PENETAPAN KADAR TANIN PADA DAUN SIRIH MERAH [(Piper crocatum Ruiz dan Pav)] SECARA SPEKTROFOTOMETRI UV-Vis. Tikasari Agustina, Sunyoto, Anita Agustina

Transkripsi

1 PENETAPAN KADAR TANIN PADA DAUN SIRIH MERAH [(Piper crocatum Ruiz dan Pav)] SECARA SPEKTROFOTOMETRI UV-Vis Tikasari Agustina, Sunyoto, Anita Agustina INTISARI Tanin diketahui sebagai salah satu bahan aktif yang terkandung dalam daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) dan sering digunakan untuk mengatasi masalah diare. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kadar tanin pada daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav). Penyarian tanin dari sampel daun dilakukan secara maserasi. Kadar tanin dalam ekstrak yang diproleh ditetapkan dengan metode Spektrofotometri UV-Vis dengan menggunakan pereaksi Folin denis dan natrium karbonat jenuh yang akan menghasilkan warna biru. Panjang gelombang maksimum yang digunakan adalah 4,5 nm. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada sampel diperoleh kadar tanin secara berturut-turut sebesar %; %; %; 0,26% dan % dengan kadar ratarata % (b/b). Kesimpulan dari penelitian ini diperoleh kadar rata-rata tanin dalam daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) sebesar % (b/b). Kata Kunci : Tanin, Sirih Merah, Kadar, Maserasi, Spektrofotometri UV-Vis. Tikasari Agustina, dkk., Dosen Prodi DIII Farmasi STIKES Muhammadiyah Klaten

2 42 CERATA Journal Of Pharmacy Science I. PENDAHULUAN Penggunaan sirih secara tradisional dimanfaatkan dalam menyembuhkan penyakit seperti sariawan dan sakit gigi. Sementara itu, air rebusan daun sirih yang bersifat antiseptik dapat berkhasiat sebagai obat kumur, mencegah bau mulut serta menghilangkan bau badan (Hidayat, 2013). Kandungan aktif tanaman sirih merah belum diteliti secara detail. Dari hasil kromatogram diketahui daun sirih merah mengandung flavonoid, senyawa polifenolad, tanin,dan minyak atsiri (Sudewo, 2010). Tanin tersebar luas dalam tumbuhan berpembuluh, dalam angiospermae terdapat khusus dalam jaringan kayu. Beberapa aktivitas cukup penting juga dilaporkan pada tanin : menghentikan pendarahan dan mengobati luka bakar, menghentikan internal healing berjalan dan tanin mampu membuat lapisan pelindung luka dan ginjal. Tanin digunakan sejak lama sebagai pengobatan cepat diare, disentri, perdarahan, dan mereduksi ukuran tumor. Berbagai virus in aktif dengan paparan tanin (Saifudin dkk, 2011). Berdasarkan uraian di atas peneliti tertarik untuk meneliti daun sirih. tersebut mengandung tanin yang mempunyai banyak manfaat untuk kesehatan. Maserasi dipilih untuk penyarian ekstrak karena meminimalisasi terjadi kerusakan senyawa tanin. Penetapan kadar tanin dapat dilakukan dengan menggunakan Spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang 190 nm-380 nm (pada daerah ultraviolet) atau panjang gelombang 380 nm-80 nm (pada daerah cahaya tampak). Penggunaan metode ini karena lebih peka dan sensitive untuk analisis tanin. Rumusan Masalah : berapa kadar tanin yang terdapat dalam daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav)? Tujuan Penelitian : untuk menyatakan adanya kandungan tanin dan mengetahui kadar tanin dalam daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) secara Spektofotometri UV- Vis. Manfaat Penelitian : memberikan informasi tentang manfaat tanin yang dapat digunakan sebagai obat diare, setelah diketahui kadarnya, tanin dapat diformulasikan menjadi sediaan kapsul tablet atau dalam bentuk sediaan lainnya sebagai obat diare untuk mempermudah proses pengkonsumsian.

3 CERATA Journal Of Pharmacy Science 43 II. METODE PENELITIAN Jenis Penelitian : yang digunakan adalah penelitian observasional. Variabel yang digunakan adalah variabel tunggal. Adapun variabel dalam penelitian ini adalah kadar tanin dalam daun sirih merah (Piper crocatom Ruiz dan Pav). Populasi dan Sampel : Populasi dalam penelitian ini adalah simplisia daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) dari Merapi Farma Herbal Jl. Kaliurang Km. 21,5 Hargobinangun, Pakem Sleman Yogyakarta, yang berumur 4-6 bulan. Banyaknya ekstrak yang akan diteliti 250 gram. Sampel yang digunakan berupa simplisia kering daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) yang berumur 4-6 bulan sebanyak 250 gram yang diekstrak dengan metode maserasi dan diperoleh sampel ekstrak daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) seberat 18,66 gram. Alat dan Bahan Penelitian : Daun sirih merah ( Piper crocatum Ruiz dan Pav) yang diperoleh dari Merapi Farma Herbal, Asam tanat, folin denis, Natrium karbonat anhidrat, aquades. Alat yang dipakai adalah Spektrofotometri UV-Vis, seperangkat alat gelas, seperangkat alat maserasi, sonikator dan penangas air. Jalannya Penelitian 1. Pengumpulan Bahan Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) yang sudah kering yang diperoleh dari Merapi Farma Herbal Jl. Kaliurang Km. 21,5 Hargobinangun, Pakem Sleman Yogyakarta. 2. Pembuatan serbuk Pembuatan simplisia daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) dilakukan dengan cara dibuat serbuk dengan menggunakan blender. 3. Pembuatan ekstrak Daun Sirih Merah Pembuatan ekstrak daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) dibuat dengan metode maserasi. Caranya : sebanyak 250,0 gram serbuk kering dimasukkan maserator atau toples kaca, dilarutkan dengan etanol 96% sebanyak kali bobot serbuk dan diaduk, kemudian dimaserasi dalam maserator tertutup dan diaduk dengan mesin pengaduk selama 10 jam. Setelah itu menyari maserat dari ampas dengan corong bucner. Maserat diendapkan 2 hari, kemudian memisahkan maserat dari endapan dengan hati-hati. Setelah itu menguapkan maserat dalam alat evaporator. Setelah itu diuapkan dalam cawan porselin dengan pemanasan di atas penangas sambil diangin-anginkan dengan kipas angin (Andriyani dkk, 2010).

4 44 CERATA Journal Of Pharmacy Science 4. Pembuatan Larutan Pereaksi a. Larutan Folin Larutan folin diambil sebanyak 1,0 ml. Kemudian ditambahkan aquabidest hingga volume 10,0 ml dan disonikasi hingga homogen. b. Larutan Na Karbonat jenuh Tiap 100,0 ml aquabidestilata ditambahkan dengan,50 gram Na Karbonat anhidrat, kemudian dipanaskan pada suhu 60 0 C. (Andriyani dkk, 2010). c. Larutan standar Asam tanat 1 mg/ml Sebanyak 10,0 mg Asam tanat dilarutkan dalam 10,0 ml aquabidestilata. Larutan standar ini harus selalu dibuat baru tiap kali melakukan pengujian (Andriyani dkk, 2010). 5. Uji Kualitatif Tanin Tabung reaksi yang bersih dan kering disiapkan sebanyak 2 buah dimana satu untuk standart dan satu untuk sampel. Masukkan 300 µl larutan standar tanin dan tabung kedua diisi 300 µl sampel. Masing-masing tabung ditambahkan dengan larutan folin sebanyak 1,5 ml gojog dan didiamkan selama 3 menit. Kemudian masing-masing tabung ditambahkan dengan larutan Na 2 CO 3 sebanyak 1,2 ml gojog dan didiamkan. Perubahan warna biru yang terjadi menunjukkan adanya kandungan tanin. 6. Penetapan Panjang Gelombang Serapan Maksimum Larutan baku tanin 300 µl dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Ke dalam tabung reaksi tersebut ditambahkan 1,5 ml pereaksi folin gojog dan didiamkan selama 3 menit. Tambahkan kembali masing-masing tabung 1,2 ml larutan Na 2 CO 3 gojog dan diamkan. Kemudian serapannya dibaca pada panjang gelombang antara nm untuk memperoleh panjang gelombang dengan serapan maksimum (Kharismawati dkk, 2009).. Penentuan Operating Time (OT) Dipipet 300 µl larutan standar asam tanat dengan seksama, kemudian dimasukkan dalam tabung reaksi. Kemudian ditambahkan 1,5 ml pereaksi Folin denis dan 1,2 ml larutan Na 2 CO 3 gojog dan diamkan selama 5 menit dan diuji serapannya selama 1 jam pada panjang gelombang 60 nm (Andriyani dkk, 2010). III. HASIL DAN PEMBAHASAN A. Hasil 1. Determinasi Tanaman Langkah pertama yang dikerjakan sebelum bagian daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) dikumpulkan adalah determinasi tanaman. Hal ini dilakukan untuk memastikan bahwa tanaman yang diteliti benar tanaman sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) sehingga menghindari kesalahan dalam pengambilan sampel. Determinasi tanaman dilakukan di Laboratorium Sistematik Tumbuhan Fakultas Biologi Universitas Gadjah Mada.

5 2. Hasil Ekstraksi Ekstraksi eksatrak daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) dilakukan dengan metode maserasi selama 10 jam dihasilkan ekstrak sebanyak 18,66 gram. Ekstrak tersebut memiliki bau wangi khas sirih merah, rasa sangat pahit dan warna coklat. 3. Hasil Identifikasi Kualitatif Tanin Untuk mengetahui tanin yang terkandung dalam daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav), maka uji kualitatif dilakukan dengan menyamakan warna antara larutan standar tanin dengan larutan sampel. Adanya warna biru menunjukkan adanya tanin yang terkandung dalam daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav). 4. Panjang Gelombang dan Serapan Maksimum Panjang Gelombang (nm) Absorbansi 52,0 4,5 44,0 32,0 14,0 65,0 588,5 541,5 539,0 508,0 Sumber Data: Data Primer 2014 CERATA Journal Of Pharmacy Science 45 0,41 0,42 0,42 0,41 0,41 0,541 0,414 0,428 0,428 0,43 Dari tabel diatas. didapat absorbansi maksimum yaitu 0,42 dengan panjang gelombang 4,5 nm 5. Penetapan Operating Time (OT) Dari hasil percobaan menunjukkan absorbansi stabil mulai menit ke Pembuatan Kurva Baku Hasil konsentrasi dan absorbansi larutan kurva baku dapat dilihat pada tabel 4.2: Kurva Baku Konsentrasi (ppm) Absorbansi 20 0, , , , ,649 Sumber Data: Data Primer 2014 Berdasarkan tabel 4.2 diperoleh y = 0,00905x + 0,0968 dengan nilai r = 0,993

6 46 CERATA Journal Of Pharmacy Science. Penetapan Kadar Tanin Hasil penetapan kadar tanin pada sampel daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) dapat dilihat pada tabel berikut: Hasil Penetapan Kadar Rep. Vol.(ml) X Berat Sampel (µg) Faktor pengenceran Kadar (%) I II III IV V x SD 51,668 51,33 51,558 53,215 51,668 (Sumber Data: Data Primer 2014) 0,26 0,0036 B. Pembahasan Tujuan dari penelitian ini untuk menyatakan adanya kandungan tanin dan mengetahui kadar tanin dalam daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) secara Spektofotometri UV-Vis. Penelitian ini dilaksanakan Laboratorium Penelitian Terpadu Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan pada Bulan Maret - Mei Penelitian ini menggunakan daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) yang sudah kering yang diperoleh dari Merapi Farma Herbal Jl. Kaliurang Km. 21,5 Hargobinangun, Pakem Sleman Yogyakarta. Daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) yang digunakan berumur 4-6 bulan sebanyak 250 gram karena pada umur tersebut tanaman telah memiliki ukuran daun yang optimal, sudah cukup tua, warnanya mengkilap dan bahan aktifnya sudah tinggi. Pengeringan sampel daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) dengan cara diangin-anginkan selama 5 hari dan dikeringkan dengan mesin pengering pada suhu 40 0 C. Daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) mengandung tanin (Agoes, 2012). Tanin adalah salah satu senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada tanaman dan disintesis oleh tanaman (Hidayat, 2013). Sifat tanin biasanya higroskopis, larut dalam air panas membentuk larutan koloid bukan larutan sebenarnya, larut dalam pelarut organik yang polar dan dapat diendapkan dengan penambahan asam mineral atau garam (Robinson, 1995). Daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) diserbuk dengan menggunakan blender dan dihasilkan serbuk sebanyak 250,0 gram. Simplisia daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) yang sudah kering dibuat serbuk dengan menggunakan blender, karena dengan penyerbukan akan memperluas permukaan serbuk dan memperluas area kontak antara serbuk simplisia dengan cairan penyari, sehingga kandungan zat aktifnya banyak tersari.

7 CERATA Journal Of Pharmacy Science 4 Metode yang digunakan untuk menyari tanin adalah maserasi dengan mesin pengaduk. Penggunaan mesin pengaduk yang berputar terus menerus, waktu proses maserasi dapat dipersingkat menjadi 10 jam. Pengadukan diperlukan untuk melarutkan konsentrasi larutan di luar butir serbuk simplisia. Hingga dengan pengadukan tersebut tetap terjaga oleh adanya derajat perbedaan konsentrasi sehingga yang sekecil-kecilnya antara larutan sel dengan larutan sel (Anonim, 1986). Hasil penyarian dengan cara maserasi perlu dibiarkan dalam 2 hari, waktu tersebut untuk mengendapkan zat-zat yang tidak diperlukan tapi ikut terlarut dalam cairan penyari (Anonim, 1986). Maserasi merupakan cara penyarian sederhana. Simplisia memungkinkan untuk direndam dalam menstruum sampai meresap dan melunakkan susunan sel, sehingga zat-zat yang mudah larut akan melarut (Ansel, 1989). Ekstraksi dihasilkan ekstrak sebanyak 18,66 gram. Ekstrak tersebut memiliki bau wangi khas sirih merah, rasa sangat pahit dan warna coklat. Setelah itu dilakukan uji kualitatif untuk mengetahui tanin yang terkandung dalam daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav), maka uji kualitatif dilakukan dengan menyamakan warna antara larutan standar tanin dengan larutan sampel. Adanya warna biru menunjukkan adanya tanin yang terkandung dalam daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav). Uji kuantitatif dengan metode spektrofotometri UV-Vis dilakukan sebagai berikut: 1. Panjang Gelombang Maksimum Penetapan panjang gelombang maksimum bertujuan agar pengukuran pada panjang gelombang serapan maksimum akan menghasilkan serapan maksimum pula. Hasil penetapan panjang gelombang maksimum larutan standar asam tanat adalah 4,5 nm dengan absorbansi maksimum yaitu 0,42. Panjang gelombang ini digunakan untuk mengukur absorbansi tanin. 2. Operating Time Untuk mendapatkan optimasi pada penetapan kadar maka dilakukan penetapan operating time terlebih dahulu. Operating time adalah waktu yang tepat untuk membaca serapan larutan yang diperiksa pada saat absorbansinya stabil. Pada kurva operating time dimulai dari saat reaksi dilakukan sampai diperoleh absorbansi yang stabil selama 60 menit. Sampel yang digunakan adalah larutan yang berwarna sehingga dapat diketahui pada menit keberapa terjadi kestabilan. Dari hasil percobaan menunjukkan absorbansi stabil mulai menit ke Penentuan Kurva Baku Pembuatan kurva baku bertujuan untuk mengetahui hubungan antara konsentrasi asam tanat dengan serapan. Sumber dari larutan standar 1000 µg/ml kemudian dibuat seri larutan dengan konsentrasi 20;30;40;50 dan 60 µg/ml. Data yang diperoleh dibuat suatu regresi linier dan dibuat kurva hubungan antara konsentrasi vs serapan. Hasil perhitungan didapatkan harga regresi (r) = 0,993, a = 0,096, b = 0,009. Dari data yang diperoleh dibuat

8 48 CERATA Journal Of Pharmacy Science persamaan y= 0,00905x + 0,0964 yang menunjukkan lineritas yang sangat baik. Dari kurva baku yang diperoleh dapat digunakan untuk menetapkan kadar tanin dalam daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav). 4. Penetapan Kadar Penetapan kadar tanin dilakukan dengan metode spektrofotometri Uv-Vis. Untuk dapat dibaca serapannya pada daerah panjang gelombang ultraviolet visibel maka tanin harus direaksikan dengan reagen pembentuk warna, yaitu folin denis. Pembentukan warnanya berdasarkan reaksi reduksi oksidasi, dimana tanin sebagai reduktor. Folin denis sebagai oksidator, tanin yang teroksidasi akan mengubah fosmolibdat dalam folin denis menjadi fosfolibdenim yang berwarna biru yang dapat menyerap sinar pada daerah panjang gelombang ultraviolet visibel. Semakin banyak tanin yang terkandung semakin banyak fosmolibdat yang tereduksi menjadi molibdenim sehingga terbentuk warna biru denagn nilai serapan yang semakin besar (Andriyani dkk, 2010). Persamaan reaksinya: OH O H 3 PO 4 (M + o O 3 ) H 2 O + ( Folin Denis) Golongan Fenol O H 3 (PM o13 O 4o ) Atau H 2 ( PMO13 O 4o ) (Kompleks Molybdenum Blue) Gambar 4.1. Reaksi Reduksi Oksidasi pada Tanin Hasil penetapan kadar tanin dari penelitian ini diperoleh kadar tanin dalam daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) sebesar %; %; %; 0,26% dan % dengan kadar rata-rata % (b/b). IV. KESIMPULAN DAN SARAN : Hasil penetapan kadar tanin dari penelitian ini diperoleh kadar rata-rata tanin dalam daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) sebesar % (b/b). Saran : Perlu penelitian lebih lanjut tentang efektifitas daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) sebagai anti diare dengan uji antibakteri, perlu penelitian lebih lanjut tentang perbandingan penetapan kadar tanin daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav) dengan bagian tanaman yang lain, perlu penelitian lebih lanjut tentang penetapan kadar senyawa lain seperti flavonoid, senyawa polifenolad dan minyak atsiri yang terdapat pada tanaman daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz dan Pav).

9 CERATA Journal Of Pharmacy Science 49 DAFTAR PUSTAKA Agoes, Azwar Tanaman Obat Indonesia. Salemba Medika : Jakarta Andriyani, Dewi, Pri Iswati Utami, Binar Astrining Dhiani Penetapan Kadar Tanin Daun Rambutan (Nephelium lappaceum.l) secara Spektrofotometri Ultraviolet Visibel. Jurnal Pharmacy Vol.0 No.02 Agustus Anonim Materi Medika. Departemen Kesehatan Republik Indonesia : Jakarta Anonim Sediaan Galenik. Jakarta: Departemen Kesehatan RI Anonim Farmakope Herbal Indonesia. Edisi I. Menteri Kesehatan Republik Indonesia : Jakarta Ansel, Howard C Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi. Edisi IV. Universitas Indonesia : Jakarta Hidayat, Taufik Sirih Merah Budidaya & Pemanfaatan untuk Obat. Pustaka Baru Press : Yogyakarta Kharismawati, Mufti, Pri Iswati Utami, Retno Wahyuningrum Penetapan Kadar Tanin dalam Infusa Daun Salam (Syzygium polyanthum (wight.) Walp)) Secara Spektrofotometri Sinar Tampak. Jurnal Pharmacy Vol.06 No. 01 April Mursyidi Analisa Metabolit Sekunder. Pusat Laboratorium Umum Bioteknologi UGM : Yogayakarta Robinson, Trevor Kandungan Organik Tumbuhan Tingkat Tinggi. Edisi VI. ITB : Bandung Saifudin, Aziz, Viesa Rahayu, Hilwan Yuda Teruna Standarisasi bahan Obat Alam. Edisi I. Graha Ilmu : Yogyakarta Sudewo, Bambang Basmi Penyakit dengan Sirih Merah. Agromedia Pustaka : Jakarta