PENGARUH PEMBERIAN ISOLAT ANDROGRAFOLID DARI HERBA SAMBILOTO

Transkripsi

1 PENGARUH PEMBERIAN ISOLAT ANDROGRAFOLID DARI HERBA SAMBILOTO (Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees.) TERHADAP PROFIL LIPID TIKUS PUTIH (Rattus Novergicus, L.) JANTAN GALUR WISTAR YANG DIINDUKSI DIET ATEROGENIK SKRIPSI NYOMAN AYU PUTRI PARAMITA SARI JURUSAN FARMASI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS UDAYANA 2015 i

2 ii Lembar Pengesahan PENGARUH PEMBERIAN ISOLAT ANDROGRAFOLID DARI HERBA SAMBILOTO (Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees.) TERHADAP PROFIL LIPID TIKUS PUTIH (Rattus Novergicus, L.) JANTAN GALUR WISTAR YANG DIINDUKSI DIET ATEROGENIK SKRIPSI Skripsi ini diajukan sebagai syarat untuk memperoleh gelar sarjana farmasi (S.Farm) di Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana Pembimbing I Oleh NYOMAN AYU PUTRI PARAMITA SARI Menyetujui: Pembimbing II Ni Kadek Warditiani, S. Farm., M.Sc., Apt. Drs. I Nyoman Kadjeng Widjaja, M.Si., Apt NIP NIP Mengesahkan: Ketua Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt NIP ii

3 iii KATA PENGANTAR Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa karena atas berkat rahmat-nya penulis dapat menyelesaikan Skripsi yang berjudul Pengaruh Pemberian Isolat Andrografolid dari Herba Sambiloto (Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees.) Terhadap Profil Lipid Tikus Putih (Rattus Novergicus, L.) Jantan Galur Wistar yang Diinduksi Diet Aterogenik tepat pada waktunya di Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana. Penyusunan Skripsi ini tidak terlepas dari dukungan, saran, dan bimbingan dari berbagai pihak. Maka dari itu, pada kesempatan ini penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada: 1. Ir. Anak Agung Gde Raka Dalem, M.Sc. (Hons). selaku Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana. 2. Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt. selaku Ketua Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana. 3. Ni Kadek Warditiani, S. Farm., M.Sc., Apt. selaku dosen pembimbing I yang telah meluangkan waktu, tenaga dan pikiran dalam membimbing penyusunan Skripsi ini. 4. Drs. I Nyoman Kadjeng Widjaja, M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing II yang telah meluangkan waktu, tenaga dan pikiran dalam membimbing penyusunan Skripsi ini. iii

4 iv 5. Seluruh dosen dan staf pegawai di Jurusan Farmasi yang telah memberikan bantuan dan bimbingan kepada penulis selama penyusunan Skripsi ini. 6. Orang tua tercinta, I Ketut Sudiasa, S.Sos, dan Ibu Sayu Putu Pancadara, S.E, yang telah mengasuh, membesarkan penulis, membimbing dan memberi motivasi dalam penyusunan Skripsi ini. 7. Kakak Kandung penulis yaitu Putu Ayu Siska Febryana, SS. dan Made Dandy Pranajaya, S.Sos., dan pacar tercinta yaitu I Made Yudi Wijaya Pande, S.Kom., serta seluruh keluarga besar di desa Tajen, Kecamatan Penebel, Kabupaten Tabanan yang selalu memberikan motivasi dn dukungan. 8. Seluruh rekan mahasiswa Jurusan Farmasi angkatan 2011 dan Bahan Alam 2011 yang penulis banggakan, khususnya Tim seperjuangan : Sinta, Aditya, Suara Swasti, Mila, Mita, Cheristien serta laboran Kak Anggi, Mbok Dwik, dan Kak Pasek yang banyak membantu dan memberikan semangat dalam penyusunan skripsi ini. Ucapan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada anggota dalam praktikum selama penulis kuliah yaitu Roni, Fatwa, Krisnantara, Waisnawa, Yunita, Redika, Swuanti, Meta, Jayanti, Ayu yang selalu menerima keluh kesah penulis. 9. Seluruh anggota Ton II yaitu Sastra, Ratu, Tria, dan Dyah yang selalu memberi semangat dan mengingatkan penulis berbagai hal. iv

5 v 10. Seluruh mahasiswa Jurusan Farmasi angkatan 2010, khususnya Kak Tio, Kak Gita, Kak Mita, Kak Restika, dan Kak Surya yang selalu memberikan semangat dan dukungan dalam pembuatan skripsi ini. 11. Semua pihak yang terlibat dan telah membantu penulis dalam penyusunan Skripsi ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu. Penulis menyadari bahwa penyusunan Skripsi ini masih jauh dari sempurna. Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang bersifat membangun sehingga di masa yang akan datang dapat menjadi lebih baik. Penulis berharap semoga Skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang memerlukan. Bukit Jimbaran, Juli 2015 Penulis v

6 vi DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL... i LEMBAR PENGESAHAN... ii KATA PENGANTAR... iii DAFTAR ISI... vi DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH... ix DAFTAR TABEL... xi DAFTAR GAMBAR... xiii DAFTAR LAMPIRAN... xiv ABSTRAK... xv BAB I PENDAHULUAN Latar Belakang Rumusan Masalah Tujuan Penelitian Manfaat Penelitian... 4 BAB II TINJAUAN PUSTAKA Tanaman Sambiloto (Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees.) Klasifikasi Deskripsi Khasiat dan Bioaktivitas Andrografolid Ekstraksi dan Isolasi Metabolit Sekunder Bahan Alam Pembuluh Darah Profil Lipid Kilimikron VLDL (Very Low Density Lipoprotein) IDL (Intermedite Density Lipoprotein) LDL (Low Density Lipoprotein) HDL (High Density Lipoprotein) vi

7 vii 2.5 Aterosklerosis Metode Penetapan Kadar Lipid Darah Penetapan kadar trigliserida Penetapan kadar kolesterol total Penetapan kadar HDL (High Density Lipoprotein) Hewan Uji Metode Induksi Aterosklerosis pada Hewan Uji Obat Aterosklerosis BAB III METODE PENELITIAN Rancangan Penelitian Tempat dan Waktu Penelitian Objek Penelitian Bahan Penelitian Alat Penelitian Prosedur Penelitian Determinasi jenis tanaman Pembuatan ekstrak terpurifikasi dari A.paniculata Isolasi andrografolid Pemurnian dan pengukuran kadar Uji Aktivitas Antiaterosklerosis Isolat Andrografolid Pembuatan pakan diet aterogenik Perlakuan hewan uji menjadi aterosklerosis Pengambilan serum Pengukuran kadar lipid serum tikus Pengukuran trigliserida Pengukuran kolesterol total Pengukuran High Density Lipoprotein (HDL) Pengukuran Low Density Lipoprotein (LDL) Analisis Data BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi Tanaman vii

8 viii 4.2 Pembuatan Ekstrak Terpurifikasi Isolasi Andrografolid Pemurnian dan Pengukuran Kadar Andrografolid Metode Induksi Aterosklerosis Uji Pengaruh Isolat Andrografolid BAB V PENUTUP Kesimpulan Saran DAFTAR PUSTAKA LAMPIRAN viii

9 ix DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH Ad libitum Aklitimasi Aterosklerosis : Diberikan tanpa ada yang menghalangi (sesukanya). : Adaptasi organisme terhadap suatu lingkungan baru : Penyakit akibat respon peradangan pada pembuluh darah yang menimbulkan penebalan dan pengerasan pada dinding arteri. BB CHOD-PAP CHOD-POD CMC Na Diet Aterogenik : Berat Badan : Cholesterol oxidase-phenol aminophenazone : Cholesterol oxidase peroxidase : Carboxy Methyl Cellulose Natrium. : Makanan yang menginduksi aterosklerosis terdiri dari Pakan Standar BR-1, Lemak Babi, Kuning Telur Bebek (80:15:5) setiap hari dengan kalsium 0,1% dan Vitamin D IU diberikan seminggu sekali Ekstrak Terpurifikasi : Ekstrak yang sudah mengalami proses purifikasi untuk menghilangkan komponen seperti lemak, klorofil dan resin. ERK1/2 : Extracelluler signal-regulated kinase 1/2 HDL : High Density Lipoprotein yaitu lipoprotein yang mengandung kolesterol sekitar 20-30% HMG-KoA : 3-hydroxy-3-methylglutaryl-koenzyme A reduktase ix

10 x IDL : Intermediet Density Lipoprotein yaitu lipoprotein yang mengandung 30% trigliserida, 20% kolesterol dan lebih banyak mengandung apolipoprotein B dan E. Isolat IU KT Kalsifikasi plak LCAT : Hasil dari proses isolasi : International Unit : Kolesterol total : Pengerasan arteri akibat kelebihan kalsium : Lecithin Cholesterol Acyl Transferase LDL : Low Density Lipoprotein, yaitu lipoprotein yang mengandung kolesterol paling banyak yaitu 60-70% dan 10% trigliserida Lipoprotein : Partikel yang terdiri dari lipid dan protein yang memungkinkan lipid melalui aliran darah Makrofag : Sel darah putih dalam jaringan yang dihasilkan oleh pembagian monosit Monosit : Jenis leukosit atau sel darah putih yang berperan dalam fungsi sistem kekebalan tubuh NF-κB : Nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated Bcells p38mapk PJK p.o : p38 mitogen-activated protein kinases : Penyakit Jantung Koroner : per oral yaitu diberikan secara oral x

11 xi Radikal Bebas : Atom atau molekul bermuatan listrik atau netral yang memiliki satu atau lebih elektron yang tidak berpasangan di orbital terluar mereka. RCT Sel Busa : Reverse Cholesterol Transport : Sel busa penuh lemak berasal dari monosit darah. Bentukan makrofag berisi LDL yang teroksidasi Sel Endotel : Suatu lapisan yang melapisi bagian dalam dari semua pembuluh darah dan berperan sebagai penghubung antara sirkulasi darah dan sel-sel otot polos pembuluh darah Sinus Orbitalis Stroke : Daerah pengambilan darah melalui sudut mata hewan uji : Penyakit yang terjadi akibat penyumbatan atau pecahnya pembuluh darah di otak TG : Trigliserida yaitu senyawa lipid utama pada deposit lemak tubuh dan makanan UV WHO : Ultra Violet : World Health Organization xi

12 xii DAFTAR TABEL Halaman Tabel 2.1 Klasifikasi profil lipid tikus Tabel 4.1 Perbandingan spektrum standar andrografolid dan spektrum sampel pada panjang gelombang 230 nm Tabel 4.2 Tabel hasil perhitungan kadar lipid rata-rata sebelum dan setelah perlakuan Tabel 4.2 Diagram rata-rata profil lipid tikus xii

13 xiii DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 2.1 Herba sambilito (Andrographis Paniculata (Burm.f.) Nees.. 6 Gambar 2.2 Struktur andrografolid... 8 Gambar 2.3 Spektrum KLT-Spektrofotodensitometri dari andrografolid pada panjang gelombang 235 nm... 9 Gambar 2.4 Struktur pembuluh darah Gambar 3.1 Skema kerja umum pengaruh isolat andrografolid Gambar 3.2 Skema uji aktivitas isolat andrografolid Gambar 4.1. Kromatogram standar andrografolid dan sampel pada panjang gelombang nm Gambar 4.2 Kurva kalibrasi andrografolid dalam penentuan linearitas xiii

14 xiv DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran.1. Hasil evaluasi kelayakan etik (ethical clearance) hewan uji. 63 Lampiran 2. Hasil determinasi tanaman sambiloto (andrographis paniculata (burm. f.) nees) Lampiran 3. Perhitungan Rendemen Andrografolid Lampiran 4. Hasil perhitungan kadar androgafolid dalam sampel dan penentuan dosis isolat Lampiran 5. Output uji shapiro-wilk dan uji lavene untuk uji distribusi normal dan homogenitas Lampiran 6. Output uji output uji ANOVA one-way Lampiran 7. Output uji paired t-test Lampiran 8. Output uji fisher LSD dengan taraf kepercayaan 95% Lampiran 9. Komposisi reagen kolesterol, trigliserida, dan larutan pengendap kolesterol Lampiran 10. Hasil tahapan ekstrak terpurifikasi Lampiran 11. Hasil tahapan isolasi Lampiran 12. Gambar hewan uji yang digunakan dalam penelitian Lampiran 13. Perhitungan dan cara pembuatan bahan uji Lampiran 14. Konversi dosis anfrografolid 18 mg/kgbb pada tikus ke dosis manusia Lampiran 15. Gambar pengamatan KLT pada UV 254 nm dan 366nm Lampiran 16. Hasil penetapan kadar andrografolid dalam ekstrak terpurifikasi Andrographis paniculata (Burm. f.) nees dengan metode KLT-spektrofotodensitometri Lampiran 17. Hasil uji kemurnian spektrum xiv

15 xv ABSTRAK Tanaman sambiloto (Andrographis paniculata (Burm.f) Ness) merupakan tanaman yang banyak digunakan di masyarakat secara turun temurun untuk menyembuhkan berbagai penyakit termasuk menurunkan kadar kolesterol dalam darah. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas penurunan lipid dari isolat andrografolid sebagai antiaterosklerosis pada tikus putih (Rattus norvegicus, L.) jantan galur wistar. Penelitian ini meliputi beberapa tahapan yaitu: ekstraksi, pembuatan ekstrak terpurifikasi, isolasi dan penetapan kadar andrografolid, induksi aterogenik pada hewan uji serta pengaruh pemberian isolat andrografolid terhadap profil lipid. Pengujian dilakukan dengan membagi tikus menjadi 5 kelompok, antara lain : kontrol normal, kontrol negatif (CMC Na 0,1%), kontrol positif (atorvastatin 7,2 mg/kg BB), PI (andrografolid 6 mg/kg BB) dan PII (andrografolid 18 mg/kg BB). Profil lipid diukur pada hari ke-45 dan ke-60 dengan tes colorimetric enzymatic CHOP-PAP dan GOP-PAP. Data yang diperoleh di analisis dengan statistika metode ANOVA satu arah dengan taraf kepercayaan 95% dan dilanjutkan Post Hoc tests. Terapi atorvastatin dan isolat andrografolid menurunkan kadar kolesterol total plasma secara bermakna sebesar 24,65% pada kontrol positif, 23,52% pada PI, dan 53% pada PII (p<0,05). Kadar LDL plasma dapat diturunkan secara bermakna hingga 53,41%, 24,65%, dan 63,59% masing-masing pada kontol positif, PI, dan PII (p<0,05). Kadar trigliserida plasma secara bermakna pada kontrol positif sebanyak 56%, PI sebanyak 43,3%, dan PII sebanyak 52% (p<0,05). Kadar HDL plasma hanya menunjukkan peningkatan yang bermakna pada kontrol positif sebesar 49,9%, PI dan PII sebesar 21,33%, dan 26,1% (p<0,05). Penelitan ini menyimpulkan bahwa terapi isolat andrografolid memperpaiki profil lipid plasma tikus jantan. Kata kunci : diet aterogenik, andrografolid, profil lipid xv

16 xvi ABSTRACT Andrographis paniculata (Burm.f) Ness is a plant that has been used by the people to treat many diseases include lowering cholesterol blood levels. The aim of this study the lipid profile lowering activity total cholesterol, triglycerides, LDL and increasing HDL from andrographolide isolates as an anti-atherosclerosis in wistar strain albino male rats (Rattus norvegicus, L.). This study includes several stages : extraction, purification of extracts, andrographolide isolation, measurement of andrographolide concentration, atherosclerotic induction in animals tests and then effect to given andrographolid isolates to lipid profile. Test is done by dividing the rats into 5 groups : normal controls, negative controls (CMC Na 0.1%), positive controls (atorvastatin 7.2 mg/kgbw), treatment I (andrographolide 6 mg/kgbw) and treatment II (andrographolide 18 mg/kgbw). Lipid profile was measured on day 45 for pre test and 60 for post test by colorimetric enzymatic CHOP and GOP-PAP test. Data was analyzed by one-way ANOVA statistical method with 95% confidence level followed by Post Hoc tests. Atorvastatin and andrographolide isolates therapy significantly reduced plasma total cholesterol level of control positive by 24,65%, P1 by 23,52%, PII by 53 % (P<0,05). Plasma LDL level could be significantly reduced plasma of 53,41%, 24,65%, and 63,59% in conrol positive, PI, and PII repecively (P<0,05). Plasma trigliseride level of control positive by 56%, P1 by 43,3%, PII by 52 % (P<0,05). Plasma HDL level only showed significant increase in control positive by 49,9%, P1 and PII by 21,33% and 26,1 % (P<0,05). This study concluded that andrographolide isolates therapy improved plasma lipid profile level in rat (P<0,05). Keywords: atherogenic diet, andrographolide, lipid profil xvi

17 1