kenikir dan Daun Kelor Sampel Ulangan LC (ppm) Rata-rata LC (ppm) Rebusan 1 9,49 Daun sirsak 2 11,481 11,92±1, ,246 Rebusan 1,466 Daun Kenikir 2,9 3,88±2,94 3 3,2 Rebusan 1 99,4 Daun Kelor 2 9,39 99,148±8,3 3 88,11 Toksisitas daun sirsak yang tinggi ini, terjadi karena daun sirsak memiliki berbagai kandungan senyawa-senyawa metabolit sekunder yang bersifat toksik misalnya annoneous acetogenins. Mayoritas annoneous acetogenins memiliki sifat sitotoksik terhadap sel kanker dan menunjukkan aktivitas imunosupresif. Menurut Prof. Soelaksono Sastrodihardjo PhD., asetogenin menghambat ATP (Adenosin Tri Phospat) yang merupakan sumber energi di dalam sel. Sel kanker membutuhkan energi banyak sehingga membutuhkan banyak ATP. Asetogenin masuk dan menempel di Reseptor dinding sel serta merusak ATP di dinding mitokondria akibatny produksi energi di dalam sel kanker terhenti dan akhirnya sel kanker mati (Suranto, 212) Abas et al., 23 menyebutkan bahwa ekstrak daun kenikir mengandung flavonoid dan glikosida kuersetin. Senyawa flavonoid diketahui mampu menginduksi terjadinya apoptosis melalui penghambatan aktivitas DNA (Deoxyribonucleic acid), modulasi signalling pathways, penurunan ekspresi gen Bcl-2 (B-cell lymphoma 2) dan Bcl-XL (B-cell lymphoma-extra large), peningkatan ekspresi gen Bax (Bcl-2 associated x protein) dan Bak (Bcl-2 associated killer), serta aktivasi endonuklease topoisomerase I/II(Ren, et al., 23).

6 Mekanisme ekstrak daun kelor sebagai senyawa toksik yaitu kemungkinan karena daun kelor mengandung beberapa senyawa aktif yaitu arginin, leusin dan metionin. Arginin berperan dalam meningkatkan imunitas atau kekebalan tubuh, dan juga mempercepat proses penyembuhan luka, meningkatkan kemampuan untuk melawan kanker dan memperlambat pertumbuhan tumor (Mardiana,212). Semua sampel ekstrak kering dari daun sirsak, daun kenikir dan daun kelor memiliki nilai LC kurang dari μg/ml yang artinya semua sampel memiliki sifat toksik. Kategori ketoksikan yang diperoleh yaitu rebusan daun sirsak bersifat sangat toksik sedangkan rebusan daun kenikir dan daun kelor bersifat toksik. Menurut Meyer et al. (1982), ekstrak dari bahan alam dikategorikan toksik apabila memiliki LC kurang dari μg/ml. Pernyataan tersebut menunjukkan bahwa ketiga sampel bersifat toksik dan memiliki potensi sebagai antikanker Cara kerja senyawa-senyawa tersebut adalah dengan bertindak sebagai stomach poisoning atau racun perut. Senyawa-senyawa ini bila masuk ke dalam tubuh larva maka alat pencernaanya akan terganggu, selain itu senyawa ini menghambat reseptor perasa pada daerah mulut dan larva hal itu mengakibatkan larva gagal mendapatkan stimulasi rasa, sehingga tidak mampu mengenali makanannya sehingga larva mati kelaparan (Rita, dkk., 28). KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan Hasil uji toksisitas rebusan daun sirsak, daun kenikir dan daun kelor berpotensi sitotoksik. Hasil uji toksisitas yang paling tinggi yaitu ekstrak kering rebusan daun sirsak diikuti ekstrak kering rebusan daun kenikir dan daun kelor dengan ratarata LC sebesar 11,92±1,13 ppm; 3,88±2,94 ppm dan 99,148±8,3 ppm. Saran Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk uji toksisitas menggunakan hewan coba lain seperti tikus dan penelitian lebih lanjut untuk mengisolasi senyawa aktif yang berkhasiat sebagai anti kanker. DAFTAR PUSTAKA Abas, F., Shaari, K., Lajis, N.H., Israf, D.A., dan Kalsom, Y.U., 23. Antioxidative and radical scavenging properties of the constituents isolated from Cosmos caudatus Kunth., Nat. Prod. Sciences, 9(4), Anwar, F., Latif, s., Ashraf, M., Gilani, A.H. 27. Moringa oleifera: A food plant with Multiple medicinal uses. Phytoterapy. XXI Anwar, S., Yulianti, E., Hakim, A., Fasya A.G., Fauziyah, B., Muti ah, R Uji Toksisitas Ekstrak Akuades (Suhu Kamar) Dan Akuades Panas (7 C) Daun Kelor (Moringa Oleifera Lamk.) Terhadap Larva Udang Artemia salina Leach.

7 Alchemy. Vol. 3 No.1 hal Harmita dan M. Radji. 2. Buku Ajar Analisis Hayati edisi III. Buku Kedokteran EGC. Jakarta. Hanifah, Z N, 21. Uji Toksisitas Akut Ekstrak Metanol Daun Sirsak (Annona muricata L) Terhadap Larva Artemia salina Leach Dengan Metode BSLT. (Skripsi). Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah. Jakarta. Krisnadi, D. A Kelor Super Nutrisi. Pusat Informasi dan Pengembangan Tanaman Kelor Indonesia Lembaga Swadaya Masyarakat Media Peduli Lingkugan (LSM- Mepeling) Mangan, Y. 23. Cara Bijak Menaklukkan Kanker. Cetakan Pertama. Argomedia Pustaka. Depok. Mardiana, L Daun Ajaib Tumpas Penyakit, Cetakan satu. Penebar Swadaya. Jakarta McLaughlin, J.L Crown Gall Tumours on Potato Disc and Brine Shrimp Lethality: Two Simple Bioassay for Higher Plant Screening and Fractination. Methods in Plants Biochemistry. 6 (1): 1-3. Meyer BN, Fergni NR, Butman JE, Ja Cobsen LB, Nicholas DE, Mclaughlin JL. 1982, Brine Shrimp:A convenient general bioassay for active plant constituents, Planta Medica. Vol. 32, Ren, W., Qiao, Z., Wang, H., Zhu, L., Zhang, L., 23, Flavonoids: Promising Anticancer Agents, Medicinal Research Reviews, 23 (4), Rita W.S., Suirta, I.W., Sabikin, A. 28. Isolasi dan Identifikasi Senyawa yang Berpotensi Sebagai Antitumor Pada Daging Buah Pare (Momordica charantia L.), Jurusan Kimia FMIPA Universitas Udayana. Jurnal Kimia Vol. 2. No 2. ISSN Supriyanto W Kanker Deteksi Dini, Pengobatan dan Penyembuhannya Edisi Pertama. Perama Ilmu. Yogyakarta. Suranto, A Dahsyatnya Sirsak Tumpas Penyakit. Cetakan ke V. Pustaka Bunda. Jakarta. Tabak, CIC, Arts, HA, Smit, DH & Kromhout, D 21, Chronic obstructive pulmonary diasese and intake of catechins, flavanols and flavones: the morgen study, Am. J. Respir. Crit. Care Med., 164: pp. Wijaya, M Ekstraksi Annonaceous Acetogenin dari Daun Sirsak, Annona Muricata, Sebagai Senyawa Bioaktif Antkanker. (Skripsi). Universitas Indonesia. Jakarta.

8