THE INTERCEPTION ANTIFERTILITY ACTIVITY TEST OF GUAVA (Psidium guajava L.) LEAF METHANOL EXTRACT TO WHITE MICE (Rattus norvegicus)

Transkripsi

1 THE INTERCEPTION ANTIFERTILITY ACTIVITY TEST OF GUAVA (Psidium guajava L.) LEAF METHANOL EXTRACT TO WHITE MICE (Rattus norvegicus) Sri Retno Dwi Ariani, Endang Susilowati, Elfi Susanti VH, Yuni Suryanto Program Studi Pendidikan Kimia P.MIPA FKIP UNS Jl. Ir Sutami A Kentingan Solo Jateng Indonesia arinsaniina@yahoo.com ; edkostrad@yahoo.co.id. Abstract The aim of this research was to know about what the guava (Psidium guajava L). leaf methanol extract on, mg/ml and,0 mg/ml dossages indicated a positive test as interseption antifertility to white mice (Rattus norvegicus). The sample was guava leaf from Mungkid, Magelang Central Java Indonesia. The animals experiment were the white mice on 0-00 grams (female), 00-0 grams (male) and about months of age in average. The steps of this research were : () preparation sample, i.e. washing, drying on to indirect sunlight and making the sample into powder, () isolation the guava leaf powder with soxhletation method with hexane pa, () evaporation the sample with rotary evaporator until guava leaf hexane extract produced, () maseration the sample with methanol, () evaporation the sample with rotary evaporator until guava leaf methanol extract produced, () test the interseption antifertility activity to guave leaf methanol extract on. mg/ml and.0 mg/ml dossages to mice white. The results of this research were guava leaf methanol extract on, mg/ml and,0 mg/ml dossages indicate a negative interseption antifertility test to white mice but in these dossages have indicated that an antiimplantation effect (the total natality of fetus is less than the total implantation site in mice white). Key words : Interseption antifertility, Psidium guajava L., Rattus norvegicus, implantatio PENDAHULUAN Daun jambu biji merupakan salah satu bahan obat tradisional yang berasal dari tumbuhan. Proyeksi luas panen tahun termasuk urutan ke- dari ke jenis buahbuahan komersial yang dihasilkan di negara kita. Proyeksi luas areal panen jambu biji pada Pelita V () sekitar.0 hektar yang tersebar di Indonesia. Berdasarkan data dari biro pusat statistik () produksi jambu biji di pulau Jawa selama triwulan I-IV mencapai sebesar., ton (Rukmana, ). Di dalam daun jambu biji terkandung antara lain senyawa-senyawa kuersetin dalam bentuk aglikon, guajaverin (kuersetin -O-β-Darabinosida), isokuersetin (kuersetin -O-β-Dglukosida), hiperin (kuersetin -O-β-Dglukosida) dan kuersitrin (kuersetin -O-β-Dramnosida), (Sudarsono dkk., 00 dan Hargono, 00). Ekberg dan Parotti menyatakan bahwa kuersetin dapat menghambat fusi membran gamet landak laut saat akan terjadinya fertilisasi. Scambia dkk. menyatakan bahwa kuersetin mempunyai sifat antiproliferasi, sehingga dapat menghambat proses oogenesis (Harborne, ). Percobaan secara in vitro membuktikan bahwa beberapa senyawa flavonoida termasuk kuersetin menghambat aktifitas hialuronidase, sehingga spermatozoa tidak dapat menembus kumulus menjelang fertilisasi. Hal ini mengakibatkan terjadinya kegagalan fertilisasi (Li dkk., ). Dilaporkan pula bahwa kuersetin menghambat enzim sitokrom P-0 III A dalam proses hidroksilasi estradiol-β menjadi estron dan selanjutnya menjadi estriol. Kenaikan kadar Estradiol darah dapat mempercepat transport gamet ataupun zigot di dalam tuba (Findlay, ). Adanya percepatan transport ini dapat mengakibatkan terjadinya kegagalan nidasi yang selanjutnya dapat berakibat pada kegagalan kehamilan (Astika, 000). Potensi estradiol, estron dan estriol berbanding 0 : :. Kadar estradiol yang tinggi setelah kopulasi dapat mempercepat transportasi gamet dan zigot atau blastosista (Findlay, ). Zigot akan mengalami proses sigaran di dalam tuba hingga mencapai stadium sel. Proses ini membutuhkan waktu selama hari terhitung sejak terjadinya kopulasi. Pada hari ke- morula atau blastosista telah masuk ke dalam uterus (Hafez, 0). G.N. Astika (000) telah membuktikan bahwa pada ekstrak metanol daun benalu (Dendrophthoe petandra) menunjukkan adanya aktifitas antifertilitas intersepsi pada tikus putih. Diinformasikan bahwa di dalam tumbuhan benalu terkandung antara lain senyawa kuersitrin, suatu glikosida flavonol, dimana aglikonnya adalah kuersetin. Kuersetin merupakan senyawa flavonoid yang dapat diekstraksi dari bahan tumbuhan dengan menggunakan pelarut metanol (Sudarsono dkk., 00 dan Hargono, 00). Adanya kekayaan alam Indonesia akan daun jambu biji dan informasi kandungan senyawa bahan alam daun jambu biji maka daun jambu biji layak diteliti untuk kepentingan eksplorasi ISBN : ---

2 bahan antifertilitas non steroid bagi wanita. Dalam penelitian ini yang diuji adalah aktivitas antifertilitas intersepsi ekstrak metanol daun jambu biji. Usaha ini merupakan penelitian/ proses dasar menuju pada standardisasi daun jambu biji sebagai bahan antifertilitas non steroid. Adapun tujuan yang ingin dicapai pada penelitian ini adalah untuk mengetahui apakah ekstrak metanol daun jambu biji pada dosis, dan,0 mg/ml menunjukkan efek antifertilitas intersepsi pada tikus putih. METODE PENELITIAN Sampel adalah daun jambu biji dari Kecamatan Mungkid Magelang Jawa Tengah Indonesia. Hewan uji coba adalah tikus putih dari Lembaga Pengembangan Hewan Ternak, FK UGM, Yogyakarta. Bahan penelitian adalah : heksana pa, metanol pa, dimetil sulfoksida, eter, cotton bud, kertas saring, akuades dan aluminum foil. Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah : seperangkat alat soxhlet, seperangkat alat rotary vaccum evaporator Heidolph Germany, oven, mortar, mikroskop, preparat, alat suntik, kandang tikus, neraca analitik Sartorius, timbangan hewan (Ghauss), seperangkat alat bedah dan seperangkat alat gelas yang lazim dipakai. Pembuatan Serbuk Daun jambu biji disortir, dibersihkan dari kotoran yang melekat, dicuci sampai bersih kemudian dijemur pada sinar matahari tidak langsung sampai kering. Selanjutnya daun jambu biji kering dibuat menjadi bentuk serbuk. Isolasi dan Rotary Evaporator Serbuk daun jambu biji sebanyak 00 gram diekstraksi dengan pelarut heksana pa sebanyak.00 ml di dalam alat soxhlet. Selanjutnya diuapkan dengan rotary evaporator sehingga didapatkan ekstrak pekat yang bebas heksana (EH). EH direndam dengan 0 ml metanol pa selama jam, lalu diuapkan dengan rotary evaporator sehingga didapatkan ekstrak metanol (EM). Ekstrak inilah yang akan digunakan sebagai sediaan (dosis) untuk uji aktivitas antifertilitas intersepsi pada tikus putih [Astika, 000 ; Doyle, 0 dan Setyowati, 00) Penyediaan Tikus Putih Binatang percobaan yang akan digunakan adalah tikus putih betina maupun jantan yang fertil. Tikus putih betina dengan berat badan 0-00 gram sedangkan yang jantan 00-0 gram [Astika, 000). Pembuatan Sediaan (dosis) Sediaan (dosis) dibuat dengan cara melarutkan EM dalam pembawa berupa dimetil sulfoksida : Sediaan : mengandung, mg EM/ml Sediaan : mengandung,0 mg EM/ml Sediaan : pembawa (dimetil sulfoksida) dalam air Uji Aktivitas Antifertilitas Intersepsi Pada Tikus Putih Galur Wistar Mengumpulkan tikus putih betina dengan tikus putih jantan. Melakukan oles vagina pada tikus putih betina. Hari teramatinya sumbat vagina menandakan telah terjadi kopulasi dan dihitung sebagai hari pertama kebuntingan (H-). Memisahkan tikus putih jantan dan tikus putih betina. Mengelompokkan secara acak tikus putih yang telah melakukan kopulasi menjadi kelompok terdiri dari kelompok perlakuan ( dan ) dan kelompok kontrol (K). Masingmasing kelompok terdiri dari ekor. Sejak (H-) memberi sediaan pada kelompok perlakuan, sediaan pada kelompok perlakuan dan sediaan pada kelompok kontrol secara oral setiap hari sampai dengan (H-). Melakukan pembedahan pada (H-), yang sebelumnya tikus putih betina dibunuh dengan menggunakan eter. Pembedahan dimulai dari atas vagina sampai pada bawah leher. Menghitung jumlah tapak implantasi dan jumlah fetus dari hasil pembedahan tikus putih betina tersebut [Astika, 000 dan Nalbandov, 0). Adapun skema penelitian dapat dilihat pada gambar di bawah ini. Hari (H-) (H-) (H-) Gambar. Skema Uji Aktifitas Antifertilitas Intersepsi (H-) : hari teramati adanya sumbat vagin a, tikus putih jantan dipisahkan dari betina (H-) (H-) : hari pemberian sediaan pembawa (H-) : hari dilakukan pembedahan Teknik Analisis Data Data yang diperoleh dalam penelitian akan diolah dengan menguji kesamaan ratarata dengan tingkat signifikasi : = 0,0 dan uji yang digunakan adalah uji - t pihak kanan ISBN : ---

3 dengan ketentuan sebagai berikut [Astika, 000 dan Sudjana, ). Adapun rumus uji-t pihak kanan adalah : t = S x x dengan n S = + n n ( ) S + ( n ) n + n S x = mean dari jumlah tapak implantasi x = mean dari jumlah fetus n = jumlah dari tapak implantasi n = jumlah dari fetus S = simpangan baku gabungan Kriteria pengujian : * Jika t hitung t tabel maka hipotesis nol diterima * Jika t hitung > t tabel maka hipotesis nol ditolak HASIL DAN PEMBAHASAN Sampel daun jambu biji dibersihkan dari kotoran, dicuci kemudian dikeringkan (tidak terkena matahari langsung). Daun yang telah kering kemudian digiling menjadi serbuk tidak terlalu halus dan tidak terlalu kasar. Serbuk daun jambu biji kering sebanyak.00 g diekstraksi dengan heksana pa di dalam alat soxhlet selama jam. Ekstrak heksana pa diambil dan diuapkan sampai kering (EH). Ekstraksi terhadap serbuk daun dilanjutkan dengan perendaman dalam pelarut metanol pa selama jam. Ekstrak metanol yang diperoleh diuapkan dengan alat rotary evaporator sampai didapat ekstrak kering (EM). Untuk mengetahui fertil tidaknya tikus putih, maka untuk yang jantan dikawinkan dengan yang betina, jika tikus putih betina bunting, maka dapat dipastikan bahwa tikus putih jantan tersebut fertil, sedangkan untuk mengetahui fertil tidaknya tikus putih betina dapat dilakukan dengan cara mengumpulkannya dengan tikus putih jantan sambil dilakukan oles vagina. Oles vagina dihentikan sampai terjadi kopulasi (percampuran antara sel telur dan sperma). Kopulasi ditandai dengan adanya sumbat vagina. Hal ini menunjukkan kebuntingan yang pertama. Dengan kebuntingan, menunjukkan bahwa tikus putih betina tersebut fertil. Kopulasi terjadi pada stadium proestrus, karena pada stadium tersebut tampak adanya folikel-folikel (sel-sel pembantu) yang mulai tumbuh dan di uterus dinding endometrium (dinding rahim) mulai menebal. Pemberian sediaan (dosis) dalam waktu hari dimungkinkan dapat memberikan efek antifertilitas intersepsi, yaitu pencegahan kehamilan pada tikus putih betina yang dilakukan setelah terjadi perkawinan. Selang hari setelah pemberian dosis atau sebelum dilakukan pembedahan dimaksudkan agar dalam waktu tersebut ekstrak metanol daun jambu biji yang mengandung kuersetin dapat bekerja sebagaimana mestinya dalam menghambat fusi membran gamet, artinya menghambat penggabungan antara sperma dan sel telur. Kuersetin juga menghambat aktivitas hialuronidase, yaitu enzim yang membantu pergerakan sperma menuju sel telur (Toelihere, ). Dengan adanya kuersetin ini mengakibatkan spermatozoa tidak dapat menembus kumulus (membran/lapisan ovum) menjelang fertilisasi(li dkk., ). Pembedahan yang dilakukan pada hari ke- bertujuan untuk mengetahui apakah EM telah bekerja dengan baik artinya dapat memberikan efek intersepsi pada tikus putih. Ini dilihat dari hasil pembedahan setelah dihitung jumlah fetus (Fe) dan tapak implantasinya (TI). Jumlah Fe dan jumlah TI hasil pembedahan dari ketiga kelompok perlakuan dapat dilihat pada Tabel, Tabel dan Tabel. Hasil dari analisis uji-t terhadap jumlah Fe dan jumlah TI untuk ketiga kelompok adalah sebagai berikut : () pada kelompok perlakuan menunjukkan hasil perhitungan t hitung sebesar 0,, setelah dikonsultasikan dengan tabel distribusi t pada taraf signifikan 0,0 didapat harga t tabel, yang berarti bahwa hipotesis nol (H 0 ) diterima, () pada kelompok perlakuan menunjukkan hasil perhitungan t hitung sebesar 0, setelah dikonsultasikan dengan tabel distribusi t pada taraf signifikan 0,0 didapat harga t tabel, yang berarti bahwa hipotesis nol (H 0 ) diterima dan () pada kelompok kontrol menunjukkan hasil perhitungan t hitung sebesar 0 setelah dikonsultasikan dengan tabel distribusi t pada taraf signifikan 0,0 didapat harga t tabel, yang berarti bahwa hipotesis nol (H 0 ) diterima. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa pada dosis tersebut memberikan efek antiimplantasi, yaitu cara yang dapat diterapkan untuk mengevaluasi kerja obat antifertilitas di mana memperlihatkan jumlah kelahiran (fetus) yang lebih sedikit dari jumlah tapak implantasinya. Dapat dilihat pada Tabel bahwa pada dosis, mg/ml memperlihatkan antiimplantasi, yang ditemukan pada tikus putih nomor,,, dan. Sedangkan pada Tabel yaitu dosis,0 mg/ml memperlihatkan efek antiimplantasi, yaitu pada tikus putih nomor, dan. ISBN : ---

4 Uji aktivitas intersepsi : Kelompok Sediaan : Dosis :, mg/ml pembawa /00 g bb/hari Tabel. Data Biologis Tikus Putih Betina No.tikus putih betina BAD (g) BKD (g) BP (g) 0 TI Fe LK 0 % Uji aktivitas intersepsi : Kelompok Sediaan : Dosis :,0 mg/ml pembawa /00 g bb/hari Tabel. Data Biologis Tikus Putih Betina No.tikus BAD BKD (g) BP (g) Tl Fe LK putih betina (g) % Uji aktivitas intersepsi : Kelompok Kontrol Sediaan : Dosis : ml pembawa/00 g bb/hari Tabel. Data Biologis Tikus Putih Betina No.tikus putih BAD (g) BKD (g) BP (g) Tl Fe LK betina BAD BKD BP TI Fe LK bb : Berat badan tikus putih betina pada awal pemberian dosis : Berat badan tikus putih betina pada akhir pemberian dosis : Berat badan tikus putih betina pada saat pembedahan : Tapak Implantasi : Fetus : Laju Kebuntingan : berat badan 0 % ISBN : ---

5 SIMPULAN Pada penelitian dapat diambil kesimpulan bahwa pada dosis, mg dan,0 mg ekstrak metanol daun jambu biji belum menunjukkan efek antifertilitas intersepsi pada tikus putih, tetapi pada dosis tersebut ekstrak metanol daun jambu biji telah menunjukkan adanya efek antiimplantasi pada tikus putih. UCAPAN TERIMA KASIH Dalam kesempatan ini ijikanlah kami mengucapkan terimakasih yang sebesarbesarnya atas bantuan dana dari Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi, Departemen Pendidikan Nasional lewat program Penelitian Dasar. Semoga hasil penelitian ini bermanfaat bagi kita semua. Amin. DAFTAR PUSTAKA Astika, G.N., 000, Aktifitas Kontrasepsi dan Intersepsi Ekstrak Metanol Daun Benalu ( Dendrophthoe petandra L.) Pada Tikus putih, Berkala Penelitian Hayati,, -. Findlay, A.L.R.,, Reproduction and The Fetus, London : Edward Arnold. Hafez, E.S.E., 0, Reproduction and Breeding Technigues for Laboratory Animals, Philadelpia : Lea and Febiger. Harborne, J.B.,, The Flavonoids Advances in Research Since. London : Chapman and Hall. Hargono. Dj., 00, Beberapa Hasil Penelitian yang Mendukung Manfaat Tumbuhan Jambu Biji (Psidium guajava L.), Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia,, -. Li, M.W., Yudin, A.I., Vande Voort, C.A., Sabuer, K., and Primakoff, P.,, Inhibition of Monkey Sperm Hyaluronidase Actifity and Heterologous Cumulus Penetration by Flavonoids, Biol.Reprod,, -. Rukmana, R.,, Jambu Biji, Jakarta : Kanisius. Sudarsono, G., Wahyuono, D., Donatus, I.A., 00, Tumbuhan Obat II : Hasil Penelitian, Sifat-sifat dan Penggunaan, Yogyakarta : Pusat Studi Obat Tradisional UGM, -. Sudjana,, Metode Statistik, Bandung : Tarsito. Toelihere, M.,, Fisiologi Reproduksi Pada Ternak, Bandung : Angkasa TANYA JAWAB Penanya : Agung Abadi K (UNPRI) Pertanyaan : Bagaimana jumlah ekstrak dan waktu fetus terhadap tujuan yang ingin dicapai? (Jumlah ekstrak dinaikkan atau waktu fetus yang diperlama?) Jawaban : Jumlah ekstrak (dosis) dan lama pemberian sediaan/pembedahan tikus, dibuat sesuai prosedur dari jurnal-jurnal terdahulu yang sudah tervalidasi. Untuk mengatasi mungkin diberikan kuersetin yang sudah murni shg efeknya sebagai antifertilitas intersepsi lebih terasa ISBN : ---