III. BAHAN DAN METODE

Transkripsi

1 21 III. BAHAN DAN METODE Penelitian ini dilaksanakan pada bulan April 2011-Juni Pemeliharaan ikan dilakukan di Pusat Studi Ilmu Kelautan (PSIK), Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor, Ancol-Jakarta. Pembuatan pakan uji, analisis kimia bahan, pakan, dan ikan, analisis gambaran darah, analisis RNA dan DNA, analisis kualitas air media, analisis kandungan Se pakan dan organ-organ tubuh ikan, analisis aktivitas enzim GPx dan SOD, analisis hormon kortisol, T3, dan T4, serta pengujian histopatologi dilakukan di Laboratorium Nutrisi Ikan, Laboratorium Kesehatan Ikan, Laboratorium Genetika Ikan, dan Laboratorium Lingkungan di Departemen Budi Daya Perairan FPIK IPB; Laboratorium Nutrisi dan Makanan Ternak di Fakultas Peternakan IPB; Laboratorium Fisiologi di Fakultas Kedokteran Hewan IPB; Laboratorium Pengujian di Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Pascapanen Pertanian; dan di Balai Besar Penelitian Veteriner Bogor. Penelitian didesain dalam 4 seri percobaan, yaitu: 1. Uji kecernaan Se 2. Penentuan dosis optimal dan sumber Se terbaik 3. Kinerja pertumbuhan dan daya tahan tubuh juvenil kerapu bebek yang diberi pakan dengan penambahan sodium selenite dosis berbeda 4. Uji ketahanan tubuh terhadap berbagai stressor lingkungan 3.1 Percobaan I: Uji kecernaan Se Percobaan ini bertujuan untuk membandingkan kecernaan Se dari dua sumber yang berbeda, yaitu Se anorganik (sodium selenite) dan Se organik (selenometionin). Pakan uji yang digunakan adalah pakan buatan berbentuk pellet (semi murni) dengan isoprotein dan isoenergi. Komposisi pakan uji, hasil analisis proksimat, dan kadar Se pakan disajikan pada Tabel 1. Jumlah Se yang ditambahkan pada percobaan ini adalah 0,1 mg Se/kg pakan dari kedua sumber Se tersebut.

2 22 Tabel 1. Komposisi pakan uji, hasil analisis proksimat, dan kadar Se pakan pada uji kecernaan Se Bahan (%) Sumber Se Sodium selenite Selenometionin Kasein 46,0 46,0 Gelatin 8,0 8,0 Dekstrin 15,0 15,0 Tepung kepala udang 12,0 12,0 Minyak 1 10,0 10,0 Vitamin mix 2 2,0 2,0 Mineral mix (tanpa Se) 3 4,0 4,0 CMC 3,0 3,0 Sodium selenite (mg) 0,22 - Selenometionin (mg) - 0,25 Cr 2 O 3 0,5 0,5 Hasil analisis proksimat (% bobot kering) Protein 45,47 46,37 Lemak 11,45 11,16 BETN 4 26,52 28,63 Energi (kkal GE 5 /kg) 4709, ,59 C/P 6 (kkal/g protein) 10,36 10,39 Cr 2 O 3 0,41 0,57 Se pakan (mg/kg) 0,325 0,318 1 = Terdiri atas minyak ikan, minyak cumi, dan minyak jagung 2 dan 3 = komposisi vitamin mix dan mineral mix disajikan pada lampiran 4 = BETN (Bahan Ekstrak Tanpa Nitrogen) 5 = GE (Gross Energy), Protein : 5,6 kkal/g; Lemak : 9,4 kkal/g; Karbohidrat : 4,1 kkal/g (NRC 1977) 6 = C/P (Kalori/Protein rasio) Tahap awal pelaksanaan percobaan adalah persiapan hewan uji. Hewan uji yang telah diadaptasikan dan diseleksi, dimasukkan ke dalam wadah percobaan dengan kepadatan 15 ekor/akuarium. Tahap selanjutnya adalah pembuatan pakan uji. Masing-masing pakan uji yang telah dibuat sesuai perlakuan, ditambahkan dengan indikator (Cr 2 O 3 ) sebanyak 0,5%. Pemeliharaan ikan dilakukan selama 14 hari dengan pemberian pakan dua kali sehari (pagi dan sore) secara at satiation. Untuk menghindari tercampurnya sisa pakan dan feses, dilakukan penyiponan sesaat setelah pemberian pakan. Pengambilan feses dilakukan 1 jam setelah pemberian pakan. Pengambilan feses dilakukan dengan metode penyiponan, dan feses yang terkumpul dimasukkan ke dalam botol film dan disimpan dalam lemari pendingin. Pengumpulan feses dilakukan selama pemeliharaan ikan. Feses yang telah terkumpul tersebut kemudian dikeringkan dan selanjutnya diukur kadar Cr 2 O 3 dan Se-nya. Pengukuran kadar Cr 2 O 3 dan Se juga dilakukan pada pakan uji.

3 23 Pada akhir percobaan, dilakukan pengukuran kadar Se dalam darah untuk melihat tingkat penyerapannya. Peubah yang diamati dalam percobaan ini adalah koefisien kecernaan Se. 3.2 Percobaan II: Penentuan dosis optimal dan sumber Se terbaik Hewan uji yang digunakan pada percobaan ini adalah juvenil kerapu bebek berukuran panjang rata-rata 6,39+0,41 cm dan bobot rata-rata 4,49+0,65 g. Ikan yang digunakan berasal dari Balai Besar Pengembangan Budi Daya Laut, Lampung. Ikan dipelihara di akuarium kaca berukuran 90x40x35 cm dengan sistem resirkulasi. Media percobaan adalah air laut yang telah difiltrasi, dengan salinitas ppt dan suhu o C. Pakan uji yang digunakan adalah pakan buatan berbentuk pellet (semi murni) dengan isoprotein dan isoenergi. Komposisi pakan uji, hasil analisis proksimat, dan kadar Se pakan disajikan pada Tabel 2. Tabel 2. Komposisi pakan uji, hasil analisis proksimat, dan kadar Se pakan dengan penambahan dosis dan sumber Se berbeda Bahan (%) selenite 1 selenite Penambahan Se (mg/kg) 2 selenite 4 selenite 1 2 SeMet 4 SeMet SeMet 2 Kasein 46,0 46,0 46,0 46,0 46,0 46,0 46,0 46,0 Gelatin 8,0 8,0 8,0 8,0 8,0 8,0 8,0 8,0 Dekstrin 15,0 15,0 15,0 15,0 15,0 15,0 15,0 15,0 Tepung kepala udang 12,0 12,0 12,0 12,0 12,0 12,0 12,0 12,0 Minyak 3 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 Vitamin mix 4 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 Mineral mix (tanpa 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 Se) 5 CMC 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 Sodium selenite (mg) - 1,10 2,19 4,38 8, Selenometionin (mg) ,48 4,96 9,92 Hasil analisis proksimat (% bobot kering) Protein 50,51 51,17 50,39 52,66 52,91 53,52 52,72 52,96 Lemak ,95 8,52 8,69 8,99 8,51 8,78 8,90 BETN 6 24,06 23,46 25,44 23,56 21,42 20,06 23,59 22,49 Energi (kkal GE 7 /kg) 4679, , , , , , , ,45 C/P 8 (kkal/g protein) 9,27 9,12 9,26 8,99 8,86 8,63 9,00 8,92 Se pakan (mg/kg) 0,03 0,63 1,31 1,85 4,12 1,37 2,03 3,56 1 = selenite = sodium selenite 2 = SeMet = selenometionin 3 = Terdiri atas minyak ikan, minyak cumi, dan minyak jagung 4 dan 5 = Komposisi vitamin mix dan mineral mix disajikan pada lampiran 6 = BETN (Bahan Ekstrak Tanpa Nitrogen) 7 = GE (Gross Energy), Protein : 5,6 kkal/g; Lemak : 9,4 kkal/g; Karbohidrat : 4,1 kkal/g (NRC 1977) 8 = C/P (Kalori/Protein rasio)

4 24 Percobaan didesain dengan menggunakan rancangan acak lengkap dengan mengaplikasikan 8 perlakuan dan 3 ulangan. Perlakuan yang diujikan adalah tanpa penambahan Se, 4 tingkatan dosis sodium selenite (Na 2 SeO 3 ) (0,5, 1, 2, dan 4 mg Se/kg pakan) dan 3 tingkatan dosis selenometionin (1, 2, dan 4 mg Se/kg pakan). Prosedur percobaan adalah juvenil kerapu bebek yang telah diseleksi berdasarkan keseragaman bobot, dipuasakan terlebih dahulu selama 24 jam sebelum ditebar ke wadah percobaan. Ikan yang ditebar pada masing-masing akuarium berjumlah 12 ekor. Selama pemeliharaan, ikan diberi pakan secara at satiation (sampai kenyang), dengan frekuensi 2 kali sehari (pagi dan sore). Pemeliharaan ikan dilakukan selama 40 hari. Untuk menjaga kelayakan media budi daya, dilakukan penyiponan wadah 2 kali sehari (pagi dan sore). Kualitas air dimonitor secara berkala. Hasil analisis menunjukkan bahwa kualitas air selama pemeliharaan berada dalam kondisi yang mendukung kehidupan ikan, yaitu suhu o C, salinitas ppt, oksigen terlarut 5,6-6,4 mg/l, ph 7,7-7,9, dan total amoniak nitrogen (TAN) 0,025-0,654 mg/l. Hasil pengukuran kadar Se rata-rata pada media pemeliharaan ikan adalah 0,033 mg/kg air laut. Pengamatan pengaruh pemberian pakan dengan penambahan Se berbeda pada kinerja pertumbuhan ikan dilakukan melalui penimbangan bobot tubuh ikan, penghitungan konsumsi pakan, dan pengukuran kadar protein dan lemak tubuh ikan, yang dilakukan pada akhir percobaan. Selain itu, dilakukan pula pengamatan gambaran darah ikan, yang juga dilakukan pada akhir percobaan. Ikan yang diambil darahnya terlebih dahulu dianastesi dengan MS-222. Sampel darah diambil dari caudalis dengan menggunakan syringe yang telah diberi antikoagulan. Sampel darah tersebut disimpan di dalam tabung eppendorf untuk dilakukan pengamatan di laboratorium. Sebagai data pendukung, beberapa ekor ikan dibedah dan diambil organ dalamnya untuk pengukuran beberapa parameter lain. Parameter yang diamati dalam percobaan ini meliputi tingkat kelangsungan hidup, laju pertumbuhan harian, konsumsi pakan, efisiensi pakan, retensi protein, retensi lemak, glikogen hati, glikogen otot, aktivitas enzim GPx hati, aktivitas enzim GPx plasma, aktivitas enzim superoksida dismutase (SOD) hati, aktivitas enzim SOD plasma, rasio T3/T4, rasio RNA/DNA, retensi Se, dan

5 25 gambaran darah (diferensial leukosit, total eritrosit, kadar hemoglobin, persentasi hematokrit, dan indeks fagositik). 3.3 Percobaan III: Kinerja pertumbuhan dan daya tahan tubuh juvenil kerapu bebek yang diberi pakan dengan penambahan sodium selenite dosis berbeda Hasil percobaan II menunjukkan bahwa penambahan sodium selenite dosis 0,5 mg Se/kg pakan telah menyebabkan kematian 97,22% pada akhir pemeliharaan. Demikian halnya dengan penambahan dosis 1 mg Se/kg pakan, bahkan penambahan dosis 2 dan 4 mg Se/kg pakan menyebabkan kematian 100%. Berdasarkan hasil tersebut, dilakukan pengujian untuk penambahan dosis sodium selenite di bawah 0,5 mg Se/kg pakan. Pada percobaan ini, hewan uji yang digunakan adalah juvenil kerapu bebek berukuran panjang rata-rata 5,83+0,28 cm dan bobot rata-rata 3,47+0,43 g. Ikan yang digunakan berasal dari Balai Besar Pengembangan Budi Daya Laut, Lampung. Ikan dipelihara di akuarium kaca berukuran 90x40x35 cm dengan sistem resirkulasi. Media percobaan adalah air laut yang telah difiltrasi, dengan salinitas ppt dan suhu o C. Pakan uji yang digunakan adalah pakan buatan berbentuk pellet (semi murni) dengan isoprotein dan isoenergi. Komposisi pakan uji, hasil analisis proksimat, dan kadar Se pakan disajikan pada Tabel 3.

6 26 Tabel 3. Komposisi pakan uji, hasil analisis proksimat, dan kadar Se pakan dengan penambahan Se dalam bentuk sodium selenite dosis berbeda Bahan (%) Penambahan Se (mg/kg) 0 0,025 0,05 0,1 0,2 0,4 Kasein 46,0 46,0 46,0 46,0 46,0 46,0 Gelatin 8,0 8,0 8,0 8,0 8,0 8,0 Dekstrin 15,0 15,0 15,0 15,0 15,0 15,0 Tepung kepala udang 12,0 12,0 12,0 12,0 12,0 12,0 Minyak 1 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 Vitamin mix 2 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 Mineral mix (tanpa Se) 3 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 CMC 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 Sodium selenite (mg) - 0,06 0,11 0,22 0,44 0,88 Hasil analisis proksimat (% bobot kering) Protein 50,47 50,46 48,54 47,24 50,17 49,56 Lemak 10,43 9,08 9,67 9,40 9,35 7,98 BETN 4 23,80 22,84 25,05 25,79 23,18 25,21 Energi (kkal GE 5 /kg) 4782, , , , , ,09 C/P 6 (kkal/g protein) 9,48 9,15 9,59 9,71 9,25 9,20 Se pakan (mg/kg) 0,02 0,03 0,07 0,09 0,29 0,35 1 = Terdiri atas minyak ikan, minyak cumi, dan minyak jagung 2 dan 3 = Komposisi vitamin mix dan mineral mix disajikan pada lampiran 4 = BETN (Bahan Ekstrak Tanpa Nitrogen) 5 = GE (Gross Energy), Protein : 5,6 kkal/g; Lemak : 9,4 kkal/g; Karbohidrat : 4,1 kkal/g (NRC 1977) 6 = C/P (Kalori/Protein rasio) Percobaan didesain dengan menggunakan rancangan acak lengkap dengan 6 perlakuan dan 3 ulangan. Perlakuan yang diujikan adalah penambahan Se dalam bentuk sodium selenite (Na 2 SeO 3 ) pada berbagai tingkat dosis, yaitu 0, 0,025, 0,05, 0,1, 0,2, dan 0,4 mg Se/kg pakan. Prosedur percobaan pada prinsipnya sama dengan percobaan II, hanya ada penambahan jumlah ikan menjadi 15 ekor per akuarium dan lama pemeliharaan menjadi 42 hari. Hasil analisis kualitas air selama pemeliharaan, yaitu suhu berkisar antara o C, salinitas ppt, oksigen terlarut 5,6-7,2 mg/l, ph 8,0-8,1, dan TAN 0,002-0,241 mg/l menunjukkan nilai kisaran berada dalam kondisi yang mendukung kehidupan ikan. Hasil pengukuran kadar Se rata-rata pada media pemeliharaan ikan adalah 0,033 mg/kg air laut, sedangkan kadar Se rata-rata di air tawar adalah 0,031 mg/kg. Pengamatan pengaruh pemberian pakan dengan penambahan Se berbeda pada kinerja pertumbuhan ikan dilakukan melalui penimbangan bobot tubuh ikan, penghitungan konsumsi pakan, dan pengukuran kadar protein dan lemak tubuh

7 27 ikan, yang dilakukan pada akhir percobaan. Selain itu, dilakukan pula pengamatan gambaran darah ikan, yang juga dilakukan pada akhir percobaan. Ikan yang diambil darahnya terlebih dahulu dianastesi dengan MS-222. Sampel darah diambil dari caudalis dengan menggunakan syringe yang telah diberi antikoagulan. Sampel darah tersebut disimpan di dalam tabung eppendorf untuk dilakukan pengamatan di laboratorium. Sebagai data pendukung, beberapa ekor ikan dibedah dan diambil organ dalamnya untuk pengukuran beberapa parameter lain. Uji perendaman di dalam air tawar dilakukan untuk menguji ketahanan tubuh ikan. Prosedurnya adalah juvenil kerapu bebek yang telah diberi pakan dengan penambahan sodium selenite selama 42 hari dimasukkan ke dalam air tawar tanpa aerasi selama 10 menit (Setiawati 2010). Setelah itu, ikan-ikan tersebut dikembalikan ke dalam wadah pemeliharaan. Pengambilan sampel darah untuk pengukuran glukosa darah dan kadar kortisol dilakukan sebelum ikan dimasukkan ke dalam air tawar (awal), 10 menit di dalam air tawar, serta jam pertama dan jam kedua setelah ikan dimasukkan kembali ke wadah pemeliharaan. Parameter yang diamati dalam percobaan ini meliputi tingkat kelangsungan hidup, laju pertumbuhan harian, konsumsi pakan, efisiensi pakan, retensi protein, retensi lemak, glikogen hati, glikogen otot, aktivitas enzim GPx hati, aktivitas enzim GPx plasma, rasio T3/T4, rasio RNA/DNA, retensi Se, kadar Se pada beberapa organ, kadar glukosa darah, kadar kortisol, dan gambaran darah (diferensial leukosit, total eritrosit, kadar hemoglobin, persentasi hematokrit, dan indeks fagositik). 3.4 Percobaan IV: Uji ketahanan tubuh terhadap berbagai stressor lingkungan Hasil percobaan II menunjukkan bahwa Se organik (selenometionin) memberi pengaruh yang lebih baik pada juvenil kerapu bebek dibandingkan dengan Se anorganik (sodium selenite), dan penambahan selenometionin dosis 4 mg Se/kg pakan adalah perlakuan terbaik. Oleh karena itu, sumber Se yang digunakan pada percobaan IV ini adalah selenometionin.

8 28 Hewan uji yang digunakan adalah juvenil kerapu bebek yang berasal dari Balai Besar Pengembangan Budi Daya Laut, Lampung, berukuran panjang ratarata 5,68+0,73 cm dan bobot rata-rata 3,43+0,46 g. Ikan dipelihara di akuarium kaca berukuran 90x40x35 cm dengan sistem resirkulasi. Media percobaan adalah air laut yang telah difiltrasi, dengan salinitas ppt dan suhu o C. Pakan uji yang digunakan adalah pakan buatan berbentuk pellet (semi murni) dengan isoprotein dan isoenergi. Komposisi pakan uji, hasil analisis proksimat, dan kadar Se pakan disajikan pada Tabel 4. Tabel 4. Komposisi pakan uji, hasil analisis proksimat, dan kadar Se pakan dengan penambahan Se dalam bentuk selenometionin dosis berbeda Bahan (%) Penambahan Se (mg/kg) Kasein 46,0 46,0 46,0 Gelatin 8,0 8,0 8,0 Dekstrin 15,0 15,0 15,0 Tepung kepala udang 12,0 12,0 12,0 Minyak 1 10,0 10,0 10,0 Vitamin mix 2 2,0 2,0 2,0 Mineral mix (tanpa Se) 3 4,0 4,0 4,0 CMC 3,0 3,0 3,0 Selenometionin (mg) - 9,92 39,68 Hasil analisis proksimat (% bobot kering) Protein 50,47 50,15 50,76 Lemak 10,43 9,35 9,11 BETN 4 23,80 24,34 23,94 Energi (kkal GE 5 /kg) 4782, , ,44 C/P 6 (kkal/g protein) 9,48 9,34 9,22 Se pakan (mg/kg) 0,02 3,87 13,93 1 = Terdiri atas minyak ikan, minyak cumi, dan minyak jagung 2 dan 3 = Komposisi vitamin mix dan mineral mix disajikan pada lampiran 4 = BETN (Bahan Ekstrak Tanpa Nitrogen) 5 = GE (Gross Energy), Protein : 5,6 kkal/g; Lemak : 9,4 kkal/g; Karbohidrat : 4,1 kkal/g (NRC 1977) 6 = C/P (Kalori/Protein rasio) Percobaan didesain dengan menggunakan rancangan acak lengkap dengan mengaplikasikan 3 perlakuan dan 3 ulangan. Perlakuan yang diujikan adalah penambahan Se dalam bentuk selenometionin pada berbagai tingkat dosis, yaitu tanpa penambahan Se, 4 mg Se/kg pakan (Se optimal), dan 16 mg Se/kg pakan (Se berlebih).

9 29 Pada percobaan IV ini, seperti halnya percobaan I dan II, untuk menjaga kelayakan media budi daya, dilakukan penyiponan wadah 2 kali sehari (pagi dan sore). Kualitas air juga dimonitor secara berkala. Hasil analisis menunjukkan bahwa kualitas air selama pemeliharaan berada dalam kondisi yang mendukung kehidupan ikan, yaitu suhu o C, salinitas ppt, oksigen terlarut 5,6-7,2 mg/l, ph 7,9-8,0, dan TAN 0,002-0,241 mg/l. Hasil pengukuran kadar Se ratarata pada media pemeliharaan ikan adalah 0,033 mg/kg air laut, sedangkan kadar Se rata-rata di air tawar adalah 0,031 mg/kg. Pemeliharaan hewan uji dilakukan selama 62 hari yang dibagi dalam 2 tahapan, yaitu pemeliharaan awal dan pemeliharaan lanjutan. Pemeliharaan awal dilakukan selama 42 hari dengan prosedur yang sama dengan percobaan II. Setelah itu, dilakukan uji transportasi ikan (simulasi) selama 13 jam. Prosedur pengujiannya adalah keseluruhan ikan yang akan ditransportasikan dimasukkan ke dalam kantung plastik yang berisi air laut dengan kepadatan 4 ekor/liter. Jumlah ikan pada masing-masing perlakuan adalah 60 ekor. Oksigen dimasukkan ke dalam plastik tersebut dengan perbandingan 2 bagian volume oksigen dan 1 bagian volume air. Plastik yang telah siap kemudian dimasukkan ke dalam stirofom dan dilakban seperti umumnya proses pengangkutan benih ikan. Setelah itu stirofom dimasukkan ke dalam bak yang kemudian dialiri air dengan menggunakan pompa sehingga menyebabkan stirofom menjadi bergerak (Budiyanti 2010). Setelah transportasi, hewan uji dimasukkan kembali ke wadahwadah pemeliharaan untuk diamati. Pengambilan sampel darah untuk pengukuran glukosa darah dan kadar kortisol dilakukan pada saat sebelum uji transportasi dan sesaat setelah transportasi. Pemeliharaan lanjutan selama 20 hari dilakukan setelah uji transportasi. Prosedurnya sama dengan pemeliharaan awal hanya terjadi pengurangan jumlah ikan menjadi 12 ekor per akuarium. Pada pemeliharaan lanjutan ini, ikan tetap diberi pakan sesuai perlakuan. Pada hari ke-7 dilakukan pengambilan sampel darah ikan untuk pengukuran glukosa darah dan kadar kortisol. Pada minggu kedua dilakukan uji perendaman di dalam air tawar dengan prosedur seperti pada uji ketahanan tubuh ikan pada percobaan III.

10 30 Pengamatan pengaruh pemberian pakan dengan penambahan selenometionin dosis berbeda pada kinerja pertumbuhan ikan dilakukan melalui penimbangan bobot tubuh ikan, penghitungan konsumsi pakan, dan pengukuran kadar protein dan lemak tubuh ikan, yang dilakukan pada akhir percobaan. Selain itu, dilakukan pula pengamatan gambaran darah ikan, yang juga dilakukan pada akhir percobaan. Pengambilan sampel darah ikan mengikuti prosedur yang sama dengan penelitian sebelumnya. Sebagai data pendukung, beberapa ekor ikan dibedah dan diambil organ dalamnya untuk pengukuran beberapa parameter lain. Parameter yang diamati dalam percobaan ini meliputi tingkat kelangsungan hidup, laju pertumbuhan harian, konsumsi pakan, efisiensi pakan, retensi protein, retensi lemak, aktivitas enzim GPx hati, aktivitas enzim GPx plasma, aktivitas enzim SOD hati, rasio T3/T4, rasio RNA/DNA, retensi Se, kadar Se pada beberapa organ, kadar glukosa darah, kadar kortisol, dan gambaran darah (diferensial leukosit, total eritrosit, kadar hemoglobin, persentasi hematokrit, dan indeks fagositik). 3.5 Peubah yang diukur Peubah yang diukur, metode menera, dan formula yang digunakan pada percobaan ini adalah: a. Konsumsi pakan Konsumsi pakan harian diketahui dengan menghitung selisih antara bobot pakan yang tersedia dan bobot pakan sisa. Dengan demikian konsumsi pakan selama percobaan dapat diketahui. b. Laju pertumbuhan harian Laju pertumbuhan harian dihitung berdasarkan formula NRC (1977): t Wt Wo 1 x 100 dengan: = laju pertumbuhan harian (%) Wt = bobot rata-rata individu pada waktu t (g) Wo = bobot rata-rata individu pada waktu awal (g) t = lama percobaan (hari)

11 31 c. Efisiensi pakan Efisiensi pakan dihitung berdasarkan formula NRC (1977): (Wt D) E = F Wo x 100 dengan : E = efisiensi pakan (%) Wt = bobot total ikan pada waktu t (g) Wo = bobot total ikan pada awal percobaan (g) D = bobot total ikan yang mati selama percobaan (g) F = bobot total pakan yang dikonsumsi (g) d. Tingkat kelangsungan hidup Tingkat kelangsungan hidup dihitung berdasarkan formula berikut : Nt SR = No x 100 (Ricker 1979) dengan : SR = kelangsungan hidup (%) Nt = jumlah ikan pada waktu t (ekor) No = jumlah ikan pada awal percobaan (ekor) e. Retensi protein Retensi protein menunjukkan besarnya protein yang tersimpan dalam tubuh ikan dari protein yang dikonsumsi. Formula yang digunakan adalah: F I RP = P x 100 (Watanabe 1988) dengan : RP = retensi protein (%) F = jumlah protein tubuh pada akhir percobaan (g) I = jumlah protein tubuh pada awal percobaan (g) P = jumlah protein yang dikonsumsi (g) f. Retensi lemak Retensi lemak menunjukkan besarnya lemak yang tersimpan dalam tubuh ikan dari lemak yang dikonsumsi. Formula yang digunakan adalah: F I RL = L x 100 (Watanabe 1988) dengan : RL = retensi lemak (%) F = jumlah lemak tubuh pada akhir percobaan (g) I = jumlah lemak tubuh pada awal percobaan (g) L = jumlah lemak yang dikonsumsi (g)

12 32 g. Retensi Se Retensi Se dihitung mengikuti formula yang dikemukakan oleh Rider et al. (2009): dengan: RSe = retensi selenium (%) Se akhir = jumlah Se tubuh pada akhir percobaan (mg) Se awal = jumlah Se tubuh pada awal percobaan (mg) Se konsumsi = jumlah total Se yang dikonsumsi (mg) h. Kecernaan Se Koefisien kecernaan nutrien (Se) pakan diukur dengan rumus yang dikemukakan oleh Takeuchi (1988): Nda = 100 (100 x x ) dengan: Nda = koefisien kecernaan Se (%) IP = kadar Cr 2 O 3 dalam pakan (%) IF = kadar Cr 2 O 3 dalam feses (%) NP = kadar Se dalam pakan (%) NF = kadar Se dalam feses (%) i. Aktivitas enzim GPx dan SOD Aktivitas enzim GPx hati dan plasma, serta aktivitas enzim SOD dilakukan dengan metode pembacaan pada spektrofotometer (Lampiran 8 dan 9). j. Konsentrasi hormon T3, T4, dan kortisol Pengukuran konsentrasi hormon T3, T4, dan kortisol dilakukan dengan metode RIA (radioimmunoassay) (Lampiran 10 dan 11).

13 33 k. Gambaran darah Pengukuran total eritrosit dan diferensial leukosit dilakukan mengikuti prosedur Blaxhall dan Daisley (1973); kadar hemoglobin diukur menurut metode Sahli dengan sahlinometer (Wedemeyer & Yasutake 1977); kadar hematokrit dan indeks fagositik diukur dengan metode yang dikemukakan oleh Anderson dan Siwicki (1993) (Lampiran 6); sedangkan kadar glukosa darah diukur melalui pembacaan pada spektrofotometer (Lampiran 7). 3.6 Analisis data Percobaan I Data koefisien kecernaan Se dianalisis dengan menggunakan analisis ragam. Jika terdapat pengaruh yang berbeda nyata pada taraf 5%, maka dilanjutkan dengan uji beda nyata terkecil. Data kadar Se di dalam darah dianalisis secara deskriptif. Pengolahan data dilakukan dengan bantuan program Microsoft Excel 2007 dan Minitab versi Percobaan II Data tingkat kelangsungan hidup, laju pertumbuhan harian, konsumsi pakan, efisiensi pakan, retensi protein, retensi lemak, glikogen hati, glikogen otot, aktivitas enzim GPx hati, aktivitas enzim superoksida dismutase (SOD) hati, rasio RNA/DNA, retensi Se dan gambaran darah (diferensial leukosit, total eritrosit, kadar hemoglobin, persentasi hematokrit, dan indeks fagositik) dianalisis dengan menggunakan analisis ragam. Jika terdapat pengaruh yang berbeda nyata pada taraf 5%, maka dilanjutkan dengan uji beda nyata terkecil. Data aktivitas enzim GPx plasma, aktivitas enzim SOD plasma, dan rasio T3/T4 dianalisis secara deskriptif. Pengolahan data dilakukan dengan bantuan program Microsoft Excel 2007 dan Minitab versi Percobaan III Data tingkat kelangsungan hidup, laju pertumbuhan harian, konsumsi pakan, efisiensi pakan, retensi protein, retensi lemak, aktivitas enzim GPx hati, aktivitas enzim GPx plasma, rasio T3/T4, rasio RNA/DNA, retensi Se, dan

14 34 gambaran darah (diferensial leukosit, total eritrosit, kadar hemoglobin, persentasi hematokrit, dan indeks fagositik) dianalisis dengan menggunakan analisis ragam. Jika terdapat pengaruh yang berbeda nyata pada taraf 5%, maka dilanjutkan dengan uji beda nyata terkecil. Data glikogen hati, glikogen otot, kadar Se di beberapa organ, kadar glukosa darah, dan kadar kortisol dianalisis secara deskriptif. Pengolahan data dilakukan dengan bantuan program Microsoft Excel 2007 dan Minitab versi Percobaan IV Data tingkat kelangsungan hidup, laju pertumbuhan harian, konsumsi pakan, efisiensi pakan, retensi protein, retensi lemak, aktivitas enzim GPx hati, aktivitas enzim GPx plasma, aktivitas enzim SOD hati, retensi Se, dan gambaran darah (diferensial leukosit, total eritrosit, kadar hemoglobin, persentasi hematokrit, dan indeks fagositik) dianalisis dengan menggunakan analisis ragam. Jika terdapat pengaruh yang berbeda nyata pada taraf 5%, maka dilanjutkan dengan uji beda nyata terkecil. Data rasio T3/T4, rasio RNA/DNA, kadar Se di beberapa organ, kadar glukosa darah, dan kadar kortisol dianalisis secara deskriptif. Pengolahan data dilakukan dengan bantuan program Microsoft Excel 2007 dan Minitab versi 14.