LAPORAN PRAKTIKUM ANALISIS KLINIK B PENETAPAN KADAR KREATININ Hari / Tanggal Praktikum : Jumat / 6 MARET 2009 Golongan : IV Dosen Jaga : Riris Istighfari, M.Si., Apt. Asisten Jaga : Mba Nanda + Mba Ainun Nama / NIM : 1. FITRIA NUR HIDAYAH FA 07932 2. SYAHRI APRIYANTO FA 07940 3. MUROJIL HASAN FA 07941 4. FERAWATI P FA 07945 5. DENTALINA DESITA T.S FA 07948 6. LUCIA WIWIN INDRIYANI FA 07952 7. SHIRLEY ALEXANDER FA 08015 8. ANIS AHMAD PUAZIL FA 08226 9. AMIRATUL NABIHA FA 08227 10. NAEMAH MAT IDRIS FA 08228 11. ILANI ABU BAKAR FA 08229 12. MAZHRUL MUKHIMI MOHD FA 08230 13. AZATUL SHIMA AMDAN FA 08231 14.FAUZIAH TAIB FA 08232 15. MAMTA VESUDAVE FA 08233 16. NURUL HAZWANI FA 08234 17. NURZATUL EFFA FA 08235 18. SUHAINE MAT RAZALI FA 08236 19. SURAIYA HANI FA 08237 20.SUGENG PURWANTO FA 07944 FAKULTAS FARMASI UGM YOGYAKARTA 2009
PENETAPAN KADAR KREATININ I. TUJUAN Menetapkan kadar kreatinin dalam sampel urin dan plasma dengan metode Jaffe modifikasi tanpa deproteinisasi serta menghitung jumlah leukosit, eritrosit, dan trombosit darah. II. PRINSIP DASAR PERCOBAAN Percobaan ini sederhana, untuk penentuan kadar dengan bantuan larutan pikrat basa tanpa deproteinisasi. Reaksinya yaitu dengan mereaksikan kreatinin dengan asam pikrat membentuk kompleks kreatinin pikrat yang berwarna jingga dan memiliki serapan λ 492 nm. III.CARA PERCOBAAN Alat Bahan Pipet volume 1 ml Sampel urin Pipet ukur 2 ml Sampel plasma Pipet tetes Reagen 1 Pro pipet Reagen 2 Yellow tip Aquadest Blue tip Alkohol Tabung reaksi Reagen TURK Labu takar 100 ml Reagen HAYEM Kuvet dan Spektrofotometer Reagen Asam Oksalat 1% Mikropipet Eppendorf Syringe dan jarum Mikroskop Objek glass IV. CARA KERJA Cara I : SAMPLE Blangko Standard 50 µl( Replikasi 3 x) ( Aquadest 50 µl ) ( Baku standard 50 µl ) Tambahkan Reagen I ( 1000 µl )
Campur, kemudian inkubasi selama lima menit pada suhu kamar Tambahkan Reagen II ( 250 µl ) Baca absorbansi ( 492 nm) pada menit pertama ( A 1 ) Setelah 2 menit, baca absorbansi kembali ( A 2 ) Cara II : Menggunakan Mono Reagen SAMPLE Blangko Standard Campur dengan monoreagen ( 8mL reagen I + 2 ml reagen II ) Baca Absorbansi ( 429 nm ) Cara Kerja Pengamatan Sel-sel Darah : 1. Eritrosit 4 ml Hayem ditambahkan 20 µl darah EDTA Ditunggu 2-3 menit Hitung Jumlah eritrosit 2. Leukosit 0,5 ml TURK ditambahkan 20 µl darah EDTA Ditunggu 15 menit Hitung Jumlah Leukosit 3. Trombosit
2 ml Amonium Oksalat 1% ditambahkan 20 µl darah EDTA Ditunggu 3-5 menit Hitung Jumlah Trombosit V. Data Percobaan dan Perhitungan No Data 1. Data Urin Replikasi I Replikasi II Replikasi III Baku 0,267 0,212 0,201 0,180 Cara I Cara II A 1 A 2 A 1 A 2 0,327 0,273 0,271 0,207 0,103 0,092 0,114 0,180 0,167 0,139 0,179 0,207 2. Data Plasma Replikasi I Replikasi II Replikasi III Baku 0,058 0,065 0,053 0,045 0,069 0,086 0,071 0,048 0,113 0,121 0,117 0,045 0,123 0,129 0,125 0,048 Hasil Pengamatan Sel-sel Darah : Gb 1 : Apusan sampel darah
Gb 2 : Eritrosit Gb 3 : Leukosit Gb 4 : Trombosit
Data Urin Cara I Sampel I = 0,327-0,267 X 1 mg / 100 ml X fp ( 50 X ) = 111,11 mg / 100 ml Sampel II = 0,273-0,212 X 1 mg/!00 ml X fp ( 50 X ) = 112,96 mg/100 ml Sampel III = 0,271-0,201 X 1 mg/!00 mlx fp ( 50 X ) = 129, 63 mg/100 ml Rata-rata = 111,11 + 112,96 + 129,63 = 117,90 mg/100 ml 3 Cara II Sampel I = 0,167-0,103 X 1 mg / 100 ml X fp ( 50 X ) = 118,52 mg / 100 ml Sampel II = 0,139-0,092 X 1 mg/!00 ml X fp ( 50 X ) = 87,04 mg/100 ml Sampel III = 0,179-0,114 X 1 mg/!00 mlx fp ( 50 X ) = 120, 37 mg/100 ml
Rata-rata = 118,52 + 87,04 + 120, 37 = 108,64 mg/100 ml 3 Data Plasma Cara I : Sampel I = 0,069-0,058 X 1 mg / 100 ml = 3,67 mg / 100 ml Sampel II = 0,086-0,065 X 1 mg/!00 ml = 7,00 mg/100 ml Sampel III = 0,071-0,053 X 1 mg/!00 ml = 6,00 mg/100 ml Rata-rata = 3,67 + 7,00 + 6,00 = 5, 56 mg/100 ml 3 Cara II : Sampel I = 0,123-0,113 X 1 mg / 100 ml = 3,33 mg / 100 ml Sampel II = 0,129-0,121 X 1 mg/!00 ml = 2,67 mg/100 ml Sampel III = 0,125-0,117 X 1 mg/!00 ml = 2,67 mg/100 ml Rata-rata = 3,33 + 2,67 + 2,67 = 2,89 mg/100 ml 3
Perhitungan Untuk pengamatan sel-sel darah Jumlah Sel darah = 1 X fp X n 1. Eritrosit Volume kotak ( mm 3 ) n = 375 fp = 4 + 0,02 = 201 X 0,02 Volume Kotak = 0,04 X 5 = 0,02 mm 3 Jumlah Sel darah = 1 X 201 X 375 2. Leukosit 0,02 ( mm 3 ) = 3.768.750 sel / mm 3 n = 80 fp = 0,5 + 0,02 = 26 X 0,02 Volume Kotak = ( 1x1x1x0,1) mm 3 x 4 = 0,4 mm 3 Jumlah Sel darah = 1 X 26 X 80 3. Trombosit 0,02 ( mm 3 ) = 5.200 sel / mm 3 n = 135 fp = 2 + 0,02 = 101 X 0,02 Volume Kotak = 0,04 mm 3 Jumlah Sel darah = 1 X 101 X 135 0,04 ( mm 3 ) = 340.875 sel / mm 3
VI. Interpretasi Klinik dari Hasil Perhitungan Kadar Kreatinin sampel urin Ratio kadar kreatinin yang normal dalam urin ialah 14-26 mg / dl Hasil percobaan melebihi ratio normal ( 117,897 mg/ 100 ml dan 108,64 mg /100 ml ) Hasil percobaan yang tidak sama mungkin disebabkan factor gangguan makromolekul seperti protein, asam askorbat, dll. Kadar Kreatinin sampel darah Kadar Kreatinin normal ( menurut buku clinical chemistry ) sampel darah # pada wanita 0,37 + ( 0,018 x umur ) # pada pria 0,35 + ( 0,025 x umur ) Sehingga kadar plasma normal pada wanita usia 21 tahun ( probandus ) adalah 0,748 mg/100ml Sedangkan dari hasil perhitungan didapatkan kadar plasma sebesar 5,56 mg / 100 ml ( cara I ) 2,89 mg/100 ml ( cara II ) Sehingga, pada percobaan kadar kreatinin lebih besar daripada kadar kreatinin normal. Hal ini disebabkan karena pada percobaan dimungkinkan plasma masih terdapat makromolekul lain sepeti protein, glukosa, asam askorbat, dll. Yang nantinya mempengaruhi hasil percobaan. Pengamatan Sel-sel darah Berdasarkan jumlah sel darah yang didapatkan (probandus perempuan): 1. Eritrosit : 3.768.750 sel/mm 3 Normal = P : 3,6 4,8 jt sel/mm 3 L : 4,1 5,1 jt sel/mm 3 2. Trombosit : 340.875 sel/mm 3 Normal = 150.000 400.000 sel/mm 3 3. Leukosit : 5.200 sel/mm 3 Normal = 5.000 10.000 sel/mm 3
Hal tersebut menunjukkan bahwa probandus mempunyai jumlah sel darah normal karena semua hasil data masuk dalam range jumlah normal. VII. Kesimpulan 1. Kadar kreatinin dalam sampel urin dan plasma pada percobaan ini ditetapkan dengan metode Jaffe 2. Hasil percobaan kadar kreatinin sampel urin cara I dan II ; 117,897 mg/ 100 ml dan 108,64 mg /100 ml Kadar kreatinin melebihi normal (14-26 mg / dl) 3. Hasil percobaan kadar kreatinin sampel darah cara I dan II ; 5,56 mg / 100 ml dan 2,89 mg/100 ml Kadar kreatinin melebihi normal (0,748 mg/100ml) 4. Sedangkan untuk pengamatan jumlah sel darah jumlahnya normal baik eritrosit, leukosit ataupun trombosit. Daftar Pustaka Rai et al, 2005, Plasma Preparation From Whole Blood, Proteomics,5 : 3262 3277 Ritchterich, R and Colombo, J.P., 1981, Clinical Chemistry, John Wiley & Sons, USA