Histologi Jaringan Kulit Mencit (Mus musculus) pada Evaluasi In Vivo Antikanker Ekstrak Spons Aaptos suberitoides

Transkripsi

1 Histologi Jaringan Kulit Mencit (Mus musculus) pada Evaluasi In Vivo Antikanker Ekstrak Spons Aaptos suberitoides Oleh : Wijayanti Pujitono Dosen Pembimbing: Awik Puji Dyah Nurhayati S.si, M.si Dewi Hidayati S.si, M.si 20 Mei 2010

2 Bab 1. Pendahuluan Latar Belakang Habitat sponge di daerah ekstrim Struktur sponge memiliki kanal Rentan terkena polutan organik Mudah terinfeksi bakteri Spons memiliki Senyawa Metabolit Sekunder Senyawa Anti Kanker

3 Pengujian Aktivitas Senyawa Antikanker In vitro In vivo Pengamatan secara histologis Kulit regenerasi cepat Jaringan kulit dan subkutan Sub kutan sel embrional

4 BAB III METODOLOGI

5 24 ekor mencit dikelompokkan dalam 6 kelompok Diinduksi dengan benzo (a)pyren Dilakukan pengambilan Jaringan kanker Ditunggu selama 7 hari Diberi terapi obat dan ekstrak spons selama 15 hari. Dibuat preparat Histologi jaringan kanker Kulit mencit Dilakukan pengamatan Histologis kerusakan Jaringan kulit. Dilakukan analisa statistik Dengan metode Kruskal Wallis dan Uji perbandingan berganda Dihitung total skor dari Pengamatan kerusakan jaringan

6 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

7 Pengamatan pada Mencit Setelah Induksi Benzo(a)Pyren Gejala makroskopis kanker timbul benjolan di bagian kepala, punggung dan tengkuk. 2 1 Keterangan: 1. Nodul pada Mencit Penderita Kanker. 2. Mencit Sehat

8 Pengamatan pada Mencit Setelah Terapi Fibrosarkoma ditemukan pada kelompok II (CMC Na), IV (ekstrak spons 500 mg/kg BB), V (ekstrak spons 1000 mg/kg BB) dan VI (konsentrasi ekstrak spons 1500 mg/kg BB). Karakter fibrosarkoma Susunan dan bentuk sel yang tidak teratur. Nekrosis. Sel mitosis. Massa sel kanker yang berproliferasi sehingga terjadi penebalan lapisan dermis. Sel berukuran besar dengan banyak inti sel di dalamnya (multinucleated giant cell). (Steele, 2001)

9 Fibrosarkoma Berdasarkan literatur Kanno et al, 2009 Berdasarkan pengamatan

10 Karakteristik Fibrosarkoma Nekrosis Mitosis Polimorfisme inti sel Multinucleated giant cell

11 Kelompok 1 Kelompok 2 Kelompok 3 E E E D D D E E E D D D Kelompok 4 Kelompok 5 Kelompok 6

12 Pengaruh Ekstrak Spons Terhadap Nekrosis Jaringan Nekrosis merupakan salah satu karakter dari kanker yang dapat digunakan sebagai salah satu parameter dalam penentuan keganasan kanker (Couto et al, 2002). Nekrosis ditemukan pada kelompok kelompok II (CMC Na), IV (ekstrak spons 500 mg/kg BB), V (ekstrak spons 1000 mg/kg BB) dan VI (konsentrasi ekstrak spons 1500 mg/kg BB). Pada kelompok I dan sebagian besar kelompok III tidak ditemukan adanya nekrosis.

13 Kelompok I 0% Kelompok II 60% Kelompok III 20% Kelompok IV 60% Kelompok V 60% Kelompok VI 30%

14 Presentase Nekrosis pada Tiap Perlakuan Presentase Nekrosis Kelompok Perlakuan ulangan 1 ulangan 2 ulangan 3 ulangan 4

15 Pengaruh Ekstrak Spons Terhadap Mitotis Sel Kanker Gambaran sel mitosis juga merupakan salah satu parameter yang digunakan dalam penentuan keganasan sel kenker (Couto et al, 2002). Sel mitosis ditemukan pada kelompok kelompok II (CMC Na), IV (ekstrak spons 500 mg/kg BB), V (ekstrak spons 1000 mg/kg BB) dan VI (konsentrasi ekstrak spons 1500 mg/kg BB). Jumlah sel mitosis yang ditemukan adalah 3-4 sel mitosis pada 10 lapang pandang. Kelompok terapi ekstrak spons masih menunjukkan karakter fibrosarkoma yaitu laju mitosis yang tinggi yaitu 3 atau lebih jumlah sel mitosis pada 10 lapang pandang perbesaran 400x (Jimenez et al, 2009).

16 Kelompok I Kelompok II Kelompok III Kelompok IV Kelompok V Kelompok VI

17 Jumlah Sel Mitosis pada Tiap Perlakuan 5 Jumlah Sel Mitosis ulangan 1 ulangan 2 ulangan 3 ulangan 4 Kelompok Perlakuan Kelompok terapi ekstrak spons masih menunjukkan karakter fibrosarkoma yaitu laju mitosis yang tinggi (3 sel mitosis pada 10 lapang pandang perbesaran 400x) (Jimenez et al, 2009).

18 Pengaruh Ekstrak Spons Terhadap Polimorfisme Inti Sel Bentuk inti sel yang tidak beraturan ini merupakan salah satu karakter yang ditemukan pada fibrosarkoma (Steele, 2001). Polimorfisme inti sel ditemukan pada kelompok kelompok II (CMC Na), IV (ekstrak spons 500 mg/kg BB), V (ekstrak spons 1000 mg/kg BB) dan VI (konsentrasi ekstrak spons 1500 mg/kg BB).

19 Kelompok I 0% Kelompok II 100% Kelompok III 0% Kelompok IV 100% Kelompok V 100% Kelompok VI 100%

20 Presentase Polimorfisme Inti Sel pada Tiap Perlakuan Presentase Polimorfisme Inti Sel Series1 Series2 Series3 Series4 Kelompok Perlakuan Kelompok terapi ekstrak spons masih menampakkan karakter fibrosarkoma yaitu bentuk inti sel yang tidak beraturan (Jimenez et al, 2009).

21 Hasil Analisa Statisitik dengan Metode Kruskal Wallis Nilai H Hitung yang didapatkan yaitu 13, 68 dibandingkan dengan nilai H tabel yaitu 11, 070. Nilai H hitung > H tabel ( 13,68 > 11, 070) tolak H0 Terdapat perbedaan hambatan pertumbuhan kanker kulit mencit pada kelompok perlakuan. Dilanjutkan ke uji Z (uji perbandingan berganda) untuk mengetahui kelompok manakah yang berbeda secara signifikan dalam hal pertumbuhan kanker

22 Uji Perbandingan Berganda Berdasarkan penghitungan didapatkan nilai Z 11,65. Nilai Z yang didapatkan dibandingkan dengan selisih rata-rata rank dengan ketentuan: Ri Rj > 11, 65 yang berarti apabila nilai Ri Rj lebih besar daripada 11, 65 maka berarti kerusakan jaringan akibat kanker pada kelompok i dan j berbeda secara signifikan.

23 kelompok Rata-rata rank Selisih Rata-rata Rank R1 R2 R3 R4 R5 R6 Kelompok I 4,5 R1-15 1,125 8,5 15,5 12 Kelompok II 19,5 R2-13,87 5 6,5 0,5 3 Kelompok III Kelompok IV Kelompok V Kelompok VI 5,625 R3-7,375 13,38 10,9 13 R4-3 3,5 19 R5-3,5 16,5 R6 -

24 Nilai selisih rata-rata rank yang lebih besar daripada nilai Z (11, 65) adalah Selisih antara rata-rata rank kelompok I (tanpa perlakuan) dan kelompok II (CMC Na). Kelompok I dengan kelompok V (konsentrasi ekstrak 1000 mg/kg BB). Kelompok II (CMC Na) dan kelompok III (Cyclophospamide). Kelompok III (Cyclophospamide) dan kelompok V (konsentrasi ekstrak 1000 mg/kg BB). Hal ini berarti terdapat perbedaan penghambatan pertumbuhan kanker yang signifikan antara kelompok I dan II, kelompok I dan V, kelompok II dan III serta kelompok III dan V.

25 Penghambatan pertumbuhan kanker pada ketiga kelompok perlakuan terapi ekstrak spons tidak berbeda secara signifikan dengan kelompok perlakuan CMC Na. Hal ini berarti ekstrak spons tersebut tidak memiliki aktivitas antikanker dalam menghambat pertumbuhan kanker fibrosarkoma. Karena pada ketiga kelompok terapi ekstrak spons tersebut, kerusakannya relatif sama dengan kelompok CMC Na yang tidak diberi pengobatan.

26 Faktor yang Mempengaruhi Tidak Efektifnya Ekstrak Spons dalam Menghambat Pertumbuhan Kanker Ekstrak spons yang digunakan bukan merupakan ekstrak murni tetapi masih berupa ekstrak kasar yang terdiri atas campuran berbagai macam senyawa organic yang terdapat pada spons. Fraksi-fraksi yang terdapat di dalam ekstrak spons belum dipisahkan satu dengan yang lain sehingga ekstrak spons masih didominasi senyawa organik non alkaloid. Pada umumnya, senyawa yang sudah dalam bentuk murni (pure compound) akan memiliki aktivitas biologi yang lebih kuat dengan catatan selama proses pemurnian, senyawa aktif tidak hilang atau mengalami kerusakan (Nursid et al, 2006).

27 Pemberian obat secara oral Sepanjang jalur yang dilewati obat untuk sampai ke jaringan, akan terjadi beberapa mekanisme yang menyebabkan obat menjadi berkurang kereaktifannya. Beberapa mekanisme tersebut antara lain terurai atau terdegradasinya sejumlah konsentrasi obat oleh cairan lambung. Degradasi tersebut menyebabkan konsentrasi obat yang mencapai aliran darah menjadi jauh berkurang (Sanjoyo, 2008).

28 Mekanisme biotransformasi Mengubah obat menjadi komponen yang bersifat polar sehingga pada akhirnya akan mudah dikeluarkan dari dalam tubuh melalui feses atau keringat. Proses biotransformasi yang terjadi di dalam hati dilakukan oleh enzim sitokrom P450. Pengubahan obat menjadi bentuk yang lebih polar tersebut akan mempengaruhi bioavalibilitas obat di dalam darah sehingga efek obat akan menjadi berkurang. Biotransfomasi juga akan menghasilkan metabolik yang berkurang toksisitas dan kereaktifannya.

29 BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

30 KESIMPULAN Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, didapatkan kesimpulan sebagai berikut: Presentase nekrosis pada kelompok terapi ekstrak spons (kelompok III, IV, dan V ) sama besar dengan kelompok II yaitu antara % pada tiap lapang pandang yang diamati. Sedangkan pada kelompok III dan kelompok 1 tidak ditemukan adanya nekrosis. Jumlah sel mitosis pada kelompok II dan kelompok terapi ekstrak spons (kelompok III, IV, dan V ) adalah 3-4 sel pada 10 lapang pandang dengan perbesaran 400x. Sedangkan pada kelompok III dan kelompok I tidak ditemukan adanya sel mitosis. Presentase polimorfisme inti sel pada kelompok II, dan dan kelompok terapi ekstrak spons (kelompok III, IV, dan V ) adalah sebesar 100%. Sedangkan pada kelompok III dan kelompok I tidak ditemukan adanya polimorfisme inti sel. Berdasarkan uji statistik dengan metode Kruskal Wallis dan Uji Perbandingan Berganda didapatkan kesimpulan bahwa ekstrak etanol spons Aaptos suberotoides pada konsentrasi 500 mg/kg BB, 1000 mg/kg BB dan 1500 mg/kg BB tidak memiliki aktivitas terhadap sel kanker kulit mencit yang diinduksi dengan benzo(a)pyren.

31 SARAN Ekstrak spons Aaptos suberitoides yang digunakan untuk terapi perlu dimurnikan terlebih dahulu menjadi bentuk pure compound sehingga memiliki aktivitas biologi yang lebih tinggi. Selain itu, perlu dilakukan evaluasi terhadap konsentrasi ekstrak yang diberikan.

32 TERIMA KASIH