EVALUASI KUALITAS SPERMATOZOA HASIL SEXING PADA KEMASAN STRAW DINGIN YANG DISIMPAN PADA SUHU 5 C SELAMA 7 HARI

Transkripsi

1 EVALUASI KUALITAS SPERMATOZOA HASIL SEXING PADA KEMASAN STRAW DINGIN YANG DISIMPAN PADA SUHU 5 C SELAMA 7 HARI (Evaluation on Sexed Sperm Quality in Chilling Straw Which was Kept Chilling at 5 C Along 7 Days) WULAN CAHYA PRATIWI, D. PAMUNGKAS, L. AFFANDHY dan HARTATI 1 Loka Penelitian Sapi Potong, Jl. Pahlawan No. 2 Grati, Pasuruan ABSTRACT The aim of this study was to investigated the quality of chilling semen of sexing sperm which was kept at 5 C in 7 days. Sexing techniques used Albumin Column as media of separation and egg yolk tris aminomethane as diluter. The PO bull (I 2 ) were used as semen provision. Through five collections, the average of volume was 7.8 ± 1.6 ml/ejakulate, colour of white milk, consistency of moderately, progresif mass 3+, ph of 7,0, concentration of ± 336 million/ml, motility of 86.0 ± 6.5%, live sperm of 93.5 ± 23.1% and abnormality 1.0 ± 1.0%. Result of sexed sperm after thawing 5 C at seven days of lower fraction with head size of sperm 22.2 ± 2.3 um showed decrease motility from 86.0% (fresh) to 56.0% (day 7) and decreased live sperm from 93.5% (fresh) to 67.9% (day 7); the upper fraction with head size sperm 28.7 ± 2.7 um showed decreased motility from 86.0% (fresh) to 46.3% (day 7) and the decrease live sperm from 93.5% (fresh) to 64.3% (day 7). The abnormality of sperm at lower and upper fraction were increased from 1.0% and 1.0% (respectively) to 2.4% and 2.2% (respectively). While the mean of ph did not show significantly differed between upper and lower fraction (7.5). The quality of chilling semen of sexed sperm which was kept at 5 C in seven days can be used for inseminating. Key Words: The Quality Of Spermatozoa, Sexing, Chilling Straw, Stored ABSTRAK Optimalisasi penggunaan teknologi Inseminasi Buatan (IB) diantaranya mengupayakan sapi induk melahirkan setiap tahun dengan menghasilkan pedet dengan jenis kelamin yang sesuai harapan. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui perubahan kualitas spermatozoa hasil sexing yang disimpan dalam straw dingin pada suhu 5 C selama 7 hari. Metoda pemisahan menggunakan gradien putih telur dan pengencer tris amino methane-kuning telur. Sebagai sumber semen adalah pejantan sapi PO (I2). Melalui 5 kali koleksi diperoleh rataan volume semen segar/ejakulat 7,8 ± 1,6 ml, warna putih susu, konsestensi sedangkental, gerak massa progresif 3+, ph 7,0, konsentrasi 1065,0 ± 336 juta/ml, motil individu 86,0 ± 6,5%, persen hidup 93,5 ± 23,1% dan abnormalitas 1,0 ± 1,0%. Setelah proses pemisahan, terdapat perubahan kualitas spermatozoa. Fraksi bawah (rataan besar kepala spermatozoa 22,2 ± 2,3 um) menunjukkan penurunan motilitas dari 86,0% (segar) ke 56,0% (7 hari) dan penurunan persen hidup dari 93,5 (segar) ke 67,9% (7 hari); sedangkan fraksi atas (rataan besar kepala spermatozoa 28,7 ± 2,7 um) menunjukkan penurunan motilitas dari 86,0% (segar) ke 46,3% (7 hari) dan penurunan persen hidup dari 93,5% (segar) ke 64,3% (7 hari). Abnormalitas spermatozoa pada fraksi bawah menunjukkan peningkatan yaitu dari 1,0% (segar) ke 2,4% (7 hari); fraksi atas juga menunjukkan peningkatan abnormalitas dari 1,0% (segar) ke 2,2% (7 hari). Sementara itu, rataan ph semen fraksi atas maupun bawah tidak menunjukkan perbedaan yakni 7,5. Disimpulkan bahwa semen hasil sexing yang disimpan pada suhu 5 C selama 7 hari masih layak digunakan untuk IB. Kata Kunci: Kualitas Spermatozoa, Sexing, Straw Dingin, Penyimpanan 143

2 PENDAHULUAN Usaha ternak sapi potong di Indonesia membutuhkan perhatian khusus dalam kaitannya dengan upaya mempertahankan dan menunjang peningkatan populasi, dimana teknologi tepat guna khususnya di bidang reproduksi dapat diterapkan secara mudah dan efesien. Data statistik peternakan tahun 2003 menyatakan bahwa Indonesia telah mengimpor susu lebih dari 577,5 ton/tahun dan mengimpor daging lebih dari 1.908,8 ton/tahun. Guna peningkatan populasi tersebut maka dilakukan pemanfaatan bioteknologi reproduksi peternakan melalui teknik Inseminasi Buatan (IB) (KAIIN et al., 2005). Optimalisasi penggunaan inseminasi buatan (IB) diantaranya adalah mengupayakan setiap sapi induk mampu menghasilkan anak setiap tahun dengan jenis kelamin sesuai keinginan, yakni jantan ataupun betina. Ternak jantan menjadi pilihan peternak untuk dipelihara mengingat kemampuan tumbuh dan berkembangnya sel-sel tubuhnya lebih cepat dibanding betina, sehingga sangatlah tepat apabila ternak jantan dibudidayakan untuk tujuan penggemukan (fattening); sedangkan ternak betina dipelihara karena kemampuannya menghasilkan anak dan susu (cow-calf operation). Pemisahan spermatozoa adalah upaya untuk mengubah perolehan spermatozoa yang berkromosom jenis X atau Y dengan metode tertentu, sehingga berubah dari proporsi normal (rasio alamiah), 50% : 50% (HENDRI, 1992). Beberapa hasil penelitian sebelumnya telah dilaporkan bahwa rata-rata kandungan spermatozoa X dan Y dalam semen sapi adalah 49,5 dan 50,5% (GARNER et al., 1983). Berbagai metode pemisahan spermatozoa X dan Y telah banyak dilakukan. Metode pemisahan tersebut antara lain yaitu sedimentasi, albumin column, sentrifugasi gradien densitas, elektroforesis, H-Y antigen, flow cytometry, dan filtrasi dengan sephadex column (HAFEZ, 1993). Pemisahan spermatozoa dengan filtrasi sephadex column dapat menghasilkan spermatozoa X 70 75% (HAFEZ, 1993). SUSILAWATI et al. (1996), telah melakukan filtrasi spermatozoa menggunakan Sephadex G-200 dan sentrifugasi gradien densitas percoll. Metode pemisahan dengan menggunakan Sephadex G-200 pada lapisan bawah dapat menghasilkan spermatozoa X sebanyak 86%, sedangkan dengan sentrifugasi gradien densitas percoll menghasilkan spermatozoa X pada lapisan bawah sebanyak 89%. Di Amerika untuk menentukan spermatozoa X dan Y menggunakan flow cytometric guna memperoleh kromosom DNA X maupun kromosom DNA Y (ANONIMUS, 2001). Seleksi jenis kelamin dengan menggunakan albumen (putih telur) merupakan metode yang mudah diaplikasikan di lapang. Selain mudah pelaksanaannya juga bahannya mudah diperoleh dan murah harganya. Hasil penelitian PAMUNGKAS et al. (2003) menyatakan bahwa pemisahan kromosom X dan Y dengan menggunakan medium gradien putih telur pada imbangan tris buffer : semen = 1 : 0,5 menunjukkan hasil motilitas lebih dari 40% dan mampu bertahan hingga 6 hari pada suhu 5 C dengan fraksi atas menunjukkan motilitas 53,75%. SUSILAWATI (2002a) melaporkan bahwa penggunaan putih telur cukup efektif sebagai bahan pemisahan spermatozoa X dan Y dengan menghasilkan spermatozoa Y proporsi bawah sebesar 75,8 ± 13%; demikian pula hasil pemisahan spermatozoa dengan menggunakan gradien putih telur yang di IB-kan pada sapi PO memperoleh kebuntingan 40% (SUSILAWATI, 2002b). Sementara itu, penggunaan pengencer merupakan hal yang penting dalam pengemasan semen dalam bentuk straw maupun ampul beku. Diharapkan kualitas semen dan viabilitas spermatozoa selama proses pembekuan dapat dipertahankan. Penggunaan pengencer dimaksudkan untuk menjamin kebutuhan fisik dan kimia spermatozoa sehingga kualitas spermatozoa dapat dipertahankan khususnya pada kemampuan kapasitasi (PARTODIHARDJO, 1992). Fungsi pengencer lainnya adalah untuk memperbesar volume semen sehingga setiap satu kali ejakulat dapat digunakan meng-ib ternak betina lebih banyak (SUYADI et al., 1994). Laporan lain menyatakan bahwa fungsi pengencer adalah: (1) memperbanyak volume semen; (2) melindungi spermatozoa dari cold shock; (3) menyediakan zat makanan sebagai sumber energi bagi spermatozoa; (4) menyediakan buffer untuk mempertahankan ph, tekanan osmotic dan keseimbangan elektrolit (PARTODIHARDJO, 1992). Penggunaan 144

3 pengencer tris aminomethan kuning telur terbukti lebih mampu mempertahankan kualitas spermatozoa dibandingkan dengan tris aminomethan tanpa kuning telur (SUSILAWATI, 2002). Seleksi spermatozoa sebagai penanda jenis kelamin dengan menggunakan metode albumen (putih telur) didasarkan atas perbedaan motilitas (daya gerak) spermatozoa X dan Y sehingga pengaruh oleh perbedaan massa dan ukurannya. Ukuran spermatozoa Y lebih kecil dan bergerak lebih cepat sehingga mempunyai daya penetrasi yang lebih tinggi untuk memasuki suatu larutan. Spermatozoa Y akan bergerak ke bawah, sedangkan spermatozoa X relatif akan bertahan di lapisan bagian atas. Oleh karena itu pengembangan teknologi semen cair dan sexing pada sapi potong masih diperlukan sehingga akan diperoleh nilai tambah dari program IB dan dapat berguna untuk mendapatkan pedet betina ataupun jantan sesuai dengan yang diharapkan. Tujuan Penelitian ini adalah untuk mengetahui perubahan kualitas semen pejantan sapi PO hasil sexing yang disimpan hingga 7 hari pada suhu 5 0 C. MATERI DAN METODE Penelitian dilakukan di laboratorium Loka Penelitian Sapi Potong yang diawali dengan proses pemisahan spermatozoa menggunakan metode sentrifugasi dengan medium pemisah gradien Albumin Column dan pengencer Tris Aminomethan kuning telur dengan perbandingan antara pengencer dan semen adalah 2 : 3 dengan pengeraman sebelum disentrifuse selama 20 menit. Pada penelitian ini dilakukan ulangan sebanyak 5 kali penampungan/proses. Prosedur Penelitian Sebelum dilakukan proses pemisahan spermatozoa terlebih dahulu dilakukan penampungan dan pemeriksaan kualitas semen segar pejantan sapi PO (bergigi seri tetap I- 2, bobot badan 530 kg) yang meliputi volume, warna, konsistensi, ph, gerakan massa, motilitas, persentase spermatozoa hidup, konsentrasi spermatozoa dengan hasil sesuai standar untuk proses pembuatan semen cair yaitu motilitas > 70%, gerakan massa > ++, sperma hidup > 70%, konsentrasi sperma > 500 (juta/ml) (Tabel 1). Selanjutnya dilakukan proses pemisahan spermatozoa sebagai berikut: 1. Membuat larutan putih telur dengan konsentrasi 30 dan 10%. 2. Memasukkan larutan putih telur (konsentrasi 30 dan 10%) masing-masing sebanyak 2 ml ke dalam tabung reaksi (dimulai dari konsentrasi 30% kemudian 10%, secara perlahan melalui dinding tabung. 3. Membuat larutan pengencer tris aminomethan kuning telur 10%. 4. Membuat pengenceran semen segar dengan perbandingan pengencer dan semen 2 : Semen yang telah diencerkan dimasukkan sebanyak 2 ml ke dalam tabung yang berisi 2 lapisan putih telur melalui dinding tabung; lalu diinkubasikan selama 20 menit pada suhu kamar. 6. Pengambilan lapisan bagian atas sebanyak 2 ml; lapisan bagian bawah sebanyak 2 ml; masing-masing dimasukkan dalam tabung yang berisi 3 ml pengencer. 7. Memasukkan tabung yang berisi lapisan atas dan bawah ke dalam centrifuge dan diputar selama 5 menit dengan kecepatan 1500 rpm. 8. Supernatannya dibuang sebanyak 3 ml dan disisakan 2 ml kemudian diuji kualitasnya dan diidentifikasi spermatozoa X dan Y (berdasarkan ukuran besar kepala spermatozoa). 9. Setelah diketahui konsentrasi dari masingmasing lapisan (atas dan bawah), maka dilakukan penghitungan jumlah volume pengencer yang harus ditambahkan. Penyimpanan hasil sexing dilakukan secara bertahap dengan mengatur suhu pada 33 C, kemudian suhu diturunkan sampai 15 C, 10 C dan akhirnya sampai suhu 5 C (pada tiap-tiap penurunan suhu tersebut dilakukan penambahan pengencer secara bertahap). Pengamatan terhadap kualitas semen hasil sexing dilakukan pada 0, 3, 5, 7 hari masa 145

4 penyimpanan pada suhu 5 0 C dengan parameter yang diamati berupa ph, motilitas dan persentase hidup/mati dan abnormalitas Analisis data Data kualitas semen segar dan semen hasil sexing dianalisis secara deskriptif. HASIL DAN PEMBAHASAN Kualitas semen segar sapi PO Tabel 1. menunjukkan hasil pengamatan terhadap performans semen segar sebelum dilakukan sexing; sedangkan data rataan kualitas spermatozoa sapi PO dalam kondisi segar dan hasil sexing selama penyimpanan 0-7 hari pada 5 0 C tercantum pada Tabel 2 dan 3. Kualitas semen segar pejantan sapi PO dalam lima kali penampungan menunjukkan hasil yang cukup baik (Tabel 1); rataan volume semen mencapai 7,8 ± 1,6 ml/ejakulasi. Pada penelitian ini rataan volume semen per ejakulasi lebih tinggi dibandingkan dengan kondisi peternakan rakyat (6,1 ± 0,2 ml/ejakulasi) (AFFANDHY et al., 2003). Volume semen sapi PO pada penelitian ini juga lebih tinggi daripada volume semen yang dihasilkan oleh sapi turunan Simmental, yaitu 5,8 ± 0,8 ml/ejakulasi, sebagaimana dilaporkan ANGGRAENY et al. (2004). Adanya perbedaan volume semen pada tiap ejakulasi antara lain dapat dipengaruhi oleh kualitas pakan, suhu lingkungan dan dewasa kelamin dari seekor pejantan. Rataan ph semen dari lima kali penampungan adalah 7,0 ± 0,0, gerak massa bervariasi (2+ hingga 3+. Warna semen adalah cream dengan konsistensi sedang sampai dengan kental. Konsentrasi per ml 1065,0 ± 336,0 juta, sedangkan motilitasnya adalah 86,0 ± 6,5. Rataan sperma hidup, mati dan abnormal masing-masing adalah 93,5 ± 2,1, 5,5 ± 2,6 dan 1,0 ± 1,0. Dengan demikian dapat dinyatakan bahwa rataan kualitas semen segar pejantan sapi PO yang digunakan sebagai materi percobaan adalah baik, karena berada di atas persyaratan minimal sebagai semen yang digunakan untuk proses sexing semen cair. Standar/patokan Lolit Sapi Potong terhadap kualitas semen yang dapat diproses lebih lanjut dalam satu ejakulasi adalah semen tersebut mempunyai gerak massa minimal 2+; dimana ciri-ciri gerakan cepat seperti mendung yang berputar (PARTODIHARJO, 1992). Untuk pembuatan semen cair standar yang harus dipenuhi adalah gerakan massa 2+ sampai dengan 3+, motilitas > 70%, konsentrasi sperma > 750 juta/ml ejakulat dengan koonsistensi sedang sampai dengan kental dan warna putih kekuningan hingga cream (AFFANDHY et al., 2004). Tabel 1. Pemeriksaan semen segar pejantan sapi PO Pengamatan Vol (ml) ph GM Mot (%) Konsent (juta/ml) Hidup (%) Mati (%) Ab (%) Warna Konsist cream kental ,1 2,9 1 cream kental ,1 8,9 0 cream sedang ,1 6,9 0 cream sedang 5 5, ,1 5,9 2 cream kental Rataan 7,8 7, ,0 1065,0 93,5 5,5 1,0 SD 1,6 0,0 6,5 336,0 2,1 2,6 1,0 Vol = Volume; GM = Gerak Massa; Mot = Motilitas; Konsen t= Konsentrasi; Ab = Abnormalitas; Konsist= Konsistensi 146

5 Identifikasi spermatozoa X dan Y Penentuan spermatozoa X dan Y didasarkan pada ukuran kepala spermatozoa, dimana spermatozoa yang memiliki ukuran kepala lebih kecil dari rataan ukuran kepala, adalah spermatozoa Y. Rataan ukuran besar kepala spermatozoa pada fraksi atas lebih besar dibandingkan dengan fraksi bawah. Hasil pengukuran luas kepala spermatozoa setelah pengenceran dan sentrifugasi bahwa fraksi bawah yang diprediksikan sebagai spermatozoa Y (calon pedet jantan) menunjukan ukurannya lebih kecil 22,2 ± 2,3 µm daripada fraksi atas 28,7 ± 2,7 µm yang diprediksikan sebagai spermatozoa X (calon pedet betina); dengan tingkat kesesuaian semen cair fraksi bawah spermatozoa X sebesar 46% dan Y sebesar 54% (calon pedet jantan) (Gambar 1); sedangkan tingkat kesesuaian fraksi atas spermatozoa X sebesar 58% dan Y sebesar 42% (calon pedet betina) (Gambar 2). Hal ini hampir sama dengan penelitian SUSILOWATI (2002a) melaporkan bahwa penggunaan putih telur cukup efektif sebagai bahan pemisahan spermatozoa X dan Y dengan menghasilkan spermatozoa Y proporsi bawah sebesar 75,8 ± 13%. Metode sexing dengan menggunakan putih telur merupakan metode yang didasarkan atas perbedaan motilitas spermatozoa X dan Y yang disebabkan oleh perbedaan massa dan ukurannya. Ukuran spermatozoa Y lebih kecil sehingga bergerak lebih cepat atau mempunyai daya penetrasi yang lebih tinggi untuk memasuki suatu larutan (JASWANDI, 1996). Spermatozoa Y akan bergerak ke bawah sedangkan spermatozoa X tetap berada di lapisan atas (BEERNINK dan ERICSSON, 1982; HAFEZ, 1993). 46% 54% Sperma X Sperma Y Gambar 1. Persentase spermatozoa X dan Y pada fraksi bawah 42% 58% Sperma X Sperma Y 147

6 Gambar 2. Persentase spermatozoa X dan Y pada fraksi atas Kualitas semen hasil sexing Pemeriksaan kualitas semen hasil sexing dilakukan setelah proses pemisahan spermatozoa dengan observasi terhadap ph, motilitas, spermatozoa hidup, mati dan abnormal. Rataan kualitas semen segar dan cair hasil sexing spermatozoa lapisan bawah (Y) dan lapisan atas (X) pada pejantan sapi potong PO tampak pada Tabel 2 dan 3 yang hingga hari ke tujuh masih dalam batas normal. Persentase motilitasnya masing-masing adalah 56,0 ± 8,2% pada lapisan bawah (spermatozoa Y) dan 46,3 ± 12,5% pada lapisan atas (spermatozoa X); demikian pula spermatozoa hidup sebesar 67,9 ± 10,2% pada lapisan bawah dan 64,3 ± 14,5% pada lapisan atas. Dengan demikian persentase motilitas spermatozoa pada lapisan atas maupun lapisan bawah lebih tinggi dari standar Post Thawing Motility (PTM) untuk diproses sebagai straw (motilitas > 40%) (TOELIHERE, 1993). SUSILOWATI (2002c) melaporkan bahwa motilitas spermatozoa Tabel 2. Rataan kualitas semen segar dan cair hasil sexing spermatozoa fraksi bawah (Y) pada pejantan sapi PO Kualitas semen Parameter Cair Segar 0 hari 7 hari Volume (cc/ejakulat) 7,8 ± 1,6 - - Warna Putih susu - - Konsistensi Sedang-kental - - Konsentrasi spermatozo (juta/cc) 1065,0 ± 336,0 - - Gerakan Massa ph 7,0 ± 0,0 7,5 ± 0,0 7,5 ± 0,0 Motilitas (%) 86,0 ± 6,5 80,0 ± 5,0 56,0 ± 8,2 Spermatozoa hidup (%) 93,5 ± 2,1 84,7 ± 8,2 67,9 ± 10,2 Spermatozoa mati (%) 5,5 ± 2,6 13,2 ± 7,9 29,7 ±8,4 Spermatozoa abnormal (%) 1,0 ± 1,0 2,1 ± 0,8 2,4 ± 2,8 Tabel 3. Rataan kualitas semen segar dan cair hasil sexing spermatozoa fraksi atas (X) pada pejantan sapi PO Kualitas semen Parameter Cair Segar 0 hari 7 hari Volume (cc/ejakulat) 7,8 ± 1,6 - - Warna Putih susu - - Konsistensi Sedang-kental - - Konsentrasi spermatozo (juta/cc) 1065,0 ± 336,0 - - Gerakan Massa ph 7,0 ± 0,0 7,5 ± 0,0 7,5 ± 0,0 Motilitas (%) 86,0 ± 6,5 76,7 ± 2,9 46,3 ±12,5 Spermatozoa hidup (%) 93,5 ± 2,1 85,0 ± 4,6 64,3 ± 14,5 Spermatozoa mati (%) 5,5 ± 2,6 11,4 ± 6,3 32,8 ±15,7 148

7 Spermatozoa abnormal (%) 1,0 ± 1,0 3,3 ± 1,1 2,2 ± 2,8 setelah pemisahan dengan menggunakan Tris aminometan kuning telur sebesar 41 ± 9,94% pada lapisan atas dan 50 ± 8,16% pada lapisan bawah. Pada fraksi atas dimana terdapat dominasi keberadaan spermatozoa X terhadap spermatozoa Y tampak bahwa motilitas spermatozoa mengalami penurunan dari kondisi segar (86,0 ± 6,5%) hingga penyimpanan selama 7 hari pada suhu 5 C (46,3 ± 12,5%) (Tabel 3). Hal ini seiring dengan penurunan kuantitas spermatozoa hidup, yakni menurun sebanyak 29,2% dari kondisi segar hingga penyimpanan selama 7 hari yaitu dari 93,5 ± 2,1% (kondisi segar) menurun sampai 64,3 ± 14,5% (7 hari). Sementara itu, persentase spermatozoa mati dan abnormal menunjukkan peningkatan dari kondisi segar masing-masing adalah 5,5 ± 2,6% dan 1,0 ± 1,0% (kondisi segar) hingga 32,8 ± 15,7% dan 2,2 ± 2,8% (7 hari). Pada fraksi bawah dimana terdapat dominasi keberadaan spermatozoa Y terhadap spermatozoa X tidak menunjukkan perbedaan dengan fraksi atas baik dalam hal motilitas, spermatozoa hidup, mati dan abnormal dari kondisi segar (sebelum proses) sampai kondisi didinginkan 5 0 C selama 7 hari (Tabel 2). Pada Tabel 2 terlihat bahwa motilitas spermatozoa Y pada pendinginan 5 C selama 7 hari mengalami penurunan dari kondisi segar yaitu dari 86,0 ± 6,5% menjadi 56,0 ± 8,2%. Begitupula dengan persentase spermatozoa hidup juga mengalami penurunan pada kondisi segar hingga penyimpanan selama 7 hari pada 5 C yaitu dari 93,5 ± 2,1% menjadi 67,9 ± 10,2%. Sementara itu, persentase spermatozoa mati dan abnormal menunjukkan peningkatan dari kondisi segar sampai penyimpanan selama 7 hari pada 5 C masing-masing yaitu dari 5,5 ± 2,6% dan 1,0 ± 1,0% menjadi 29,7 ± 8,4% dan 2,4 ± 2,8%. Penurunan kualitas ini cukup wajar mengingat serangkaian proses yang mengkondisikan spermatozoa untuk diperlakukan sesuai dengan prosedur pemisahan X dan Y sehingga spermatozoa mengalami shock. Selain itu, penyimpanan dalam jangka waktu lama menyebabkan penurunan motilitas spermatozoa akibat adanya asam laktat sisa metabolisme sel yang menyebabkan kondisi medium menjadi semakin asam Kondisi ini dapat bersifat racun bagi spermatozoa yang akhirnya menyebabkan kematian sperma (SUGIARTI et al., 2004). EINARSSON (1992) menyatakan bahwa proses cooling, freezing dan thawing sangat mempengaruhi stabilitas dan fungsi-fungsi hidup sel membran. Penurunan kualitas spermatozoa diatas terjadi karena adanya kerusakan struktur membran akibat serangkaian proses dalam prosedur pemisahan X dan Y maupun selama pendinginan sehingga proses metabolisme spermatozoa terganggu (SUSILAWATI, 2005). Membran plasma utuh mutlak harus dimiliki oleh spermatozoa agar dapat memfertilisasi oosit. Selain berfungsi melindungi secara fisik organel-organel sel, membran plasma juga mengatur keluar masuknya zat-zat makanan serta keseimbangan elektrolit intra dan ekstraseluler. Apabila membran plasma rusak maka proses metabolisme sel akan terganggu dan berakibat kematian sperma (SUGIARTI et al., 2004). Faktor luar yang mempengaruhi metabolisme spermatozoa antara lain keadaan spermatozoa di dalam alat kelamin betina, konsentrasi spermatozoa, kerapatan O 2 dan gas CO 2, konsentrasi ion dan efek cahaya (RULIANSYAH, 1984). KESIMPULAN DAN SARAN Evaluasi terhadap kualitas spermatozoa Sapi PO dalam kondisi segar menunjukkan hasil yang sesuai dengan standar untuk diproses lebih lanjut menjadi semen sexing dalam bentuk cair. Kualitas spermatozoa hasil sexing dalam penyimpanan pada 5 C selama 7 hari menunjukkan penurunan dari kondisi segar baik pada persentase motilitas, dan spermatozoa hidup. Namun penurunannya itu masih diatas batas normal dan layak untuk diinseminasikan pada sapi induk. Diperlukan penelitian lebih lanjut penyebab rendahnya persentase motilitas dan spermatozoa hidup hasil sexing tersebut pada penyimpanan pada 5 C selama 7 hari. DAFTAR PUSTAKA 149

8 AFFANDHY. L., D. PAMUNGKAS, A. RASYID dan P. SITUMORANG Uji Fertilitas Semen Cair dan Beku pada Pejantan Sapi Potong Lapang. Laporan Penelitian. Loka Penelitian Sapi Potong. ANGGRAENY, Y. N., L. AFFANDHY dan A. RASYID Efektifitas subtitusi pengencer tris sitrat dan kolesterol menggunakan air kelapa dan kuning telur terhadap kualitas semen beku sapi potong. Pros. Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner. Bogor, 4 5 Agustus Puslitbang Peternakan, Bogor. hlm: EINARSSON, S Concluding remarks. In: Influence of Thawing Method on Motility, Plasma Membran Integrity and Morphology of Frozen Stallion Spermatozoa. BOR. K., B. COLENBRANDER, A. FAZELLI, J. PALLEVLIET and L. MALMGREN (Eds.) Theriogenology VI. 48 th pp GARNER, D.L. and E.S.E. HAFEZ Spermatozoa and seminal plasma. In: Reproduction in Farm Animal. HAFEZ, E.S.E. (Ed.) Six Edition. Lea and Febiger. Philadelpia. HAFEZ, E.S.E Reproduction in Farm Animals. 6 th Edition. Lea Febiger. Philadelphia: HUNTER, R. H. F Reproduction on farm animal. School of Agriculture University of Edinburgh. Longman, London and New York. JASWANDI Pengaruh Lapisan Suspensi Bovine Serum Albumin 6 dan 10 Dalam Kolum untuk Memisahkan Sperma Sapi Pembawa Kromosom X dan Y Sapi Guna Mengubah Rasio Seks pada Pedet. Tesis. Program Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor. KAIIN, E.M., M. GUNAWAN, S. SAID dan. B. TAPPA Fertilisasi dan perkembangan oosit sapi hasil IVF dengan sperma hasil pemisahan. Pros. Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner. Bogor, 4 5 Agustus Puslitbang Peternakan, Bogor. hlm PAMUGKAS, D., L. AFFANDHY, A. RASYID, D.B. WIJONO dan T. SUSILAWATI Teknologi Pemisahan Spermatozoa X dan Y Sapi Potong Skala Laboratorium. Laporan Penelitian. Loka Penelitian Sapi Potong. PARTODIHARDJO Ilmu Reproduksi Hewan. Cetakan Ketiga. Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor. Penerbit Mutiara Sumber Wijaya, Jakarta Pusat. RULIANSYAH Penggunaan Air Kelapa sebagai Pengencer Semen pada Ternak. Skripsi. Fakultas Kedokteran Hewan. Institut Pertanian Bogor. SUGIARTI, T., E. TRIWULANNINGSIH, P. SITUMORANG, R.G. SIANTURI dan D.A. KUSUMANINGRUM Penggunaan katalase dalam produksi semen dingin sapi. Pros. Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner. Bogor, 4 5 Agustus Puslitbang Peternakan, Bogor. hlm SUSILAWATI, T Tingkat Keberhasilan Inseminasi Buatan pada Sapi Peranakan Ongole Menggunakan Hasil Sexing dengan Gradient Konsentrasi Putih Telur. Fakultas Peternakan Universitas Brawijaya (Laporan). SUSILAWATI, T. 2002a. Pembekuan Spermatozoa Sapi Limousin Hasil Sexing dengan Gradient Konsentrasi Putih Telur. Fakultas Peternakan. Universitas Brawijaya (Laporan). SUSILAWATI, T. 2002b. Tingkat Keberhasilan Inseminasi Buatan pada Sapi Peranakan Ongole Menggunakan Hasil Sexing dengan Gradient Konsentrasi Putih Telur. Fakultas Peternakan Universitas Brawijaya. (Laporan). SUSILAWATI, T. 2002c. Perbedaan kualitas spermatozoa hasil seleksi jenis kelamin pada sapi menggunakan gradien putih telur pada pengencer tris dan tris kuning telur. J. Ilmiah Peternakan dan Perikanan (PROTEN), Universitas Muhammadiyah Malang. hlm SUSILAWATI, T Keberhasilan Inseminasi Buatan menggunakan semen sexing setelah dibekukan. Pros. Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner. Bogor, September Puslitbang Peternakan, Bogor. hlm SUSILAWATI, T., S. B. SUMITRO, S. RAHAYU, G. CIPTADI and N. ISNAENI Separation of X Y chromosome bearing sperm in Indonesia native bull with sephadex G-200. The 13 th Tnt. Cong. On Animal Reproduction Darling Harbour Convention Centre. Sidney. 24: 3. TOELIHERE, M. R Inseminasi Buatan pada Ternak. Cetakan ke 10. Penerbit Angkasa, Bandung. 150