PENGEMBANGAN RADIOFARMAKA 18 FLT (FLOROTIMIDIN) UNTUK DETEKSI KANKER BERDASAR PADA METABOLISME DNA

Transkripsi

1 0594: Purwoko dkk. KO-57 PENGEMBANGAN RADIOFARMAKA 18 FLT (FLOROTIMIDIN) UNTUK DETEKSI KANKER BERDASAR PADA METABOLISME DNA Purwoko, Maskur, Chaeruman, dan Yono Sugiarto Pusat Radioisotop dan Radiofarmaka - PRR BATAN Kawasan PUSPIPTEK, Gd. 11, Setu Tangerang Selatan purwk@batan.go.id, purbatan2000@yahoo.com Disajikan Nop 2012 ABSTRAK Positron Emmission Tomography (PET) adalah suatu teknik pencitraan menggunakan radiofarmaka pemancar positron untuk mengidentifikasi kanker dengan mengukur aktivitas metabolisme sel sel di dalam tubuh. Radiofarmaka PET adalah radiofarmaka biomolekul yang mengandung radionuklida pemancar positron seperti senyawa 3f-deoksi-3f- [ 18 F] Florotimidin atau 18 FLT. Senyawa 18 FLT adalah senyawa turunan timidin analog penyusun DNA yang apabila masuk ke dalam sel akan mengalami metabolisme hingga terbentuk DNA yang dikatalis oleh enzim timidin kinase I(TK 1). Namun berbeda untuk sel tumor atau kanker 18 FLT tidak diproses lebih lanjut ke DNA akan tetapi berhenti serta terperangkap di dalam sel tumor atau kanker dan meninggalkan jejak metabolit yang memancarkan emisi positron sehingga dapat dimanfatkan untuk deteksi kanker atau tumor imaging. Telah dilakukan penelitian dan pengembangan radiofarmaka 18 FLT yang dimulai dari studi penandaan dingin yaitu sintesa FLT menggunakan Flor non-radioaktif terhadap prekursor FLT kemudian diujicobakan dengan penandaan panas menggunakan 18 Flor radioaktif. Sintesa 18 FLT dilakukan dengan pendekatan dari metoda literatur melalui reaksi florinasi nukleofilik menggunakan 18 Flor pada suhu 160 C selama 30 menit terhadap senyawa 5f-O-(4,4f-Dimetoksitrifenilmetil)-2,3- anhidrotimidin dengan katalisator kriptofik 2.2.2, dilanjutkan dengan hidrolisa menggunakan HCl sambil dipanaskan pada suhu 100 C selama 10 menit, kemudian dinetralkan dengan NaOH dan dilakukan pemurnian dengan sistim kartrid tunggal Alumina-N sebagai pengganti pemurnian dengan HPLC. Hasil dari pemurnian akan diperoleh 18 FLT kemurnian tinggi yang akan digunakan untuk preparasi sediaan radiofarmaka 18 FLT. Preparasi sediaan radiofarmaka 18 FLT telah dilakukan empat kali di ruang aseptik klas A di bawah aliran udara laminair dan pengujian kualitas serta karakterisasi dilakukan dengan cara kromatografi HPLC dan TLC scanner, hasilnya menunjukkan bahwa telah diperoleh sediaan 18 FLT berupa larutan jernih bebas partikel dengan ph: 6,0-7,5, kemurnian radiokimia 97,93 ± 1,48 %, steril dan bebas pirogen serta memenuhi persyaratan sebagai sedian radiofarmaka injeksi dengan perolehan 8,1875 ± 1,5415 % (tanpa koreksi umur paro) dan waktu proses selama 73 ± 4 menit. Kata Kunci: Pengembangan Radiofarmaka, PET, 18 FLT, Deteksi Kanker I. PENDAHULUAN Penyakit kanker adalah penyakit mematikan yang dapat menyerang siapapun, menurut catatan dari Kementerian Kesehatan RI penderita kanker setiap tahunnya diperkirakan mencapai penderita baru. [1] Radiofarmaka PET adalah radiofarmaka dari senyawa biomolekul yang ditandai dengan radionuklida pemancar positron seperti 18 Flor sehingga dapat digunakan untuk mengukur aktivitas metabolisme sel sel di dalam tubuh dan dapat dimanfaatkan untuk deteksi kanker menggunakan kamera Positron [2, 6] Emmission Tomo graphy (PET). Pusat Radioisotop dan Radiofarmaka PRR-BATAN sejak tahun 2004 telah mengembangkan radiofarmaka PET 2f-( 18 F) Florodeoksi glukosa atau 18 FDG untuk deteksi tumor/kanker berdasar pada metabolisme glukosa di dalam tubuh. Di Indonesia era PET dimulai pada tahun 2010 oleh sebuah Rumah Sakit swasta di Jakarta yang memiliki kamera PET lengkap dengan mesin siklotron dan alat modul sintesa otomatik untuk proses 18 FDG dan hingga kini sudah ada tiga buah Rumah Sakit yang dilengkapi dengan fasilitas tersebut. Penggunaan 18 FDG telah umum serta luas digunakan untuk deteksi kanker meskipun tidak spesifik, sedang 18 Flor dipilih oleh karena memiliki umur paro 110 menit dan cukup ideal untuk diagnosa menggunakan kamera PET. Pengembangan radiofarmaka PET selanjutnya adalah 3f( 18 F) Florodeoksitimidin atau 18 FLT, senyawa

2 KO-58 tersebut adalah turunan timidin yang dapat digunakan untuk deteksi tumor atau kanker berdasar pada metabolisme DNA. Senyawa 18 FLT apabila masuk ke dalam sel akan mengalami fosforilisasi oleh enzim timidin kinase I (TK I) dan diproses sampai DNA. Namun tidak demikian halnya untuk sel tumor atau kanker, adanya unsur 18 Flor yang mensubtitusi gugus OH yang terikat atom C pada posisi 3f akan mencegah proses metabolisme berlanjut sampai DNA dan ion 18 FLT-MP yang telah terbentuk akan terperangkap di dalam sel tumor atau kanker sehingga meninggalkan jejak metabolit yang memancarkan emisi positron dan dapat dimanfaatkan untuk pengukuran laju pertumbuhan sel tumor/kanker atau untuk tumor imaging menggunakan kamera [2, 4, 5] PET. Pengembangan Radiofarmaka 18 FLT akan diawali dengan sintesa dan karakterisasi 18 FLT, sintesa dilakukan dengan metoda literatur sesuai dengan prosedur dari Blocher A. et al. [2] dengan melakukan pengembangan dalam metoda pemurnian 18 FLT yakni menggunakan kartrid tunggal Alumina-N sebagai pengganti metoda pemurnian dengan HPLC yang dipandang tidak praktis dan rumit, terlebih apabila di kemudian akan dikembangkan metoda sintesa menggunakan modul sintesa automatik. Percobaan pertama yang akan dilakukan adalah uji coba penandaan dingin terhadap prekursor FLT menggunakan Flor non radioaktif, hasilnya akan dijadikan model dalam penandaan panas menggunakan 18 Flor radioaktif. Radionuklida 18 Flor diperoleh dari penembakan proton terhadap bahan sasaran H 2 O diperkaya) 18 O di dalam mesin Siklotron melalui reaksi inti 18 O (p,n) 18 F. [?] Ada tiga prekursor turunan timidin yang dapat digunakan sintesa 18 FLT yakni 5f-O-(4,4f-dimetoksitripenilmetil)-2,3f anhidrotimidin atau DMTr-2,3f anhidrotimidin, 5f-O-(4,4f-dimetoksitripenilmetil)- 3f-O-nosiltimidin dan 3-N-Boc-5f-O-(4,4f-dimetoksi tripenilmetil)-3f-o-nosiltimidin. [5, 6] Namun dalam penelitian ini akan digunakan prekursor DMTr-2,3f anhidrotimidin dengan pertimbangan bahwa secara teoritis pengotor yang akan dihasilkan lebih sedikit sehingga mempermudah dalam cara pemurnian. Senyawa 18 FLT dapat diperoleh melalui dua tahap reaksi yakni florinasi nukleofilik terhadap DMTr-2,3f anhidrotimidin dengan katalisator kriptofix dan kemudian hidrolisa dengan HCl untuk menghilangkan gugus pelindung yaitu DMTr serta netralisasi. Pemurnian 18 FLT dimaksudkan untuk menghilangkan pengotor kimia maupun radiokimia dan akan dilakukan dengan cara kromatografi menggunakan kartrid tunggal Alumina-N. Proses preparasi sediaan radiofarmaka 18 FLT dilakukan secara aseptis dalam ruang bersih clean room klas 0594: Purwoko dkk. A di bawah aliran udara laminair, menggunakan bahan dan peralatan yang steril serta bebas pirogen. Proses sterilisasi larutan dilakukan dengan cara penyaringan menggunakan penyaring bakteri yang steril dan bebas pirogen. Pengujian kualitas sebagai sediaan radiofarmaka 18 FLT dilakukan sesuai ketentuan serta persyaratan dari US Pharmacope yaitu dengan pemeriksaan fisik seperti kejernihan larutan, ph larutan, pengujian kemurnian kimia, pengujian kemurnian radiokimia dan pengujian mikrobiologi. Pengujian kemurnian kimia dan radiokimia 18 FLT dimaksudkan untuk melihat jumlah pengotor kimia dan radiokimia dan dilakukan dengan mengamati hasil kromatogram dari analisa HPLC kemudian dibandingkan dengan standar FLT dan hasil TLC scanner. Pengujian mikrobiologi dimaksudkan untuk melihat sterilitas dan apirogenitas dari sediaan 18 FLT, uji sterilitas dilakukan dengan menggunakan media pertumbuhan bakteri dan jamur sedangkan uji apirogenitas dilakukan dengan pengujian bakteri endotoksin menggunakan pereaksi Limulus Amoebocyte Lysate atau LAL. Sebagai sediaan radiofarmaka injeksi maka sediaan larutan 18 FLT harus memenuhi persyaratan sesuai US Pharmacope yakni larutan harus jernih bebas partikel, ph larutan harus sesuai ph darah antara 5,5-7,5, mempunyai kemurnian radiokimia lebih dari 95%, steril dan bebas pirogen. Dalam makalah ini akan dilaporkan tentang hasilhasil yang telah diperoleh serta pembahasan dan kesimpulan sebagai hasil akhir dari kegiatan penelitian ini. II. METODOLOGI A. Bahan dan Peralatan Bahan kimia yang digunakan dalam penelitian ini antara lain adalah 5f-O-(4,4f-dimetoksitritil)-2,3fanhidrotimi din dari ABX, Kriptofix 2,2,2, asetonitril, Dimetil sulfoksida (DMSO), K 2 CO 3, semuanya berasal dari Aldrich dengan tingkat kemurnian analisa, sedangkan bahan lainya seperti NaOH, NaF, HCl berasal dari E. Merck. Untuk gas nitrogen diperoleh dari perdagangan lokal dengan kemurnian High purity. Untuk pengujian sterilitas digunakan bahan media untuk pertumbuhan bakteri seperti Fluid Thioglycolate (FTG) dan Trypton Soy Broth (TSB) produk dari Diffco. Bahan radionuklida 18 Flor radioaktif diperoleh dari mesin Siklotron Rumah Sakit Kanker Dharmais Jakarta dengan cara penembakan proton terhadap bahan sasaran H 2 O diperkaya 18 O melalui reaksi inti 18 O (p,n) 18 F. Peralatan yang diperlukan dalam penelitian ini antara lain adalah peralatan gelas seperti vial V ukuran 5 ml, syringe 3 ml, Kartrid Alumina-N dari E.Merck, heater block untuk pemanasan dan gas N 2. Peralatan instrumen HPLC (Shimadzu) yang dilengkapi detektor radioaktif serta detektor UV akan digunakan untuk

3 0594: Purwoko dkk. KO-59 penentuan kemurnian kimia dan radiokimia dan TLCscanner Bioscan akan digunakan untuk menentukan kemurnian radiokimia. Alat pembaca reader yang telah dilengkapi software dari Charles-River Laboratories serta kartrid untuk pengujian endotoksin. B. Tata kerja B-1. Sintesa 18 FLT Senyawa 18 FLT diperoleh dari reaksi antara prekursor DMTr- 2,3f anhidrotimidin dengan 18 Flor dengan cara sebagai berikut: Ke dalam vial V ukuran 5 ml dimasukkan sejumlah larutan 18 Flor hasil elusi kartrid QMA dengan 1,0 ml larutan asetonitril 90% yang telah mengandung 15 mg kriptofik 2,2,2 dan 3,5 mg K 2 CO 3. Vial yang telah berisi campuran dari larutan tersebut dimasukkan ke dalam heater block dan dipanaskan pada suhu 100 C (sambil dialiri gas nitrogen) hingga kering, tambahkan 1 ml asetonitril dan dipanaskan kembali hingga kering (penambahan 1 ml asetonitril di ulangi hingga 3 kali dimaksudkan agar penguapan air secara azeotrop sempurna dan terbentuk kriptand). Ke dalam vial V yang terdapat kriptand (kriptofix K-F) dimasukkan larutan DMTr- 2,3f anhidrotimidin 20 mg/1.0 ml DMSO dan dipanaskan pada suhu 160 C (sambil dialiri gas nitrogen) selama 30 menit ke dalam heater block untuk reaksi penandaan, kemudian dihentikan dan suhu dibiarkan turun hingga C. Setelah dingin ditambahkan 600 µl larutan HCl 1,0 N sambil dipanaskan pada suhu 100 C (sambil dialiri gas nitrogen) selama 10 menit untuk hidrolisa, kemudian dihentikan dan suhu dibiarkan turun hingga suhu kamar, larutan dinetralkan dengan menambahkan larutan NaOH 1,0 N atau 0,1 N hingga ph antara 5,5-7,5. Reaksi kimia dari sintesa 18 FLT dapat dilihat pada GAMBAR 1 pada Bab hasil dan pembahasan. Larutan 18 FLT netral diambil dan dimasukkan ke dalam vial ukuran 10 ml, diencerkan dengan akuabides hingga volume 5 ml yang selanjutnya akan dilakukan pemurnian menggunakan kartrid Alumina-N. B-2. Pemurnian 18 FLT Pemurnian 18 FLT dilakukan dengan cara sebagai berikut: Diambil seluruh larutan 18 FLT netral encer kemudian dilewatkan melalui kartrid tunggal Aluminanetral dan ditampung dalam vial 10 ml, dicuci dengan cara melewatkan 5,0 ml akuades dan ditampung serta digabungkan ke dalam vial 10 ml, hasilnya diukur radioaktivitasnya dengan alat dose calibrator dan dicuplik untuk ditentukan kemurnian kimia ataupun kemurnian radiokimianya. B-3. Preparasi sediaan radiofarmaka 18 FLT Preparasi radiofarmaka 18 FLT dilakukan di ruang aseptis clean room klas A dengan bahan serta peralatan yang steril serta mengikuti prosedur bekerja di ruang steril. Larutan 18 FLT hasil pemurnian dilakukan sterilisasi menggunakan penyaring bakteri 0.22 µm dan ditempatkan dalam vial steril. Kemudian hasil dari sterilisasi dicuplik ml ditempatkan di dalam vial steril untuk dilakukan uji kualitas sebagai sediaan radiofarmaka. Data hasil dari empat kali preparasi 18 FLT dapat dilihat pada TABEL 1. B-4. Pengujian kualitas sediaan radiofarmaka 18 FLT Pengujian fisik kejernihan serta ph larutan Pengujian fisik berupa pengamatan langsung di bawah sinar lampu terang terhadap larutan dan diamati dari kemungkinan adanya partikel, sedangkan ph larutan ditentukan dengan menggunakan indikator universal kertas ph, persyaratan ph larutan sebagai sediaan injeksi adalah antara 5,5-7,5. Pengujian kemurnian kimia dan radiokimia 18 FLT dengan alat HPLC Diambil dengan pipet 100 µl larutan 18 FLT kemudian dimasukkan ke dalam mikrotube 2,0 ml, kemudian ditambahkan 400 µl larutan asetonitril. Larutan digetarkan dengan alat vortex selama 30 detik hingga larut sempurna, disaring dengan filter 0,45 µm, kemudian diambil 20 µl larutan contoh diinjeksikan ke dalam sistim injektor HPLC (Shimadzu) dan dielusi dengan kondisi sebagai berikut: Kolom : µ-bondapak C-18 (0,8 cm diameter dalam 30 cm panjang, SS) Fasa gerak : asetonitril Kecepatan aliran : 1,0 ml/menit. Dengan cara yang sama dilakukan pula terhadap standar FLT non radioaktif sebagai pembanding. Data hasil kromatogram HPLC antara absorbansi terhadap waktu retensi dari masing-masing contoh dapat dilihat pada GAMBAR 2 dan GAMBAR 3 pada Bab hasil dan pembahasan. Pengujian kemurnian radiokimia 18 FLT dengan TLC scanner Ke dalam tabung gelas diameter 10 cm dan tinggi 25 cm, dimasukkan 30 ml larutan campuran dari CH 2 Cl 2 dan CH 3 OH (9 : 1, v/v) sebagai larutan pembawa. Pada fasa diam berupa strip plastik silika ukuran 1,5 x 15 cm, ditotolkan larutan contoh 18 FLT tepat pada titik berjarak 3 cm dari ujung bagian bawah dan dibuat triplo, dengan cara yang sama ditotolkan larutan 18 Flor sebagai pembanding. Kemudian seluruh strip silika tersebut dimasukkan ke dalam tabung gelas yang telah berisi larutan pembawa dengan cara menggantungkan pada tutup tabung

4 KO : Purwoko dkk. GAMBAR 2: Kromatogram standar FLT non-radioaktif GAMBAR 1: Skema reaksi sintesa 18 FLT yang dilengkapi pengait hingga ujung bagian bawah dari strip silika menyentuh dan kurang lebih 1.0 cm masuk ke dalam larutan pembawa, tunggu selama 20 menit sehingga larutan pembawa akan naik kurang lebih mencapai cm, kemudian diangkat dan digantungkan hingga kering. Masing-masing strip silika yang telah kering kemudian dicacah dengan alat TLC scanner. Data hasil kromatogram dari TLC scanner dapat dilihat pada GAMBAR 4 dan GAMBAR 5 pada Bab hasil dan pembahasan. Pengujian sterilitas sediaan radiofarmaka 18 FLT Ke dalam tabung tabung steril yang berisi larutan steril media pembenihan bakteri Fluid Thioglycolate (FTG) dan Trypton Soy Broth (TSB) dimasukkan 1,0-2,0 ml larutan contoh 18 FLT hasil preparasi, kemudian tabung di tutup dan diinkubasikan di dalam inkubator pada suhu C dan C selama 6 hari. Setiap hari diamati sampai pada hari ke enam dan apabila terdapat koloni bakteri yang tumbuh maka sediaan dinyatakan tidak steril. Uji sterilitas dilakukan di dalam ruang khusus yang steril di bawah aliran udara laminair serta mengikuti prosedur bekerja di ruang steril. Pengujian apirogenitas sediaan radiofarmaka 18 FLT Pengujian apirogenitas dilakukan dengan pengujian bakteri endotoksin menggunakan pereaksi Limulus Amebocyte Lysate atau LAL dengan model cartridges for endotoxin detection lengkap dengan alat pembacaan reader serta softwarenya. Ke dalam kartrid yang terdapat 4 tempat sampel, masing-masing di teteskan 25 µl larutan contoh 18 FLT hasil preparasi, kemudian dimasukkan ke dalam alat pembaca reader yang telah dilengkapi software yang dapat membaca hasil pengujian dan dibandingkan dengan standar dalam satuan endotoksin atau eu. Sebagai sedian injeksi jumlah endotoksin yang dipersyaratkan harus kurang dari 12,5 eu/ml. III. HASIL DAN PEMBAHASAN Senyawa 18 FLT dapat diperoleh melalui dua tahap reaksi yaitu reaksi antara prekursor 5 -O-(4,4 - dimetoksi tripenil metil)-2,3 anhidrotimidin atau DMTr-2,3f anhidrotimidin dengan 18 Flor melalui reaksi florinasi nukleofilik dengan katalisator kriptofix 2.2.2, kemudian dilanjutkan dengan hidrolisa menggunakan HCl sesuai skema reaksi pada GAMBAR 1. Reaksi florinasi dilakukan pada suhu 160 C selama 30 menit dengan menggunakan pelarut DMSO (Dimetil sulfoksida), pelarut ini dipilih oleh karena merupakan salah satu pelarut aprotik yang mempunyai titik didih yang tinggi sehingga sesuai digunakan untuk penandaan suhu tinggi. Penggunaan pelarut aprotik dimaksudkan agar tidak terjadi ikatan hidro-

5 0594: Purwoko dkk. KO-61 gen dengan atom Oksigen anhidro sehingga memudahkan masuknya atom 18 Flor pada atom C posisi 3 pada molekul gula. Florin mempunyai energi hidrasi tinggi sedemikian sehingga air tidak cocok digunakan sebagai pelarut bahkan harus dihilangkan sama sekali, oleh karena itu pada pembentukan kriptand dilakukan penguapan sampai tiga kali untuk memastikan bahwa air telah hilang. Pada prekursor DMTr-2,3f anhidrotimidin atom C posisi 5 pada molekul gula dilindungi oleh gugus dimetoksitripenilmetil (DMTr), hal ini dimaksudkan agar pada posisi tersebut tidak terjadi florinasi, sehingga reaksi florinasi nukleofilik diarahkan pada atom C posisi 3 yang menjadi pusat elektofilik dan katalis kriptofix serta pelarut DMSO akan membantu terbentuknya senyawa 18 FLT. Senyawa kriptofix adalah ester siklik bentuk mahkota yang akan berikatan dengan ion K + yang berasal dari K 2 CO 3, berperan sebagai qounter ion untuk anion 18 F- sehingga terbentuk senyawa kriptand yang akan meningkatkan reaktivitas florinasi tetapi tidak menggangu reaksi. Hasil reaksi florinasi tahap pertama diperoleh DMTr- 18 FLT yaitu 18 FLT yang masih mengandung gugus pelindung DMTr, untuk menghilangkan gugus tersebut maka dilakukan hidrolisa menggunakan larutan asam HCl 1,0 N. Untuk mempercepat reaksi hidrolisa dilakukan pemanasan pada suhu 100 C selama 10 menit. Hasil dari reaksi hidrolisa diperoleh 18 FLT yang masih mengandung pengotor yang berasal dari sisasisa pereaksi dan hasil samping dari reaksi penandaan maupun hidrolisa, oleh karena itu harus dilakukan pemurnian. Pemurnian 18 FLT pada umumnya dilakukan menggunakan cara kromatografi HPLC, dengan cara ini 18 FLT sebagai eluat ada di dalam pelarut organik yang tak dapat diinjeksikan ke tubuh manusia. Oleh karena itu pada penelitian ini dilakukan cara lain yaitu menggunakan sistim kartrid tunggal alumina-n sehingga 18 FLT ada dalam pelarut air dan dapat sebagai larutan injeksi. Dengan kartrid alumina-n saja diharapkan dapat menghilangkan pengotor seperti CO 3, pengotor kationik seperti DMTr dan lainnya, sehingga 18 FLT ada dalam pelarut air yang dapat diinjeksikan ke dalam tubuh manusia. A. Karakterisasi 18 FLT Karakterisasi 18 FLT dilakukan dengan menggunakan alat kromatografi HPLC yang dilengkapi detektor UV/Vis dan detektor radioaktif gamma. Dengan alat ini suatu senyawa atau campuran dari senyawa dapat diketahui dan dibedakan berdasarkan polaritas serta afinitasnya terhadap fasa geraknya yang dinyatakan dalam satuan waktu retensi dan dideteksi dengan detektor UV/Vis dan detektor radioaktif gamma. Prinsip serupa dapat dilakukan dengan cara lebih sederhana, yakni cara Kromatografi Lapis Tipis (KLT), media fasa diammya digunakan kertas atau plastik dan fasa geraknya pelarut organik, perbedaan retensinya dideteksi dengan alat TLC scanner yang dilengkapi detektor radioaktif gamma. Rasio dari area sesuai waktu retensi dari masingmasing senyawa dapat digunakan untuk menentukan kuantitatif atau prosentase dari masing-masing senyawa sehingga kemurnian kimia atau radiokimia suatu senyawa dapat diketahui dengan metoda tersebut. Data kromatogram HPLC dari masing-masing pengamatan dapat dilihat pada GAMBAR 2 dan GAM- BAR 3. Data kromatogram TLC scanner dari masing-masing pengamatan dapat dilihat pada GAMBAR 4 dan GAM- BAR 5. Dari GAMBAR 2 di atas, menunjukkan bahwa kromatogram standar FLT (detektor UV) mempunyai puncak dominan pada retensi 11,680 menit (98,4%) dan 24,393 menit (1,6%). Sedang pada GAMBAR 3 tampak bahwa kromatogram 18 FLT (detektor UV) menunjukkan puncak tunggal pada retensi 11,663 menit (100%) sedangkan dengan detektor gamma menunjukkan puncak dominan pada retensi 11,700 menit (97,6 %) serta tampak adanya puncak rendah pada retensi 3,990 menit (2,4%) yang kemungkinan besar merupakan puncak dari 18 Flor bebas sehingga dapat dikatakan bahwa 18 FLT mempunyai kemurnian radiokimia yang tinggi, lebih dari 95 %. Dari detektor UV/Vis tidak tampak adanya puncakpuncak pengotor kimia sehingga dapat dikatakan bahwa 18 FLT mempunyai kemurnian kimia yang tinggi. Dari GAMBAR 2 dan GAMBAR 3 tampak adanya konsistensi antara puncak standar FLT non-radioaktif dengan puncak-puncak 18 FLT baik yang ditangkap dengan detektor radioaktif gamma maupun detektor UV yakni pada retensi sekitar 11,600. Dengan demikian dapat diyakini bahwa hasil karakterisasi HPLC seperti yang ditunjukkan pada GAMBAR 3 dipastikan adalah 18 FLT. Data kromatogram hasil dari TLC scanner yang ditunjukkan pada GAMBAR 4 dan GAMBAR 5 di atas. 18 Flor mempunyai RF pada 0,173 sedangkan pada 18 FLT mempunyai RF pada 0,526 dan tidak tampak adanya puncak RF untuk 18 Flor maupun RF untuk DMTr- 18 FLT (RF:0,9) sehingga dapat disimpulkan bahwa 18 FLT hasil preparasi mempunyai kemurnian radiokimia tinggi lebih dari 95 %. (batas minimal persyaratan kemurnian radiokimia sediaan radiofarmaka dari US Pharmacope). Data hasil 4 kali preparasi sediaan 18 FLT dan hasil

6 KO : Purwoko dkk. GAMBAR 3: Kromatogram 18 FLT kemurnian radiokimia dari masing-masing dapat dilihat pada TABEL 1. TABEL 1: Hasil Perolehan preparasi 18 FLT (tanpa koreksi umur paro) No A 0 a A b Y c P d 1. 2,15 0,136 6,32 98, ,72 1,49 8,91 96, ,46 1,41 7,65 99, ,30 4,87 9,87 97,62 a Radioaktivitas 18 Flor pada awal reaksi (mci) b Radioaktivitas 18 FLT yang dihasilkan (mci) c Perolehan (tanpa koreksi umur paro) (%) d Kemurnian Radiokimia 18 FLT (%), HPLC Dari TABEL 1 di atas selama 4 kali percobaan preparasi 18 FLT apabila dihitung maka rata-rata perolehannya adalah 8,1875 ± 1,5415 % (tanpa koreksi umur paro) dengan kemurnian kimia rata-rata 97,93 ± 1,48 %. IV. KESIMPULAN Dari hasil empat kali preparasi 18 FLT yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa: Telah diperoleh sediaan radiofarmaka 18 FLT hasil dari reaksi florinasi nukleofilik terhadap prekursor DMTr-2,3f-anhidrotimidin dengan katalisator kriptofik 2,2,2, dihidrolisa dengan HCl, dinetralkan dengan NaOH serta dimurnikan dengan kartrid tunggal Alumina-N, hasil perolehannya 8,1875 ± 1,5415 % (tanpa koreksi umur paro) dan waktu proses selama 73 ± 4 menit. Hasil preparasi 18 FLT berupa larutan jernih bebas partikel dengan ph: 6,0-7,5, kemurnian radiokimia 97,93 ± 1,48 %, steril dan bebas pirogen serta memenuhi persyaratan sebagai sediaan radiofarmaka injeksi. GAMBAR 4: Kromatogram 18 Flor GAMBAR 5: Kromatogram 18 FLT

7 0594: Purwoko dkk. KO-63 UCAPAN TERIMA KASIH Pada kesempatan ini perkenankanlah saya sebagai Peneliti Utama dari kegiatan penelitian ini ingin mengucapkan terima kasih sebanyak-banyaknya kepada Menteri Riset dan Teknologi beserta jajarannya atas bantuan dana penelitian yang telah diberikan melalui Program Riset Insentif SINAS 2012, Kepala BATAN beserta jajarannya, Direktur RSK. Dharmais Jakarta beserta jajarannya serta rekan-rekan yang telah membantu demi kelancaran sehingga dapat diselesaikan dengan baik kegiatan penelitian ini. DAFTAR PUSTAKA [1] Nuniek T., Dokter sehat, Majalah info kesehatan, Jakarta 12 Maret [2] Blocher.A, Kuntzsch.M, Wei R., Machula H.J.: Synthesis and Labelling of 5-O- (4,4f-dimethyltritil)- 2,3f-anhidrothymidine for F-18 FLT preparation, Journal of Radiopharmaceutical and Nuclear chemistry, Vol. 251 No.12002, [3] Moon B.S., Lee.C, An G.I., Chi D.Y., Yang S.D.: Preparation of 3-Deoxy-3f (F-18) Fluorothymidine of F-18 (FLT) in ionic liquid, (bmim) OTf, Journal of Labelled compound and radiopharmaceuticals, 2006, 49, [4] Nandy S.K. and Rajan M.G.R.: Fully automated and simplified radiosynthesis of [ 18 F]-3f-deoxy-3ffluorothymidine using anhydro precursor and single neutral alumina column purification, Journal of Radioanalytical and Nuclear Chemistry An International Journal Dealing with All Aspects and Applications of Nuclear Chemistry Akademiai Kiado, Budapest, Hungary /s [5] Tang G., Tang X., Wen F., Wang M. and Li B.: A facile and rapid automated synthesis of 3-deoxy- 3-[ 18 F]fluorothymidine, Journal of Applied Radiation and Isotopes, Volume 68, Issue 9, September 2010, pp [6] Teng B., Wang S., Fu Z.,, Dang Y., Wu Z. and Liu L.: Semiautomatic synthesis of 30-deoxy-30- [ 18 F]fluorothymidine using three precursors, Journal of Applied Radiation and Isotopes 64 (2006) , ELSEVIER. [7] Mark, M. and Jonathan R.: Positron Emission Tomography in cancer Research and Treatment, Journal of Technology in Cancer Research & Treatment, Volume 1, No. 6, Adenine Press, 2002, pp.1-14.