DIAGNOSA PENYAKIT BRUCELLOSIS PADA SAP] DENGAN TEKNIK UJI PENGIKATAN KOMPLEMEN Yusuf Mukmin Balai Penelitian Veteriner, Jalan R.E. Martadinata 30, Bogor 11614 PENDAHULUAN Brucellosis adalah penyakit bakterial menular pada ternak khususnya sapi perah, sapi potong dan babi. Penyakit ini dapat menular pada manusia, sehingga dikenal sebagai salah satu penyakit zoonotik pada manusia. Penyebab utama penyakit ini adalah kuman yang berasal dari genus Brucella yang pada sapi disebabkan oleh B. abortus. Penyebaran penyakit Bucellosis pada sapi telah dilaporkan terjadi hampir di seluruh wilayah Indonesia yang setidaknya telah dilaporkan menyebar ke-26 propinsi (Sudibyo dan Ronohardjo, 1989). Luasnya penyebaran penyakit ini disebabkan karena meningkatnya mutasi dan aktivitas penyebaran ternak dari sumber bibit ternak yang terinfeksi ke berbagai wilayah di Indonesia (Setiawan dkk., 1995). Penyakit brucellosis telah menimbulkan kerugian ekonomi bagi peternak dan pembangunan subsektor peternakan secara keseluruhan yang diperkirakan mencapai Rp. 10 Milliar per tahun (Direktorat Jenderal Peternakan, 1981). Kerugian tersebut umumnya akibat gejala klinis yang dimanifestasikannya berupa (1) abortus atau keguguran, (2) kematian dini pada pedet, (3) gangguan reproduksi seperti infertilitas, (4) penurunan produksi susu, (5) penurunan daya kerja ternak akibat peradangan persendian lutut, (6) penurunan nilai ekonomi pada ternak yang terinfeksi serta (7) timbulnya sapi reaktor yang dapat menularkan penyakit tersebut kepada ternak lain yang tidak terinfeksi. Pada manusia, infeksi Brucellosis dapat terjadi akibat kontak dengan hewan yang terinfeksi atau mengkonsumsi produk ternak yang terkontaminasi oleh Brucella. Infeksi penyakit ini pada manusia (Priadi dkk., 1992) umumnya berkaitan dengan pekerjaan, seperti pekerja pada rumah potong hewan, pada peternakan sapi maupun peternak itu sendiri. Sudibyo (1995) melaporkan bahwa sebanyak 22,6% pekerja di RPH babi Jakarta telah terinfeksi oleh Brucellosis, sedangkan pada peternakan sapi perah dapat mencapai 13,6% dan 22,6% pada peternakan babi. Diagnosa penyakit umumnya dilakukan berdasarkan isolasi kuman Brucella yang dikonfirmasikan dengan pengujian bakteriologi seperti uji biokimia dan uji serologis. Uji serologis merupakan teknik diagnosa yang 198
umum digunakan untuk brucellosis yang di Indonesia umumnya menggunakan teknik Rose Bengal Plate Test (RBPT), Serum Agglutination Test (SAT), dan Complement Fixation Test (CFT). Sementara itu teknik diagnosa Enzymelinked lmmunosorbent Assay (ELISA) adalah teknik diagnosa yang paling sensitif untuk uji brucellosis. Teknik ELISA sedang dikembangkan oleh Balai Penelitian Veteriner. Bagian ini membahas hasil pemeriksaan serologis terhadap sampel serum darah sapi yang dikirim ke laboratorium brucella Balitvet dengan menggunakan uji CFT. BAHAN DAN CARA Sebanyak 495 sampel serum darah sapi diterima dari Dinas Peternakan Kabupaten Bogor yang berasal dari 3 kecamatan yang berbeda yaitu kecamatan Cijeruk, Cisarua dan kecamatan Ciampea (Cibungbulang) untuk dilakukan pemeriksaan brucellosis. Seluruh sampel disimpan di dalam freezer pada suhu -20 C sampai digunakan untuk pemeriksaan. Pencatatan seperti asal serum dan jumlahnya dilakukan terhadap semua sampel yang diterima. Uji Serologis Uji pendahuluan terhadap seluruh sampel dilakukan dengan menggunakan teknik RBPT mengikuti prosedur yang telah baku dilakukan di Australia. Uji RBPT dilakukan sebagai seleksi sampel, kemudian serum yang positif terhadap brucellosis di uji lebih lanjut dengan teknik CFT mengikuti prosedur yang di terangkan oleh Alton dkk. (1975). Cara uji pengikatan komplemen 1. Setiap lubang cawan micro yang mempunyai dasar berbentuk U (U bottom) pada baris A masing-masing diisi serum sebanyak 0,05 ml (termasuk serum kontrol negatif dan positif), kemudian diinaktivasi pada suhu 58 C selama 30 menit di dalam penangas air. 2. Setiap lubang cawan kecuali baris A di isi pengencer Barbital Buffer Saline (BBS) sebanyak 0,025 mi. 3. Serum di encerkan dalam BBS dengan cara memindahkan 0,025 ml serum dari A ke lubang cawan di baris B, begitu seterusnya sampai baris H, sehingga diperoleh enceran serum 1/2, 1/4, 1/8, 1/16 dan seterusnya. 4. Setiap lubang cawan mikro mulai baris C sampai dengan H masing-masing diisi antigen sebanyak 0,025 ml. 5. Mulai baris B sampai dengan H masing-masing lubang ditambah 0,025 ml komplemen. 1 99
Lokakarya Fungsional Non Peneli6 1997 6. Semua lubang pada baris B ditambah pengencer 0,025 ml dan digunakan sebagai kontrol terhadap adanya aktivitas antikomplementer. 7. Cawan-cawan ini kemudian diinkubasi pada suhu 37 C selama 30 menit. 8. Setelah masa inkubasi berakhir, setiap lubang cawan mulai dari baris B sampai dengan H masing-masing ditambah 0,025 ml eritrosit yang telah disensitifkan dengan hemolisin. Selanjutnya cawan-cawan ini diinkubasikan lagi pada temperatur 37 C selama 30 menit sambil dikocok dengan alat pengocok (shaker). 9. Cawan-cawan mikro diputar pada kecepatan 2000 rpm selama 5 menit atau didiamkan pada suhu 4 C semalam, lalu hasil reaksinya dibaca dengan kriteria sebagai berikut : Negatif (-) :Terjadi hemolisis sempurna, cairan dalam lubang cawan berwarna merah, tidak ada endapan eritrosit didasar cawan. +(+1) :Terjadi hemolisis hampir sempurna, cairan dalam cawan berwama merah, ada sedikit eritrosit didasar cawan. ++(+2) :Sebagian besar hemolisis, cairan berwarna merah, endapan eritrosit agak melebar dengan tepi rata. +++(+3) :Sebagian eritrosit tidak lisis, warna cairan agak merah, endapan eritrosit terlihat jelas. ++++(+4) : Tidak terjadi hemolisis, cairan dalam cawan bening, endapan eritrosit terlihat nyata dengan batas pinggir rata. Interpretasi hasil uji pengikatan komplemen Hasil reaksi ditentukan berdasarkan terjadinya 50% hemolisis pada pengenceran serum tertinggi. Serum dengan 'titer CFT 1/4 atau lebih dikategorikan positif. HASIL DAN PEMBAHASAN Berdasarkan uji pendahuluan dengan menggunakan RBPT terhadap 495 sampel serum maka diperoleh sebanyak 20,3% sampel yang positif terhadap brucellosis, yang terdiri dari 6,9% sampel asai Cijeruk ; 6,8% asal Cisarua ; dan 6,6% asal Cibungbulang. Selanjutnya sebanyak 34 sampel yang positif tersebut dianalisis dengan menggunakan teknik CFT. Dengan teknik CFT ini terlihat bahwa 34 (6,8%) dari 495 sampel serum darah sapi yang dianalisis, positif terhadap brucellosis. Secara umum, kasus brucellosis di kabupaten Bogor masih terlihat cukup tinggi. Brucellosis pada sapi perah di Indonesia, seperti yang dilaporkan oleh Sudibyo dan Ronohardjo (1989) berkisar antara 0,2% - 11,8% dengan rata-rata 1,78%. Sementara itu 20 0
reaktor tertinggi dilaporkan tercatat di DKI Jakarta yang diikuti oleh Jatim, Jateng dan Aceh masing-masing sebesar 11,8%, 8,3% ; 2,7% dan 0,2% (Setiawan dkk., 1995). Apabila dibandingkan dengan kejadian di masing-masing daerah tersebut di atas maka hasil analisis pada sampel ini terlihat masih Iebih tinggi dari Jateng dan Jatim. Risiko munculnya penyakit ini dikhawatirkan dapat terjadi sewaktu-waktu apabila tidak dilakukan pengendalian penyakit secara balk seperti vaksinasi yang teratur, terutama untuk daerah Kabupaten Bogor. Hasil pemeriksaan serologis dengan uji pengikatan komplemen pada serum sapi. Tabel 1. Hasil analisis sampel serum sapi asal kabupaten Bogor dengan menggunakan teknik CFT Daerah Asal Jumlah Negatif Positif Kecamatan : 1. Cijeruk 186 173 13 6,9 2. Cisarua 294 274 20 6,8 3. Cibungbulang 15 14 1 6,6 Jumlah : 495 461 34 6,8 KESIMPULAN Hasil analisis ini menunjukkan bahwa penyakit (prevalensi) brucellosis di Kabupaten Bogor masih cukup tinggi yaitu 6,8%. Tingkat penyakit (prevalensi) tersebut berada di atas rata-rata Indonesia sebesar 1,78%. Oleh karena itu perlu dilakukan program pengendalian dan pemberantasan penyakit secara ketat melalui vaksinasi yang teratur, pengawasan lalulintas ternak baik antar propinsi maupun intra propinsi dan pengawasan penyakit untuk daerah yang memiliki penyakit (prevalensi) yang tinggi. UCAPAN TERIMA KASIH Penulis mengucapkan terima kasih kepada Drh. Agus Sudibyo MSiL dan Dr. Endhie D. Setiawan MS atas dukungan dan saran yang telah diberikan dalam penulisan makalah ini. 2 0 1
DAFTAR BACAAN Alton, G.G., L.M. Jones and D.E. Pietz. 1975. Laboratory techniques in brucellosis 2 nd., WHO. Geneva. Direktorat Jenderal Peternakan. 1981. Penyakit Keluron menular (brucellosis). Pedoman Pengendalian Penyakit Hewan Menular. Bina Direktorat Kesehatan Hewan Ditjen. Peternakan Jakarta. Priadi, A., R.G. Hirst, M. Soeroso dan C. Koesharyono. 1992. Brucella Suis Infection as Zoonosis in Java, Penyakit Hewan 24 : 110-112. Setiawan, E.D., A. Sudibyo dan A. Priadi. 1995. Brucellosis pada ternak dan manusia. Prosiding Seminar Nasional Peternakan dan Veteriner. Jilid 1. Cisarua, 7-8 Nopember 1995. 345-354. Sudibyo, A. dan P. Ronohardjo. 1989. Brucellosis pada sapi perah. Prosiding Pertemuan Ilmiah Ruminansia. Ruminansia besar, Jilid 1 :25-31. Sudibyo, A., B.E. Patten, T.L. Spencer, Y. Mukmin dan Supartono. 1991. Study Brucellosis pada Sapi Perah di Jakarta. Laporan Penelitian tahun 1990/1991, Bogor Indonesia. Sudibyo, A. 1995. Penggunaan ELISA untuk diagnosa Brucellosis pada ternak dan manusia. Laporan Teknis Penelitian T.A. 1994/1995. Balitvet, Bogor. 2 0 2