Lampiran 1.Tabel Hasil Percobaan Sampel Nomor Sampel Tes Pendugaan Tes penegasan MPN Air Minum Isi Ulang 216/B/AM 5 3 0 3 0 0 7.8 34
Lampiran 2.Flowsheet Pembuatan Media Lactose Broth Single Ditimbang seksama media Lactose BrothSebanyak 13gr. Dimasukkan ke dalam beker gelas, Dilarutkan dalam 1 liter aquadest. Dimasukkanmagnetic stirrer. Dipanaskan diatas hot plate sampai larut Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang Berisi tabung durham masing-masing 10 ml Disterilkan di dalan oven dengan tekanan 1 atm pada suhu121 0 C Selama 15 menit Setelah dingin di simpan di tempat yang bersih dan kering. Hasil 35
Pembuatan Media Lactose Broth Double Ditimbang seksama media Lactose Brot Sebanyak 26 gr. Dimasukkan ke dalam beker gelas, Dilarutkan dalam 500 ml aquadest. Dimasukkanmagnetic stirrer. Dipanaskan diatas hot plate sampai larut Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang Berisi tabung durham masing-masing 5 ml Disterilkan di dalan oven dengan tekanan atm padasuhu 121 0 C selama 15 menit. Setelah dingin di simpan di tempat yang bersih dan kering. Hasil 36
Pembuatan Media Brilliant Green Lactose Broth Single Ditimbang seksama media Brilliant Green Lactose Broth sebanyak 40 gr. Dimasukkan ke dalam beker gelas. Dilarutkan dalam 1 liter aquadest. Dimasukkanmagnetic stirrer. Dipanaskan diatas hot plate sampai larut. Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham masing-masing 10 ml. Disterilkan di dalan oven dengan tekanan 1 atm pada suhu 121 0 C selama 15 menit. Setelah dingin di simpan di tempat yang bersih dan kering. Hasil 37
Pembuatan Media Tryptone Ditimbang seksama media Tryptone sebanyak 15 gr. Dimasukkan ke dalam beker gelas. Dilarutkan dalam 1 liter aquadest. Dimasukkan magnetic stirrer. Dipanaskan diatas hot plate sampai larut. Dimasukkan ke dalam tabung reaksi masing-masing 10 ml. Disterilkan di dalan oven dengan tekanan atm pada suhu 121 0 C selama 15 menit. Setelah dingin di simpan di tempat yang bersih dan kering. Hasil 38
Uji Pendugaan Pada tes Pendugaan digunakan media Lactose broth. Tes pendugaan dilakukandengan 2 cara :single dan double Single : 13 gram Lactose Broth dalam 1000 ml aquadest Siapkan 10 buah tabung reaksi yang telah diisi dengan tabung Durham dengan posisi terbalik. 10 tabung diisi dengan masing masing 10 ml media. Double : 26 gram Lactode Broth dalam 500 ml aquadest. Siapkan 10 buah tabung reaksi yang telah diisi dengan tabungdurham dengan posisi terbalik. 5 tabung diisi dengan masing-masing 5ml. Hasil 39
Sampel Masukkan sampel yang sudah dihomogenkan secara aseptik ke dalam masing-masing tabung LB. Tabung lalu di goyang-goyang agar homogen. Inkubasikan pada inkubator pada suhu 35 0 C selama 2x24 jam. Reaksi dinyatakan positif bila terbentuk gas dalam tabung durham. Kemudian tabung-tabung yang positif dilanjutkan ke tes penegasan. Hasil 40
Sampel Tabung yang dinyatakan positif pada uji pendugaan, diinokulasikan ke dalam tabung yang berisi media Tryptone. Masing-masing diisi satu sampai dua ose yang pengerjaannya dilakukan secara aseptis. Diinkubasi pada suhu 44 0 C selama 2x24 jam Setalah 48 jam, ditambahkan larutan kovaks sebanyak 0.5 ml dan Dinyatakan positif jika terbentuk cincin merah Tabung yang positif dicocokan dengan tabel MPN Hasil 41
Lampiran 3. Permenkes Nomor 492/MENKES/PER/IV/2010 42
43
44
Lampiran 4.Tabel Perkiraan Terdekat (MPN) Tabel MPN Nilai MPN dan LK (Limit Kepercayaan) 95% untuk kombinasi 5 tabung 10 ml, 5 tabung 1 ml, dan 5 tabung 0,1 ml 5 Tabung MPN/g Batas Kepercayaan 5 Tabung MPN/g Batas Kepercayaan 10 1 0.1 Bawah Atas 10 1 0.1 Bawah Atas 0 0 0 <1.8 6.8 4 0 2 21 6.8 40 0 0 1 1.8 0.09 6.8 4 0 3 25 9.8 70 0 1 0 1.8 0.09 6.9 4 1 0 17 6 40 0 1 1 3.6 0.7 10 4 1 1 21 6.8 42 0 2 0 3.7 0.7 10 4 1 2 26 9.8 70 0 2 1 5.5 1.8 15 4 1 3 31 10 70 0 3 0 5.6 1.8 15 4 2 0 22 6.8 50 1 0 0 2 0.1 10 4 2 1 26 9.8 70 1 0 1 4 0.7 10 4 2 2 32 10 70 1 0 2 6 1.8 15 4 2 3 38 14 100 1 1 0 4 0.7 12 4 3 0 27 9.9 70 1 1 1 6.1 1.8 15 4 3 1 33 10 70 1 1 2 8.1 3.4 22 4 3 2 39 14 100 1 2 0 6.1 1.8 15 4 4 0 34 14 100 1 2 1 8.2 3.4 22 4 4 1 40 14 100 1 3 0 8.3 3.4 22 4 4 2 47 15 120 1 3 1 10 3.5 22 4 5 0 41 14 100 1 4 0 11 3.5 22 4 5 1 48 15 120 2 0 0 4.5 0.79 15 5 0 0 23 6.8 70 2 0 1 6.8 1.8 15 5 0 1 31 10 70 2 0 2 9.1 3.4 22 5 0 2 43 14 100 2 1 0 6.8 1.8 17 5 0 3 58 22 150 2 1 1 9.2 3.4 22 5 1 0 33 10 100 2 1 2 12 4.1 26 5 1 1 46 14 120 2 2 0 9.3 3.4 22 5 1 2 63 22 150 2 2 1 12 4.1 26 5 1 3 84 34 220 2 2 2 14 5.9 36 5 2 0 49 15 150 2 3 0 12 4.1 26 5 2 1 70 22 170 2 3 1 14 5.9 36 5 2 2 94 34 230 2 4 0 15 5.9 36 5 2 3 120 36 250 3 0 0 7.8 2.1 22 5 2 4 150 58 400 3 0 1 11 3.5 23 5 3 0 79 22 220 3 0 2 13 5.6 35 5 3 1 110 34 250 3 1 0 11 3.5 26 5 3 2 140 52 400 3 1 1 14 5.6 36 5 3 3 180 70 400 3 1 2 17 6 36 5 3 4 210 70 400 3 2 0 14 5.7 36 5 4 0 130 36 400 45
3 2 1 17 6.8 40 5 4 1 170 58 400 3 2 2 20 6.8 40 5 4 2 220 70 440 3 3 0 17 6.8 40 5 4 3 280 100 710 3 3 1 21 6.8 40 5 4 4 350 100 710 3 3 2 24 9.8 70 5 4 5 430 150 1,100 3 4 0 21 6.8 40 5 5 0 240 70 710 3 4 1 24 9.8 70 5 5 1 350 100 1100 3 5 0 25 9.8 70 5 5 2 540 150 1700 4 0 0 13 4.1 35 5 5 3 920 220 2600 4 0 1 17 5.9 36 5 5 4 1600 400 4600 5 5 5 >1600 700 46
Lampiran 5.Gambar Media Media Lactose Broth (LB) Media Tryptone Water Media Lactose Broth (LB) Double Strenght dan Single Strenght 47
Lampiran 6.Gambar Sampel 48
Lampiran 7.Gambar Alat Inkubator Inkubator Suhu 35ºC Inkubator Suhu 44ºC 49
Lampiran 8.Gambar Alat Sterilisasi Autoklaf Oven 50
Lampiran 9.Gambar Hasil Uji Pendugaan dan Uji Penegasan Media Lactose Broth sebelum ditambahkan sampel untuk uji pendugaan. Hasil uji penegasan sebelum ditambahkan pereaksi kovacs. Hasil uji penegasan setelah ditambahkan pereaksi kovacs 51
Lampiran 10.Gambar Pereaksi KOVAC S 52