Lampiran 1. Hasil Identifikasi Tumbuhan
Lampiran 2. Gambar morfologi tumbuhan rimpang lengkuas merah
Lampiran 3. Gambar rimpang lengkuas merah, irisan rimpang lengkuas merah, dan simplisia rimpang lengkuas merah a. Rimpang Lengkuas Merah b. Irisan Rimpang Lengkuas Merah c. Simplisia Rimpang Lengkuas Merah
Lampian 4. Gambar simplisia dan ekstrak rimpang lengkuas merah a. Simplisia rimpang lengkuas merah b. Ekstrak simplisia rimpang lengkuas merah
Lampiran 5. Hasil pemeriksaan mikroskopik penampang melintang rimpang lengkuas merah 1 2 3 \ 4 5 6 7 Keterangan : 1. Epidermis 2. Butir pati 3. Sel idioblas berisi minyak atsiri 4. Sel-sel parenkim 5. Serabut sklerenkim 6. Berkas pembuluh 7. Endodermis
Lampiran 6. Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia I.1 Perhitungan kadar air simplisia rimpang lengkuas merah Kadar air simplisia = Volume air Berat Sampel 100% a. Berat sampel = 5,004g Volume air = 0,45 ml Kadar air = 0,45 5,004 b. Berat sampel = 5,007 g 100% = 8,99% Volume air = 0,45 ml Kadar air = 0,45 100% = 8,99% 5,007 c. Berat sampel = 5,010 g Volume air = 0,45 ml Kadar air = 0,45 100% = 8,98% 5,010 %Kadar air rata-rata = (8,99+8,99+8,98)% 3 = 8,99%
Lampiran 6. (Lanjutan) I.2 Perhitungan kadar air ekstrak rimpang lengkuas merah Kadar air ekstrak = Volume air Berat Sampel 100% a. Berat sampel = 5,004g Volume air = 0,15 ml Kadar air = 0,15 100% = 3,00% 5,004 b. Berat sampel = 5,006 g Volume air = 0,15 ml Kadar air = 0,15 100% = 3.00% 5,006 c. Berat sampel = 5,010 g Volume air = 0,15 ml Kadar air = 0,15 100% = 2,99% 5,010 %Kadar air rata-rata = (3.00+3.00+2,99)% 3 = 3,00%
Lampiran 6. (Lanjutan) II.1 Perhitungan kadar sari larut air simplisia rimpang lengkuas merah Kadar sari = Berat Sampel 100 20 100% a. Berat sampel = 5,004 g = 0,178 g Kadar sari = 0,178 100 5,004 20 b. Berat sampel = 5,002 g = 0,157 g 100% = 17,79% Kadar sari = 0,157 100 100% = 15,69% 5,002 20 c. Berat sampel = 5,007 g = 0,192 g Kadar sari = 0,192 100 100% = 19,17% 5,007 20 %Kadar sari rata-rata = (17,79+15,69+19,17)% 3 = 17,55%
Lampiran 6. (Lanjutan) II.2 Perhitungan kadar sari larut air ekstrak rimpang lengkuas merah Kadar sari = Berat Sampel 100 20 100% a. Berat sampel = 5,005 g = 0,683 g Kadar sari = 0,683 100 5,005 20 b. Berat sampel = 5,006 g = 0,663 g 100% = 68,23% Kadar sari = 0,663 100 100% = 66,22% 5,006 20 c. Berat sampel = 5,002 g = 0,697 g Kadar sari = 0,697 100 100% = 69,67% 5,002 20 %Kadar sari rata-rata = (68,23+66,22+69,67)% 3 = 68,04%
Lampiran 6. (Lanjutan) III.1 Perhitungan kadar sari larut etanol simplisia rimpang lengkuas merah Kadar sari = Berat Sampel 100 20 100% a. Berat sampel = 5,001 g = 0,160 g Kadar sari = 0,160 100 100% = 16,00% 5,001 20 b. Berat sampel = 5,003 g = 0,157 g Kadar sari = 0,157 100 100% = 15,69% 5,003 20 c. Berat sampel = 5,008 g = 0,146 g Kadar sari = 0,146 100 100% = 14,58% 5,008 20 %Kadar sari rata-rata = (16,00+15,69+14,58)% 3 = 15,42%
Lampiran 6. (Lanjutan) III.2 Perhitungan kadar sari larut etanol ekstrak rimpang lengkuas merah Kadar sari = Berat Sampel 100 20 100% a. Berat sampel = 5,009 g = 0,682 g Kadar sari = 0,682 100 100% = 68,08% 5,009 20 b. Berat sampel = 5,011 g = 0,603 g Kadar sari = 0,603 100 100% = 60.18% 5,011 20 c. Berat sampel = 5,008 g = 0,676 g Kadar sari = 0,676 100 100% = 67,49% 5,008 20 %Kadar sari rata-rata = (68,08+60,18+67,49)% 3 = 65,24%
Lampiran 6. (Lanjutan) IV.1 Perhitungan kadar abu total simplisia rimpang lengkuas merah Kadar abu total = a. Berat sampel = 2,006 g Berat Abu Berat Sampel 100% Berat abu = 0,077 g Kadar abu = 0,077 100% = 3,83% 2,006 b. Berat sampel = 2,002 g Berat abu = 0,065 g Kadar abu = 0,065 100% = 3,25% 2,002 c. Berat sampel = 2,008 g Berat abu = 0,072 g Kadar abu = 0,072 100% = 3,59% 2,008 %Kadar abu total rata-rata = (3,83+3,25+3,59)% 3 = 3,56%
Lampiran 6. (Lanjutan) IV.2 Perhitungan kadar abu total ekstrak rimpang lengkuas merah Kadar abu total = d. Berat sampel = 2,010 g Berat Abu Berat Sampel 100% Berat abu = 0,041 g Kadar abu = 0,041 100% = 2,04% 2,010 e. Berat sampel = 2,009 g Berat abu = 0,058 g Kadar abu = 0,058 100% = 2,89% 2,009 f. Berat sampel = 2,005g Berat abu = 0,055 g Kadar abu = 0,055 100% = 2,74% 2,005 %Kadar abu total rata-rata = (2,04+2,89+2,74)% 3 = 2,56%
Lampiran 6. (Lanjutan) V.1 Perhitungan kadar abu total tidak larut asam simplisia rimpang lengkuas merah Kadar abu tidak larut asam = Berat Abu Berat Sampel 100% a. Berat sampel = 2,006 g Berat abu = 0,064 g Kadar abu = 0,064 100% = 3,19% 2,006 b. Berat sampel = 2,002 g Berat abu = 0,058 g Kadar abu = 0,058 100% = 2,89% 2,002 c. Berat sampel = 2,008 g Berat abu = 0,055 g Kadar abu = 0,055 100% = 2,74% 2,008 %Kadar abu total tidak larut asam rata-rata = (3,19+2,89+2,74)% 3 = 2,94%
Lampiran 6. (Lanjutan) V.2 Perhitungan kadar abu total tidak larut asam ekstrak rimpang lengkuas merah Kadar abu tidak larut asam = Berat Abu Berat Sampel 100% d. Berat sampel = 2,010 g Berat abu = 0,013 g Kadar abu = 0,013 100% = 0,65% 2,010 e. Berat sampel = 2,009 g Berat abu = 0,021 g Kadar abu = 0,021 100% = 1,05% 2,009 f. Berat sampel = 2,005 g Berat abu = 0,015 g Kadar abu = 0,015 100% = 0,75% 2,005 %Kadar abu total tidak larut asam rata-rata = (0,65+1,05+0,75)% 3 = 0,81%
Lampiran 7. Bagian alur penelitian Bagan Alur Penelitian Rimpang lengkuas merah Berat basah 4891,304 g Berat kering 1214,73 g 1077,63 g serbuk simplisia Dibersihkan dari pengotor Dicuci sampai bersih, ditiriskan Uji mikroskopik Ditimbang Dikeringkan pada suhu ± 40 o C Dihaluskan Ditimbang Karakter Simplisia (± 118,79 g) Ekstraksi (958,84 g) Pemeriksaan makroskopik Pemeriksaan mikroskopik Penetapan kadar abu total Penetapan kadar abu tidak larut dalam asam Penetapan kadar air Penetapan kadar sari larut dalam air Penetapan kadar sari larut dalam etanol Pemeriksaan skrining fitokimia Maserat Dimaserasi menggunakan etanol 96 % yang telah didestilasi Ampas Diuapkan menggunakan rotary evaporator Difreeze dryer pada suhu -40 o C selama ± 24 j Ekstrak kental 146,09 g Diuji aktivitas antimutagenik Dilakukan penentuan golongan senyawa kimia Hasil + Hasil (flavonoid, tanin, saponin, glikosida dan triterpenoid)
Lampiran 8. Bagan pembuatan preparat/ apusan sumsum tulang femur mencit Mencit Dibunuh dengan cara dislokasi leher Diambil salah satu tulang femurnya, dan dipotong pada bagian pangkal dan ujungnya Pada salah satu ujung tulang femur, tusukkan jarum syringe yang telah diisi dengan 0,3 ml serum darah sapi lalu disempritkan isi sumsum tulang dan ditampung dalam mikrotube Disentrifuge dengan kecepatan 1.200 rpm selama 5 menit Dibuang bagian supernatan Endapan sel untuk dibuat apusan Diambil dengan mikropipet Ditaruh pada salah satu ujung sisi objek glas, dan dioleskan hingga menyebar menggunakan objek glas lain Dibiarkan hingga kering (kira-kira 2 menit) Difiksasi menggunakan metanol absolut selama 10 menit Diwarnai dengan Giemsa selama 30 menit Dicuci dengan air yang mengalir Dikeringkan pada suhu kamar satu malam Apusan sumsum tulang femur mencit
Lampiran 9. Alat-alat 9.1. Velocity 18R refrigerated centrifuge 9.2. Oral Sonde
Lampiran 9 (lanjutan) 9.3. Peralatan Bedah 9.4. Mikroskop
Lampiran 10. Hewan percobaan Mencit Jantan
Lampiran 11. Contoh Perhitungan Dosis 11.1 Dosis ekstrak etanol rimpang lengkuas merah Contoh perhitungan dosis untuk mencit dengan berat badan 25 g dengan dosis ekstrak rimpang lengkuas merah 200 mg/kg BB Dosis = 200 mg/kg BB = 200 mg 25g = 5 mg 1000 g Konsentrasi obat 3% = 3 g/100 ml = 3000 mg/100 ml = 30 mg/ml Jumlah obat yang di suntikkan: 5 mg = 0,16 ml 30 mg/ml
11.2 Dosis monosodium glutamat Mencit 20 g Tikus 200 g Marmot 400 g Mencit 1,0 7,0 12,25 20 g Tikus 0,14 1,0 1,74 200 g Marmot 0,08 0,57 1,0 400 g Kelinci 0,04 0,25 0,44 1,5 kg Kera 0,016 0,11 0,19 4 kg Anjing 0,008 0,06 0,10 12 kg Manusia 0,0026 0,018 0,031 70 kg Kelinci 1,5 kg 27,8 3,9 2,25 1,0 0,42 0,22 0,07 Kera 4 kg 64,1 9,2 5,2 2,4 1,0 0,52 0,16 Anjing 12 kg 124,2 17,8 10,2 4,5 1,9 1,0 0,32 Manusia 70 kg 387,9 56,0 31,5 14,2 6,1 3,1 1,0 (Donatus, 1996) Berdasarkan pengamatan, indonesia rata-rata mengonsumsi MSG sekitar 0,6 g/kg BB Maka jika BB = 70 kg = 0,6 g/ kg BB x 70 kg = 42 g/hari Dikonversikan dosis dari manusia terhadap mencit: 42 g x 0,0026 = 0,1092 g/mencit = 109,2 mg/mencit 1000/20 x 109,2 = 5460 mg/kg BB Larutan MSG 20% Untuk mencit BB = 200 mg/ml = 27 g Maka, 27/ 1000 x 5460 mg = 147,42 mg Volume yang disuntikan = 147,42/200 x 1 ml = 0,7381 ml= 0,7 ml
Lampiran 12. Tabel jumlah mikronukleus pada masing-masing apusan sumsum tulang femur mencit Kelompok Perlakuan Jumlah Mikronukleus (dalam 200 sel eritrosit polokromatik) Mencit 1 Mencit 2 Mencit 3 Mencit 4 Mencit 5 I CMC 5 74 68 80 62 76 mg/mencit II Induksi dengan 272 244 236 252 228 Monosodium Glutamat dosis 5460 mg/kg BB, Suspensi CMC 5 mg/mencit III Induksi dengan 156 140 162 152 148 Monosodium Glutamat dosis 5460 mg/kg BB, Suspensi EERLM dosis 200 mg/kg BB IV Induksi dengan 120 126 110 116 132 Monosodium Glutamat dosis 5460 mg/kg BB, Suspensi EERLM dosis 400 mg/kg BB V Induksi dengan Monosodium Glutamat dosis 5460 mg/kg BB, Suspensi EERLM dosis 800 mg/kg BB 82 91 104 79 101
Lampiran 13. Hasil Perhitungan Statistik Uji Deskriptif Jumlah Mikronukleus Descriptives Kontrol Normal Kontrol Positif 200 mg/kg BB 400 mg/kg BB 800 mg/kg BB N 5 5 5 5 5 Mean Std. Deviation Std. Error 95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Minimum Maximum Upper Bound 72.00 7.071 3.162 63.22 80.78 62 80 246.40 16.876 7.547 225.45 267.35 228 272 151.60 8.295 3.709 141.30 161.90 140 162 120.80 8.556 3.826 110.18 131.42 110 132 91.40 11.104 4.966 77.61 105.19 79 104 Total 25 136.44 63.290 12.658 110.32 162.56 62 272 Uji ANAVA SatuArah (One Way ANOVA) ANOVA Mikronukleus Sum of Squares Df Mean Square F Sig. Between Groups 93733.760 4 23433.440 195.246.000 Within Groups 2400.400 20 120.020 Total 96134.160 24
Uji Normalitas Tests of Normality Kolmogorov- Smirnov a Shapiro-Wilk Kelompok Statistic df Sig. Statistic Df Sig. Mikronukleus Kontrol Normal.211 5.200 *.965 5.844 Kontrol Positif.170 5.200 *.962 5.822 200 mg/kg BB.132 5.200 *.996 5.995 400 mg/kg BB.137 5.200 *.991 5.984 800 mg/kg BB.206 5.200 *.911 5.476 a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance.
UjiPost Hoc Tuckey Multiple Comparisons Mikronukleu Tukey HSD (I) Kelompok (J) Kelompok Mean Difference (I-J) Std. Error Sig. Kontrol Normal Kontrol Positif -174.400 * 6.929.000 200 mg/kg BB -79.600 * 6.929.000 400 mg/kg BB -48.800 * 6.929.000 800 mg/kg BB -19.400 6.929.074 Kontrol Positif Kontrol Normal 174.400 * 6.929.000 200 mg/kg BB 94.800 * 6.929.000 400 mg/kg BB 125.600 * 6.929.000 800 mg/kg BB 155.000 * 6.929.000 200 mg/kg BB Kontrol Normal 79.600 * 6.929.000 Kontrol Positif -94.800 * 6.929.000 400 mg/kg BB 30.800 * 6.929.002 800 mg/kg BB 60.200 * 6.929.000 400 mg/kg BB Kontrol Normal 48.800 * 6.929.000 Kontrol Positif -125.600 * 6.929.000 200 mg/kg BB -30.800 * 6.929.002 800 mg/kg BB 29.400 * 6.929.003 800 mg/kg BB Kontrol Normal 19.400 6.929.074 Kontrol Positif -155.000 * 6.929.000 200 mg/kg BB -60.200 * 6.929.000 400 mg/kg BB -29.400 * 6.929.003 *. The mean difference is significant at the 0.05 level.
Uji Homogeneous Tukey HSD a Kelompok Kontrol Normal Mikronukleus Subset for alpha = 0.05 N 1 2 3 4 5 72.00 800 mg/kg BB 5 91.40 400 mg/kg BB 5 120.80 200 mg/kg BB 5 151.60 Kontrol Positif 5 246.40 Sig..074 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5,000.