PENGARUH VITAMIN E TERHADAP AKTIFITAS ENZIM GLUTATION PEROKSIDASE (GSH-Px) PADA TIKUS STRAIN WISTAR JANTAN YANG TERPAPAR KARBON TETRAKLORIDA (CCl4)

Transkripsi

1 PENGARUH VITAMIN E TERHADAP AKTIFITAS ENZIM GLUTATION PEROKSIDASE (GSH-Px) PADA TIKUS STRAIN WISTAR JANTAN YANG TERPAPAR KARBON TETRAKLORIDA (CCl4) Titin Ifayanti 1 Akademi Kebidanan Alifah Padang titin.titinifayanti@yahoo.com ABSTRAK Radikal bebas merupakan penyebab timbulnya kerusakan sel, yang mendasari munculnya berbagai penyakit degeneratif. Kelebihan radikal bebas dapat menyebabkan stress oksidatif. Karbontetraklorida termasuk bahan kimia yang dimetabolisme di hepar, hasil metabolismenya bersifat radikal bebas. Antisipasi kerusakan pada hepar dibutuhkan antioksidan. Untuk itu dibutuhkan antioksidan dari luar tubuh dalam meningkatkan pertahanan sel, sebagai penetralisir radikal bebas, seperti vitamin E. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh vitamin E terhadap aktifitas enzim Glutathion Peroksidase pada tikus yang terpapar karbontetraklorida. Penelitian dilaksanakan secara eksperimental dengan desain post test only control group design. Sampel penelitian terdiri dari 15 ekor tikus strain wistar jantan, yang dibagi menjadi 3 kelompok, yaitu kelompok kontrol negatif, kontrol positif (CCl 4), perlakuan I (CCl 4 dan Vitamin E). CCl 4 diberikan dengan dosis tunggal 0,2 mg/kgbb, 24 jam berikutnya diberikan Vitamin E 0,8 ml/kgbb, diberikan secara oral selama 14 hari. Data dianalisis dengan tingkat kepercayaan 95%. Hasil penelitian menunjukkan rerata aktifitas enzim glutathione peroksidase (nmol/ml) adalah kelompok KN ± 5.5 nmol/ml, KP 96 ± 7.4nmol/ml, P ± 5.4 nmol/ml, P ± 3.2 nmol/ml, P3 156 ± 4.2 nmol/ml. Secara statistic didapatkan perbedaan rerata yang signifikan aktifitas glutahion peroksidase antar kelompok (p 0,05). Dari hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa Vitamin E dapat meningkatkan aktifitas Glutathion Peroksidase pada tikus yang terpapar karbontetraklorida. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang pengaruh Vitamin E dengan melihat jaringan yang ada pada hepar. Kata kunci: Karbon Tetraklorida, Glutathion Peroksidase, Vitamin E. ABSTRACT The free radicals are the cause of cell damage that underlies the emergence of various degenarative diseases. Having an abundant amount of free radicals can cause oxidative stress. Carbon tetrachloride, including chemicals that are metabolized in the liver, its metabolism result is free radical. Its needed to anticipate the damage to the liver. So that, it is needed to have antioxidants from outside to increase the cells defense as neutralizer free radicals like vitamin E. The purpose of this study was to determine the effect of vitamin E on glutathione peroxidase enzyme activity rats exposed to carbon tetrachloride. The research was conducted experimentally with posttest only control group design. The study sample consisted of 15 male wistar strain, divided into 3 groups: negative control, positive control (CCl 4), treatment (CCl 4 and Vitamin E). CCl 4 was given a single dose of 0.2 mg / kg, the next 24 hours are given 0.8 ml Vitamin E / kg, administered orally for 14 days. Data were analyzed with a confidence level of 95%. The Results of the study showed the average activity of the enzyme glutathione peroxidase was negative group ± 5.5 nmo/ml, positive group 96 ± 7.4 nmo/ml, the treatment ± 3.2nmo/ml. It is concluded that vitamin E can increase the glutathione peroxidase activity in rats exposed to carbon tetrachloride. It is need to do more research on the effect of vitamin E to see the existing network of the liver. Key word: Carbon Tetrachloride, Glutathione Peroxidase, Vitamin E 27

2 E-ISSN : X Jurnal Ilmu Kesehatan (JIK) Oktober 2017 I. Pendahuluan Radikal bebas merupakan salah satu penyebab timbulnya berbagai penyakit degeneratif, seperti kardiovaskuler, tekanan darah tinggi, stroke, sirosis hati, katarak, diabetes mellitus dan kanker.radikal bebas dapat dihasilkan dari dalam tubuh dan luar tubuh.. Radikal bebas dapat merusak makromolekul seperti merusak lipid membran sel, DNA, dan protein yang menyebabkan stres oksidatif sel (Valko, 2006). Namun dalam beberapa keadaan, dimana terdapat peningkatan radikal bebas yang disebabkan oleh pemicu, maka dapat terjadi dampak negatif pada sel hepar (Cochrane, 1991). Bahan kimia yang telah dikenal dapat meningkatkan radikal bebas adalah Karbontetraklorida (CCl₄). Namun dalam beberapa keadaan, dimana terdapat peningkatan radikal bebas, maka dapat menjadi dampak negatif pada sel hepar (Cochrane, 1991). Penyakit hepar tergolong sebagai salah satu penyakit degeneratif yang merupakan problem Nasional di Indonesia dan negara berkembang pada umumnya. Berdasarkan laporan dari semua RSUP tipe A dan B di seluruh Indonesia, ternyata penyakit hepar menempati urutan ketiga setelah penyakit infeksi dan penyakit paru. Dan dari data Word Health Organization (WHO, 2007), penyakit hati kronik dan Sirosis Hati merupakan penyebab kematian peringkat duabelas pada tahun 2007 di Amerika Serikat dengan jumlah (1.2%). Pada tahun 2007 prevalensi Sirosis Hati di Australia sebesar 2 % dan di Jepang sebesar 2,7 % (Farrell, 2008). Karbontetraklorida (CCl₄) adalah senyawa kimia, yang dapat menyebabkan kerusakan jaringan hati dan ginjal (Ogeturk et al, 2004). Sifat toksit CCl₄ telah terbukti dari beberapa penelitian, bahwa dosis sekecil apapun dapat menimbulkan efek pada jaringan hati. Kerusakan hati akibat paparan CCl₄ tergantung pada dosis yang diberikan (Halliwell and Gutteridge, 2004). Karbontetraklorida diproduksi dalam jumlah banyak misalnya dalam pembuatan cairan refrigator/pendingin, propellants untuk kaleng aerosol, peptisida, cairan pembersih noda dan digunakan untuk pemadaman kebakaran (ATSDR, 2005). Efek hepatotoksik CCl₄ tergantung pada aktifitas metabolik CCl₄ yang berlangsung dalam retikulum endoplasma sel hati melalui interaksi dengan transport elektron NADPH sitokrom P450. Berdasarkan penelitian Dahiru 2003, bahwa pemberian dosis CCL 4 dengan dosis tunggal 1.0 mg/kg berat badan dapat menyebabkan peningkatan aktifitas enzim SGPT, SGOT dan total protein pada hati tikus percobaan. Dalam menghadapi serangan radikal bebas, tubuh memiliki mekanisme perlindungan melalui sistem antioksidan tubuh. Secara umum antioksidan dibagi menjadi dua, yaitu antioksidan enzimatis yang berasal dari dalam tubuh (endogen), yaitu enzim superoksida dismutasi (SOD), katalase, glutation peroksidase (GSH-px), dan antioksidan non enzimatis yang berasal dari luar dalam tubuh (eksogen), yaitu Vitamin C, Vitamin E, betakaroten dan senyawa flavonoid yang diperoleh dari tumbuhan (Chevion et al, 2003). Antioksidan enzimatik (endogen) seperti Glutation peroksidase (GSH-px) adalah enzim yang berfungsi mengkatabolisme hydrogen peroksida (H₂O₂). Mekanisme enzim GSH-px merupakan salah satu cara utama yang digunakan oleh tubuh untuk melindungi diri dari kerusakan oksidatif. Enzim ini mengkatalisis reduksi hidrogen peroksida dan peroksida lemak (LOOH) oleh gluthation (γglutamil-isteinsintetase) (Montgomery et al, 1991). Aktifitas glutation peroksidase dalam tubuh manusia bervariasi tergantung jaringannya. Aktifitas glutation di dalam darah berada dalam rentang 0,5-8 mili molar/l dengan konsentrasi tertinggi di hati. Sedangkan pada hati tikus normalnya mengandung 7-8 µmol GSH/g jaringan. Glutation dalam plasma hanya 0,5 % dari yang terkandung dalam darah, sedangkan dalam eritrosit mengandung 99,5%. Pada eukariot, 90% glutation terdapat di sitosol, 10 % terdapat di mitokondria dan beberapa persen berada di retikulum endoplasma (Daruningrum, 2012). Pada keadaan stress oksidatif konsentrasi glutation peroksidase akan menurun yang dapat disebabkan oleh terpakainya glutation dalam menangkal radikal bebas tersebut (Youngson, 2005). Antioksidan non enzimatis adalah antioksidan dari luar tubuh (eksogen) yang berasal dari bahan makanan misalnya Vitamin C, Vitamin E, betakaroten dan senyawa flavonoid yang diperoleh dari tumbuhan. Kekurangan salah satu komponen tersebut dapat menyebabkan terjadinya penurunan status antioksidan secara menyeluruh, sehingga perlindungan tubuh terhadap radikal bebas berkurang (Chevion et al, 2003). Antioksidan non enzimatis adalah antioksidan dari luar (eksogen) adalah Vitamin E (αtochoperol) yang merupakan vitamin yang larut di dalam lemak dan sangat potensial sebagai antioksidan.α-tochoperol melakukan pemutusan rantai dalam mencegah propagasi dari radikal bebas (Ramanathan, 2005). Vitamin E (α-tokoferol) telah banyak didokumentasikan sebagai antioksidan yang mempunyai kemampuan tinggi dalam memproteksi sel dari radikal bebas. Peran biologi utama Vitamin E adalah memutuskan rantai proses peroksidasi lipid dengan menyumbangkan satu atom hidrogendari gugus OH pada cincinnya ke radikal bebas, sehingga terbentuk radikal Vitamin E yang stabil dan tidak merusak (Almatsier, 2009). Tujuan Penelitian adalah Mengetahui Pengaruh Vitamin E terhadap Aktifitas Glutation Peroksidase (GSH-px) pada Tikus Strain Wistar yang terpapar Karbon Tetraklorida (CCl₄). 28

3 II. METODE PENELITIAN Penelitian ini dilaksanakan secara experimental dengan desain penelitian yaitu Post Test Only Control Group Design yaitu rancangan yang digunakan untuk mengukur pengaruh perlakuan pada kelompok eksperimen dengan cara membandingkan kelompok perlakuan dengan kelompok kontrol. Perlakuan yang digunakan adalah kontrol (tanpa perlakuan), tikus yang dipapar karbon tetraklorida (CCL 4), tikus yang dipapar CCL 4 dan Vitamin E. Populasi dalam penelitian ini adalah tikus putih strain wistar yang didapat dari unit pengembangan hewan penelitian (UHPH) di Fakultas Farmasi Universitas Andalas Padang, dengan pertimbangan tikus adalah mamalia coba atau sering disebut hewan laboratorium, karena sering dipakai pada penelitian biologi laboratorium. Jumlah sampel di tiap kelompok adalah 5 ekor. Penelitian ini terdiri dari 3 kelompok. Jadi jumlah sampel keseluruhan 5 x 3 = 15 ekor. Walaupun demikian sebagai cadangan untuk pengganti kemungkinan droup out sebesar %, maka dalam penelitian ini setiap kelompok dipelihara 7 ekor, sehingga jumlah total tikus sebanyak 21 ekor. Pemberian karbon tetraklorida dilakukan sebanyak 1 kali (dosis tunggal). Berdasarkan penelitian Dahiru (2003), bahwa CCl 4 diberikan dengan dosis tunggal 1.0 mg/kgbb. Pemberian Vitamin E diberikan setiap hari selama 14 hari perlakuan. Cara pemberian sama dengan pemberian CCl 4 yaitu dengan menggunakan sonde tumpul melalui tepi langit-langit sambil di dorong perlahan ke belakang sampai oesopagus, sesuai dengan dosis yang telah ditentukan. Pemeriksaan Glutathion Peroksidase dilakukan di Laboratorium Biomedik Universitas Andalas Padang. Pemeriksaan dilakukan dengan menggunakan metode elisa. Data hasil penelitian yang diperoleh dilakukan Uji Normalitas Shapiro-Wilk dan Uji Homogenitas. Apabila data tidak terdistribusi normal, dianalisa menggunakan uji Non Parametrik Kruskal Wallis Test. Dan apabila data terdistribusi normal, dilanjutkan analisa data dengan menggunakan uji ANOVA dengan derajat kepercayaan 95%. Jika didapatkan hasil yang bermakna dilanjutkan dengan uji statistik Mutiple Comparisons (Post Hoc Test) jenis Bonferroni, untuk melihat signifikansi antar kelompok (Sastroasmoro, 2010). III. III. HASIL Penelitian ini menggunakan 15 ekor tikus jantan, penelitian dimulai 21 Februari sampai dengan 12 Maret Dilakukan di Laboratorium Farmasi dan pemeriksaan serum penelitian dilakukan di Laboratorium Biomedik Fakultas Kedokteran Universitas Andalas Padang pada tanggal 29 Februari Hasil penelitian dapat dilihat pada tabel 1,2 dan 3. Sebelum data diolah lebih jauh secara statistik, dilakukan uji normalitas terlebih dahulu. Tabel 1 Uji Normalitas Aktifitas Enzim Glutathion Peroksidase (GSH-px) pada hewan uji Aktifitas Gluthation Peroksidase Rerata (nmol/ml) Std. Deviasi p Pada tabel 1 Sebelum data dianalisa, terlebih dahulu data yang ada kita lakukan uji normalitas yaitu dengan menggunakan Uji Shapiro-Wilk. Didapatkan bahwa data terdistribusi normal, dimana p = 0,46 (p> 0,05). Tabel 2 Uji Homogenitas Aktifitas Enzim Glutathion Peroksidase (GSH-px) pada hewan uji Aktifitas Gluthation Peroksidase Rerata (nmol/ml) Pada tabel 2 Sebelum data dianalisa, terlebih dahulu data yang ada juga kita lakukan uji homogenitas. Didapatkan bahwa variant data homogen, dimana p = 0,70 (p> 0,05). Tabel 3 Rerata aktifitas gluthation peroksidase tikus pada kelompok kontrol dan kelompok perlakuan setelah pemberian vitamin E Kelompok Aktifitas Gluthation peroksidase p Rerata ± SD (nmol/ml) KN ± 5.5 KP 96 ± 7.4 0,001 P ± 3.2 Pada table 3 Ditemukan bahwa setelah pemberian CCl 4 0,2 mg/200grbb terjadi penurunan rerata aktifitas gluthation peroksidase pada tikus strain jantan wistar pada kelompok positif yaitu 96 nmol/ml, dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif yang tidak diberikan CCl 4 yaitu nmol/ml. Setelah pemberian vitamin E terdapat peningkatan rerata aktifitas gluthation peroksidase nmol/ml. Secara statistik terdapat hasil yang signifikan p = (p 0,05) yang berarti terdapat pengaruh pemberian vitamin E terhadap aktifitas gluthation peroksidase. p 29

4 E-ISSN : X Jurnal Ilmu Kesehatan (JIK) Oktober 2017 Tabel 4 Hasil uji Post Hoc Test Bonferoni tarhadap rerata aktifitas glutathion peroksidase tikus pada masing-masing kelompok penelitian. Kelompok Tingkat Kebermaknaan Aktifitas GSHpx (nmol/ml) KN P KP KN * 0.001* KP 0.000* * P 0.001* 0.000* - Berdasarkan hasil uji Post Hoc Bonferoni pada tabel 4 didapatkan bahwa pada setiap kelompok perlakuan dengan vitamin E terjadi peningkatan rerata aktifitas gluthation peroksidase secara signifikan (p 0,05). IV. PEMBAHASAN Hasil penelitian yang terlihat pada tabel 5.3 menunjukkan bahwa terdapat penurunan rerata aktifitas gluthation peroksidase tikus yang dipaparkan dengan CCl 4 (KP). Terjadinya penurunan aktifitas gluthation peroksidase ini merupakan akibat pemberian karbon tetraklorida. Pemberian karbon tetraklorida pada kelompok kontrol positif dengan tujuan membuat kondisi meningkatnya radikal bebas /Reactive Oksigen Spesies (ROS). Tikus yang terpapar CCl 4 (kontrol positif) aktifitas gluthation peroksidasenya mengalami penurunan dibandingkan dengan kelompok yang tidak terpapar CCl 4 (kontrol negatif). Ketika tikus diberikan CCl 4, maka terjadi peningkatan peroksida lipid. Dalam aktivitas enzim yang normal, peningkatan konsentrasi subtrat, yaitu molekul hidrogen peroksida (H 2O 2) dapat meningkatkan aktivitas enzim. Namun pada saat sisi aktif semua enzim berikatan dengan substrat, penambahan substrat tidak dapat meningkatkan kecepatan reaksi enzim selanjutnya, sehingga terjadi penurunan aktivitas enzim GSH peroksidase. Selain itu, produk radikal bebas dapat merusak senyawa protein karena senyawa oksidan tersebut dapat mengadakan interaksi dengan asamasam amino penyusun protein. Bagian yang mudah diserang radikal bebas adalah gugus sulfidril (SH). Serangan radikal bebas pada gugus tersebut akan membentuk ikatan disulfida (-S-S-) dan menimbulkan ikatan intra dan antar molekul sehingga protein kehilangan fungsi biologis. Misalnya protein yang berperan sebagai enzim akan kehilangan aktivitasnya (Winarsi, 2007). Oleh sebab itu, aktivitas enzim GSH peroksidase yang merupakan molekul protein kompleks dapat mengalami penurunan dengan adanya pemberian CCl 4. Pada tabel 3 menunjukkan bahwa adanya peningkatan aktifitas glutathion peroksidase pada kelompok perlakuan (dengan pemberian vitamin E). Hasil analisa menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan rerata aktifitas gluthation peroksidase antara kelompok perlakuan. Hal ini ditunjukkan dengan nilai p < 0,05, yang berarti ada pengaruh pemberian vitamin E terhadap aktifitas glutathione tetraklorida. Ketidakseimbangan antara antioksidan dan radikal bebas dapat menimbulkan stress oksidatif sehingga dibutuhkan asupan antioksidan eksogen, salah satunya vitamin E. Vitamin E merupakan antioksidan larut lemak terbesar di system pertahanan antioksidan sel. Peranan besar vitamin E melindungi membran sel dari oksidasi oleh radikal bebas. Vitamin E terletak di dalam lapisan phospholipid dari membran sel, sehingga sangat efektif melindungi kerusakan lemak tak jenuh (Almatsier, 2009). Glutation peroksidase (GSHpx) adalah peroksidase yang mengandung selenium (Se) pada sisi aktifnya. Di dalam tubuh, selenium bekerja sama dengan vitamin E sebagai zat antioksidan untuk memperlambat oksidasi asam lemak tak jenuh. Dengan adanya asupan vitamin C dan E dapat membentuk kondisi yang optimal bagi aktivitas enzim GSH peroksida, sehingga meningkatkan aktivitas fungsi enzim dalam mereduksi molekul hidrogen peroksida dan menghambat kerusakan sel. Pengaruh Vitamin E terhadap aktifitas gluthation peroksidase pada tikus yang terpapa karbon tetraklorida. Pada tabel 3 menunjukkan bahwa adanya peningkatan aktifitas glutahion peroksidase pada kelompok perlakuan (dengan pemberian vitamin E). Hal ini ditunjukkan dengan nilai p < 0,05, yang berarti ada pengaruh pemberian vitamin E terhadap aktifitas glutathione peroksidase pada tikus yang terpapar karbon tetraklorida. Vitamin E juga mempunyai fungsi utama sebagai chain-breaking antioxidant. Vitamin E memberikan hydrogen dari group hidroksil ( OH) pada struktur radikal bebas, sehingga radikal bebas menjadi tidak reaktif. Vitamin E menghentikan peroksidasi lemak radikal bebas dengan memberikan electron tunggal untuk membentuk tokoferil kuinon yang stabil dan teroksidasi sempurna, oleh karena itu keberadaan vitamin E di dalam tubuh sangat diperlukan (Mark, 2000). Vitamin E merupakan pemutus rantai peroksida lemak pada membran. Selain itu, vitamin E yang larut dalam lemak merupakan antioksidan yang melindungi komponen sel serta membran sel dari oksidasi oleh radikal bebas. Dengan ini dapat disimpulkan keberadaan vitamin E di dalam tubuh sangat diperlukan, karena vitamin E dapat meredam efek radikal bebas yang disebabkan pemberian karbon tetraklorida. Hasil penelitian ini sesuai dengan hasil penelitian yang dilakukan Zulfita (2014), dimana pemberian ekstrak rosella meningkatkan aktifitas gluthation peroksidase serum darah tikus yang 30

5 terpapar karbon tetraklorida. Vitamin E inilah yang meredam efek radikal bebas yang disebabkan pemberian karbon tetraklorida, salah satunya adalah peroksidase lipid. Keadaan ini terlihat dari hasil penelitian, bahwa dengan pemberian kombinasi vitamin E dapat meningkatkan aktifitas glutathione peroksidase secara signifikan pada tikus yang terpapar karbon tetraklorida. VI. KESIMPULAN Pemberian vitamin C berpengaruh secara signifikan terhadap peningkatan aktifitas gluthation tetraklorida.pemberian vitamin E berpengaruh secara signifikan terhadap peningkatan aktifitas gluthation tetraklorida. Pemberian kombinasi vitamin C dan E berpengaruh secara signifikan terhadap peningkatan aktifitas gluthation peroksidase pada tikus yang terpapar karbon tetraklorida. VII. DAFTAR PUSTAKA 18. Almatsier S Prinsip Dasar Ilmu Gizi. Jakarta.PT. Gramedia Pustaka Utama. 19. ATSDR (Agency for Toxic Substances and Disease Registry)2005. Toxilogikal profile for carbon tetraclorida. Atlanta GA: US. Department of Public Health and Human Services Public Health Service. 20. Chevion, S. et al, Plasma antioxidant status and cell injury after severe physical exercise. Proc Nati Acad Sci. 100 (9): Cochrane G.C Celluler injury by oxidants. Am.J. Med. Department of Immunology, IMM12, Research Institute of Scripps Clinic, North Torrey Pines Road, 92037, La Jolla, CA, USA. pp Dahiru D, ObiO and Umaru H Effect of hibiscus sabdariffa calyx extract on carbon tetrachloride induced liver damage. Biochemistry 15 (1): Daruningrum I S, Pengukuran kadar GSH hati tikus dan darah tikus. Laporan Praktikum Teknik Metabolisme dan Stresas Oksidatif. Program Magister Ilmu Biomedik Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Jakarta. 24. Farrell G, Cirrhosis in Asians: Less Common Than In Europeans. Journal of Gastroenterology and Hepatology, 23 (4). 25. Halliwel B, Gutteridge JM Free radicals in biology and medicine Oxford. 26. Marks Dawn B, Marks Alan B, Smith Collen M, Biokimia kedokteran dasar: sebuah pendekatan klinis. Dalam dr. Brahm U : Penterjemah. EGC. Jakarta. 27. Montgomery KF, Osborn L, Hession C, Tizerd R, Goff D, Vasallo C, et all Activation of Endothelial-Leukocyte Adhesion Molecule 1 Gene Transcription. Proc Natl Acad Sci Usa. 88: Ramanathan K, Anusuyadevi M, Shila S, Paneerselvam C, Ascorbic acid and tocopherol as potent modulators of apoptosis on arsenic induced toxicity in rats. Toxicol Lett: 156 : S Sudigdo, Sastroasmoro Dasar-dasar Metodologi Penelitian Klinis. Jakarta: Sagung Seto. 30. Valko, Free radicals, metals and antioxidants in oxidativestress-induced cancer.j chem. Biol. Rusia. Edisi 160, Winarsi H, Antioksidan alami dan radikal bebas potensi dan aplikasinya dalam kesehatan. Yogyakarta. Kanisius. 32. WHO, Carbon Tetrachloride Health And Safety Guide. Available from : 8.htm. 33. Youngson R, Antioksidant. Manfaat Vitamin C dan E bagi kesehatan Jakarta. Arcan. 34. Zulfita, Pengaruh pemberian ekstrak rosella terhadap aktifitas Glutathion Peroksidase pada tikus terpapar Karbon Tetraklorida. (Tesis). Padang. Fakultas Kedokteran Universitas Andalas. 31