METODOLOGI Waktu dan Tempat Ikan Uji Persiapan Bahan Baku Biji Karet Komposisi TBBK Tidak Diolah TBBK Diolah

Transkripsi

1 METODOLOGI Waktu dan Tempat Penelitian ini dilaksanakan bulan Oktober sampai Desember 2010 yang bertempat di Laboratorium Lapangan dan Teaching Farm Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Institut Pertanian Bogor. Analisis kimia, histologi, gambaran darah dan kualitas air dilakukan di Laboratorium Nutrisi Ternak Perah Fakultas Peternakan, Laboratorium Nutrisi Ikan, Laboratorium Kesehatan Ikan, Laboratorium Kualitas Air Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Institut Pertanian Bogor dan Laboratorium Balai Besar Penelitian Veteriner Bogor. Ikan Uji Ikan uji yang digunakan adalah benih ikan mas Cyprinus carpio L. ukuran 3-5 cm sebanyak 600 ekor (lebih banyak dari jumlah yang diperlukan) berukuran 2,19 ± 0,005 g. Ikan ini merupakan hasil 1 kali pemijahan dari 1 induk ikan mas Majalaya di Laboratorium Lapangan dan Teaching Farm Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Institut Pertanian Bogor. Benih ikan uji ditampung dalam 3 buah bak bervolume 200 liter air sebagai proses aklimatisasi (lingkungan dan pakan) selama 14 hari. Persiapan Bahan Baku Biji Karet Bahan baku pakan uji ini berupa 200 kg biji karet yang berasal dari perkebunan karet alam di Desa Pondok Meja, Kecamatan Mestong, Kabupaten Muara Jambi, Propinsi Jambi. Tabel 7. Komposisi kimia TBBK tidak diolah dan TBBK diolah Komposisi TBBK Tidak Diolah TBBK Diolah Protein (%) 21,87 33,82 Lemak (%) 49,30 15,07 Serat Kasar (%) 3,19 15,03 Abu (%) 3,14 5,06 Air (%) 1,50 11,00 BETN (%) 21,00 20,02 Sianida (mg/kg) Sumber: Data primer yang diolah (2010)

2 21 Setelah dikeringkan, buah karet dipecahkan dan diambil bijinya selanjutnya diolah menjadi tepung. Proses pengurangan lemak TBBK hingga 15% menggunakan hidrolic press kemudian diekstrak dengan perendaman dalam larutan heksan selama 1 hari 1 malam. Setelah diekstrak, TBBK direndam dalam air garam dengan dosis 10 g/100 ml selama 12 jam dan dilanjutkan dengan perebusan terbuka selama 30 menit untuk mengurangi kandungan sianida. Pakan Uji Dalam penelitian ini terdapat 2 macam pakan uji, yaitu pakan untuk uji kecernaan (Tabel 8) dan pakan untuk uji kinerja pertumbuhan (Tabel 9). Tabel 8. Pakan uji kecernaan (%) Bahan Baku Pakan Rujukan TBBK Diolah TBBK Tidak Diolah Pakan Komersial Pengikat (CMC) Cr 2 O 3 Biji Karet 94,50 5,00 0, ,50 5,00 0,50 30,00 64,50 5,00 0,50 30,00 Total Tabel 9. Pakan uji kinerja pertumbuhan (%) Bahan Baku Bungkil biji karet Bungkil kedelai Bahan nabati lainnya Premiks Perlakuan P 1 P 2 P 3 P ,40 62,09 64,01 28,45 10,20 3,00 28,00 67,25 44,10 30,61 3,69 4,30 4,30 4,30 4,30 Total Sianida 0 0,45 0,67 1,16 Analisis Proksimat Kadar air Protein Lemak Abu Serat kasar BETN 4,72 31,82 8,12 7,75 6,58 41,01 5,00 30,84 10,82 7,30 8,63 37,41 5,11 30,80 11,86 7,43 9,55 35,25 3,37 29,58 31,90 6,34 4,37 24,44 Total Keterangan: Energi protein, lemak dan karbohidrat masing-masing 5,6; 9,4 dan 4,1 kkal.

3 22 Pakan untuk uji kecernaan menggunakan pakan rujukan dengan kadar protein 28-30%, TBBK diolah dan TBBK tidak diolah, Cr 2 O 3 sebagai indikator dan CMC sebagai pengikat. Pakan kemudian dianalisis kandungan protein, fosfor, kalsium dan Cr 2 O 3. Pakan untuk uji kinerja pertumbuhan menggunakan bahan baku berupa TBBK diolah dengan berbagai level dan TBBK tidak diolah (Lampiran 1). Sebelum pakan dibuat, bahan baku pakan akan dianalisis proksimat kemudian setelah pakan selesai dibuat dilakukan kembali analisis proksimat serta asam aminonya menggunakan metode AOAC (1984) (Lampiran 2). Rancangan Percobaan Penelitian tahap pertama berupa uji kecernaan menggunakan 3 perlakuan, yaitu: pakan rujukan, TBBK yang diolah dan TBBK yang tidak diolah. Penelitian tahap kedua berupa uji kinerja pertumbuhan menggunakan 4 perlakuan dan 3 ulangan dengan Rancangan Acak Lengkap, sebagai berikut: Perlakuan P 1 : Tidak mendapat sumbangan protein dari TBBK. Perlakuan P 2 : 50% protein dari TBBK diolah. Perlakuan P 3 : 75% protein dari TBBK diolah. Perlakuan P 4 : 50% protein dari TBBK tidak diolah. Pemeliharaan Ikan Pemeliharaan ikan pada uji kecernaan menggunakan 9 buah akuarium berukuran 50x40x30 cm dengan volume air sebanyak 40 l/akuarium dan padat penebaran sebanyak 10 ekor/akuarium. Setiap akuarium dilengkapi dengan aerator, sistem resirkulasi dan diberi penutup plastik agar ikan tidak mudah stres terhadap lingkungan sekitar. Akuarium diletakkan dalam posisi miring (menanjak bagian atasnya yang bertujuan agar feses ikan terkumpul pada bagian dasar akuarium). Pakan diberikan secara at satiation (sekenyang-kenyangnya) dengan frekuensi sebanyak 3 kali sehari, yaitu pada pukul 07.00, dan WIB selama 14 hari masa pemeliharaan. Pada hari ke-3, feses ikan diambil menit setelah pemberian pakan. Feses tersebut disipon dari bagian dasar akuarium kemudian feses tersebut

4 23 ditampung dalam botol film yang selanjutnya dilakukan analisis kandungan Cr 2 O 3, protein, fosfor dan kalsium. Pemeliharaan ikan pada uji kinerja pertumbuhan menggunakan 18 buah akuarium berukuran 50x40x30 cm dengan volume air sebanyak 40 l/akuarium dan padat penebaran sebanyak 20 ekor/akuarium. Pakan diberikan secara at satiation (sekenyang-kenyangnya) dengan frekuensi sebanyak 3 kali sehari, yaitu pada pukul 07.00, dan WIB selama 40 hari masa pemeliharaan. Jumlah pakan yang diberikan dihitung dengan cara menimbang pakan pada pagi hari dan sisa pakan pada sore hari. Ikan yang mati hingga hari kedua diganti sesuai dengan bobotnya dan setelah itu ikan yang mati ditimbang bobotnya. Pada awal dan akhir pemeliharaan, dilakukan analisis proksimat tubuh ikan uji sedangkan untuk menjaga kualitas air agar tetap baik, feses ikan disipon pada pagi dan sore hari. Selama masa pemeliharaan, nilai kualitas air yang meliputi suhu air berkisar antara o C, ph 7, DO 4,75-4,95 mg/l dan ammonia-n (NH 3 -N) 0,93-1,34 mg/l. Pada akhir masa pemeliharaan, ikan dipuasakan selama 1 hari kemudian ditimbang bobotnya dan beberapa ekor ikan dari setiap perlakuan diambil untuk analisis kadar air, lemak, glikogen hati dan nilai HSI, histologi serta gambaran darah. Parameter yang Dievaluasi Kecernaan Total, Protein, Fosfor dan Kalsium Kecernaan total/protein, fosfor (P) dan kalsium (Ca) dihitung menurut Law et al. (1985), yaitu: Kecernaan total/protein/p/ca (%) = 1 - IP NF x x 100 IF NP Ket: IP = Cr 2 O 3 dalam pakan (%) IF = Cr 2 O 3 dalam feses (%) NP = Protein, fosfor dan kalsium dalam pakan (%) NF = Protein, fosfor dan kalsium dalam feses (%) Tingkat Kelangsungan Hidup Tingkat kelangsungan hidup dihitung menurut Zonneveld et al. (1991), yaitu:

5 24 TKH (%) = total ikan akhir (ekor) total ikan awal (ekor) Jumlah Konsumsi Pakan Jumlah konsumsi pakan dihitung dengan mengurangi total jumlah pakan yang diberikan pada akhir penelitian dengan awal penelitian. Efisiensi Pakan Efisiensi pakan (EP) dihitung menurut Takeuchi (1988), yaitu: EP (%) = [(W t + W d ) W 0 ] F Ket : W t = bobot total ikan pada akhir pemeliharaan (g) W 0 = bobot total ikan pada awal pemeliharaan (g) W d = bobot total ikan yang mati selama pemeliharaan (g) F = jumlah pakan yang diberikan selama percobaan (g) Pertumbuhan Relatif Pertumbuhan relatif (PR) dihitung menurut Takeuchi (1988), yaitu: W t - W 0 PR (%) = W 0 Ket : W t = Biomassa ikan akhir pemeliharaan (g) W 0 = Biomassa ikan awal pemeliharaan (g) Retensi Protein (RP) Retensi protein (RP) dihitung menurut Takeuchi (1988), yaitu: RP (%) = (F - I) P Ket : F = jumlah protein tubuh pada akhir pemeliharaan (g) I = jumlah protein tubuh pada awal pemeliharaan (g) P = jumlah protein yang dikonsumsi ikan (g) Retensi Lemak (RL) Retensi lemak (RL) dihitung menurut Takeuchi (1988), yaitu:

6 25 RL (%) = (F - I) L Ket : F = jumlah lemak tubuh pada akhir pemeliharaan (g) I = jumlah lemak tubuh pada awal pemeliharaan (g) L = jumlah lemak yang dikonsumsi ikan (g) Analisis Kadar Air, Lemak, Glikogen Hati dan Nilai Hepatosomatik Indeks (HSI) (Garling dan Wilson 1977) Analisis ini dilakukan untuk membandingkan keadaan organ hati sebelum dan sesudah diberi pakan TBBK, yang meliputi kadar air, lemak, glikogen hati serta nilai hepatosomatik indeks (HSI). HSI = Bobot organ hati (g) * Bobot tubuh ikan uji (g) * Keterangan: * dalam bobot basah Gambaran Darah Pengamatan gambaran darah dilakukan untuk melihat pengaruh pemberian TBBK dalam pakan yang menimbulkan perubahan komposisi darah pada ikan uji. Pengambilan darah dilakukan pada awal dan akhir pemeliharaan. Pengamatan gambaran darah yang dilakukan meliputi sel darah merah (SDM), dan sel darah putih (SDP), hemoglobin (Hb) dan hematokrit (Ht). SDM = Jumlah sel terhitung = Jumlah sel terhitung =. sel/mm 3 x x 1 x faktor volume kotak besar pengenceran 1 0,05 x 0,05 x 0,1 x 200 mm 3 SDP = Jumlah sel terhitung = Jumlah sel terhitung =. sel/mm 3 x 1 faktor x volume kotak besar pengenceran x 1 0,2 x 0,2 x 0,1 mm 3 x 10

7 26 Pengukuran kadar hemoglobin darah dengan menggunakan metode Sahli, yang didasarkan atas terbentuknya asam hematin (Hb darah dirombak menjadi asam hematin oleh asam khlorida 0,1 N) dengan satuan pengukuran dalam g %. Tabung Sahli diisi dengan larutan HCl 0,1 N sampai batas tera 2. Darah dihisap dengan pipet Sahli sampai skala 20 mm 3. Darah kemudian dipindahkan ke dalam tabung sahli yang telah diisi dengan larutan HCl 0,1 N. Kedua bahan diaduk dan didiamkan sebentar agar terbentuk asam hematin (berwarna kuning kecoklatan) kemudian tambahkan aquades hingga warna sampel sama dengan warna standar pada tabung Sahli. Pembacaan dilakukan dengan melihat permukaan cairan dan warna yang dicocokkan dengan warna pada skala tabung Sahli yang dilihat pada lajur g % yang berarti banyaknya hemoglobin dalam g/100 ml darah (Aliffudin 1993). Pengukuran kadar hematokrit dilakukan untuk membandingkan plasma dengan padatan darah, perbandingan keduanya dibaca dengan pembaca mikrohematokrit dalam satuan %. Darah dihisap dengan menggunakan tabung mikrohematokrit berlapis heparin sebanyak 4 / 5 dari volume tabung kemudian bagian ujung tabung ditutup dengan menggunakan lilin sumbat (cristosel). Tabung yang berisi darah kemudian disentrifugasi selama 5 menit dengan kecepatan rpm. Pengukuran dilakukan dengan membandingkan bagian darah yang mengendap dengan seluruh bagian darah yang ada di dalam tabung mikrohematokrit dan hasilnya dinyatakan dalam %, yaitu (x/y) (Aliffudin 1993). Histologi Usus, Ginjal, Otot dan Hati Histologi dilakukan untuk melihat terjadinya kerusakan sel, penumpukan lemak dan perbedaan hepatosit pada setiap perlakuan. Pengambilan sampel dilakukan pada awal dan akhir pemeliharaan. Pembuatan preparat dilakukan dengan metode pewarnaan hematoksilin-eosin. Hasil histologi selanjutnya diamati dengan mikroskop pada pembesaran 100x. Pengamatan dilakukan terhadap keberadaan vakuola dan kerusakan sel usus, ginjal, otot dan hati (Humason 1972). Analisis Kimia

8 27 Kadar air diukur dengan metode pemanasan dalam oven ( o C) selama 4 jam. Protein dianalisis dengan metode Kjedahl, lemak dengan metode ekstraksi menggunakan alat Soxlet, abu dengan pemanasan dalam tanur ( o C), serat kasar diukur dengan pelarutan dalam asam dan basa kuat serta pemanasan. Lemak tubuh dan hati dianalisis dengan menggunakan metode Folch (Takeuchi 1988). Pengukuran Cr 2 O 3, fosfor dan kalsium serta HPLC untuk asam amino sesuai prosedur AOAC (1984). Pengukuran zat anti nutrisinya dilakukan menggunakan alat spectrofotometer (APHA 1998). Analisis Statistik Data dianalisis menggunakan Analysis of Variance (ANOVA) dan dilanjutkan dengan Uji Duncan dengan selang kepercayaan 95% (α = 0,05) dengan menggunakan program SAS (Mattjik dan Sumertajaya 2006). Pengamatan histologi dan gambaran darah dianalisis dengan analisis desriptif ekploratif menggunakan tabel dan grafik..