OPTIMASI REAKSI AMIDASI ENZIMATIS DIETANOLAMIDA MENGGUNAKAN Rhizomucor Meihei

Transkripsi

1 OPTIMASI REAKSI AMIDASI ENZIMATIS DIETANOLAMIDA MENGGUNAKAN Rhizomucor Meihei Eka Kurniasih * dan Tjahjono Herawan 2 Jurusan Teknik Kimia Politeknik Negeri Lhokseumawe Jl. Banda Aceh-Medan km. 28 Buketrata-Lhokseumawe * echakurniasih@yahoo.com Abstrak Surfaktan adalah senyawa yang memiliki dua gugus yaitu hidrofobik (lipofilik) dan hidrofilik (lipopobik) dalam satu molekul. Salah satu jenis surfaktan adalah dietanolamida yang dapat disintesa dari asam lemak sawit dengan senyawa dietanolamina melalui reaksi amidasi menggunakan aktifitas enzim lipase. Jenis enzim lipase yang dipilih adalah Rhizomucor meihei karena memiliki aktifitas yang baik terhadap asam lemak rantai sedang hingga panjang (C 2 -C 8 ). Optimasi sintesa dietanolamida dilakukan terhadap tiga variabel yang mempengaruhi reaksi amidasi. Variabel yang digunakan dalam metode ini adalah konsentrasi Rhizomucor meihei (b/b), rasio mol dietanolamina dan temperatur reaksi. Hasil penelitian memberikan respons optimal pada konsentrasi Rhizomucor meihei % (b/b), rasio mol dietanolamina terhadap asam lemak (:) dan temperatur 5 o C dengan konversi 8,83%. Kata kunci : Amidasi, Enzim, Lipase, Optimasi, Rhizomucor meihei Pendahuluan Dietanolamida adalah golongan senyawa alkanolamida yang diperoleh melalui reaksi amidasi. Sintesa alkanolamida secara kimiawi konvensional dilangsungkan dengan menggunakan katalis basa pada temperatur 2 o C-5 o C. Pada akhir produk akan diperoleh kandungan sabun amina yang akan menaikkan ph produk, sehingga dibutuhkan tahapan purifikasi lebih lanjut. Oleh sebab itu dikembangkan proses enzimatis untuk menghasilkan dietanolamida dari asam lemak dan minyak nabati dengan menggunakan biokatalisator. Biokatalisator yang digunakan dapat berupa enzim lipase. Enzim lipase yang digunakan harus memiliki sifat spesifik pada substrat asam lemak sawit. Sifat spesifik adalah kemampuan suatu enzim untuk beraktifitas pada satu jenis substrat tertentu []. Rhizomucor meihei adalah satu dari banyak lipase yang biasa digunakan dalam reaksi esterifikasi asam lemak untuk produksi metil ester asam lemak (FAME), kosmetik (palm oil emulsifier) yang mengandung asam palmitat yang tinggi, industri makanan (cocoa butter), industri minyak nabati seperti minyak jagung, minyak bunga matahari, minyak zaitun [2]. Penggunaan reaksi enzimatis pada asam lemak dan minyak nabati memiliki beberapa keuntungan yaitu (i) sifat spesifik lipase yang tinggi sehingga akan dihasilkan produk yang murni (ii) penggunaan suhu dan tekanan yang relatif rendah, (iii) biaya pengelolaan limbah yang relatif lebih murah dan (iv) produk yang dihasilkan lebih aman dibandingkan dengan proses kimia konvensional [3]. 9

2 Dietanolamida yang diperoleh dari asam lemak (fatty acid) sering dikenal sebagai fatty amida dan merupakan surfaktan non ionik yang banyak digunakan sebagai bahan pembuatan shampoo, busa mandi (shower foam), pemantap lateks, zat penghambat karat, produk pembersih peralatan rumah tangga dan deterjen cair [4]. Surfaktan adalah senyawa yang memiliki dua gugus yaitu hidrofobik (lipofilik) dan hidrofilik (lipopobik) dalam satu molekul, sehingga disebut sebagai senyawa amphilic [5]. Dietanolamida pertama kali diperoleh dengan mereaksikan dua mol dietanolamina dengan satu mol asam lemak. Senyawa ini diberi nama Kritchevsky amida sesuai dengan nama penemunya. Bahan baku yang digunakan dalam produksi dietanolamida dapat berupa asam lemak, trigliserida atau metil ester. Dietanolamida biasanya diproduksi secara kimia konvensional pada temperatur 5 o C selama 6 jam [6]. Dari hasil reaksi akan dihasilkan produk dietanolamida dan hasil samping berupa sabun amina. Kehadiran sabun amina ini, tentu saja akan menaikkan ph produk. Pada tahap selanjutnya akan dilakukan pemurnian produk untuk memisahkan produk utama dengan sabun amina. Dietanolamida termasuk dalam surfaktan non ionik, yang memiliki kemampuan untuk menurunkan tegangan permukaan cairan, atau antar permukaan dua cairan yang tidak saling bercampur. Aktifitas suatu surfaktan terjadi karena sifat ganda dari molekulnya, yang terdiri dari bagian hidrofil (suka air) dan lipofil (suka lemak). Bagian polar (hidrofil) molekul surfaktan dapat bermuatan positif (surfaktan kationik), negatif (surfaktan anionik), memiliki kedua muatan positif dan negatif (surfaktan amfoterik) ataupun netral (surfaktan non ionik) sedangkan bagian lipofilnya merupakan rantai alkil [7] Proses produksi dietanolamida melalui reaksi amidasi enzimatis, melibatkan dietanolamina akan menghasilkan senyawa alkanolamida yang memiliki tingkat kepolaran yang lebih baik dibandingkan alkanolamina lainnya. Hal ini disebabkan oleh adanya dua gugus hidroksil dalam molekul alkonolamida yang dihasilkan. Berikut adalah reaksi pembentukan dietanolamida O R-C-OH + H-N-CH 2 CH 2 OH CH 2 CH 2 OH Enzim Lipase O R-C-N-CH 2 CH 2 OH + H 2 O CH 2 CH 2 OH ALSD Dietanolamina Dietanolamida Air Metode Penelitian Metode Response Surface Methodology (RSM) digunakan untuk mendesain percobaan dalam menentukan kondisi optimum proses amidasi asam lemak sawit distilat menjadi dietanolamida dengan menggunakan tiga faktor sebagai variabel bebas, yaitu :. Konsentrasi biokatalis (Rhizomucor meihei) 2. Rasio mol dietanolamina terhadap asam lemak sawit distilat (ALSD) 3. Temperatur reaksi 92

3 Percobaan dirancang mengikuti bentuk Central Composite Design (CCD). Titik pusat (center point) dalam rancangan percobaan CCD merupakan konversi terbaik dari masing-masing variabel yang diperoleh melalui percobaan pendahuluan [8] Titik pusat tersebut akan disusun sebagi level terkode percobaan yang disajikan pada Tabel dan Tabel 2. Tabel. Perlakuan Terkode Untuk Amidasi ALSD Perlakuan Perlakuan Terkode -,682 -,682 Konsentrasi Rhizomucor meihei (b/b) 6, ,36 Rasio Mol Dietanolamina/ALSD 4, ,4 Temperatur reaksi ( o C) Hasil Penelitian Penelitian utama dilakukan untuk mengetahui konversi optimum yang dapat diperoleh dari amidasi asam lemak sawit distilat menggunakan lipase Rhizomucor meihei. Penelitian utama dilakukan dengan menggunakan aturan rancangan percobaan central composite design (CCD) dengan tiga variabel bebas dan dua level, yaitu rendah (low) dan tinggi (high), sehingga diperoleh 2 run percobaan optimasi. Penelitian ini memilih CCD sebagai bentuk desain eksperimen disebabkan oleh CCD memberikan rancangan yang sistematik untuk memperoleh interaksi antar variabel. Dari rancangan CCD ini akan diperoleh interaksi dari ketiga variabel yaitu konsentrasi Rhizomucor meihei (X ), rasio mol dietanolamina terhadap asam lemak sawit distilat (X 2 ) dan temperatur (X 3 ) Berikut adalah hasil percobaan optimasi yang telah dilakukan. Tabel 2. Hasil Percobaan Optimasi No Konsentrasi R.meihei (X ) Rasio Mol Dietanolamina/ALSD (X 2 ) Temperatur (X 3 ) Konversi (%) Aktual Kode Aktual Kode Aktual Kode , , , , , , , , ,64 -, ,5567 3,36, ,968 4,96 -, , ,4, , ,682 76, ,682 74, , , , , , ,

4 Analisa Pengaruh Variabel Pengaruh signifikansi variabel-variabel yang digunakan dapat diobservasi dari hasil analisa statistika untuk signifikansi pengaruh dari ketiga variabel Tabel 3. Hasil Statistika Response Surface Methodology (RSM) Parameter Hasil Analisa Statistika Koefisien Nilai p Konstanta 8,5666, Konsentrasi Rhizomucor meihei (X ),463,22 Rasio mol ALSD/Dietanolamina (X 2 ),94, Temperatur (X 3 ),6326,65 Konsentrasi Rizhomucor meihei (X *X ) -,76,26 Rasio mol ALSD/Dietanolamina (X 2 *X 2 ) -,438,6 Temperatur (X 3 *X 3 ) -,6358,3 X *X 2 -,952,5 X *X 3,746,895 X 2 *X 3 -,983,3 R 2,867 Nilai p Pemodelan,3 Keterangan : * Faktor signifikansi (p<,5) Berdasarkan hasil analisa statistika diatas, dapat diketahui bahwa konsentrasi biokatalis (Rhizomucor meihei) memberikan pengruh yang positif sebesar,463 dan signifikan terhadap pembentukan produk. Tetapi kuadrat variabel konsentrasi biokatalis Rhizomucor meihei dan interaksinya dengan rasio mol dietanolamina memberikan efek negatif sebesar -,76 dan -,952 meskipun tidak signifikan. Begitu pula interaksi konsentrasi Rhizomucor meihei dengan temperatur yang memberikan efek positif,746 dengan nilai p,895. Hal ini menunjukkan adanya batasan dalam penggunaan Rhizomucor meihei, rasio mol dietanolamina dan temperatur yang dilibatkan pada reaksi. Rasio mol dietanolamina terhadap ALSD turut memberikan pengaruh yang signifikan dan positif,94. Tetapi interaksinya dengan temperatur (X 2. X 3 ) memberikan efek negatif yang tidak signifikan. Variabel temperatur, turut memberikan efek positif yang relatif kecil dibandingkan variabel lainnya dan tidak signifikan sebesar,6326. Interaksi temperatur dengan variabel reaksi lainnya juga tidak signifikan. Ini menunjukkan bahwa laju reaksi enzimatis antara asam lemak sawit distilat dengan dietanolamina banyak dipengaruhi oleh besarnya konsentrasi Rhizomucor meihei dan rasio mol dietanolamina terhadap asam lemak sawit distilat, sedangkan peningkatan temperatur memberikan pengaruh yang tidak signifikan terhadap laju pembentukan produk dietanolamida. Namun penggunaan variabel konsentrasi biokatalis dan rasio mol dietanolamina terhadap ALSD juga memiliki batasan tertentu, sebab dalam reaksi enzimatis dikenal adanya hambatan oleh substrat. Selanjutnya, model persamaan yang dapat menunjukkan hubungan variabel reaksi dan interaksinya terhadap % konversi dietanolamida dengan nilai toleransi galat sebesar p > T =,5 diperoleh sebagai berikut : Y = 8,5666 +,463X +,94X 2 +,6326X 3,76X 2,438X 2 2,6358X 3 2 Model orde dua yang diperoleh akan diplot sebagai respon permukaan dan kontur permukaan tiga dimensi untuk mengekspresikan respon % konversi dari percobaan. 94

5 Analisa Respon Variabel Respon Konsentrasi Rhizomucor meihei Terhadap Rasio Mol Dietanolamina/ALSD Interaksi dari tiga variabel percobaan dalam desain central composite design (CCD) dianalisa melalui respon permukaan (surface response) dan countur. Respon permukaan dan grafik kontur tiga dimensi untuk pengaruh konsentrasi Rhizomucor meihei terhadap rasio mol dietanolamina/alsd dapat diplot dengan menggunakan Rhizomucor meihei sebagai sumbu y dan rasio mol dietanolamina terhadap ALSD sebagai sumbu x dan respon konversi pada sumbu z dengan temperatur reaksi tetap. Dari respon tersebut akan diketahui level variabel yang dapat digunakan untuk mendapatkan konversi dietanolamida optimum. Respon permukaan menunjukkan bahwa konversi dietanolamida meningkat seiring dengan peningkatan konsentrasi biokatalis dan rasio mol dietanolamina hingga batasan tertentu. 8 Konversi (%) Rasio Mol Dietanolamina/ALSD Kons R.meihei (b/b) Gambar. Respon Permukaan dari Plot Konsentrasi Rhizomucor meihei Terhadap Rasio Mol Dietanolamina/ALSD Plot permukaan ini mengekspresikan bahwa peningkatan konversi dietanolamida lebih tajam pada peningkatan rasio mol dietanolamina dibandingkan dengan bertambahnya konsentrasi Rhizomucor meihei. Bertambahnya rasio dietanolamina akan menyebabkan peningkatan konsentrasi campuran. Pada konsentrasi substrat yang tinggi peluang terjadinya tumbukan antar partikel semakin besar, sehingga kemungkinan terjadinya reaksi amidasi semakin besar. Respon Temperatur Terhadap Konsentrasi Biokatalis Respon berikut menunjukkan ekspresi respon permukaan % konversi dietanolamida pada rasio mol dietanolamina terhadap asam lemak sawit distilat tetap. Terlihat bahwa peningkatan konsentrasi Rhizomucor meihei sangat mempengaruhi perolehan % konversi, sedangkan temperatur pada level tertentu. Ekspresi permukaan kurva menunjukkan bahwa kondisi optimum reaksi terhadap temperatur terdapat pada pusat lengkungan kurva. Hal ini memungkinkan penggunaan temperatur yang moderat yaitu 5 o C 55 o C pada reaksi untuk perolehan produk optimum yang diwujudkan oleh pengaruh positif sebesar,6326. Untuk penggunaan konsentrasi biokatalis yang tinggi pada temperatur yang moderat dapat meningkatkan perolehan produk, yang diekspresikan dari interaksi bernilai positif dari variabel konsentrasi Rhizomucor meihei 95

6 dan temperatur (X.X 3 ). Tetapi pengaruh yang diberikan oleh biokatalis lebih besar dari pada variabel temperatur. 8 Konversi (%) Temperatur (oc) Kons R.meihei (b/b) Gambar 2. Respon Permukaan dari Plot Konsentrasi Rhizomucor meihei Terhadap Temperatur ResponTemperatur Terhadap Rasio Mol ALSD/Dietanolamina Respon permukaan menggambarkan, bahwa pada temperatur rendah (pada level 2), perolehan % konversi dietanolamida meningkat seiring dengan tingginya penggunaan rasio mol dietanolamida/alsd pada reaksi. Hal ini diwujudkan oleh analisa statistik yang memberikan nilai positif pada variabel rasio mol dietanolamina dan temperatur. Tetapi pengaruh yang signifikan dan tajam lebih diberikan oleh variabel rasio mol dibandingkan dengan temperatur. Hal ini juga ditunjukkan oleh interaksi antara dua variabel tersebut (X 2.X 3 ) yang memberikan respon negatif tetapi tidak signifikan. Grafik tiga dimensi untuk pengaruh temperatur terhadap rasio mol ini, memperlihatkan bahwa perolehan produk terbesar berada pada kondisi temperatur pada titik pusat (center point) 8 Konversi (%) Rasio Mol Dietanolamina/ALSD Temperatur (oc) Gambar 3. Respon Permukaan dari Plot Rasio Mol Dietanolamina/ALSD Terhadap Temperatur 96

7 Gambar 4. Hasil Spektrofotometer Infra Red Pada Produk Optimum Kesimpulan Kesimpulan yang dapat diambil antara lain::. Kondisi optimum reaksi diperoleh pada konsentrasi Rhizomucor meihei % (b/b), rasio mol dietanolamina/alsd : dan temperatur 5 o C dengan konversi reaksi sebesar 8,83 %. 2. Pada percobaan optimasi, pengaruh yang signifikan diberikan oleh peningkatan rasio mol dietanolamina/alsd, diikuti oleh peningkatan konsentrasi Rhizomucor meihei. Sedangkan kenaikan temperatur tidak memberikan pengaruh yang signifikan terhadap konversi reaksi Referensi [] Poedjiadi, A, Dasar-Dasar Biokimia. Penerbit Universitas Indonesia [2] Hasan, F.; A. Ali Shah, dan A. Hameed. 25. Industrial Application of Microbial Lipase. Microbiology Research Laboratory, Pakistan [3] Elisabeth, J.; Jatmika, A.; E.Nainggolan, dan D.M Malau Preparasi Mono-dan Digliserida Dari Minyak Sawit Dengan Gliserolisis Enzimatik. Jurnal Penelitian Kelapa Sawit 6(): [4] Rahman, A.; M.B. Yap.; C.L. K.Dzulkefly, dan R.N.Z. Abdul Rahman. 23. Synthesis of Palm Kernel Oil Alkanolamide Using Lipase. Journal of Oleo Science (JOS) Vol 52 No.2, [5] Gautam, K.K. dan Tyagi, V.K. 25. Microbial Surfactant. Journal of Oleo Science (JOS) Vol 55 No.4, [6] Herawan, T.; E. Nuryanto, dan P. Guritno Penggunaan Asam Lemak Sawit Distilat Sebagai Bahan Baku Superpalmamida. Jurnal Penelitian Kelapa Sawit 7() : [7] Genaro, R.A. 99. Rhemington s Pharmaceutical Science. Edisi 8. Macle Printing Company, Easton, Pennsilvania, USA [8] Montgomery, Douglas C Design And Analysis Of Experiments. Edition-5. John wiley And Son Inc. 97