SUPLEMENTASI MIKROMINERAL PADA LIMBAH AGROINDUSTRI YANG DIFERMENTASI Trichoderma viridae YANG DITINJAU DARI KONSENTRASI VFA DAN N-NH 3 SECARA IN VITRO

Transkripsi

1 SUPLEMENTASI MIKROMINERAL PADA LIMBAH AGROINDUSTRI YANG DIFERMENTASI Trichoderma viridae YANG DITINJAU DARI KONSENTRASI VFA DAN N-NH 3 SECARA IN VITRO (Micromineral Suplementation on Fermented By-Product of Agroindustry using Trichoderma viridae Based on In Vitro Concentration of VFA and NH 3 ) CARIBU HADI PRAYITNO Fakultas Peternakan Universitas Jenderal Soedirman, Jl. Dr. Suparno Kotak Pos 110, Purwokerto ABSTRACT The purpose of this study is to investigate the effects of micromineral supplementation (Zn and Cu) on by-product of agroindustry (cassava s shell, cacao shell and coffea s shell) fermented by Trichoderma viridae 5% for ruminal VFA and N-NH 3 by in vitro method. The experiment was design as nested classification with two level (group). Main group, by-product of agroindustry was L1 = cassava shell, L2 = cacao shell and L3 = coffee shell. Sub group was micromineral supplementation, there were m0 (without supplementation), m1(50 ppm Zn supplementation), m2 (6 ppm Cu supplementation) and m3 (50 ppm Zn and 6 ppm Cu supplementation). Each sub group was nested to main group (3 x 4) and 3 times replications. Variables observed was digestibility, concentration of VFA and N-NH 3 by in-vitro method. It is concluded that the supplementation of 50 ppm Zn and 6 ppm Cu (m3) on cassava s shell fermented by Trichoderma viridae gave higher production average of DMD, DMO, VFA and N-NH 3 than that of cacao shell and coffee shell. Key Words: By-Product of Agroindutry, Trichoderma Viridae, Zn, Cu, VFA, N-NH 3 ABSTRAK Tujuan penelitian ini adalah untuk mengkaji pengaruh suplementasi mikromineral (Zn dan Cu) pada limbah agroindustri (kulit singkong, kulit kakao dan kulit kopi) yang difermentasi menggunakan Trichoderma viridae 5% terhadap konsentrasi VFA dan N-NH 3 di dalam rumen secara in vitro. Digunakan rancangan percobaan pola tersarang (nested clasification) dengan dua tingkatan yaitu limbah agroindustri sebagai main group dan suplementasi mikromineral sebagai sub group. Main group terdiri dari L1 = kulit singkong terfermentasi Trichoderma viridae 5%, L2= kulit kakao terfermentasi Trichoderma viridae 5% dan L3= kulit kopi terfermentasi Trichoderma viridae 5%. Sub group terdiri dari m1 (suplementasi Zn), m2 (suplementasi Cu) dan m3 (suplementasi Zn 50 ppm dan Cu). Setiap sub group disarangkan pada main group (3 x 4) dan diulang sebanyak 3 kali. Parameter yang diukur adalah kecernaan (bahan kering dan organik) konsentrasi VFA dan N-NH 3 dalam cairan rumen. Hasil penelitian in vitro menunjukkan bahwa suplementasi Zn 50 ppm dan Cu 6 ppm (m3) pada kulit singkong yang terfermentasi Trichoderma viridae menghasilkan rataan kecernaan, produksi VFA dan produksi amonia (NH 3 ) paling tinggi dibandingkan dengan kulit kakao dan kulit kopi. Kata Kunci: Limbah Agroindustri, Trichoderma viridae, Zn, Cu, VFA, N-NH 3 PENDAHULUAN Hambatan utama dalam peningkatan populasi ternak ruminansia adalah keterbatasan pakan. Mengingat sempitnya lahan yang tersedia dan mahalnya harga pakan, maka upaya pemanfaatan sisa hasil pertanian untuk pakan yang dipadukan dengan bahan lain perlu dilakukan. Limbah agroindustri di Indonesia tersedia dalam jumlah besar seperti kulit singkong, kulit kopi dan kulit kakao. Kulit singkong merupakan limbah dari tanaman singkong yang memiliki kandungan karbohidrat tinggi yang dapat digunakan sebagai sumber 761

2 energi bagi ternak. Setiap kilogram singkong biasanya dapat menghasilkan 15 20% kulit umbi. Kandungan pati kulit singkong yang cukup tinggi, memungkinkan digunakan sebagai sumber energi. Kulit buah kakao kandungan nutriennya terdiri atas bahan kering (BK) 88% protein kasar (PK) 8%, serat kasar (SK) 40,1% dan TDN 50,8% dan penggunaannya oleh ternak ruminansia 30 40%. Tanaman kopi dapat menyumbang bahan pakan berupa kulit biji (shell) sebanyak 6,0% dan pulp (daging buah) sebanyak 43,0%. Tingkat produktivitas mencapai kg/ha, sehingga potensi produksi daging buah dan kulit biji masing-masing sebesar 0,94 ton dan 0,14 ton/ha (BOUCQUE dan FIEMS, 1988). Sebagian besar limbah agroindustri, termasuk kulit singkong, kulit kopi dan kulit kakao, memiliki faktor pembatas yaitu kandungan serat kasarnya tinggi dan nilai nutriennya rendah sehingga kecernaannya rendah. Adanya faktor pembatas tersebut dapat diminimalkan dengan teknik fermentasi menggunakan Trichoderma viridae yang merupakan kapang tanah yang aktif dalam dekomposisi lignoselulosa. Pengolahan secara biologis melalui fermentasi Trichoderma viridae merupakan salah satu cara untuk meningkatkan nilai nutrisi dan kecernaan bahan pakan. Bioproses rumen dan pascarumen harus didukung kecukupan mineral makro dan mikro. Mineral-mineral tersebut berfungsi untuk optimalisasi bioproses rumen dan metabolisme nutrien. Hasil penelitian LITTLE (1986) menunjukan bahwa kandungan Zn pada pakan ruminansia di Indonesia antara 20 dan 38 mg kg -1 bahan kering. Padahal kebutuhan Zn bagi ternak ruminansia adalah 40 ppm untuk sapi perah, 20 sampai 30 ppm untuk pertumbuhan dan finishing sapi (sapi potong), dan 35 sampai 50 untuk domba (NRC, 1989). Sedangkan kebutuhan Zn mikroba rumen antara 130 sampai 220 ppm (HUNGATE, 1966). Kebutuhan Cu pada ruminansia berkisar dari 8 sampai 10 ppm (UNDERWOOD, 1977), sedangkan kebutuhan pada sapi perah adalah 10 ppm (NRC, 1989). Kandungan Cu hijauan kurang dari 3 ppm bahan kering, sehingga sering terjadi defisiensi Cu pada ternak yang digembalakan, oleh karena itu suplementasi Cu harus dilakukan (MILLER et al., 1988). Suplementasi Cu dapat disediakan dalam bentuk Cu-sulfat, Cu-karbonat, Cu-klorit, Cukhelat dan Cu-proteinat. Cu sulfat dan Cu-oksit adalah bentuk umum yang paling sering digunakan. Cu-sulfat lebih efektif dibandingkan dengan Cu-oksit (CROMWELL et al., 1989). Bahan-bahan pakan berserat oleh ruminansia akan diubah menjadi bahan-bahan bernilai biologis tinggi, sebab ruminansia memiliki proses fisiologis pencernaan yang spesifik yaitu adanya aktivitas mikroba dalam rumen sehingga dapat menghasilkan Volatile Fatty Acid (VFA), amonia (N-NH 3 ) dan karbondioksida (CO 2 ) yang bermanfaat bagi mikroba dan ternaknya. Konsentrasi VFA dan N-NH 3 dapat digunakan sebagai indikator kualitas suatu bahan pakan. Konsentrasi VFA di dalam rumen mengindikasikan fermentabilitas bahan pakan sedangkan produksi N-NH 3 mengindikasikan tingkat degradasi bahan pakan di dalam rumen. Oleh karena itu, perlu dikaji sejauh mana pengaruh Trichoderma viridae, serta Zn dan Cu terhadap kualitas kecernaan limbah agroindustri (kulit singkong, kulit kopi dan kulit kakao) berdasarkan konsentrasi VFA dan N-NH 3 secara in-vitro. Tujuan penelitian ini untuk mengkaji pengaruh fermentasi Trichoderma viridae terhadap tiga substrat limbah agroindustri yaitu kulit singkong, kulit kopi dan kulit kakao dengan penambahan mikromineral terhadap peningkatan konsentrasi VFA dan N-NH 3 secara in-vitro. METODE PENELITIAN Materi penelitian yang digunakan adalah kulit singkong, kulit kopi dan kulit kakao masing-masing sebanyak 1 kg, starter Trichoderma viridae sebanyak 5% substrat, serta Zn dari ZnSO 4 50 ppm dan Cu dari CuSO 4 6 ppm. Bahan/pereaksi yang digunakan meliputi media PDA, aquades, alkohol, larutan Mc Dougalls, indikator phenolphthalein, HgCl 2, gas CO 2, H 2 SO 4, HCl 0,5 N, NaOH 0,5 N dan larutan Na 2 CO 3. Pada penelitian ini digunakan rancangan pola tersarang (nested classification) dengan dua tingkat yaitu limbah agroindustri sebagai main group dan suplementasi mikromineral sebagai sub group. Main group terdiri dari L 1 = kulit singkong terfermentasi Trichoderma 762

3 viridae 5%, L 2 = kulit kakao terfermentasi Trichoderma viridae 5% dan L 3 = kulit kopi terfermentasi Trichoderma viridae 5%. Sub group terdiri dari m1 (suplementasi Zn dari ZnSO 4 50 ppm), m2 (suplementasi Cu dari CuSO 4 6 ppm) dan m3 (suplementasi Zn dari ZnSO 4 50 ppm dan Cu dari CuSO 4 6 ppm). Substrat perlakuan selanjutnya diinkubasi pada suhu 37ºC selama 5 hari secara aerob. Setiap sub group disarangkan pada main group (3 x 4) dan diulang sebanyak 3 kali. Tahapan penelitian dimulai dari pembuatan starter Trichoderma viridae dengan media beras, dilanjutkan dengan fermentasi bahan dengan menambahkan starter Trichoderma viridae 5%. Pengambilan cairan rumen dari sapi berfistula untuk percobaan in vitro sesuai metode TILLEY dan TERRY (1963). Parameter yang diukur adalah kecernaan (bahan kering dan organik), konsentrasi VFA dan N-NH 3. Pengukuran konsentrasi VFA total dengan metode destilasi uap dan pengukuran kadar N- NH 3 metode mikro difusi conway (DEPARTEMENT OF DAIRY SCIENCE UNIVERSITY OF WISCOSIN, 1966). Data yang diperoleh dianalisis dengan analisis variansi (keragaman) untuk mengetahui pengaruh perlakuan terhadap parameter. Uji beda BNT untuk mengetahui perbedaan antar perlakuan limbah (main group) dan kontras ortogonal untuk mengetahui perbedaan antar perlakuan suplementasi pada masing-masing limbah (sub group). HASIL DAN PEMBAHASAN Konsentrasi Volatile Fatty Acids (VFA). Konsentrasi asam lemak atsiri (VFA) yang dihasilkan pada 24 jam inkubasi secara in vitro berkisar antara 110 mm sampai 243,3 mm. Hasil tersebut lebih tinggi dibandingkan hasil penelitian SUTARDI (1977), yang mendapat konsentrasi VFA 3 5 jam setelah pemberian pakan sebesar mm serta pernyataan SATTER dan SLYTER (1974) bahwa konsentrasi VFA sering mengalami perubahan dengan variasi antara 9 67 mm. Tingginya hasil yang didapatkan terkait tidak adanya absorbsi VFA selama percobaan in vitro. Hasil analisis ragam menunjukkan bahwa perbedaan limbah dan perlakuan suplementasi mikromineral berpengaruh sangat nyata (P < 0,01) terhadap konsentrasi VFA total. Uji lanjut dengan BNT menunjukkan adanya perbedaan yang sangat nyata antara L 1, L 2 dan L 3. Fenomena tersebut karena adanya perbedaan kandungan karbohidrat dan serat kasar pada masing-masing limbah. Kulit singkong terfermentasi memiliki rataan VFA paling tinggi (210 ± 10 mm) dibanding kulit kakao (143,3 ± 5,7 mm) dan kulit kopi (110 ± 10 mm). Perbedaan konsentrasi VFA berhubungan dengan ketersediaan BETN (Bahan Ekstrak Tanpa Nitrogen) yang merupakan sumber energi untuk aktivitas fermentasi mikroba. BETN kulit singkong paling tinggi (52,48%) dibandingkan dengan kulit kakao (44,40%) dan kulit kopi (29,24%). Produksi VFA adalah indikator kecernaan karboridrat di dalam rumen yang merupakan bagian dari bahan organik pakan, oleh karenanya peningkatan kecernaan bahan organik akan meningkatkan konsentrasi VFA. Perbedaan produksi VFA antar limbah dapat dikarenakan oleh kecernaan bahan organik antara kulit singkong (63,76 %), kulit kakao (63,1%) dan kulit kopi (65,5%). Fermentasi limbah dengan mikroba selulolitik Trichoderma viridae dapat meningkatkan fermentabilitas pakan terbukti dengan meningkatnya konsentrasi VFA pada limbah terfermentasi (L 1 m0, L 2 m0, L 3 m0) dibandingkan dengan konsentrasi VFA limbah tanpa fermentasi (data ditampilkan pad Tabel 1). Aktivitas selulolitik Trichoderma viridae dapat mengubah lignoselulosa menjadi selulosa dan selulosa menjadi glukosa sehingga meningkatkan fermentabilitas bahan pakan. Antar perlakuan suplementasi mikromineral, berdasarkan analisis ragam menunjukkan perbedaan yang sangat nyata (P < 0,01). Hasil uji lanjut kontras ortogonal pada kulit kakao dan kulit kopi menunjukkan adanya beda sangat nyata antara limbah tanpa suplementasi (m0) dibandingkan dengan suplementasi mikromineral (m1, m2, m3) (P < 0,01). Hal tersebut menunjukkan adanya peningkatan aktivitas selulolitik mikroba rumen karena pertumbuhannya didukung oleh ketersediaan mikromineral Zn dan Cu. suplementasi Zn 50 ppm (m1), pada ketiga limbah menunjukkan konsentrasi VFA yang paling tinggi karena kandungan seng (Zn) pada ketiga limbah tersebut telah dapat memenuhi kebutuhan untuk pertumbuhan dan 763

4 aktivitas mikroba rumen dan dosis suplementasi yang diberikan telah sesuai dengan rekomendasi NRC (1985). Konsentrasi VFA pada ketiga limbah yang disuplementasi Zn (m1) atau Cu (m2) tidak berbeda nyata dibandingkan dengan kombinasi suplementasi Zn dan Cu (m3) (P > 0,05). Terdapat perbedaan yang sangat nyata (P > 0,01) antara perlakuan suplementasi Zn (m1) dan suplementasi Cu (m2) pada setiap limbah. Konsentrasi VFA pada perlakuan m3 (suplementasi Zn dan Cu) pada semua limbah lebih rendah dibanding m1 (suplementasi Zn) tapi lebih tinggi dari m2 (suplementasi Cu). Walaupun lebih rendah daripada m1, tetapi nilainya (L 1 = 210 mm, L 2 = 176,6 mm dan L 3 = 130 mm) lebih mendekati kisaran konsentrasi konsentrasi VFA yang dibutuhkan untuk menunjang pertumbuhan mikroba yang optimal yaitu mm (SUTARDI, 1977). Imbangan suplementasi Zn dari ZnSO 4 50 ppm dan Cu dari CuSO 4 6 ppm diduga adalah yang terbaik karena selain dapat meningkatkan perkembangan dan pertumbuhan mikroba rumen juga dapat meningkatkan aktivitas selulolitik mikroba rumen serta diperoleh konsentrasi VFA yang efektif untuk dimanfaatkan oleh mikroba rumen. Kadar Amonia (N-NH 3 ). Konsentrasi N- NH 3 dalam rumen hasil penelitian berkisar antara 6,5 ± 0,5 (L 2 m0) sampai 11,93 ± 1,07 (L 1 m1). Kisaran ini sesuai dengan SUTARDI (1977) yang menyatakan bahwa kadar NH 3 cairan rumen yang mendukung pertumbuhan mikroba rumen adalah 4 12 mm dan kadar NH 3 optimum adalah 8 mm. SATTER dan SLYTER (1974) menyatakan bahwa pertumbuhan mikroba rumen mulai terganggu bila kadar NH 3 rumen kurang dari 3,57 mm. Rataan konsentrasi N-NH 3 dan VFA sebelum perlakuan suplementasi mikromineral pada limbah agroindustri terfermentasi yang dicobakan dapat dilihat pada Tabel 1. Hasil analisis ragam konsentrasi N-NH 3 menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan yang nyata pada perlakuan antar limbah (P > 0,05). Kisaran konsentrasi N-NH 3 pada kulit singkong (L 1 ) adalah yang tertinggi, diikuti kulit kopi (L 3 ) dan yang paling rendah kulit kakao (L 2 ). Fenomena ini terjadi karena protein dalam kulit singkong mudah dipecah oleh mikroba rumen akibat kandungan BETN (Bahan Ekstrak Tanpa Nitrogen) (52,48%) sebagai karbohidrat fermentable untuk sumber energi bagi mikroba lebih tinggi dibanding kulit kakao (44,40%) dan kulit kopi (29,24%). Tabel 1. Hasil analisis konsentrasi VFA dan N-NH 3 limbah sebelum fermentasi Limbah agroindustri VFA (mm) N-NH 3 (mm) Kulit singkong 176,67 5,34 Kulit kakao 122,3 4,79 Kulit kopi 102 4, 40 Analisis ragam menunjukkan adanya perbedaan sangat nyata (P < 0,01) pada perlakuan antar suplementasi yang berarti bahwa perlakuan suplementasi mikromineral memberikan pengaruh nyata terhadap perubahan konsentrasi N-NH 3 dalam rumen. Uji lanjut kontras ortogonal menunjukkan perbedaan sangat nyata (P < 0,01) antara limbah tanpa suplementasi (m0) dengan yang disuplementasi (m1, m2, m3) pada setiap limbah. Terdapat beda sangat nyata (P < 0,01) antara suplementasi ZnSO 4 atau CuSO 4 (m1, m2) dengan suplementasi keduanya (m3), serta berbeda nyata (P < 0,05) antara suplementasi ZnSO 4 (m1) dan suplementasi CuSO 4 (m2) pada kilit singkong, tetapi tidak berbeda pada kulit kakao dan kulit kopi (P > 0,05). Konsentrasi N-NH 3 pada setiap limbah meningkat akibat suplementasi mikromineral. Hal ini menandakan bahwa kebutuhan mikroba akan mikromineral untuk metabolisme hidupnya dapat tercukupi sehingga dapat meningkatkan kinerja mikroba dalam mendegradasi pakan terutama protein. Kecernaan protein pakan yang meningkat dan tingginya populasi mikroba rumen akan meningkatkan amonia dalam rumen. Konsentrasi NH 3 mencerminkan jumlah protein ransum yang banyak dominan di dalam rumen dan nilainya sangat dipengaruhi oleh kemampuan mikroba rumen dalam mendegradasi protein ransum. Konsentrasi N- NH 3 pada perlakuan m3 pada setiap limbah menunjukkan hasil tertinggi. Hal ini membuktikan bahwa gabungan antara mikromineral saling memperbaiki daya cerna bahan pakan di dalam rumen dan dosis mikromineral masih dapat digunakan dengan baik oleh ternak untuk meningkatkan 764

5 pertumbuhan dan aktivitas mikroba rumen. Peningkatan konsentrasi N-NH 3 akibat suplementasi ZnSO 4 (m1) cenderung lebih tinggi daripada suplementasi CuSO 4 (m2). Hal tersebut dikarenakan kebutuhan mikroba akan mikromineral Zn lebih esensial dibanding Cu dalam proses degradasi protein, Zn diperlukan untuk aktivitas lebih dari 90 enzim yang ada hubungannya dengan metabolisme karbohidrat dan energi, degradasi atau sinteis protein, sintesis asam nukleat, transport CO 2 dan reaksi-reaksi lain. MUHTARUDIN dan WIDODO (2003) yang menyatakan bahwa pemberian mineral Zn dapat memacu pertumbuhan mikroba rumen. Defisiensi Zn dapat mengganggu peranan Zn dalam metabolisme mikroorganisme rumen. Suplementasi Zn pada penelitian telah sesuai dengan rekomendasi NRC (1989) yaitu 50 ppm, dan pemberian melebihi dosis memberikan efek negatif untuk pertumbuhan mikroba rumen sehingga menurunkan produksi NH 3. Rendahnya peningkatan konsentrasi NH 3 pada perlakuan m2 (suplementasi CuSO 4 ) diduga karena dosis suplementasi (6 ppm) belum optimal. Rekomendasi NRC untuk suplementasi Cu dalam pakan adalah 8 10 ppm. Produksi VFA dan N-NH 3 adalah indikator kecernaan karbohidrat dan protein dalam rumen yang merupakan bagian dari bahan organik. Laju peningkatan kecernaan bahan organik sejalan dengan laju peningkatan konsentrasi VFA dan N-NH 3 seperti tampak pada Gambar 1 dan 2. KCBK (%) Kecernaan bahan kering (KCBK) 63,1 55,2 57,25 56,66 55,3 54,22 50, ,2 52,22 46,78 48, m0 m1 m2 m3 KCBO (%) ,5 63,76 63,1 Kecernaan bahan organik (KCBO) 74,5 72,93 66, ,57 66, 70,73 71,1 69, m m1 m2 m3 Gambar 1. Rataan kecernaan bahan kering dan bahan organik (KCBK dan KCBO) = Kulit singkong terfermentasi Trichoderma viridae 5% = Kulit kakao terfermentasi Trichoderma viridae 5% = Kulit kopi terfermentasi Trichoderma viridae 5% m0 = tanpa suplementasi m1 = suplementasi Zn 50 ppm m2 = suplementasi Cu 6 ppm m3 = suplementasi Zn 50 ppm + Cu 6 ppm 765

6 VFA (mm) ,3 10 Konsentrasi VFA total 243, ,6 193,3 176,6 m , , m0 m1 m2 m3 N-NH3 (mm) Kadar N-NH3 13,4 11,9 10, ,3 8,06,9 9,7 9,2 8,16 8,03 6,5 1 m0 2 m1 3 m2 4 m3 Gambar 2. Rataan konsentrasi VFA dan N-NH 3 = Kulit singkong terfermentasi Trichoderma viridae 5% = Kulit kakao terfermentasi Trichoderma viridae 5% = Kulit kopi terfermentasi Trichoderma viridae 5% m0 = tanpa suplementasi m1 = suplementasi Zn 50 ppm m2 = suplementasi Cu 6 ppm m3 = suplementasi Zn 50 ppm + Cu 6 ppm KESIMPULAN Hasil penelitian menunjukkan bahwa suplementasi Zn sebanyak 50 ppm dan Cu sebanyak 6 ppm pada kulit singkong yang terfermentasi Trichoderma viridae menghasilkan rataan kecernaan, produksi VFA, dan amonia (N-NH 3 ) paling tinggi dibandingkan pada kulit kakao dan kulit kopi. UCAPAN TERIMA KASIH Disampaikan kepada Dr. Wardhana SP dan Titin Widyastuti, SPt., MSi., atas masukan dan diskusi sebelum kegiatan penelitian berlangsung. Kepada Wulan, Nuri, dan Sukartini disampaikan terima kasih atas kerjasamanya selama kegiatan penelitian. DAFTAR PUSTAKA BOUCQUE, C.H.V. and L.O. FIEMS Vegetable By-Products of Agro-Industrial Origin. Livest. Prod. Sci. 19: CROWELL, G.E., STAHLY T.S. and H.J. MONEQUE Effect of source and level copper on performance and level copper of stores in weaning pigs. J. Anim. Sci. 67: DEPARTEMENT OF DAIRY SCIENCE General Laboratory Prosedures. University of Wiscosin, USA. pp HUNGATE, R.E Rumen and Its Microbes. Academic Press, New York. LITTLE, D.A The mineral content of ruminant feeds and potensial for mineral supplementation in South-East Asia with particular reference to Indonesia. In: Ruminant Feeding Systems Utilizing Fibrous. DIXON, R.M. (Ed.). Canberra Agricultural Residues. IDP. MILLER, J.K., R. NANCY and F.C. MADSEN The trace element. In: The Ruminant Animal Digestive Physiology and Nutrition. CHURCH, D.C. (Ed.). Prentice Hall, New Jersey. MUHTARUDIN dan Y. WIDODO Penggunaan seng organik dan Polyunsaturated Fatty Acid dalam upaya meningkatkan ketersediaan seng, pertumbuhan, serta kualitas daging kambing. J. Penelitian Pertanian Terapan. 3(5):

7 NRC (NATIONAL RESEARCH COUNCIL) Nutrient Requirement of Diary Cattle. 6 th Ed. National Academy Science, Washington D.C. NATIONAL RESEARCH COUNCIL Nutrient Requirement of Diary Cattle. 6 th Revised Ed. National Academy Science, Washington D.C. SATTER, L.D. and L.L. SLYTER Effect of Amonia on Rumen Microbial Production invitro. British J. Nutrition. 32: SUTARDI, T Ikhtisar Ruminologi. Bahan Kursus Peternakan Sapi Perah. Kayu Ambon. Dirjen Peternakan FAO. hlm TILLEY, J.M.A. and R.A. TERRY A two Stage Technique for The In vitro Digestion Forage Crops. J. The British Grassland Society 18(2): 104. UNDERWOOD, E.J Trace Element in Human and Animal Nutrition. 4 th Ed. Academic Press, New York. 767