UJI BIOAKTIVITAS ZAT EKSTRAKTIF KAYU SUREN (Toona sureni Merr.) dan KI BONTENG (Platea latifolia BL.) MENGGUNAKAN BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BSLT)

Transkripsi

1 UJI BIOAKTIVITAS ZAT EKSTRAKTIF KAYU SUREN (Toona sureni Merr.) dan KI BONTENG (Platea latifolia BL.) MENGGUNAKAN BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BSLT) SRI WAHYUNI MEILANI DEPARTEMEN HASIL HUTAN FAKULTAS KEHUTANAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR 2006

2 PERNYATAAN Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi Uji Bioaktivitas Zat Ekstraktif Kayu Suren (Toona sureni Merr.) dan Ki bonteng (Platea latifolia BL.) Menggunakan Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) adalah karya saya sendiri dan belum diajukan dalam bentuk apapun kepada perguruan tinggi manapun. Sumber informasi yang berasal atau dikutip dari karya yang diterbitkan maupun tidak diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam Daftar Pustaka di bagian akhir skripsi ini. Bogor, September 2006 Sri Wahyuni Meilani NRP E

3 ABSTRAK SRI WAHYUNI MEILANI. Uji Bioaktivitas Zat Ekstraktif Kayu Suren (Toona sureni Merr.) dan Ki bonteng (Platea latifolia BL.) Menggunakan Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Dibimbing oleh WASRIN SYAFII dan RITA KARTIKA SARI. Negara Indonesia dikenal dunia memiliki hutan hujan tropika yang kaya akan keanekaragaman flora. Bagian daun dan kulit batang pohon suren (Toona sureni Merr.) telah lama digunakan masyarakat umum sebagai obat tradisional (Sangat el al. 2000). Di hutan alam kawasan Gunung Salak, Jawa Barat ditemukan 112 jenis tumbuhan dari 49 famili yang berpotensi sebagai tumbuhan obat diantaranya ki bonteng (Platea latifolia BL.), karena mengandung senyawa alkaloid, flavonoid dan saponin yang merupakan kelompok senyawa bioaktif (Sugiana 2003). Maka perlu dilakukan penelitian mengenai bioaktivitas dari kedua jenis tersebut agar ditemukan senyawa kimia berkhasiat obat khususnya antikanker. Metode bioassay untuk menguji aktivitas antikanker ekstrak suatu tumbuhan adalah Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) dengan menggunakan hewan uji Artemia salina Leach. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui kandungan zat ekstrakif kulit dalam (inner bark) dan bagian teras cabang suren dan ki bonteng yang larut dalam pelarut aseton dan hasil fraksinasinya dengan pelarut n-heksana, etil-asetat serta residu dari ekstrak aseton tersebut serta untuk mengetahui bioaktivitas zat ekstraktif tersebut terhadap A. salina. Penelitian ini dilakukan dalam beberapa tahapan yaitu ekstraksi serbuk (40-60 mesh) dari inner bark dan bagian teras cabang suren dan ki bonteng dengan menggunakan pelarut aseton dan kemudian fraksinasi dengan pelarut n- heksana dan etil asetat. Kemudian ekstrak dan fraksinya diujikan terhadap larva udang A. salina dan data mortalitas diolah dengan menggunakan analisis probit untuk mendapatkan nilai LC 50. Hasil ekstraksi dan fraksinasi menunjukkan bahwa inner bark suren mengandung 12,93 % ekstrak aseton yang terdiri dari 0,80 % fraksi n-heksana; 3,13 % fraksi etil asetat dan 3,94 % fraksi residu. Sedangkan bagian teras cabangnya mengandung 2,31 % ekstrak aseton dengan 0,18 % fraksi n-heksana; 1,42 % fraksi etil asetat dan 0,40 % fraksi residu. Untuk jenis ki bonteng, inner barknya mengandung 11,19 % ekstrak aseton dengan fraksi n-heksana 0,11 %; fraksi etil-asetat 1,47 % dan fraksi residu 3,19 %. Sedangkan bagian teras cabangnya mengandung 0,90 % ekstrak aseton dengan fraksi n-heksana 0,25 %; fraksi etil-asetat 0,41 % dan fraksi residu 0,16 %. Hasil uji BSLT terbaik adalah pada fraksi etil asetat inner bark suren (LC 50 0,0005 ppm). Semua fraksi pada ekstrak aseton bagian teras cabang suren bersifat sangat toksik dan toksik (LC 50 berturut-turut n-heksana, etil-asetat dan residu adalah 4,2595; 38,7593; 299,3360 ppm). Ekstrak aseton dan fraksi etil asetat inner bark ki bonteng tergolong toksik (LC ,7360 ppm dan 515,7250 ppm). Semua fraksi pada ekstrak aseton bagian teras cabang ki bonteng bersifat sangat toksik dan toksik (LC 50 berturut-turut n-heksana, etil-asetat dan residu adalah 18,2327; 515,7250; 511,8000 ppm). Perlu dilakukan isolasi dan identifikasi senyawa bioaktif dari ekstrak yang bersifat sangat toksik dan toksik.

4 UJI BIOAKTIVITAS ZAT EKSTRAKTIF KAYU SUREN (Toona sureni Merr.) dan KI BONTENG(Platea latifolia BL.) MENGGUNAKAN BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BSLT) SRI WAHYUNI MEILANI E SKRIPSI sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Kehutanan Pada Fakultas Kehutanan Institut Pertanian Bogor DEPARTEMEN HASIL HUTAN FAKULTAS KEHUTANAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR 2006

5 LEMBAR PENGESAHAN Judul Penelitian : Uji Bioaktivitas Zat Ekstraktif Kayu Suren (Toona sureni Merr.) dan Ki bonteng (Platea latifolia BL.) Menggunakan Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Nama Mahasiswa : Sri Wahyuni Meilani NRP : E Disetujui, Komisi Pembimbing Prof.Dr.Ir.H.Wasrin Syafii, M.Agr Ketua Ir. Rita Kartika Sari, M.Si Anggota Diketahui, Dekan Fakultas Kehutanan Institut Pertanian Bogor Prof.Dr.Ir. Cecep Kusmana, MS Tanggal : Tanggal lulus :

6 RIWAYAT HIDUP Penulis dilahirkan di Pekanbaru, Riau pada tanggal 5 Mei Penulis merupakan anak kedua dari tiga bersaudara keluarga Wahyono Wassim dan Tiasari Hasibuan. Penulis memulai pendidikan di TK Bhayangkari tahun 1989, tahun 1990 masuk Sekolah Dasar Negeri 004 Tembilahan, Kabupaten Indragiri Hilir Propinsi Riau. Pada tahun 1996 penulis melanjutkan pendidikan ke SLTP Negeri 2 Tembilahan kemudian pada tahun 2002 lulus dari SMU Negeri 2 Tembilahan. Pada tahun yang sama melalui jalur Undangan Seleksi Masuk IPB (USMI), penulis diterima di Institut Pertanian Bogor pada Jurusan Teknologi Hasil Hutan, Fakultas Kehutanan. Selama mahasiswa, penulis aktif pada Badan Eksekutif Mahasiswa Fakultas Kehutanan periode tahun sebagai staff Departemen Kesekretariatan dan Lembaga Kemahasiswaan Himpunan Profesi Mahasiswa Teknologi Hasil Hutan (HIMASILTAN) sebagai Kepala Departemen Kesekretariatan periode Selain itu, penulis juga aktif di berbagai kepanitiaan diantaranya Bina Corps Rimbawan 2003, Forester Cup 2003, pelepasan wisuda Fakultas Kehutanan 2004 dan KOMPAK THH Penulis pernah mengikuti kegiatan Field Trip di PT Trakindo Utama Bekasi, PT Inhutani II Bekasi, dan Pabrik Pengolahan Gondorukem dan Terpentin (PGT) Sindang Wangi, Nagrek, Perum Perhutani Unit III Jawa Barat. Pada tahun 2005, penulis melaksanakan Praktek Pengenalan dan Pengelolaan Hutan (P3H) kelompok Getas II jalur Baturraden-Cilacap dan Kampus Lapangan UGM, di Getas, Ngawi, Jawa Timur. Selain itu, pada tahun 2006 penulis melaksanakan Praktek Kerja Lapang (PKL) di HPHTI PT Arara Abadi (Sinar Mas Group) Perawang, Kabupaten Siak Propinsi Riau. Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Kehutanan IPB, penulis melakukan penelitian yang berjudul Uji Bioaktivitas Kayu Suren (Toona sureni Merr.) dan Ki bonteng (Platea latifolia BL.) Menggunakan Brine Shrimp Lethality Test (BSLT), dibawah bimbingan Prof.Dr.Ir.H. Wasrin Syafii, M.Agr dan Ir. Rita Kartika Sari, M.Si.

7 PRAKATA Alhamdulillah, puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT karena atas rahmat dan karunia-nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul Uji Bioaktivitas Zat Ekstraktif Kayu Suren (Toona sureni Merr.) dan Ki bonteng (Platea latifolia BL.) Menggunakan Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) ini dengan sebaik-baiknya. Skripsi ini disusun sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Kehutanan pada Fakultas Kehutanan Institut Pertanian Bogor. Pada kesempatan ini, penulis mengucapkan terima kasih yang sebesarbesarnya kepada : 1. Bapak, mama, bang Febri, adek Rani tercinta, keluarga besar Wassim dan Dullah Sidik Hasibuan serta bang Neko yang telah memberikan doa, cinta kasih, perhatian, dukungan, semangat dan motivasinya kepada penulis. 2. Bapak Prof.Dr.Ir.H. Wasrin Syafii, M.Agr selaku pembimbing skripsi 1 dan Ibu Ir. Rita Kartika Sari, M.Si selaku pembimbing skripsi 2 atas segala perhatian, masukan, nasehat-nasehat dan bimbingannya. 3. Bapak Drs. Simon Taka Nuhamara, MS selaku dosen penguji dari Departemen Silvikultur dan Bapak Ir. Edhi Sandra, M.Si selaku dosen penguji dari Departemen Konservasi Sumberdaya Hutan dan Ekowisata. 4. Seluruh staf dan laboran laboratorium Kimia Hasil Hutan Departemen Hasil Hutan atas bantuannya selama melaksanakan penelitian. 5. Nura, Fadli dan Ijul atas kerjasamanya selama penelitian. 6. Budi, Ieka, Tia, Nia, Chiput, Irma, Buyung, Rais, Doto dan keluarga besar THH 39 atas kekompakan serta kebersamaannya selama ± 4 tahun ini. 7. Neni, Vivi, Iera, Andri, Melin dan teman-teman di Puri Fikriyah atas bantuan, pengertian, dorongan semangat, dan canda tawanya. 8. Seluruh pihak yang telah membantu namun tidak dapat disebutkan satu persatu. Bogor, September 2006 Sri Wahyuni Meilani

8 DAFTAR ISI Halaman PRAKATA... i DAFTAR ISI... ii DAFTAR TABEL... iii DAFTAR GAMBAR... iv DAFTAR LAMPIRAN... v PENDAHULUAN... 1 TINJAUAN PUSTAKA Tumbuhan Obat... 4 Deskripsi Suren (Toona sureni Merr.)... 4 Deskripsi Ki bonteng (Platea latifolia BL.)... 5 Ekstraksi... 5 Senyawa Bioaktif... 8 Ekstraktif Brine Shrimp Lethality Test Artemia salina Leach BAHAN DAN METODE Waktu dan Tempat Penelitian Bahan dan Alat Metode Penelitian Uji Bioaktivitas dengan Brine Shrimp Lethality Test HASIL DAN PEMBAHASAN Analisis Fisik Inner bark dan Teras Cabang Kayu Suren (Toona sureni Merr.) dan Ki bonteng (Platea latifolia BL.) Kandungan Zat Ekstraktif Kandungan Zat Ekstraktif Kayu Suren Kandungan Zat Ekstraktif Kayu Ki bonteng Uji Bioaktivitas Zat Ekstraktif dengan Brine Shrimp Lethality Test SIMPULAN Kesimpulan Saran DAFTAR PUSTAKA LAMPIRAN... 44

9 DAFTAR TABEL Halaman 1. Nilai konstanta dielektrik, titik didih dan sifat kepolaran beberapa pelarut yang digunakan dalam penelitian ini Jenis kayu dengan diameter berbeda sebagai contoh uji Hasil analisis fisik kulit cabang kayu suren dan ki bonteng Hasil analisis fisik bagian teras cabang kayu suren dan ki bonteng Kandungan rata-rata ekstrak aseton inner bark dan teras cabang suren (T. sureni) serta hasil fraksinasinya Kandungan rata-rata ekstrak aseton inner bark dan teras cabang ki bonteng (P. latifolia) serta hasil fraksinasinya Nilai rata-rata mortalitas terkoreksi terhadap larva udang A. salina setelah diberikan zat ekstraktif kayu suren dan ki bonteng pada berbagai konsentrasi Hasil analisis probit fraksi teraktif ekstrak aseton kayu suren (T. sureni) dan ki bonteng (P. latifolia) Hasil uji fitokimia kulit batang suren (T. sureni) dan ki bonteng (P. latifolia)... 36

10 DAFTAR GAMBAR Halaman 1. Larva udang Artemia salina Leach Cabang kayu suren dan ki bonteng sebagai contoh uji Bagan kerja ekstraksi dan fraksinasi inner bark dan teras cabang suren dan ki bonteng Hubungan mortalitas larva udang Artemia salina Leach. dengan penambahan berbagai konsentrasi ekstrak yang terkandung dalam inner bark suren Hubungan mortalitas larva udang A. salina dengan penambahan berbagai konsentrasi ekstrak yang terkandung dalam teras cabang suren Hubungan mortalitas larva udang A. salina dengan penambahan berbagai konsentrasi ekstrak yang terkandung dalam inner bark ki bonteng Hubungan mortalitas larva udang A. salina dengan penambahan berbagai konsentrasi ekstrak yang terkandung dalam teras cabang ki bonteng... 35

11 DAFTAR LAMPIRAN Halaman 1. Nilai persentase kadar air (KA) suren (Toona sureni Merr.) dan ki bonteng (Platea latifolia BL.) Nilai persentase kadar ekstrak aseton suren dan ki bonteng Nilai persentase kadar ekstrak aseton suren dan ki bonteng pada fraksi n-heksana Nilai persentase kadar ekstrak aseton suren dan ki bonteng pada fraksi etil asetat Nilai persentase kadar ekstrak aseton suren dan ki bonteng pada fraksi residu Hasil uji mortalitas aseton inner bark dan teras cabang suren (Toona sureni Merr.) Hasil uji mortalitas aseton inner bark dan teras cabang suren (Toona sureni Merr.) fraksi n-heksana Hasil uji mortalitas aseton inner bark dan teras cabang suren (Toona sureni Merr.) fraksi etil asetat Hasil uji mortalitas aseton inner bark dan teras cabang suren (Toona sureni Merr.) fraksi residu Hasil uji mortalitas aseton inner bark dan teras cabang ki bonteng (Platea latifolia BL.) Hasil uji mortalitas aseton inner bark dan teras cabang ki bonteng (Platea latifolia BL.) fraksi n-heksana Hasil uji mortalitas aseton inner bark dan teras cabang ki bonteng (Platea latifolia BL.) fraksi etil asetat Hasil uji mortalitas aseton inner bark dan teras cabang ki bonteng (Platea latifolia BL.) fraksi residu Hasil minitab analisis probit pada suren Hasil minitab analisis probit pada ki bonteng... 67

12 PENDAHULUAN Latar Belakang Negara Indonesia dikenal dunia memiliki hutan hujan tropika yang kaya akan keanekaragaman flora. Diperkirakan flora Indonesia memiliki spesies tumbuhan berbunga. Ini suatu jumlah yang melebihi aneka flora dari negara-negara tropika lainnya di dunia. Dari jumlah tersebut, terdapat tidak kurang dari spesies tumbuhan yang dapat digunakan sebagai tumbuhan obat tradisional (Heyne 1987). Menurut Kassahara dan Hemmi (1986), dari jenis tumbuhan yang ditemukan di Indonesia, ± jenis (7.577 jenis) diantaranya adalah tumbuhan obat. Fransworth (1985) dalam Zuhud et al. (1994), menyatakan bahwa 74 % dari 121 bahan aktif obat modern di USA berasal dari pengetahuan obat tradisional yang berasal dari tumbuhan hujan tropika. Hal ini menunjukkan bahwa hutan tropika Indonesia sangat potensial mengandung berbagai senyawa bioaktif yaitu senyawa yang dalam kadar kecil dapat mempengaruhi fungsi fisiologi sel hidup. Oleh karena itu, keanekaragaman hayati hutan tropika Indonesia adalah sumber senyawa-senyawa metabolit sekunder (zat ekstraktif) yang tak ternilai jumlah jenisnya. Senyawa-senyawa ini dapat dimanfaatkan sebagai bahan obat untuk mengatasi berbagai penyakit bahkan obat modern yang beredar di pasaran merupakan hasil eksplorasi zat ekstraktif tumbuhan yang terdapat di hutan tropis. Krisis ekonomi yang melanda serta kesadaran masyarakat untuk back to nature telah meningkatkan penggunaan tanaman obat baik untuk pencegahan maupun dalam pengobatannya. Dengan demikian, keanekaragaman tumbuhan obat tersebut sangatlah mungkin dimanfaatkan demi kesejahteraan umat manusia. Berdasarkan hasil penelitian Direktorat Aneka Usaha Kehutanan dan Fakultas Kehutanan IPB tahun 2000 yang dilakukan di Hutan Lindung Gunung Salak (tidak termasuk kawasan hutan UGI), menunjukkan bahwa kawasan hutan ini mempunyai potensi yang cukup besar sebagai sumber plasma nutfah tumbuhan obat. Hal ini dibuktikan dengan ditemukannya 117 jenis dari 60 famili tumbuhan obat sehingga kemudian kawasan hutan ini ditetapkan sebagai salah satu kawasan pengembangan wanafarma di Jawa Barat (Sugiana 2003). Penelitian Sugiana

13 (2003), menyatakan bahwa ditemukan 112 jenis tumbuhan dari 49 famili yang terdiri dari 62 jenis pohon, 20 jenis herba, 6 jenis perdu, 2 jenis semak, 8 jenis liana dan 14 jenis epifit yang berpotensi sebagai tumbuhan obat dan diantaranya adalah ki bonteng. Ki bonteng (Platea latifolia BL.) adalah salah satu jenis tumbuhan potensial berkhasiat obat yang ditemukan di Gunung Salak karena bagian kulit batang ki bonteng mengandung senyawa kimia kelompok alkaloid, flavonoid dan saponin. Bagian daun dan kulit batang pohon suren (Toona sureni Merr.) telah lama digunakan masyarakat umum sebagai obat mules, demam, kencing manis dan gondok (Sangat et al. 2000). Pada screening awal yang dilakukan Kardono et al. (2002), menunjukkan bahwa ekstrak metanol kulit kayu suren ini mengandung senyawa bioaktif antidiabetes. Hasil uji fitokimia menunjukkan bahwa bagian kulit dan kayu suren mengandung senyawa kimia dari kelompok alkaloid, flavonoid dan saponin. Senyawa-senyawa tersebut merupakan kelompok senyawa bioaktif. Kelompok senyawa ini diduga memiliki sifat antidiabetes dan antikanker (Kardono et al dan Sajuthi 2001). Oleh karena itu, eksplorasi senyawa bioaktif terhadap kedua jenis tersebut perlu dilakukan dengan harapan ditemukan senyawa kimia yang berkhasiat obat, khususnya yang bersifat antikanker. Alasan dipilihnya eksplorasi zat ekstraktif sebagai obat antikanker karena jumlah penderita kanker yang terus meningkat (penambahan 7 juta orang/tahun), dan 2/3nya diperkirakan berasal dari negara berkembang termasuk Indonesia (Kupang Watch 2006). Untuk melihat adanya kemungkinan efek suatu ekstrak dapat digunakan penelusuran farmakologis-biologis dengan menguji ekstrak tersebut berdasarkan suatu metode bioassay (Bruhn 1991). Metode bioassay yang digunakan untuk uji bioaktivitas zat ekstraktif adalah dengan Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) dengan menggunakan larva udang Artemia salina Leach sebagai hewan uji. Alasan penggunaan BSLT ini adalah peka, cepat, sederhana dan dapat diulang tanpa terjadi penyimpangan. Serta metode bioassay ini sering dikaitkan sebagai metode identifikasi senyawa antikanker yang berasal dari tumbuhan (Wahyuno 1995). Hasil pengamatan dari uji ini adalah dari nilai LC 50 (Lethal Concentration

14 50 %) dan hasil BSLT ini berkorelasi positif dengan sifat antikanker senyawasenyawa kimia yang dikandung oleh bahan uji (Meyer et al.1982). Penelitian ini menggunakan kulit dalam (inner bark) dan bagian teras cabang kayu suren dan ki bonteng. Menurut Fengel dan Wegener (1995), inner bark kemungkinan mengandung jenis zat ekstraktif maupun komposisi berbeda dengan kulit bagian luarnya sehingga akan mengandung senyawa bioaktif yang berbeda jenis atau komposisinya. Harun dan Labosky (1985), menyatakan bahwa ada kemungkinan zat ekstraktif yang terdapat di dalam kayu juga terdapat di dalam kulit, mengingat pembentukan jaringan kayu dan kulit dimulai dari jaringan meristem sekunder yang sama. Fengel dan Wegener (1995) juga menyatakan bagian teras umumnya mengandung lebih banyak zat ekstraktif. Apabila inner bark dan teras cabang memiliki aktivitas dan kandungan senyawa bioaktif yang tidak berbeda dengan bagian batang maka kita dapat memanfaatkan tanaman tersebut sebagai obat tanpa melakukan penebangan. Sedangkan untuk memperoleh ekstrak yang mengandung senyawa kimia dari kelompok alkaloid, flavonoid, saponin, triterpenoid, dan senyawa bioaktif lainnya dari tumbuhan dibutuhkan pelarut yang aman, harganya tidak terlalu mahal, toksisitasnya rendah, daya larutnya tinggi dan tidak terlalu reaktif (Houghton dan Raman 1998). Maka pelarut aseton dipilih sebagai pelarut dalam penelitian ini, dan untuk memperoleh fraksi-fraksinya digunakan pelarut n-heksana dan etil-asetat yang mewakili pelarut yang bersifat non-polar dan polar. Tujuan Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui kandungan zat ekstraktif kulit dalam (inner bark) dan bagian teras cabang suren (T. sureni) dan ki bonteng (P. latifolia) yang larut dalam pelarut aseton dan hasil fraksinasinya dengan pelarut n-heksana, etil asetat dan residunya serta untuk menguji bioaktivitas zat ekstraktif tersebut terhadap Artemia salina Leach. melalui pengujian BSLT.

15 TINJAUAN PUSTAKA Tumbuhan Obat Pengertian tumbuhan obat adalah semua tumbuhan, baik yang sudah ataupun yang belum dibudidayakan yang dapat digunakan sebagai obat, berkisar dari yang terlihat mata hingga yang nampak di bawah mikroskop (Hamid et al. 1991). Menurut Zuhud et al. (1994), tumbuhan obat adalah seluruh spesies tumbuhan obat yang diketahui atau dipercaya mempunyai khasiat obat yang dikelompokkan menjadi : Tumbuhan obat tradisional, yaitu spesies tumbuhan yang diketahui atau dipercaya oleh masyarakat mempunyai khasiat obat dan telah digunakan sebagai bahan baku obat tradisional. Tumbuhan obat modern, yaitu spesies tumbuhan yang secara ilmiah telah dibuktikan mengandung senyawa/bahan bioaktif yang berkhasiat obat dan penggunaannya dapat dipertanggungjawabkan secara medis. Tumbuhan obat potensial, yaitu spesies tumbuhan obat yang diduga mengandung senyawa/bahan aktif yang berkhasiat obat, tetapi belum dibuktikan secara ilmiah/medis atau penggunaannya sebagai bahan obat tradisional sulit ditelusuri Jumlah tumbuhan dan tanaman obat di Indonesia tercatat berkisar antara ratusan sampai ribuan jenis. Dalam buku Medicinal Herbs Index in Indonesia tercantum jenis tumbuhan yang dikenal dan ditemukan di Indonesia, walaupun tidak seluruhnya berasal dari Indonesia (Heyne 1987). Deskripsi Suren (Toona sureni Merr.) Tanaman suren termasuk famili Meliaceae dengan genus Toona. Di Indonesia tanaman ini dikenal dengan nama suren (Jawa), surian (Kalimantan) atau mapala/molopaga (Sulawesi). Daerah penyebaran pohon suren di seluruh Indonesia. Pohon suren memiliki ciri utama warna kayu merah seperti daging direbus, riap tumbuhnya jelas, susunan pori tata lingkar dan isi porinya berupa endapan merah kecoklatan. Suren merupakan tanaman tahunan cepat tumbuh

16 yang berbentuk pohon dengan tinggi mencapai 20 m dan tumbuh baik di dataran rendah hingga ketinggian m dpl. Sifat dan kegunaan kayu suren adalah berat jenis : rata-rata 0,39 (0,27-0,67); kelas awet : IV/V; kelas kuat : IV. Kegunaan : bahan bangunan ringan (termasuk lemari), dinding hias, langit-langit, peti teh, kotak cerutu, bangunan kapal dan perahu dayung, alat musik (antara lain piano), vinir lapisan muka kayu lapis dan ukiran (Newman et al. 1999). Suren memiliki kandungan bahan surenon, surenin dan surenolakton yang berperan sebagai penghambat pertumbuhan, insektisida dan antifeedant (menghambat daya makan) terhadap larva serangga uji ulat sutera (Dinata 2005). Suren telah dikenal oleh masyarakat Indonesia sebagai tumbuhan yang berkhasiat obat. Bagian kulitnya digunakan untuk menyembuhkan berbagai penyakit, misalnya oleh suku Rejang Lebong (Bengkulu) untuk mules, suku Jawa untuk demam, suku Bali untuk kencing manis (diabetes mellitus) dan oleh suku Samawa (NTB) untuk menyembuhkan penyakit gondok (Sangat et al. 2000). Deskripsi Ki bonteng (Platea latifolia BL.) Menurut Heyne (1987), ki bonteng termasuk famili Icacinaceae dengan genus Platea. Nama daerah sunda : Ki kadanca. Pohon ki bonteng dikenal dengan raksasa rimba karena batangnya berbentuk tiang, perawakan pohon ini sangat besar dengan tinggi lebih besar dari 40 m, diameter batang setinggi dada 1,50 m dan terdapat di seluruh pulau Jawa pada ketinggian antara dan m dpl. Kayunya yang berbau seperti kumarin, bisa terdapat dalam ukuran yang sangat besar akan tetapi kayu ini tidak awet di cuaca terbuka. Di daerah Priangan, ki bonteng dianggap dapat digunakan untuk pekerjaan dibawah atap. Di Jawa Tengah dan Jawa Timur, walaupun banyak terdapat di sana namun namanya tidak dikenal oleh masyarakat (Heyne 1987). Ekstraksi Ekstraksi kayu meliputi sejumlah besar senyawa berbeda yang dapat diekstraksi dari kayu dengan menggunakan pelarut polar dan non-polar. Ekstraksi dengan pelarut dapat dilakukan dengan pelarut yang berbeda seperti eter, aseton,

17 benzena, etanol, diklorometana atau campuran dari pelarut-pelarut tersebut. Asam lemak, asam resin, lilin, tannin, dan senyawa berwarna merupakan senyawasenyawa yang paling penting yang dapat diekstraksi dengan pelarut. Komponen utama dari bagian kayu yang dapat larut dalam air terdiri atas karbohidrat, protein dan garam-garam an-organik (Fengel dan Wegener 1995). Ekstraksi adalah suatu metode pemisahan komponen-komponen dari suatu campuran dimana komponen yang larut masuk ke dalam pelarut yang dipakai sedangkan komponen yang tidak larut akan tertinggal di dalam bahan. Metode yang paling sederhana yang digunakan untuk mengekstraksi padatan adalah mencampurkan seluruh bahan dengan pelarut, kemudian memisahkannya dari padatan yang tidak terlarut (Lehniger dan Baverloo 1976). Hasil ekstraksi yang diperoleh bergantung pada kandungan ekstrak yang terdapat pada contoh uji dan jenis pelarut yang digunakan. Hal-hal yang perlu dipertimbangkan dalam pemilihan pelarut adalah selektivitas, kapasitas, kemudahan untuk diuapkan dan harga pelarut tersebut. Prinsip kelarutan adalah like dissolve like, yaitu (1) pelarut polar akan melarutkan senyawa polar, demikian juga sebaliknya pelarut non-polar akan melarutkan senyawa non-polar, (2) pelarut organik akan melarutkan senyawa organik (Khopkar 1990 dalam Yunita 2004). Ekstraksi obat dari tumbuhan dengan ekstraksi cair tergolong sebagai jenis ekstraksi cairan-padat (liquid-solid extraction). Tujuan metode ekstraksi ini adalah mengeluarkan bahan yang diinginkan dari sel-sel dengan proses difusi. Prinsip dari cara ini adalah untuk tercapainya keseimbangan konsentrasi bahan dalam pelarut pada batas yang diinginkan. Hasil ekstraksi dari proses ini dipengaruhi oleh suhu, ph, ukuran bahan yang akan diekstraksi dan gerakan pelarut yang terjadi di sekitarnya. Parameter yang juga sangat penting dalam ekstraksi adalah pemilihan pelarut. Suatu pelarut ideal adalah yang memiliki selektivitas tinggi yakni untuk memisahkan senyawa dengan bobot molekul rendah, seperti alkaloid, saponin dan terpentin, pelarut yang paling baik digunakan adalah alkohol alifatik dengan maksimum 3 atom karbon atau campuran dari pelarut itu dengan air (Bombardelli 1991). Tahapan yang harus diperhatikan dalam mengekstraksi jaringan tumbuhan adalah penyiapan bahan sebelum ekstraksi yang meliputi penghalusan atau

18 pengrajangan simplisia, pemilihan pelarut dan kondisi ekstrak, proses pengambilan pelarut, pengawasan mutu dan pengujian serta usulan proses ekstraksi yang akan digunakan (Sabel dan Warren 1973). Prosedur klasik untuk memperoleh kandungan senyawa organik dari jaringan tumbuhan kering adalah dengan proses ekstraksi berkesinambungan dengan menggunakan sederetan pelarut yang berbeda tingkat kepolarannya (Harborne 1987). Polaritas sering diartikan sebagai adanya pemisahan kutub muatan positif dan negatif dari suatu molekul sebagai akibat terbentuknya konfigurasi tertentu dari atom-atom penyusunnya. Dengan demikian, molekul tersebut dapat tertarik oleh molekul yang lain yang juga mempunyai polaritas yang kurang lebih sama. Besarnya polaritas dari suatu zat pelarut proporsional dengan besarnya konstanta dielektriknya (Adnan 1997). Menurut Stahl (1985), konstanta dielektrik (ε) merupakan salah satu ukuran kepolaran pelarut yang mengukur kemampuan pelarut untuk menyaring daya tarik elektrostatik antara isi yang berbeda. Kemampuan zat cair melarutkan zat padat ion sangat bergantung, walaupun tidak semata-mata bergantung pada tetapan dielektriknya. Dalam penelitian ini digunakan pelarut aseton dikarenakan pelarut ini memiliki sifat antara lain nilai polaritas dan konstanta dielektrik yang tinggi, dapat dicampur dengan air dalam berbagai perbandingan dan merupakan pelarut yang baik (Lestari 2003). Menurut Reichardt (1998), aseton sebagai pelarut organik lebih aman bagi kesehatan dibandingkan dengan pelarut kloroform, benzena dan toluena. Pelarut aseton mempunyai toksisitas yang lebih rendah (1.000 ppm) dibandingkan dengan benzena (8 ppm), kloroform (10 ppm) dan toluena (200 ppm). Nilai konstanta dielektrik, titik didih dan sifat kepolaran beberapa pelarut yang digunakan dalam penelitian ini disajikan dalam Tabel 1. Tabel 1. Nilai konstanta dielektrik, titik didih dan sifat kepolaran beberapa pelarut yang digunakan dalam penelitian ini Nama Pelarut Nilai konstanta dielektrik (ε) Titik didih ( o C) 1) Sifat kepolaran 2) Aseton N-Heksana Etil Asetat 20,70 1,89 6,02 56,3 68,7 77,1 Polar Non polar Semi polar Sumber : 1) Houghton dan Raman (1998) 2) Reichardt (1988)

19 Senyawa Bioaktif Senyawa bioaktif merupakan senyawa yang mempunyai aktivitas biologis terhadap organisme lain atau pada organisme yang menghasilkan senyawa tersebut. Senyawa bioaktif hampir selalu toksik pada dosis tinggi. Setiap zat kimia, termasuk senyawa aktif dari tumbuhan pada dasarnya bersifat racun, tergantung pada penggunaan, takaran, pembuatan, cara pemakaian dan waktu yang tepat untuk mengkonsumsi. Beberapa tanaman dikenal menghasilkan senyawa bioaktif yang mempunyai berbagai aktivitas bioaktif termasuk antikanker yang pada umumnya berupa senyawa-senyawa flavonoid, glikosida, steroid alkaloid dan terpenoid (Kurz dan Constabel 1998). Alkaloid Menurut Harborne (1987), alkaloid sekitar jenis telah diketahui dan merupakan golongan zat tumbuhan sekunder yang terbesar. Tidak ada satupun istilah alkaloid yang memuaskan, tetapi pada umumnya alkaloid mencakup senyawa bersifat basa yang mengandung satu atau lebih atom nitrogen, biasanya dalam gabungan, sebagai bagian dari sistem siklik. Alkaloid seringkali bersifat racun bagi manusia dan banyak mempunyai kegiatan fisiologi yang menonjol yang secara luas banyak digunakan dalam bidang pengobatan. Alkaloid biasanya tanpa warna, seringkali bersifat optis aktif, kebanyakan berbentuk kristal tetapi hanya sedikit yang berupa cairan (misalnya nikotina) pada suhu kamar. Uji sederhana yang sama sekali tidak sempurna, untuk alkaloid dalam daun atau buah segar adalah rasa pahitnya di lidah. Misalnya, alkaloid kuinina adalah zat yang dikenal paling pahit dan pada konsentrasi molar 1x10-3 memberikan rasa pahit yang berarti. Alkaloid dahulu sebagai sumber utamanya hanya berasal dari tanaman yang berbunga (angiospermae). Tetapi pada dewasa terakhir, ternyata alkaloid ditemukan juga dalam beberapa jenis hewan baik yang hidup di laut maupun di darat, berupa serangga, makroorganisme dan tanaman rendah lainnya (Pandji 1989). Alkaloid dapat ditemukan dalam berbagai bagian tumbuhan seperti biji, daun, ranting dan kulit kayu. Alkaloid memang jarang ditemukan dalam jaringan mati. Umumnya alkaloid terakumulasi dalam jaringan yang tumbuh aktif seperti epidermis, hipodermis dan kelenjar lateks. Adapun fungsi alkaloid dalam

20 tumbuhan belum diketahui begitu pasti, walaupun beberapa senyawa ditafsirkan berperan sebagai pengatur, atau penolak dan pengikat serangga. Sampai saat ini, penggolongan senyawa alkaloid belum ada yang digunakan secara umum. Hal ini disebabkan karena alkaloid mempunyai struktur yang banyak jenisnya, sehingga penggolongan alkaloid berdasarkan strukturnya untuk membedakan jenis yang satu dengan yang lain sukar dilakukan (Suradikusumah 1989). Dalam pengobatan, alkaloid memberikan efek fisiologis yang pada umumnya di susunan syaraf pusat, misalnya sebagai obat anti rasa sakit dan obat tidur, dalam jumlah besar sangat beracun bagi manusia (Vicker dan Vickery 1981). Menurut Sumiwi (1992), fungsi alkaloid bagi tumbuhan antara lain sebagai zat beracun untuk melawan serangga atau hewan pemakan tumbuhan, faktor pengatur tumbuh, substansi cadangan untuk memenuhi kebutuhan akan nitrogen dan elemen-elemen lain yang penting bagi tumbuhan dan hasil akhir reaksi detoksifikasi dari suatu zat yang berbahaya bagi tumbuhan. Flavonoid Flavonoid terutama berupa senyawa yang larut dalam air. Mereka dapat diekstraksi dengan etanol 70% dan tetap ada dalam lapisan air setelah ekstrak ini dikocok dengan eter minyak bumi. Flavonoid berupa senyawa fenol, karena itu warnanya berubah bila ditambah basa atau amonia; jadi mereka mudah dideteksi pada kromatogram atau dalam larutan (Harborne 1987). Flavonoid mengandung sistem aromatik yang terkonyugasi dan karena itu menunjukkan pita serapan kuat pada daerah spektrum UV dan spektrum tampak. Flavonoid umumnya terdapat dalam tumbuhan, terikat pada gula sebagai glikosida dan aglikon flavonoid yang manapun mungkin saja terdapat dalam satu tumbuhan dalam beberapa bentuk kombinasi glikosida. Karena alasan itu, maka dalam menganalisis flavonoid biasanya lebih baik kita memeriksa aglikon yang terdapat dalam ekstrak tumbuhan yang telah dihidrolisis sebelum memperhatikan kerumitan glikosida yang mungkin terdapat dalam ekstrak asal (Harborne 1987). Flavonoid terdapat dalam tumbuhan sebagai campuran, jarang sekali dijumpai hanya flavonoid tunggal dalam jaringan tumbuhan. Disamping itu,

21 sering terdapat campuran yang terdiri atas flavonoid yang berbeda kelas. Antosianin berwarna yang terdapat dalam daun bunga hampir selalu disertai oleh flavon atau flavonol tanpa warna. Hasil penelitian akhir-akhir ini telah membuktikan bahwa flavon merupakan ko-pigmen penting, karena sangat diperlukan untuk menyatakan warna antosianin secara penuh dalam jaringan bunga. Biasanya antosianin juga terdapat sebagai campuran, terutama dalam bunga, dan suatu jaringan bunga dapat mengandung sampai sepuluh pigmen yang berlainan (Harborne 1987). Pada tumbuhan, flavonoid dapat meningkatkan dormansi, meningkatkan pembelahan sel-sel kalus, sebagai enzim penghambat pembentukkan protein, menghasilkan zat warna pada bunga, untuk merangsang serangga, burung dan satwa lainnya untuk mendatangi tumbuhan tersebut sebagai agen dalam penyerbukan dan penyebaran biji. Dalam dunia pengobatan, beberapa senyawa flavonoid berfungsi sebagai antibodi, misalnya antivirus dan jamur, peradangan pembuluh darah dan dapat digunakan sebagai racun ikan (Vickery dan Vickery 1981). Saponin Saponin termasuk dalam golongan senyawa terpenoid dan bagian dari triterpenoid (diturunkan dari hidrokarbon C 30 ). Saponin merupakan glikosida triterpenoid dan sterol. Senyawa ini merupakan senyawa aktif permukaan yang bersifat seperti sabun dan dapat dideteksi berdasarkan kemampuannya membentuk busa yang stabil dan dapat menghemolisis sel darah. Pembentukan busa yang mantap sewaktu mengekstrak tumbuhan atau pemekatan ekstrak tumbuhan merupakan bukti adanya saponin. Untuk uji saponin yang sederhana adalah dengan menggunakan ekstrak alkohol, air dari tumbuhan dalam tabung reaksi dan perhatikan terbentuknya busa yang tahan lama pada permukaan cairan (Harborne 1987). Pada tumbuhan, saponin mempunyai fungsi yang sama dengan triterpenoid karena mengandung turunan dari senyawa ini, diantaranya dapat meningkatkan daya kecambah benih dan menghambat pertumbuhan akar, menghambat pertumbuhan sel-sel tumor pada tumbuhan dan satwa. Saponin digunakan sebagai bahan pencuci karena memiliki sifat emulsi, dapat digunakan

22 untuk meningkatkan kolesterol serum, sebagai zat antibiotik, tahan jamur, anti influenza dan peradangan tenggorokan, sebagai bahan dasar untuk mendapatkan sapogenin yang berguna untuk menghasilkan hormon pertumbuhan pada satwa dan dapat digunakan sebagai racun ikan (Vickery dan Vickery 1981). Triterpenoid dan Steroid Triterpenoid adalah senyawa yang kerangka karbonnya berasal dari enam satuan isoprena dan secara biosintesis diturunkan dari hidrokarbon C30 asiklik, yaitu skualena. Senyawa ini berstruktur siklik yang nisbi rumit, kebanyakan berupa alkohol, aldehida atau asam karboksilat. Mereka berupa senyawa tanpa warna, berbentuk kristal, seringkali bertitik leleh tinggi dan aktif optik, yang umumnya sukar dicirikan karena tak ada kereaktifan kimianya. Uji yang banyak digunakan adalah reaksi Lieberman-Burchard (anhidrida asetat-h2so4 pekat) yang dengan kebanyakan triterpena dan sterol memberikan warna hijau-biru. Sterol dianggap senyawa satwa (sebagai hormon kelamin, asam empedu dan lainlain), tetapi pada tahun-tahun terakhir ini makin banyak senyawa tersebut yang ditemukan dalam jaringan tumbuhan. Memang tiga senyawa yang biasa disebut fitosterol mungkin terdapat pada setiap tumbuhan tinggi : sitosterol, stigma sterol dan kampesterol (Harborne 1987). Triterpenoid dan turunannya termasuk saponin dan steroid pada tumbuhan berfungsi sebagai racun serangga, bakteri dan jamur. Steroid dapat meningkatkan permeabilitas membran sel dan merangsang proses pembungaan. Dalam pengobatan, senyawa ini berguna sebagai zat antibiotik diantaranya anti jamur, bakteri dan virus. Steroid dapat merangsang aktivitas hormon estrogen dan progesteron pada satwa dan manusia. Steroid menjadi sumber energi bagi mikroorganisme pada pengurai (Vickery dan Vickery 1981). Ekstraktif Kayu mengandung endapan yang bervariasi (umumnya bahan organik) yang gabungannya disebut ekstraneous atau ekstraktif. Bahan tersebut bukan merupakan bahan penyusun kayu, tetapi terdapat dalam rongga sel dan dinding sel. Ekstraktif merupakan kelompok dari berbagai komposisi kimia, seperti gum,

23 lemak, resin, gula, minyak, pati, alkaloid dan tannin. Istilah ekstraktif didasarkan kepada kemungkinannya (bagian kecil) diekstraksi dari kayu dengan air dingin atau panas, atau pelarut netral seperti alkohol, benzen, aseton dan lain-lain. Proporsi ekstraktif bervariasi mulai kurang dari 1 % (sebagai contoh poplar) hingga lebih dari 10 % (sebagai contoh redwood) berdasarkan berat kering tanur kayu. Untuk beberapa jenis dari daerah tropis bisa terdapat sekitar 20 %. Adanya variasi tidak hanya terdapat diantara spesies tetapi juga dalam pohon yang sama terutama diantara kayu gubal dan kayu teras (Tsoumis 1991). Menurut Fengel dan Wegener (1995), kandungan ekstraktif dalam kulit lebih tinggi daripada dalam kayu. Ia tidak hanya tergantung pada spesies tetapi juga pada pelarut yang digunakan. Keanekaragaman senyawa yang dapat diekstraksi biasanya membutuhkan serangkaian ekstraksi yang hasilnya memberikan ciri awal komposisinya. Hal yang mempengaruhi kandungan zat ekstraktif dalam kayu diantaranya adalah umur, site (tempat tumbuh), genetik, posisi dalam pohon, jenis pelarut yang digunakan dan kecepatan pertumbuhan. Brine Shrimp Lethality Test Menurut Meyer et al. (1982), uji bioaktivitas menggunakan larva udang Artemia salina Leach dikenal dengan istilah Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). BSLT adalah suatu metode penelusuran untuk menentukan bioaktivitas suatu ekstrak ataupun senyawa terhadap larva udang dari A. salina. Metode ini berkembang sebagai salah satu metode bioassay dalam mengisolasi senyawa aktif yang terdapat dalam suatu ekstrak tanaman. Lebih jauh lagi bioassay ini sering dikaitkan sebagai metode identifikasi senyawa anti kanker berasal dari tumbuhan. Uji bioaktivitas dengan menggunakan larva udang memiliki spektrum farmakologi yang luas, sederhana prosedurnya, cepat, tidak memerlukan biaya yang besar dan hasilnya dapat dipercaya. Uji mortalitas larva udang merupakan salah satu metode uji bioaktif pada penelitian senyawa bahan alam. Penggunaan larva udang untuk kepentingan studi bioaktivitas sudah dilakukan sejak tahun 1956 dan sejak saat itu telah banyak dilakukan pada studi lingkungan, toksisitas dan penapisan senyawa bioaktif dari

24 jaringan tanaman. Uji ini merupakan uji pendahuluan untuk mengamati aktivitas farmakologi suatu senyawa. Adapun penerapan untuk sistem bioaktivitas dengan menggunakan larva udang tersebut, antara lain untuk mengetahui residu pestisida, anastetik lokal, senyawa turunan morpin, mikotoksin, karsinogenitas suatu senyawa dan polutan untuk air laut serta sebagai alternatif metode yang murah untuk uji sitotoksisitas (Hamburger dan Hostettmann 1991). Senyawa aktif yang memiliki daya bioaktivitas tinggi diketahui berdasarkan nilai Lethal Concentration 50 % (LC 50 ), yaitu suatu nilai yang menunjukkan konsentrasi zat toksik yang dapat menyebabkan kematian hewan uji sampai 50 %. Data mortalitas yang diperoleh kemudian diolah dengan probit analisis yang dirumuskan oleh Finney (1971) untuk menentukan nilai LC 50 pada derajat kepercayaan 95 %. Senyawa kimia berpotensi bioaktif jika mempunyai nilai LC 50 kurang dari ppm (Meyer et al. 1982). Artemia salina Leach. Menurut Mudjiman (1983), udang renik asin (brine shrimp) atau artemia adalah udang-udangan tingkat rendah yang hidup sebagai zooplankton yang menghuni perairan-perairan yang berkadar garam tinggi (salina), baik dekat pantai maupun jauh di Pedalaman laut. Artemia salina Leach. diklasifikasikan sebagai berikut : filum : Arthropoda kelas : Crustacea subklas : Branchipoda ordo : Anostraca famili : Artemiidae genus : Artemia species : Artemia salina Leach. Gambar 1. Larva A. salina Keunggulan penggunaan A. salina untuk uji BSLT ini ialah sifatnya yang peka terhadap bahan uji, waktu siklus hidup yang lebih cepat, mudah dibiakkan dan harganya yang murah. Sifat peka A. salina kemungkinan disebabkan oleh

25 keadaan membran kulitnya yang sangat tipis sehingga memungkinkan terjadinya difusi zat dari lingkungan yang mempengaruhi metabolisme dalam tubuhnya. A. salina ditemukan hampir pada seluruh tempat di permukaan perairan di bumi yang memiliki kisaran salinitas g/l, hal inilah yang menyebabkannya mudah dibiakkan. Telur A. salina terlihat seperti partikel-partikel kecil berwarna coklat dengan diameter kira-kira 0,20 mm. Partikel-partikel tersebut akan naik ke permukaan dan akhirnya tersapu ke darat oleh angin ketika terjadi penguapan air pada musim-musim tertentu di wilayah perairan yang memiliki kadar garam tinggi. Telur-telur tersebut dapat dikumpulkan dan dipisahkan dari pasir dan kotoran lainnya dengan cara pengayakan. Telur-telur tersebut memiliki resistensi yang tinggi terhadap kondisi ekstrim dan dapat disimpan dalam waktu yang lama, jika telur-telur tersebut berada dalam keadaan bebas air. Uji BSLT dengan menggunakan A. salina dilakukan dengan menetaskan telur-telur tersebut dalam air laut yang dibantu dengan aerasi. Telur A. salina akan menetas sempurna menjadi larva dalam waktu 24 jam. A. Salina yang baik digunakan untuk uji BSLT ialah yang berumur 48 jam sebab jika lebih dari 48 jam dikhawatirkan kematian A. salina bukan disebabkan toksisitas ekstrak melainkan oleh terbatasnya persediaan makanan (Meyer et al. 1982). Larva yang baru saja menetas berbentuk bulat lonjong dan berwarna kemerah-merahan dengan panjang 400 μm dengan berat 15 μg. Anggota badannya terdiri dari sepasang sungut kecil (anteluena atau antena I) dan sepasang sungut besar (antena atau antena II). Di bagian depan diantara kedua sungut kecil tersebut terdapat bintik merah yang berfungsi sebagai mata (oselus). Di belakang sungut besarnya terdapat sepasang mandibula (rahang) yang kecil, sedangkan di bagian perut (ventral) sebelah depan terdapat labrum (Mudjiman 1983).

26 METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Kimia Hasil Hutan, Fakultas Kehutanan Institut Pertanian Bogor pada bulan Juni - Agustus Bahan dan Alat Penelitian ini dimulai dengan pengadaan bahan baku yaitu bagian cabang kayu suren (Toona sureni Merr.) dan ki bonteng (Platea latifolia BL.) yang berasal dari hutan alam di sekitar Gunung Salak Sukabumi. Secara administrasi letak lokasi pengadaan bahan baku ini adalah di Wana Wisata Perhutani Cangkuang, Kecamatan Cidahu, Kabupaten Sukabumi Provinsi Jawa Barat. Secara geografis terletak pada LS sampai LS dan BT sampai BT pada ketinggian m dpl. Menurut tipe iklim Schmidt dan Fergusson, Gunung Salak termasuk tipe iklim A sedangkan menurut tipe iklim Mohr termasuk iklim bulan basah sepanjang tahun. Suhu rata-rata 25,5 o C dan kelembaban udara rata-rata 85,5 % dengan curah hujan rata-rata mm/thn (Sugiana 2003). Contoh uji diperoleh dari dua bagian dari cabang yang diambil, yaitu kulit bagian dalam (inner bark) dan teras cabang kayu suren dan ki bonteng. Dari dua jenis kayu tersebut diambil masing-masing tiga bagian cabang dari pohon yang berbeda dengan jenis yang sama. Ketiga bagian tersebut digunakan sebagai ulangan (Gambar 2). Sedangkan diameter cabang yang digunakan dalam penelitian ini tertera pada Tabel 2. Gambar 2. Cabang kayu suren dan ki bonteng sebagai contoh uji

27 Tabel 2. Jenis kayu dengan diameter berbeda sebagai contoh uji Jenis Kayu Diameter Pohon (cm) Diameter Cabang (cm) Suren (T. sureni) ,5 Suren (T. sureni) Suren (T. sureni) Ki bonteng (P. latifolia) ,5 Ki bonteng (P. latifolia) Ki bonteng (P. latifolia) Semua contoh uji dipotong-potong menjadi serpihan dan dikering udarakan. Apabila sudah kering, kemudian contoh uji digiling dengan menggunakan hammer mill dan disaring sehingga masing-masing contoh uji berbentuk serbuk dengan ukuran yang seragam (40-60 mesh) sebanyak g untuk bagian teras cabang dan + 50 g untuk inner bark. Bahan lainnya yang digunakan adalah telur A. salina, pelarut netral seperti aseton, n-heksana dan etil asetat. Peralatan yang digunakan adalah alat pembuat serbuk (willey mill dan hammer mill), peralatan gelas (labu erlenmeyer, tabung reaksi, cawan petri, gelas piala, gelas ukur, pipet volumetrik dll), perangkat ekstraksi, alat timbangan dan rotary evaporator. Metode Penelitian Adapun rangkaian metode penelitian dimulai dengan penyiapan serbuk, ekstraksi dan fraksinasi serta uji bioaktivitas ekstrak dengan Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Penyiapan Serbuk Bagian inner bark suren dan ki bonteng dirajang dan bagian teras cabangnya dipotong-potong sebesar batang korek api lalu dikering udarakan, kemudian digiling dengan Willey mill dan disaring dengan menggunakan Hammer mill berukuran mesh untuk mendapatkan serbuk dengan ukuran yang seragam.

28 Ekstraksi dan Fraksinasi Serbuk bagian inner bark dan teras cabang kayu suren dan ki bonteng yang telah diketahui kadar airnya untuk mengoreksi berat serbuk yang digunakan sehingga diperoleh residu serbuk dengan bobot yang tepat diekstraksi. Teknik ekstraksi yang dilakukan adalah dengan cara maserasi yaitu dengan merendam serbuk dalam 1 liter pelarut selama 1 hari. Serbuk inner bark suren dan ki bonteng sebanyak ± 50 g diekstraksi dengan ± 200 ml aseton dan ± 300 g serbuk teras cabangnya diekstraksi dengan ± ml aseton. Pelarut yang digunakan adalah aseton teknis yang telah dimurnikan dengan cara penyulingan. Serbuk direndam dengan menggunakan pelarut aseton hingga seluruh bahan terendam dan lakukan pengadukan sedikit agar pelarut mengenai seluruh bahan. Perendaman dengan menggunakan aseton dilakukan berulang-ulang hingga diperoleh larutan yang tidak berwarna atau jernih (warna pelarut sama seperti warna asalnya). Ekstrak aseton yang dihasilkan kemudian dipekatkan dengan menggunakan rotary vaccum evaporator pada suhu o C dan selanjutnya dilakukan pengeringan dalam oven pada suhu sekitar 40 o C. Kemudian ditimbang bobotnya untuk mendapatkan kadar ekstrak kasar. Ekstrak kasar yang diperoleh difraksinasi secara berturut-turut dengan menggunakan pelarut n-heksana dan etil asetat. Fraksinasi yang dilakukan adalah dengan cara memasukkan larutan yang telah kental ke dalam funnel separator. Ekstrak aseton yang dihasilkan dimasukkan ke dalam funnel dan ditambahkan sebanyak pelarut n-heksana : aquades : aseton (perbandingan 2:1:1). Campuran dikocok dan dibiarkan hingga terjadi pemisahan, selanjutnya fraksi terlarut dalam n-heksana dipisahkan dari residunya dan dimasukkan ke dalam labu. Fraksinasi dengan menggunakan n-heksana dilakukan hingga larutan berwarna jernih dan selanjutnya fraksi terlarut n-heksana ini dipekatkan dengan menggunakan rotary vaccum evaporator pada suhu o C. Selanjutnya dilakukan pengeringan di oven pada suhu sekitar 40 o C. Kemudian ditimbang bobotnya untuk mendapatkan kadar fraksi terlarut dalam n-heksana Fraksinasi berikutnya dengan menggunakan pelarut etil asetat. Residu hasil fraksinasi dengan n-heksana ditambahkan dengan 50 ml etil asetat (perbandingan 1:1). Selanjutnya campuran dikocok dan dibiarkan hingga terjadi pemisahan

29 seperti fraksi dengan n-heksana. Setelah terjadi pemisahan, fraksi terlarut etil asetat dimasukkan ke dalam botol yang tertutup rapat. Fraksinasi dilakukan hingga larutan berwarna jernih. Fraksi yang terpisah dipisahkan menjadi fraksi pada bagian atas funnel merupakan fraksi etil asetat sedangkan fraksi yang berada dibagian bawah funnel merupakan residu. Selanjutnya sama dengan fraksi terlarut n-heksana, fraksi terlarut etil asetat ini dipekatkan dengan menggunakan rotary vaccum evaporator pada suhu o C. Kemudian dilakukan pengeringan dalam oven pada suhu sekitar 40 o C dan ditimbang bobotnya untuk mendapatkan kadar fraksi terlarut dalam etil asetat. Untuk lebih jelasnya, tahapan fraksinasi dengan menggunakan pelarut di atas secara skematis dapat dilihat pada Gambar 3 di bawah ini. Serbuk kulit dalam dan teras cabang (40-60 mesh) Ekstrak kasar* Maserasi Aseton 1 l, evaporasi sampai bening Fraksinasi n-heksana:aquades:aseton 25 ml, evaporasi sampai bening Fraksi n-heksana * Residu Fraksinasi etil asetat 50 ml, evaporasi Fraksi etil asetat* Residu * Uji Antikanker (Brine Shrimp Lethality Test) Gambar 3. Bagan kerja ekstraksi & fraksinasi inner bark dan teras cabang suren dan ki bonteng.

30 Penentuan Kadar Ekstraktif Kandungan zat ekstraktif pada tiap-tiap fraksi dihitung terhadap bobot kering tanur. Ekstrak aseton, fraksi n-heksana, fraksi etil asetat dan residu yang telah dikeringkan dalam oven 40 o C ditimbang untuk menghitung kadar ekstraknya. Mahmudah (2003), menyatakan bahwa kadar ekstraktif dari hasil ekstraksi dihitung terhadap kering tanur serbuk dengan menggunakan rumus : Kadar Ekstraktif = (Wa/Wb) x 100% Keterangan : Wa = berat padatan ekstraktif (g) Wb = berat kering tanur serbuk (g) Uji Bioaktivitas dengan Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) Ekstrak yang diperoleh dari ekstraksi pelarut aseton, n-heksana dan etil asetat kemudian diuji bioaktivitasnya dengan menggunakan larva udang. Telur udang ditetaskan di dalam gelas piala ukuran 1 l yang diisi air laut dilengkapi dengan aerator dan lampu penerangan dan dalam 24 jam telur akan menetas menjadi larva udang kemudian dilakukan penyiapan larutan ekstrak uji. Pengujian dilakukan dengan 6 variasi konsentrasi, yaitu ppm, 500 ppm, 200 ppm, 100 ppm, 20 ppm dan 10 ppm. Untuk membuat berbagai konsentrasi ekstrak maka terlebih dulu membuat larutan induk ekstrak ppm dengan cara : sebanyak 10 mg ekstrak kering dilarutkan dalam 5 μl aseton dan tambahkan air laut hingga menjadi 5 ml larutan ekstrak untuk mendapatkan kadar ppm larutan induk. Dari larutan induk ekstrak tersebut dipipet 500, 250, 100, 50, 10, 5 μl ke dalam vial sehingga konsentrasi ekstrak menjadi 1.000, 500, 200, 100, 20, 10 μg/ml (ppm) setelah ditambahkan air laut hingga 1 ml. Sebelum dimasukkan larutan ekstrak dan air laut, terlebih dahulu dimasukkan larva udang sebanyak 10 ekor ke dalam vial, hal ini dilakukan agar konsentrasi tepat dan udang tidak mendapat konsentrasi larutan yang terlalu tinggi sebelum penambahan air laut hingga 1 ml. Setiap ekstrak dari tiap pohon diuji dan ditambah 1 kontrol, sehingga ada 3 contoh uji dan 1 kontrol. Kontrol dikerjakan tanpa penambahan ekstrak. Setiap