Kata kunci : endofit, antagonisme, isolat, mikoparasit dan antibiotik. Key words: endophytic, antagonism, isolate, mycoparasite, and antibiotics.

Transkripsi

1 23 IDENTIFIKASI JAMUR ENDOFIT DAN MEKANISME ANTAGONISMENYA TERHADAP JAMUR Fusarium oxysporum f. sp. vanillae PADA TANAMAN VANILI IDENTIFICATION OF ENDOPHYTIC FUNGI AND THEIR ANTAGONISM MECHANISM TO Fusarium oxysporum f. sp. vanillae FUNGUS ON VANILLA PLANT I Made Sudantha*) dan Abdul Latief Abadi**) *) PS. Hama dan Penyakit Tumbuhan, Fakultas Pertanian Universitas Mataram **) Jurusan Hama dan Penyakit Tumbuhan, Fakultas Pertanian Universitas Brawijaya ABSTRAK Penelitian bertujuan untuk mengidentifikasi jamur endofit pada tanaman vanili dan mengetahui mekanisme antagonismenya terhadap jamur F. oxysporum f. sp. vanillae penyebab penyakit busuk batang. Metode penelitian yang digunakan adalah eksploratif dan eksperimental. Metode eksploratif meliputi isolasi jamur endofit, pemurnian isolat dan identifikasi isolat, sedangkan metode eksperimental meliputi uji antagonisme isolat jamur endofit dengan jamur F. oxysporum f. sp. vanillae secara oposisi langsung dan uap biakan. Hasil penelitian ini menunjukan bahwa: ditemukan 16 isolat jamur endofit yaitu Trichoderma sp. ENDO-01 akar tanah (T. viride), Trichoderma sp. ENDO-02 batang (T. koningii), Trichoderma sp. ENDO-03 buah (T. longibrachiatum), Trichoderma sp. ENDO-05 batang Selebung (T. pseudokoningii), Trichoderma sp. ENDO-06 batang Celelos (T. viride), Rhizoctonia sp. ENDO-07 batang, Rhizoctonia sp. ENDO-08 batang Selebung, Cladosporium sp. ENDO-09 batang, Cladosporium sp. ENDO-10 daun, Cladosporium sp. ENDO-11 buah Selebung, Cladosporium sp. ENDO-12 akar udara Selebung, Cladosporium sp. ENDO-13 batang Celelos, Penicllium sp. ENDO-14 akar tanah (P. citrinum), Aspergillus sp. ENDO-15 akar udara (A. plavus), Aspergillus sp. ENDO-16 daun (A. plavus), Aspergillus sp. ENDO-17 akar tanah Selebung (A. niger). Semua jamur endofit bersifat antagonistik terhadap jamur F. oxysporum f. sp. vanillae. Lima isolat jamur endofit Trichoderma spp. dan dua isolat jamur endofit Rhizoctonia spp. paling mampu menghambat peran F. oxysporum f. sp. vanillae dengan cara fisik (kompetisi ruang dan mikoparasit) dan mengeluarkan antibiotik yang didifusikan ke dalam medium agar. ABSTRACT This research was aimed to identify endophytic fungi and to know their antagonism mechanism to F. oxysporum f. sp. vanillae fungus, the causal agent of vine rot disease of vanilla plant. The research used explorative and experimental methods. Isolation of endophytic fungi, isolate purification and identification were covered in explorative method, while experimental method covered examination of antagonism with F. oxysporum f. sp. vanillae fungus through direct opposition and steam of endophytic fungi culture. Results showed that 16 isolates of endophytic fungi were found namely Trichoderma sp. ENDO-01 (from soil & roots, ) (T. viride), Trichoderma sp. ENDO-02 (from vines, ) (T. koningii), Trichoderma sp. ENDO-03 (from beans, ) (T. longibrachiatum), Trichoderma sp. ENDO-05 (from vines, Selebung) (T. pseudokoningii), Trichoderma sp. ENDO-06 (from vines, Celelos) (T. viride), Rhizoctonia sp. ENDO-07 (from vines, ), Rhizoctonia sp. ENDO-08 (from vines, Selebung), Cladosporium sp. ENDO-09 (from vines, ), Cladosporium sp. ENDO-10 (from leaves, ), Cladosporium sp. ENDO-11 (from beans, Selebung), Cladosporium sp. ENDO-12 (from aerial roots, Selebung), Cladosporium sp. ENDO-13 (from vines Celelos), Penicllium sp. ENDO-14 (from soil & roots, ) (P. citrinum), Aspergillus sp. ENDO-15 (from aerial roots, ) (A. plavus), Aspergillus sp. ENDO-16 (from leaves, ) (A. plavus), Aspergillus sp. ENDO-17 (from soil & roots, Selebung) (A. niger). All of the endophytic fungi were antagonistic to F. oxysporum f. sp. vanillae fungus. Five Trichoderma spp. isolates and two Rhizoctonia spp. isolates were the most capable of inhibiting the growth of the F. oxysporum f. sp. vanillae fungus through physical mechanisms (competition for growth space and mycoparasitism) and production of antibiotics diffused to agar medium. Kata kunci : endofit, antagonisme, isolat, mikoparasit dan antibiotik. Key words: endophytic, antagonism, isolate, mycoparasite, and antibiotics. Agroteksos Volume 17 Nomor 1, April 2007

2 24 PENDAHULUAN Jamur Fusarium oxysporum f. sp. vanillae merupakan kendala utama dalam pengembangan tanaman vanili. Jamur ini menyerang semua bagian tanaman mulai dari akar, batang, daun dan buah. Infeksi oleh jamur ini kebanyakan dimulai dari stek tanaman karena jamur sudah terlanjur ada di dalam tanah dan dilanjutkan menyerang pada akar dan batang. Sedangkan serangan pada daun dan buah bersumber dari percikan air atau peralatan yang sudah terinfeksi (Semangun, 1991). Pada tanaman dewasa tingkat kematian akibat serangan jamur ini mencapai %, memperpendek umur produksi dari 10 kali panen menjadi dua kali bahkan tidak dapat berproduksi (Hadisutrisno, 2005). Selain itu, menyebabkan produktivitas tanaman vanili menjadi rendah yaitu berkisar antara 0,2 0,5 kg polong kering per pohon, padahal potensinya dapat mencapai 1,0 1,5 kg polong kering per pohon (Ruhnayat, 2004). Menurut Hadisutrisno (dalam Redaksi Trubus, 2004), 7 32 % bibit yang berasal dari stek terkontaminasi oleh jamur ini, walaupun tanaman induknya tidak menunjukkan gejala serangan. Sampai saat ini penyakit busuk batang vanili merupakan salah satu penyakit pada tanaman vanili yang sulit dikendalikan, karena jamur F. oxysporum f. sp. vanillae memiliki struktur bertahan berupa klamidospora yang dapat bertahan dalam tanah sebagai saprofit dalam waktu relatif lama sekitar tiga sampai empat tahun walau tanpa tanaman inang (Sukamto dan Tombe, 1995; Nurawan et al., 1995). Selain itu menurut Hadisutrisno (2005), sulitnya pengendalian penyakit ini disebabkan karena penularannya melalui stek yang sudah terinfeksi, sehingga penyebarannya menjadi cepat dan meluas. Ruhnayat (2004) mengatakan bahwa sampai saat ini belum ditemukan klon vanili yang tahan atau toleran terhadap penyakit ini. Pengendalian penyakit busuk batang yang paling banyak dilakukan saat ini adalah penggunaan fungusida melalui perlakuan stek dan penyemprotan pada tanaman. Namun aplikasi fungisida seringkali gagal menghadapi serangan jamur F. oxysporum yang berat (Ruhnayat, 2004). Salah satu alternatif pengendalian adalah secara hayati menggunakan jamur endofit yang bersifat antagonistik Jamur endofit adalah jamur yang hidup di dalam jaringan tanaman sehat tanpa menyebabkan gejala atau kerusakan pada tanaman inang (Petrini, 1991). Keuntungan dengan adanya jamur endofit pada tanaman inang adalah meningkatnya toleransi terhadap logam berat, meningkatkan ketahanan terhadap kekeringan, menekan serangan hama, resistensi sistemik terhadap patogen (Saikkonen et al., 1998 dalam Arnold et al., 2003). Jamur endofit menghasilkan alkoloid dan mikotoxin lainnya sehingga memungkinkan digunakan untuk meningkatkan ketahanan tanaman terhadap penyakit (Petrini, 1993). Jamur endofit menghasilkan senyawa aktif biologis secara in-vitro antara lain alkaloid, paxillin, lolitrems dan tetranone steroid (Dahlam et al., 1991; Brunner dan Petrini, 1992). Di Indonesia laporan tentang jamur endofit pada berbagai tanaman sangat terbatas. Irawati (2005) melaporkan bahwa jamur Rhizoctonia sp. ditemukan pada akar tanaman vanili sehat, namun belum dimanfaatkan untuk pengendalian penyakit. Sulistyowati et al. (2005) melaporkan bahwa jamur endofit Trichoderma asperellum yang diisolasi dari jaringan batang jeruk bertindak sebagai antagonis terhadap jamur Phytophthora spp. dan Diplodia spp. Budi et al. (2005) mengatakan bahwa jamur endofit Penicillium spp, Gliocladium spp. dan Trichoderma spp. yang ditemukan pada jaringan batang dan akar padi rawa pasang surut dapat menekan kejadian penyakit yang disebabkan oleh jamur Rhizoctonia solani. Berdasarkan uraian di atas, maka dilakukan identifikasi jamur endofit antagonistik pada tanaman vanili dan mekanisme antagonismenya terhadap F. oxysporum f. sp. vanillae dengan tujuan untuk mengetahui keragaman hayati jamur endofit pada tanaman vanili dan mekanisme antagonismenya terhadap jamur F. oxysporum f. sp. vanillae penyebab penyakit busuk batang pada tanaman vanili. METODE PENELITIAN Penelitian menggunakan dua metode, yaitu deskriptif dan eksperimental. Metode deskriptif dilaksanakan melalui teknik survei dan eksplorasi di lapang dan laboratorium, sedang metode eksperimental dilaksanakan melalui serangkaian percobaan di laboratorium. Pengambilan tanaman vanili sehat dan sakit Pengambilan sampel tanaman vanili sehat dan terinfeksi penyakit busuk batang dilakukan di Dusun Desa Pengadangan Kecamatan Pringgasela Kabupaten Lombok Timur, Dusun Selebung Desa Selebung Kecamatan Batukliang Kabupaten Lombok Tengah, dan Dusun Jurang Malang Kecamatan Narmada Kabupaten Lombok Barat. Tanaman vanili yang diduga mengandung jamur endofit Sudantha, I.M. & A.L. Abadi: Identifikasi

3 25 diambil dari tanaman vanili yang sehat di antara tanaman yang sakit, sedangkan jamur F. oxysporum f. sp. vanillae diisolasi dari tanaman vanili yang menunjukkan gejala busuk batang. Pada masing-masing lokasi dipilih 5 tanaman, kemudian bagian akar, pangkal batang dan daun dari masing-masing tanaman tersebut dimasukkan ke dalam kantong plastik, selanjutnya dibawa ke laboratorium. Isolasi, Pemurnian dan Identifikasi Jamur F. oxysporum f. sp. vanillae Jamur F. oxysporum f. sp. vanillae diisolasi dari jaringan tanaman vanili yang menunjukkan gejala busuk batang. Bagian akar atau pangkal batang tanaman sakit dipotong, dicelupkan ke dalam alkohol 70% kemudian dimasukkan ke dalam aquadest steril. Potongan akar yang sakit dikan pada medium PDA. Jamur yang kemudian dimurnikan dan diidentifikasi untuk digunakan sebagai sumber inokulum (Windels, 1993). Isolasi, Pemurnian dan Identifikasi Jamur Endofit Jamur endofit diisolasi dari akar, batang dan daun vanili yang sehat dan sakit. Metode isolasi yang digunakan serupa dengan yang digunakan oleh Petrini dan Carroll (1991 dalam Arnold, 2000). Akar, batang dan daun vanili dipotongpotong sepanjang 1,0-1,5 cm, dilakukan sterilisasi permukaannya dengan menggunakan Klorox atau sodium hypochlorite komersial 10 % selama dua menit, alkohol absolut 96 % (selama 30 detik) atau ethanol 75 % (selama dua menit) sebanyak tiga kali, dan aquades steril sebanyak tiga kali. Masing-masing bahan yang sudah disterilkan permukaannya diletakkan pada medium Potato Dekstrose Agar (PDA) pada cawan Petri dan diangkat lagi yang bertujuan untuk mengetahui apakah permukaan bahanbahan yang telah disterilkan tadi benar-benar telah steril atau sebagai kontrol (bahan untuk mengecek). Selanjutnya dipotong sepanjang 0,5 cm dan dibelah kemudian dikan pada medium PDA yang telah diberi asam laktat atau antibiotik untuk menghindari kontaminasi oleh bakteri. Jamur yang, masing-masing di pindahkan ke dalam cawan Petri yang berisi medium PDA (ph 6) dan diinkubasikan pada suhu 25 o C. Isolasi dilakukan dengan teknik transfer konidium tunggal (Burgess et al., 1988), kemudian diberi tanda. Pengamatan dilakukan terhadap kecepatan peran, warna koloni, hifa dan spora yang dihasilkan. Selanjutnya diidentifikasi menggunakan buku kunci identifikasi dan jamur-jamur endofit yang ditemukan digunakan untuk percobaan di laboratorium. Uji Antagonisme Jamur Endofit dengan Jamur F. oxysporum f. sp. vanillae Uji antagonisme dilakukan dengan cara inokulum isolat jamur F. oxysporum f. sp. vanillae dan setiap isolat jamur endofit potensial dikan pada jarak 4 cm di tengah medium PDA dalam cawan Petri yang berdiameter 9 cm. Inokulum jamur F. oxysporum berupa potongan biakan berdiameter 4 mm pada medium PDA. Pengujian dilakukan dengan tiga ulangan, kemudian biakan tersebut diinkubasikan pada suhu 25 o C. Pengamatan dilakukan terhadap peran koloni jamur F. oxysporum f. sp. vanillae dan adanya zona hambatan di antara dua koloni jamur yang beroposisi. Penghambatan peran miselium jamur F. oxysporum f. sp. vanillae oleh jamur endofit dihitung berdasarkan rumus yang diadaptasikan dari rumus yang dikemukakan oleh Fokkema (1973 dalam Skidmore, 1976) yaitu: ( r1 + r2 ) I = 100% r1 I = persentase hambatan, r 1 = jari-jari koloni jamur F. oxysporum f. sp. vanillae yang ke arah berlawanan dengan tempat jamur endofit, dan r 2 = jari-jari koloni jamur F. oxysporum f. sp. vanillae yang ke arah jamur endofit. Untuk antagonisme antara jamur F. oxysporum f. sp. vanillae dengan jamur endofit yang mengeluarkan senyawa antibiotik, selain mengukur jari-jari koloni, diukur pula jarak zona hambatan (d) yaitu zona ujung koloni endofit dengan ujung koloni jamur F. oxysporum f. sp. vanillae. Perhitungan persentase hambatan dilakukan pada data hasil pengukuran jari-jari koloni jamur F. oxysporum f. sp. vanillae pada hari ketiga setelah inokulasi jamur endofit. Data hasil pengamatan dianalisis secara statistik menggunakan Analisis Keragaman pada taraf nyata 0,05 dan apabila antar perlakuan ada yang berbeda nyata (signifikan) maka dilanjutkan dengan Uji Beda Nyata Jujur pada taraf nyata yang sama. Uji Uap Biakan Jamur Endofit dengan Jamur F. oxysporum f. sp. vanillae Pada pengujian ini, biakan jamur endofit antagonis dan biakan jamur F. oxysporum f. sp. vanillae dalam cawan Petri yang terpisah ditangkupkan satu sama lain. Hal ini bertujuan Agroteksos Volume 17 Nomor 1, April 2007

4 26 untuk mengetahui adanya uap biakan jamur endofit antagonis yang mengandung antibiotik terhadap jamur F. oxysporum f. sp. vanillae. Untuk itu dibuat biakan jamur F. oxysporum f. sp. vanillae dengan cara menanam sepotong biakan berdiameter 4 mm pada medium PDA dalam cawan Petri (sebanyak 15 ml). Dibuat juga biakan jamur endofit antagonis pada medium PDA dalam cawan Petri berdiameter 9 cm. Caranya dengan menanam sepotong biakan jamur endofit antagonis yang berdiameter 4 mm dari biakan berumur tiga hari dalam medium PDA di tengah cawan Petri yang telah berisi 15 ml medium PDA. Di atas dasar cawan Petri berisi biakan jamur endofit antagonis ini kemudian ditangkupkan biakan jamur F. oxysporum f. sp. vanillae. Pengamatan peran jamur F. oxysporum f. sp. vanillae dilakukan dengan cara mengukur diameter koloni biakan setiap 24 jam sampai biakan berumur lima hari. Data hasil pengamatan dianalisis secara statistik menggunakan Analisis Keragaman pada taraf nyata 0,05 dan apabila antar perlakuan ada yang berbeda nyata (signifikan) maka dilanjutkan dengan Uji Beda Nyata Jujur pada taraf nyata yang sama. HASIL DAN PEMBAHASAN Pada tahap awal dilakukan identifikasi isolat jamur endofit yang diperoleh sampai tingkat genus sesuai dengan deskripsi yang dikemukakan oleh Rifai (1969), Barnet dan Hunter (1998) dan Domsch et. al. (1980) berdasarkan mikroskopis (bentuk konidia, bentuk konidiofor dan fialid) sehingga diperoleh lima genus yaitu Trichoderma (ordo Moniliales dan famili Moniliaceae), Rhizoctonia (ordo Agonomycetales dan famili Stilbellaceae atau Mycelia sterilia), Cladosporium (ordo Moniliales dan famili Moniliaceae), Penicillium (Moniliales dan famili Moniliaceae), dan Aspergillus (Moniliales dan famili Moniliaceae). Selanjutnya semua isolat jamur endofit yang diperoleh diidentifikasi sampai tingkat species terutama dilakukan secara mikroskopis berdasarkan warna hifa, bentuk konidia atau phialospore, bentuk konidiofor dan bentuk phialide, sedangkan untuk memastikan perbedaan species jamur yang termasuk dalam satu genus dilakukan pula pengamatan makroskopis meliputi warna, ketebalan, pola peran dan diameter koloni, karena setiap species jamur mempunyai ciri khas dalam hal kenampakan makroskopisnya. Dari lima genus jamur endofit yang ditemukan didentifikasi menjadi 16 species seperti yang disajikan pada Tabel 1 dan Gambar 1-5. Dari lima genus jamur endofit yang ditemukan pada jaringan tanaman vanili sehat, ada satu genus yang pernah dilaporkan oleh Irawati (2005), yaitu jamur Rhizoctonia sp. ditemukan pada akar tanaman vanili sehat, namun belum dimanfaatkan untuk pengendalian penyakit, sedang jamur lain dilaporkan oleh Sulistyowati et al. (2005), yaitu jamur endofit Trichoderma asperellum ditemukan pada jaringan batang jeruk sehat. Budi et al. (2005) menemukan jamur endofit Trichoderma spp. dan Penicillium sp. pada jaringan batang dan akar padi rawa pasang surut. Mekkamol (1998 dalam Lumyong et al., 2004) menemukan jamur Cladosporium sp. pada jaringan batang pohon jati. Hasil uji antagonisme antara jamur endofit dengan jamur F. oxysporum f. sp. vanillae dengan metode oposisi langsung disajikan pada Tabel 2. Semua isolat jamur endofit dapat menghambat peran jamur F. oxysporum f. sp. vanillae, namun tingkat penghambatannya berbeda-beda. Jamur endofit yang paling mampu menghambat peran jamur F. oxysporum f. sp. vanillae adalah semua isolat jamur Trichoderma spp., yaitu Trichoderma sp. ENDO-01 akar tanah (T. viride) dengan nilai 45,222 %, Trichoderma sp. ENDO- 02 batang (T. koningii) dengan nilai 44,444 %, Trichoderma sp. ENDO-03 buah (T. longibrachiatum) dengan nilai 43,833 %, Trichoderma sp. ENDO-05 batang Selebung (T. pseudokoningii) dengan nilai 43,278 %, dan Trichoderma sp. ENDO-06 batang Celelos (T. viride) dengan nilai 43,278 %, disusul dengan jamur Rhizoctonia spp. dengan kisaran nilai 41,425 % - 41,599 %, Penicllium sp. dengan nilai 13,556 %, Aspergillus spp. dengan kisaran nilai 5,333 % 6,722 % dan Cladosporium spp. dengan kisaran nilai % - 2,667 %. Dalam uji antagonisme semua isolat jamur endofit Trichoderma spp tidak menampakan zona hambatan, bahkan dapat terus melewati koloni jamur F. oxysporum f. sp. vanillae sehingga menyebabkan peran jamur F. oxysporum f. sp. vanillae terhambat. Demikian pula jamur endofit Rhizoctonia spp. isolat ENDO-07 batang dan ENDO- 08 Selebung tidak terlihat adanya zona hambatan dan terus sampai menutupi permukaan koloni jamur F. oxysporum f. sp. vanillae. Jamur Penicllium sp. ENDO-14 akar tanah (P. citrinum), jamur Aspergillus sp. ENDO-15 akar udara (A. plavus) dalam menghambat peran jamur F. Sudantha, I.M. & A.L. Abadi: Identifikasi

5 27 oxysporum f. sp. vanillae tidak terlihat adanya zona hambatan, berbeda halnya dengan jamur endofit Cladosporium spp. menampakan adanya zona hambatan (Gambar 6). Adanya keragaman tingkat penghambatan terhadap jamur F. oxysprum f. sp. vanillae oleh jamur endofit diduga erat kaitannya dengan kemampuan dari jamur endofit berkompetisi dengan patogen terutama sebagai mikoparasit dan kecepatan. Jamur Trichoderma spp. dan Rhizoctonia spp. mempunyai peran yang cepat yaitu dalam waktu tiga hari telah menutupi cawan Petri, sedangkan jamur endofit lainnya perannya lambat sehingga tidak mampu menghambat jamur F. oxysprum f. sp. vanillae (Tabel 1). Selain itu menurut Liu dan Baker (1980 dalam Cook dan Baker, 1983) bahwa peran miselia dari Trichoderma spp. panjang dan melilit serta melakukan penetrasi ke dalam miselia dari inang jamur lain, kemudian jamur Trichoderma spp. dan memenuhi hifa host, sehingga menyebabkan jamur host lisis dan hancur. Kejadian seperti ini pernah dilaporkan oleh Chet dan Baker (1981) bahwa Trichoderma menghasilkan enzim ß (1,3) glukanase dan sellulase yang mampu mendegradasi dinding sel inang. Selain itu Abd- El Moity dan Shatla (1981) menyatakan bahwa Trichoderma merupakan mikoparasit yang dapat melakukan penetrasi ke miselium dan sclerotia jamur lain sehingga terjadi lisis dan pengkristalan. Selanjutnya menurut Papavizas (1985), mekanisme mikoparasitisme dimulai dengan pelunakan sel inang oleh enzim yang dihasilkan oleh mikoparasit sebelum kerusakan dan kematian sel inang. Hasil uji antagonisme antara jamur endofit dengan jamur F. oxysprum f. sp. vanillae dengan metode uap biakan disajikan pada Tabel 3. Peran jamur F. oxysprum f. sp. vanillae pada medium PDA terhambat secara nyata bila biakan tersebut ditangkupkan di atas biakan jamur endofit antagonis dibandingkan dengan bila biakan yang sama ditangkupkan di atas medium PDA tanpa jamur endofit antagonis (kontrol). Jamur endofit yang paling mampu menghambat peran jamur F. oxysprum f. sp. vanillae adalah jamur endofit Trichoderma spp. dan Rhizoctonia spp., hal ini diperlihatkan dengan kecilnya diameter koloni jamur F. oxysprum f. sp. vanillae (Gambar 7). Terhambatnya peran koloni jamur F. oxysprum f. sp. vanillae pada uji ini diduga bahwa semua jamur endofit mengeluarkan antibiotik atau alkaloid yang mudah menguap. Adanya perbedaan kemampuan menghambat diantara jamur endofit diduga karena jumlah antibiotik atau alkaloid yang dihasilkan oleh masing-masing jamur endofit berbeda. Jamur endofit Trichoderma spp. dan Rhizoctonia spp. mempunyai peran yang cepat yaitu dalam waktu tiga hari telah menutupi cawan Petri (Tabel 1) sehingga menghasilkan antibiotik atau alkaloid yang lebih banyak dibandingkan dengan jamur endofit lainnya. Telah diketahui bahwa jamur T. viride menghasilkan gliotoksin pertama kali dilaporkan oleh Weindling dan Emerson (1936), dan Brian (1944) (dalam Cook dan Baker, 1983). Brian dan McGowan (1945) mengatakan bahwa selain gliotoksin, T. viride juga menghasilkan viridin seperti yang dihasilkan oleh jamur Gliocladium virens (dalam Cook dan Baker, 1983). Rifai (1969) melaporkan bahwa jamur T. viride mengeluarkan bau minyak kelapa terutama pada biakan yang sudah tua. Domsch et al. (1980) mengemukakan bahwa jamur Aspergillus plavus menghasilkan aflatoksin, sedang jamur Penicillium citrinum menghasilkan citrin yang berperan sebagai fungistatik yang dapat menghambat peran jamur lain. Denis dan Webster (1971a) mengatakan bahwa beberapa isolat Trichoderma mengeluarkan substansi toksik yang didifusikan ke dalam medium berupa antibiotik yang larut dalam kloroform termasuk trikodermin dan peptida yang dapat menghambat peran jamur Fomes annosus. Selain itu menurut Denis dan Webster (1971b) antibiotik yang dikeluarkan oleh Trichoderma menyebabkan hifa F. annosus dan Rhizoctonia solani mengalami vakoulasi, koagulasi sitoplasma, kadang-kadang terjadi lisis hifa. Metabolit yang mudah menguap tersebut diidentifikasi sebagai asetaldehida yang menghambat peran R. Solani. Yetti et. al. (2001) juga melaporkan bahwa jamur T. harzianum mengeluarkan senyawa anti mikroba yang mampu menghambat peran jamur S. rolfsii. KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan Ditemukan 16 isolat jamur endofit pada jaringan tanaman vanili sehat, yaitu Trichoderma sp. ENDO-01 akar tanah (T. viride), Trichoderma sp. ENDO- 02 batang (T. koningii), Trichoderma sp. ENDO-03 buah (T. longibrachiatum), Trichoderma sp. ENDO-05 batang Selebung (T. pseudokoningii), Trichoderma sp. ENDO-06 batang Celelos (T. viride), Rhizoctonia sp. ENDO-07 batang, Rhizoctonia sp. ENDO-08 batang Selebung, Cladosporium sp. ENDO-09 batang Agroteksos Volume 17 Nomor 1, April 2007

6 28, Cladosporium sp. ENDO-10 daun, Cladosporium sp. ENDO-11 buah Selebung, Cladosporium sp. ENDO-12 akar udara Selebung, Cladosporium sp. ENDO-13 batang Celelos, Penicllium sp. ENDO-14 akar tanah (P. citrinum), Aspergillus sp. ENDO-15 akar udara (A. plavus), Aspergillus sp. ENDO-16 daun (A. plavus), Aspergillus sp. ENDO-17 akar tanah Selebung (A. niger). Semua isolat jamur endofit bersifat antagonistik terhadap jamur F. oxysporum f. sp. vanillae. Lima isolat jamur endofit Trichoderma spp. dan dua isolat jamur endofit Rhizoctonia spp. paling mampu menghambat peran F. oxysporum f. sp. vanillae dengan cara fisik (kompetisi ruang dan mikoparasit) dan mengeluarkan antibiotik yang didifusikan ke dalam medium agar. Saran Berdasarkan hasil penelitian ini maka perlu dilakukan penelitian lebih lanjut penggunaan lima isolat jamur endofit Trichoderma spp. dan dua isolat jamur endofit Rhizoctonia spp. sebagai agens pengendali hayati penyakit busuk batang vanili pada kondisi rumah kaca dan lapang. UCAPAN TERIMA KASIH Ucapan terima kasih penulis ucapkan kepada Direktur Binlitabmas Dirjen Dikti dan Ketua Lembaga Penelitian Universitas Mataram yang telah memberikan dana penelitian fundamental melalui Binlitabmas Dirjen Dikti Depdiknas, sesuai dengan Surat Perjanjian Pelaksanaan Penelitian Nomor: 028/SP3/PP/ DP2M/II/ 2006 tanggal 1 Pebruari DAFTAR PUSTAKA Abd-El Moity, H. and M. N. Shatla Biological control of white rot disease of onion (Sclerotium cepivorum) by Trichoderma harzianum. Phytopathologiche Zeitschrift 100: Arnold, A. E Fungal Endophytes of Tropical Trees: Methods and Potential for Biological Control of Fungal Pathogen of Cocoa. Department of Ecology and Evolutionary Biology, University of Arizona, Tucson USA Maret Arnold, A. E., L. C. Mejia, D. Kyllo, E. I. Rojash, Z. Maynard, N. Robbins and E. A. Herre Fungal Endophytes Limit Pathogen Damage In a Tropical Tree. PNAS vol. 100 No. 26: Published online: Barnett, H. L. And B. B. Hunter Illustrated Genera of Imperfect Fungi. Fourth Edition. APS Press, The American Phytopathological Society, St. Paul, Minnesota. 218 p. Brunner, F. and O. Petrini Taxonomic Studies of Xylaria species and Xylariaceous Endophytes by Izozyme Electrophoresis. Mycological Research 96: Budi, I. S. Mariana and Rachmadi Exploration of Tidal Swamp Rice Endophytic Fungi from South Kalimantan and Biological Control of Rhizoctonia. Burgess, L. W., C. M. Liddell and B. A. Summerell Laboratory Mannual For Fusarium Research. Second Edition. Fusarium Research Laboratory Departement of Plant Pathology and Agricultural Entomology The University of Sydney. 156 p. Chet, I. and R. Baker, Isolation and biocontrol potential of Trichoderma hamatum from soil naturally suppressive to Rhizoctonia solani. Phytopathology 71: Cook, R. J. and K. F. Baker The Nature and Practice of Biological Control of Plant Pathogens. The American Phytopathological Society. St. Paul, Minnesota. 539 hal. Dahlam, D. L., H. Eichenseer and M. R. Siegel Chemical Perspectives on Endophyte- Grass Interaction and Their Implications to Insect Herbivory. In: Microbial Mediation of Plant-Herbivore Interaction (Eds. Barbosa, P., V. A. Krichil and C. G. Jones). Jhon Wiley & Sons Inc., New York: Dennis, C. and J. Webster. 1971a. Antagonistic properties of species groups of Trichoderma. I. Production of non-volatile antibiotics. Trans. Brit. Mycol. Soc. 57 (1): Dennis, C. and J. Webster. 1971b. Antagonistic properties of species groups of Trichoderma. III. Hyphal interaction. Trans. Brit. Mycol. Soc. 57 (3): Domsch, K. H.; W. Gams and T. Anderson Compendium of Soil Fungi. Academic Press. New York. 859 p. Sudantha, I.M. & A.L. Abadi: Identifikasi

7 29 Hadisutrisno, B Budidaya Vanili Tahan Penyakit Busuk Batang. Penerbit Penebar Swadaya, Depok. 87 p. Irawati, A. F. C Characterization and Hypovirulent Test of Rhizoctonia sp. from Healthy Vanilla Roots. Paper Presented on The 1 st International Conference of Crop Security 2005, Brawijaya University, Malang, September 20 th 22 nd, p. Lumyong, S., P. Lumyong and K. D. Hyde, Endophytes. In Jones, E. B. G., M. Tantichareon and K. D. Hyde (Ed.), Thai Fungal Diversity. Published by BIOTEC Thailand and Biodiversity Research and Training Program (BRTI/TRF. Biotec) Nurawan, A., M. Tombe dan K. Matsumoto Penelitian Daya Antagonisme Isolat Bakteri yang Diisolasi Dari Rhizosfera Berbagai Jenis Tanaman Terhadap Patogen Busuk Batang Vanili. Dalam Parman et al. (Penyunting), Peran Fitopatologi dalam Pembangunan Pertanian Berkelanjutandi Kawasan Timur Indonesia. Risalah Kongres Nasional XIII dan Seminar Ilmiah Perhimpunan Fitopatologi Indonesia di Mataram Papavizas, G. C Trichoderma and Gliocladium: Biology, ecology and potential for biocontrol. Ann. Rev. Phytopathology 23: Petrini, O Fungal Endophytes of Tree Leaves. In: Microbial Ecology of Leaves (Eds. Andrews, J. H. and S. S. Hirano). Springer-Verlag, Berlin Petrini, O Endophyt of Pteridium spp.: Some Consederations for Biological Control. Sydowia 45: Redaksi Trubus, Panduan Praktis: Vanili Kiat bebas Busuk Batang. Penerbit Majalah Trubus, Jakarta. 16 hal. Rifai, M. A A Revision of The Genus Trichoderma. Mycological Papers, No. 16. Commonwealth Mycological Instittute Kew, Surrey, England. 56 hal. Ruhnayat, A Kiat Mengatasi Permasalahan Praktis Bertanam Vanili Si Emas Hijau nan Wangi. Agromedia Pustaka, Jakarta. 51 hal. Semangun, H Penyakit-Penyakit Tanaman Perkebunan di Indonesia. Gadjah Mada Press, Yogyakarta Skidmore, A. M Intraction in Relation to Biological Control of Plant Pathogens. In Dickinson, C. H. and T. F. Preece (Edt.). Microbiology of A Serial Plant Surface. Academic Press, New York Sukamto dan M. Tombe Antagonisme Trichoderma viride terhadap Fusarium oxysporum f. sp. vanillae secara In-Vitro. Dalam Parman et al. (Penyunting), Peran Fitopatologi dalam Pembangunan Pertanian Berkelanjutandi Kawasan Timur Indonesia. Risalah Kongres Nasional XIII dan Seminar Ilmiah Perhimpunan Fitopatologi Indonesia di Mataram Sulistyowati, L., N. F. Deci and A. R. Gendall Isolation and Sequencing of Chitinase and Glucanase Genes of Endophytic Trichoderma asperellum from Citrus Stem. In Program and Abstract The 1 st International Conference of Crop Security 2005, Brawijaya University, Malang, September 20 th 22 nd, Windels, C. E Fusarium. In Methods for Research on Soilborne Phytopathogenic Fungi. (Singelton, L. L., J. D. Mihail and C. M. Rush. APS Press, The American Phytopathological Society, St. Paul, Minnesota Yetti E., Mardinus, T. Habazar dan A. Bachtiar Studi kemampuan isolat-isolat jamur Trichoderma spp. yang beredar di Sumatera Barat untuk pengendalian jamur patogen Sclerotium rolfsii pada bibit cabai. Prosiding Kongres Nasional XVI dan Seminar Ilmiah PFI, Bogor Agroteksos Volume 17 Nomor 1, April 2007

8 30 Tabel 1. Hasil identifikasi makroskopis dan mikroskopis isolat jamur endofit yang ditemukan pada jaringan akar tanah, akar udara, batang, daun dan buah tanaman vanili No. Nama Isolat Jamur Endofit 1. Trichoderma ENDO-01 akar tanah 2. Trichoderma ENDO-02 batang 3. Trichoderma ENDO-03 buah Warna dan ketebalan koloni Makroskopis putih, setelah konidia menjadi hijau tua sampai hijau kebiruan. tebal dan padat. putih, setelah phialospore berubah menjadi putih kehijauan. tebal dan padat. putih, setelah bentuk konidia berubah menjadi putih kehijauan, kemudian menjadi hijau tua. Pola peran dan diameter koloni cepat dan merata, 3 hari setelah inokulasi menutupi cawan Petri. Hifa udara muncul ke permukaan merata dan cepat, setelah tiga hari inokulasi menutupi seluruh permukaan cawan Petri. merata dan cepat, setelah 3 hari diinokulasi menutupi seluruh permukaan cawan Petri Identifikasi Warna hifa, bentuk dan ukuran konidia Miselia hyaline, berdinding bersekat, bercabang, phialospore bulat, hijau dan berdiameter 3 5 µ Miselia hyaline, bercabang banyak, bersekat., phialospore elips berukuran 3 5 µ x 2 3 µ, hijau muda Miselia bersekat, hyaline, Phialospore berbentuk elips berukuran 3 6 µ x 2 3 µ hijau pucat Mikroskopis Bentuk konidiofor dan fialid Konidiofor bercabang banyak. Phialide 2 3 pada ujung percabangan, pada tiap ujung phalide phialospore Konidiofor bercabang banyak. Phialide berbentuk kerucut, pada ujungnya terdapat phialospore. Cabang utama konidiofor memanjang. Phalide seperti botol pada ujung menghasilkan phialospore Hasil Identifikasi Trichoderma viride Trichoderma. koningii Trichoderma longibrachiatum Sudantha, I.M. & A.L. Abadi: Identifikasi

9 31 4 Trichoderma ENDO-05 batang Selebung 5 Trichoderma ENDO-06 batang Celelos 6 Rhizoctonia ENDO-07 batang 7 Rhizoctonia ENDO-08 batang Selebung 8 Cladosporium ENDO-09 batang putih, setelah konidia menjadi putih kehijauan, mengeluarkan pigment ke dalam medium sehingga berubah menjadi kekuningan putih, setelah membentuk konidia berubah menjadi hijau tua sampai hijau kebiruan jamur putih, kemudian berubah menjadi coklat kehitaman. Miselia menyebar, sedikit sekali menghasilkan hifa udara. jamur menutupi permukaan medium secara merata pada hari ke lima setelah inokulasi Miselia menyebar secara merata. cepat, 3 hari setelah inokulasi menutupi seluruh cawan Petri. cepat, 3 hari setelah inokulasi telah menutupi cawan Petri Miselia bercabang, bersekat dan berdinding halus. Phialospore bulat sampai elips hijau, berdiameter 3 6 µ Miselia jamur hyaline, berdinding, bersekat, bercabang, phialospore berbentuk bulat hijau dan berdiameter 3 5 µ Hifa kasar dan panjang, hyaline sampai hitam, tidak mempunyai konidia (miselium Cabang utama konidiofor steril, setelah dewasa spora seperti tepung. Konidiofor sedikit percabangan dan phalide yang sedikit Konidiofor bercabang banyak. Phialide lebih 2 3 pada ujung percabangan, dan pada tiap ujung phalide phialospore Miselia bercabang siku-siku, membentuk sclerotia hitam di atas permukaan koloni Trichoderma pseudokoningii Trichoderma viride Rhizoctonia sp. steril). Karakteristik makroskopis dan mikroskopis sama seperti Rhizoctonia ENDO-07 batang jamur putih, dengan semakin tuanya umur koloni berubah menjadi kecoklatan Miselia menyebar, pada umur 3 hari setelah inokulasi koloni berdiameter 4,4 cm. Hifa bersekat, konidia bersel 1 2 gelap, berbentuk bulat sampai lonjong, berukukuran antara 6 10 µ x 3 5 µ Konidiofor bercabangcabang dan berkelompok. Cladosporium sp. Agroteksos Volume 17 Nomor 1, April 2007

10 32 9 Cladosporium ENDO-10 daun 10 Cladosporium ENDO-11 buah Selebung 11 Cladosporium ENDO-12 akar udara Selebung 12 Cladosporium ENDO-13 batang Celelos 13 Penicllium sp. isolat ENDO-14 akar tanah 14 Aspergillus ENDO-15 akar udara 15 Aspergillus ENDO-16 daun Karakteristik makroskopis dan mikroskopis sama seperti Cladosporium ENDO-09 batang Karakteristik makroskopis dan mikroskopis sama seperti Cladosporium ENDO-09 batang Karakteristik makroskopis dan mikroskopis sama seperti Cladosporium ENDO-09 batang Karakteristik makroskopis dan mikroskopis sama seperti Cladosporium ENDO-09 batang jamur hijau kebiruan dan mengeluarkan pigment yang didifusikan ke dalam media Jamur mempunyai koloni hijau jamur lambat sekali, setelah diinkubasi selama tiga hari berdiameter 2,2 cm. jamur lambat sekali, berdiameter 2,8 cm setelah tiga hari inokulasi hijau kebiruan dan mengeluarkan pigment. Konidia berbentuk bulat sampai lonjong, berdiameter antara 3 4 µ Konidia berbentuk bulat sampai lonjong hijau, berdiameter 3 5 µ, konidia berangkairangkai berjumlah Jamur mempunyai konidiofor berdinding halus, bercabangcabang melingkar, ada yang tunggal dan ada yang ganda. Konidiofor hyaline, pada ujungnya membesar membentuk bulatan dan terdapat kumpulan phalide seperti tabung (sterigmata). Penicllium citrinum Aspergillus plavus banyak Karakteristik makroskopis dan mikroskopis sama seperti Aspergillus ENDO-15 akar udara Sudantha, I.M. & A.L. Abadi: Identifikasi

11 33 16 Aspergillus ENDO-17 akar tanah Selebung Jamur mempunyai koloni hitam jamur lambat sekali, berdiameter 2,8 cm setelah tiga hari inokulasi Konidia berukuran besar, bentuk bulat sampai lonjong hitam berdiameter 4 6 µ, Konidiofor panjang, hyaline, pada ujungnya membesar membentuk bulatan dan terdapat kumpulan phalide Aspergillus niger Tabel 2. Rata-rata persentase hambatan peran jamur F. oxysprum f. sp. vanillae yang beroposisi dengan beberapa jamur endofit No. Perlakuan jamur F. oxysprum f. sp. vanillae yang beroposisi dengan jamur endofit Rata-rata hambatan (%) 1 Trichoderma sp. ENDO-01 akar tanah (T. viride) f 2 Trichoderma sp. ENDO-02 batang (T. koningii) f 3 Trichoderma sp. ENDO-03 buah (T. longibrachiatum) ef 4 Trichoderma sp. ENDO-05 batang Selebung (T. pseudokoningii) ef 5 Trichoderma sp. ENDO-06 batang Celelos (T. viride) ef 6 Rhizoctonia sp. ENDO-07 batang e 7 Rhizoctonia sp. ENDO-08 batang Selebung e 8 Cladosporium sp. ENDO-09 batang b 9 Cladosporium sp. ENDO-10 daun b 10 Cladosporium sp. ENDO-11 buah Selebung b 11 Cladosporium sp. ENDO-12 akar udara Selebung b 12 Cladosporium sp. ENDO-13 batang Celelos b 13 Penicllium sp. ENDO-14 akar tanah (P. citrinum) d 14 Aspergillus sp. ENDO-15 akar udara (A. plavus) c 15 Aspergillus sp. ENDO-16 daun (A. plavus) c 16 Aspergillus sp. ENDO-17 akar tanah Selebung (A. niger) c 17 Kontrol (tanpa jamur endofit) a *) Angka yang diikuti huruf yang sama berarti tidak berbeda nyata menurut uji BNJ 0,05. Agroteksos Volume 17 Nomor 1, April 2007

12 34 Tabel 3. Rata-rata diameter koloni jamur F. oxysprum f. sp. vanillae pada medium PDA dalam cawan Petri yang ditangkupkan di atas biakan beberapa jamur endofit setelah diinkubasikan delapan hari No. Perlakuan jamur F. oxysprum f. sp. vanillae yang ditangkupkan di atas biakan jamur endofit Rata-rata diameter koloni jamur F. oxysprum f. sp. vanillae (mm) 1 Trichoderma sp. ENDO-01 akar tanah (T. viride) a *) 2 Trichoderma sp. ENDO-02 batang (T. koningii) a 3 Trichoderma sp. ENDO-03 buah (T. longibrachiatum) a 4 Trichoderma sp. ENDO-05 batang Selebung (T. pseudokoningii) a 5 Trichoderma sp. ENDO-06 batang Celelos (T. viride) a 6 Rhizoctonia sp. ENDO-07 batang ab 7 Rhizoctonia sp. ENDO-08 batang Selebung a 8 Cladosporium sp. ENDO-09 batang c 9 Cladosporium sp. ENDO-10 daun bc 10 Cladosporium sp. ENDO-11 buah Selebung c 11 Cladosporium sp. ENDO-12 akar udara Selebung bc 12 Cladosporium sp. ENDO-13 batang Celelos bc 13 Penicllium sp. ENDO-14 akar tanah (P. citrinum) b 14 Aspergillus sp. ENDO-15 akar udara (A. plavus) c 15 Aspergillus sp. ENDO-16 daun (A. plavus) c 16 Aspergillus sp. ENDO-17 akar tanah Selebung (A. niger) cd 17 Kontrol (tanpa jamur endofit) d *) Angka yang diikuti huruf yang sama berarti tidak berbeda nyata menurut uji BNJ 0,05 Berikut ini beberapa contoh koloni dan morfologi jamur endofit yang ditemukan pada jaringan vanili sehat seperti yang tampak pada Gambar Morfologi (1 = phialide, 2 = phialosprore, 3 = konidiofor) Gambar 1. dan morfologi jamur endofit Trichoderma ENDO-02 batang vanili (T. koningii) 10 µ Sudantha, I.M. & A.L. Abadi: Identifikasi

13 35 1 Morfologi (1 = hifa siku) Gambar 2. dan morfologi jamur endofit Rhizoctonia ENDO-08 batang vanili Selebung (Rhizoctonia sp.) µ Morfologi ( 1 = konidia, 2 = hifa, 3 = konidiofor) Gambar 3. dan morfologi jamur endofit Cladosporium ENDO-09 batang vanili (Cladosporium sp.) Agroteksos Volume 17 Nomor 1, April 2007

14 µ 2 3 Morfologi (1 = konidia, 2 = konidiofor, 3 = hifa) Gambar 4. dan morfologi jamur endofit Penicillium ENDO-14 akar tanah vanili (P. citrinum) µ Morfologi (1 = konidia, 2 = kumpulan phialide, 3 = konidiofor) Gambar 5. dan morfologi jamur endofit Aspergillus ENDO-15 akar udara vanili (A. plavus ) F F F T T R Trichoderma sp. ENDO-01 akar tanah vanili (T. viride) dengan F. oxysporum f. sp. vanillae Trichoderma sp. ENDO-05 batang vanili Selebung (T. pseudokoningii) dengan F. oxysporum f. sp. vanillae Sudantha, I.M. & A.L. Abadi: Identifikasi Rhizoctonia sp. ENDO-07 batang vanili dengan F. oxysporum f. sp. vanillae

15 37 F F F R P A Cladosporium sp. ENDO-09 batang vanili dengan F. oxysporum f. sp. vanillae Antagonisme antara Penicillium ENDO-14 akar tanah vanili (P. citrinum) dengan F. oxysporum f. sp. vanillae Antagonisme antara Aspergillus ENDO-16 daun vanili (A. plavus) dengan F. oxysporum f. sp. vanillae Gambar 6. Antagonisme antara beberapa isolat jamur endofit Trichoderma spp. (T), Rhizoctonia spp. (R), Cladosporium spp. (C), Penicillium sp. (P) dan Aspergillus spp. (A) dengan F. oxysporum f. sp. vanillae (F) Jamur F. oxysporum f. sp. vanillae yang ditangkupkan di atas biakan Trichoderma sp. ENDO-02 batang (T. koningii) Jamur F. oxysporum f. sp. vanillae yang ditangkupkan di atas biakan Trichoderma sp. ENDO-06 batang Celelos (T. polysporum) Jamur F. oxysporum f. sp. vanillae yang ditangkupkan di atas biakan Gliocladium sp. ENDO-18 batang Jurang Malang (G. Catenulatum) Agroteksos Volume 17 Nomor 1, April 2007

16 38 Jamur F. oxysporum f. sp. vanillae yang ditangkupkan di atas biakan Rhizoctonia sp. ENDO-08 batang Selebung Jamur F. oxysporum f. sp. vanillae yang ditangkupkan di atas biakan Cladosporium sp. ENDO-10 daun Jamur F. oxysporum f. sp. vanillae yang ditangkupkan di atas medium PDA tanpa jamur endofit (kontrol) Gambar 7. Peran jamur F. oxysporum f. sp. vanillae pada medium PDA yang ditangkupkan di atas biakan jamur endofit Trichoderma sp., Rhizoctonia sp. Gliocladium sp., Cladosporium sp. dan kontrol setelah diinkubasikan tujuh hari Sudantha, I.M. & A.L. Abadi: Identifikasi