BIOTEKNOLOGI DAN MASA DEPAN. Inseminasi Buatan Pengantar ke Genetika Veteriner

Transkripsi

1 BIOTEKNOLOGI DAN MASA DEPAN Banyaknya hal mengenai buku ini berisi aplikasi berbagai macam bioteknologi pada pemuliaan ternak. Tujuan dari bab ini adalah mengisi kekurangan yang masih ada --mengomentari aspek-aspek bioteknologi yang belum tercakup dalam bab-bab terdahulu. Untuk itu, kita sebaiknya menatap masa depan, yang merupakan suatu usaha yang selalu mengandung resiko. Oleh karena itu, prediksi yang mengikutinya dibuat dalam bentuk pengetahuan secara menyeluruh yang tidak semuanya cenderung terlaksana dengan baik. Inseminasi Buatan IB adalah jenis pertama dari teknologi reproduksi yang telah diterapkan dalam skala besar untuk peningkatan mutu genetika. Karena pada dasarnya IB merupakan metode untuk meningkatkan potensi reproduksi hewan jantan, teknologi tersebut memungkinkan penggunaan sedikit hewan jantan untuk dipilih sebagai tetua bagi generasi berikutnya. Oleh karena itu, pengaruh genetiknya adalah meningkatkan intensitas seleksi hewan jantan. Segera setelah IB diterapkan dalam industri sapi perah pada tahun 1950-an, program pemuliaan dirancang untuk memungkinkan seluruh potensi genetikanya dapat dicapai. Pada dasarnya program tersebut melibatkan uji zuriat dari pejantan sapi perah, dengan menyebarkan semen dari sekelompok pejantan muda ke sejumlah kelompok peternak yang berpartisipasi, yang pada setiap kelompok tersebut, anak betina dari pejantan muda yang digunakan tersebut, anak betina dari berbagai pejantan muda yang digunakan tersebut dibandingkan secara langsung. Walaupun hal ini memerlukan interval generasi yang panjang (karena pejantan tersebut tidak akan diseleksi sampai anak betinanya telah menyelesaikan laktasi pertamanya), itu mengakibatkan akurasi seleksi yang tinggi, dan Pengantar ke Genetika Veteriner

2 pertambahan potensi genetika sangat lebih besar dari pertambahan potensi genetika yang mungkin dihasilkan dari perkawinan alami. Misalnya pada sapi perah, IB dapat menghasilkan peningkatan genetika sekitar 1% dari produksi rata-rata per tahun (walaupun itu tampaknya merupakan nilai yang sangat kecil, ingat bahwa peningkatan tersebut bersifat akumulatif, yaitu suatu peningkatan tambahan secara konstan yang diperoleh setiap tahun. Juga sekali peningkatan tiap tahun dicapai, itu akan terus berlangsung, tanpa kebutuhan input tambahan untuk mempertahankannya). Kritikan mengenai IB mengarah pada potensinya untuk meningkatkan tingkat silang dalam, dengan semua kerugian yang menyertainya, khususnya berkaitan dengan cacat yang bersifat resesif autosom, seperti didiskusikan pada Bab 13. Tentunya IB mempunyai potensi ini, dan dalam populasi tertutup, perlu perhatihan untuk memastikan bahwa ukuran populasi efektif cukup besar bagi tingkat silang dalam untuk dapat dipertahankan pada level rendah yang dapat diterima. Dalam prakteknya, kebanyakan program peningkatan IB mempunyai suatu ukuran populasi efektif yang cukup besar, dan selain itu imigrasi yang terus-menerus memastikan bahwa tingkat silang dalam tetap pada level rendah yang memuaskan. Apa yang membuat kritikan tentang IB umumnya gagal menyadari bahwa, pada level produksi komersial, IB memiliki potensi untuk menurunkan tingkat silang dalam tersebut, karena IB memberikan pilihan pejantan tak berkerabat yang jauh lebih luas daripada yang tersedia pada perkawinan alami. Ini sangat penting, karena hal itu berarti bahwa IB menjadi alat yang sangat ampuh untuk mencegah kejadian cacat turunan. Jadi daripada mencoba menyalahkan IB sebagai suatu teknologi yang berbahaya sebagaimana beberapa otoritas kehewanan yang berkompeten mencoba melakukannya dari waktu ke waktu, semua pihak yang tertarik sebaiknya terus-menerus mencoba merangsang penerapan IB secara benar. Dengan banyak keuntungannya, tampaknya IB akan terus digunakan secara ekstensif dalam peningkatan sapi perah, dan dalam bentuk lain dari produksi ternak dimana siklus reproduksi betina dapat dimonitor atau dikontrol dengan mudah. Ovulasi Ganda dan Pindah Janin (multiple ovulation and embryo transfer-moet) Sebagaimana IB yang meningkatkan potensi reproduksi jantan, demikian juga MOET meningkatkan reproduksi betina. Alternatifnya, MOET dapat digunakan untuk menurunkan interval generasi betina, dengan memungkinkan calon-calon induk akan dapat diperoleh hanya dari betinabetina muda dalam satu populasi. Bioteknologi dan Masa Depan - 325

3 Bagi sebagian industri dimana program peningkatannya masih bersifat tradisional menggunakan uji penampilan (misalnya sapi dan domba), MOET memberikan keuntungan besar yang menghasilkan sekitar 50% respon tambahan pertahun. Jika diterapkan secara bersamaan pada program peningkatan IB yang menggunakan uji zuriat pada jantan, MOET mempunyai pengaruh yang relatif kecil, karena intensitas seleksi betina untuk dikawinkan dengan kelompok jantan berikutnya sudah sangat tinggi. Akan tetapi, jika MOET digunakan dalam lingkungan di mana seleksi jantan berdasarkan uji zuriat diganti dengan seleksi jantan pada umur yang jauh lebih muda berdasarkan penampilan saudara betinanya, maka walaupun akurasi seleksi berkurang, interval generasi berkurang dengan cukup besar, dengan hasil bahwa tingkat peningakatan genetika per tahun sesungguhnya adalah sebesar, jika tidak lebih besar daripada program uji zuriat. Program uji zuriat merupakan pekerjaan berskala besar yang melibatkan pencatatan penampilan ribuan atau puluhan ribu ternak, dan memerlukan kerjasama banyak peternak komersial. Sebaliknya, program peningkatan MOET dapat dilaksanakan dengan sangat berhasil dalam suatu populasi inti dengan hanya sekitar beberapa ratus ternak, yang dapat dikerjakan sebagai suatu kelompok ternak di bawah pengawasan oleh hanya beberapa orang. Karena jumlah ternak yang relatif sedikit harus dicatat, merupakan hal yang mudah untuk mengukur sifat-sifat tambahan selain sifat-sifat yang umumnya diukur. Misalnya dalam suatu populasi inti MOET sapi perah, merupakan hal yang mungkin untuk mengukur konsumsi pakan individu dan berbagai metabolit darah, dan menentukan genotipe ternak dengan penciri DNA yang sesuai. Sebaliknya, dalam suatu program uji zuriat nasional atau seluruh negara bagian, aktivitas tambahan seperti itu tidak mungkin, baik secara ekonomis maupun praktis. Selain itu karena inti MOET secara pasti menerapkan kemampuan bioteknologi penting, kelompok ternak seperti itu secara ideal digunakan untuk mengadopsi bioteknologi baru seperti didiskusikan di bawah ini. Akhirnya, di negaranegara yang sedang berkembang, di mana pola pencatatan berskala besar dan penggunaan IB secara luas hampir tidak mungkin dilakukan. Inti MOET dapat disebarkan ke level komersial melalui pemberian pejantan pemacek dari inti tersebut, atau jika sumber ini tidak cukup mempunyai permintaan dari satu atau lebih pengganda. Alternatifnya, jika teknologi yang sesuai tersebut tersedia, IB dari jantan yang dihasilkan di dalam inti dapat digunakan. Sebagaimana dengan IB, MOET berpotensi meningkatkan tingkat silang dalam. Jika MOET digunakan dalam populasi tertutup, ukuran populasi efektif harus cukup besar untuk menghindari tingkat silang dalam yang terlalu tinggi. Dalam prakteknya, seperti juga pada IB, imigrasi sementara merupakan cara yang sangat bermanfaat untuk menghindari Pengantar ke Genetika Veteriner

4 masalah silang dalam. Sudah barang tentu upaya yang dilakukan adalah mencari ternak yang tak berkerabat yang memiliki keunggulan genetika yang sama, lebih disukai dan lebih superior. Dalam prakteknya, kebanyakan populasi inti MOET tetap terbuka selama bertahun-tahun; tiap tahun sejumlah perkawinan memanfaatkan semen dari pejantan luar. Jika keturunan yang dihasilkan mempunyai EBV yang cukup tinggi, mereka dipelihara yang berarti bahwa gen dari semen yang diimpor dari luar tersebut tergabung dalam inti tersebut. Jika keturunan tersebut tidak cukup baik, mereka disisihkan. Dalam mengevaluasi potensi MOET, perlu disadari bahwa teknologi ini efeknya mengubah spesies monotocous menjadi spesies polytocous: dengan kata lain, MOET mengubah sapi menjadi babi. Itu berarti bahwa MOET kurang mempunyai pengaruh yang besar terhadap perbaikan genetika pada spesies polytocous. Akibatnya, sapi (baik perah maupun pedaging), domba, kambing adalah spesies yang memperoleh banyak perbaikan dari penggunaan populasi inti MOET. In Vitro Maturation (IVM) dan In Vitro Fertilisation (IVF) Sel Telur Dua teknologi ini mempunyai potensi besar. Dari sudut pandang produksi ternak komersial, mereka memberikan potensi bagi IB semen untuk digantikan dengan penbuahan buatan (PB) dari janin-janin yang dibuat secara masal dengan tujuan spesifik. Tergantung pada kebutuhan industri, janin tersebut bisa merupakan bangsa murni, atau persilangan F1, atau bahkan persilangan 3 bangsa atau 4 bangsa. Berkaitan dengan perbaikan genetika, IVM dan IVF mempunyai potensi untuk mengurangi keragaman dalam produksi janin, dan oleh karena itu meningkatkan efektivitas program MOET konvensional. Selain itu, dengan memungkinkan pengambilan sel telur dari betina yang sangat muda, mereka memberikan harapan pengurangan interval generasi dan akibatnya meningkatkan tingkat perbaikan dalam inti MOET. IVM dan IVF juga memunculkan kemungkinan-kemungkinan baru, misalnya semua jantan terseleksi bisa dikawinkan ke semua betina terseleksi, yang oleh karena itu menciptakan suatu keluarga bersaudara tiri dari bapak (paternal half-sib), keluarga bersaudara tiri dari ibu (maternal half-sib), dan keluarga bersaudara kandung (full-sib) untuk setiap kombinasi yang mungkin dari jantan terseleksi dan betina terseleksi. Program perbaikan yang menggunakan rancangan perkawinan ini dapat memperoleh tingkat respon yang dapat dibandingkan dengan tingkat respon yang dapat dibandingkan dengan tingkat respon yang diperoleh dalam program MOET. Bioteknologi dan Masa Depan - 327

5 Multiplikasi dan Pindah Janin (Embryo Multiplication and Transfer-EMT) EMT berskala besar (sebelumnya disebut kloning janin) mempunyai potensi ampuh baik untuk program perbaikan maupun untuk produksi ternak komersial. Dalam hal program perbaikan, EMT memberikan kemungkinan memperoleh EBV yang sangat akurat untuk tiap-tiap dari sejumlah keturunan (janin) yang berbeda dari hasil perkawinan individuindividu dalam populasi inti yang terbaik dengan melakukan uji klon tiap janin. Sekali klon terbaik telah teridentifikasi selanjutnya tinggal merupakan masalah penyimpanan dalam alat pembeku dan ekstraksi janin lebih banyak dari klon-klon terbaik tersebut, serta menumbuhkannya menjadi ternak dewasa, yang kemudian dikawinkan untuk menghasilkan klon berikutnya lagi. Gambar 20.1 mengilustrasikan bagaimana EMT dapat digabungkan ke dalam suatu program perbaikan. Phase Activity Selection and re-breeding Select the best x male clones y female clones per year Mate Embryos Clone testing and selection Test a sample of each clones for economic merit Select best clone(s) from embryo store Clones Freeze sample of each clones as embryos Commercial use Multiply clone(s) for embryo transfer Commercial stock Gambar Suatu program peningkatan yang melibatkan penggunaan EMT Pengantar ke Genetika Veteriner

6 Pada level produksi komersial, EMT bisa memberikan efek yang sangat besar. Misalnya dalam hal produksi sapi perah, induk biasa bisa menghasilkan janin dengan persilangan sapi perah betina (persilangan 2 bangsa, 3 bangsa, atau 4 bangsa) untuk memproduksi generasi berikutnya dari sapi induk komersial. Ini hanya melibatkan sebagian dari seluruh induk sapi perah. Sisanya bisa diberikan janin yang diklon untuk digunakan dalam industri sapi potong, misalnya jantan persilangan F1 digunakan sebagai pejantan pemacek dalam populasi sapi potong, betina persilangan F1 digunakan sebagai induk dalam populasi sapi potong, atau embrio sapi dari persilangan sapi potong 3 bangsa atau 4 bangsa. Konsekuensi menarik tentang aplikasi praktis yang meluas dari EMT adalah bahwa keunggulan genetika rata-rata dari klon yang digunakan dalam produksi komersial jauh lebih tinggi daripada keunggulan genetika dari populasi inti yang merupakan asal muasalnya klon tersebut. Ini jelas merupakan kebalikan dengan kelambanan yang terjadi dalan piramida perkawinan tradisional, yang telah diterangkan pada Bab 17. Adanya kemampuan untuk meraup keuntungan berskala besar, tampaknya EMT pasti akan menjadi kenyataan di masa mendatang. Akan tetapi ada beberapa masalah yang harus dipertimbangkan. Pertama, satu problem yang mendesak adalah bahwa berat lahir janin yang diklon jauh lebih besar dari berat lahir janin normal. Kelompok optimis berpendapat bahwa ini adalah halangan teknis yang dapat diatasi melalui pengembangan dan penelitian lebih lanjut. Kelompok lainnya khawatir bahwa ini mungkin merupakan suatu masalah yang tak dapat diatasi. Lebih umum lagi, ada kepedulian bahwa penggunaan ternak yang diklon secara luas akan menciptakan masalah yang berkaitan dengan biakan seragam (monoculture). Jika kondisi lingkungan berubah, misalnya jika bentuk patogen baru dan bersifat virulent muncul, seluruh populasi bisa terbinasakan. Akan tetapi, pendapat ini melampaui kenyataan bahwa berbagai macam klon yang berbeda akan tersedia bagi peternak komersial. Selain itu, klon-klon tersebut hanya akan digunakan pada level komersial saja; pada level inti, mempertahankan sebanyak mungkin keragaman genetika jelas diperlukan, sehingga perbaikan genetika yang berkelanjutan dapat dicapai, dan untuk memberikan bermacam-macam genotipe yang akan menjadi penting untuk memberikan kondisi yang berubah yang tentunya akan dihadapi oleh produsen komersial. Satu masalah yang sangat serius dalam EMT adalah kepedulian yang dirasakan oleh beberapa orang pada kekhawatiran tentang klon ternak. Kenyataan bahwa banyak di antara spesies tanaman pertanian yang digunakan secara luas merupakan klon, misalnya anggur, pisang, apel, tidak bisa memberikan ketenteraman kepada orang-orang yang percaya bahwa mengklon ternak merupakan satu tahap yang terlalu jauh dari intervensi manusia. Kepedulian semacam ini sebaiknya jangan diabaikan. Bioteknologi dan Masa Depan - 329

7 Pengendalian Rasio Jenis Kelamin Pada prinsipnya, dua pendekatan utama untuk mengatur rasio jenis kelamin adalah menentukan jenis kelamin janin (melalui pemanfaatan PCR dengan primer yang hanya dapat mensekuen pada kromosom Y saja) atau menggunakan berbagai pendekatan fisiologis atau fisik untuk memisahkan sperma yang menbawa X dari sperma yang membawa Y. Berkaitan dengan program perbaikan, kemampuan memanipulasi rasio jenis kelamin tidak akan mempunyai dampak penting. Misalnya jika rasio jenis kelamin diatur agar jantan lebih banyak, maka intensitas seleksi jantan tentunya meningkat, tetapi intensitas jenis kelamin betina menurun. Jika EMT menjadi kenyataan, ini akan sangat bermanfaat untuk mengetahui jenis kelamin dari tiap klon sebelum dilakukan penggandaan berskala besar. Akan tetapi karena setiap klon akan mengalami evaluasi dalam bentuk ternak yang sebenarnya, jenis kelamin dalam setiap klon tersebut akan diketahui segera setelah ternak pertama ditumbuhkan dari klon itu. Jadi tampaknya perlu sedikit metode canggih dalam menentukan jenis kelamin janin. Sebaliknya, penetuan jenis kelamin sperma, yang secara bertahap mendekati sedikit keberhasilan, barangkali mempunyai beberapa keunggulan, misalnya dalam industri sapi pedaging di mana jantan biasanya lebih menguntungkan dari betina. Akan tetapi penentuan jenis kelamin sperma tentunnya memerlukan penggunaan IB, yang belum dapat dikerjakan dengan mudah dalam sistem produksi sapi, domba, atau babi berskala besar. Selain itu premi yang harus dibayarkan oleh peternak sapi pedaging untuk sperma yang telah teridentifikasi jenis kelaminnya akan dibatasi oleh perbedaan keuntungan relatif kecil antara jenis kelamin tersebut. Pada produksi sapi perah, hasil perhitungan menunjukkan bahwa produsen sanggup membayar kira-kira dua kali harga untuk semen yang hanya akan menghasilkan anakan sapi betina. Mungkin keunggulan yang paling hebat untuk pnentuan jenis kelamin adalah dalam program IVM/IVF, karena program ini memungkinkan dihasilkannya kelompok janin yang berjenis kelamin sama. Pendekatan yang amat berbeda untuk mengubah jenis kelamin memanfaatkan penggunaan gen SRY atau satu di antara gen-gen lain yang terlibat dalam penetuan jenis kelamin mamalia. Seperti dijelaskan dalam Bab 4, peran gen SRY adalah memberikan pemicu awal yang menyebabkan gonad yang belum terdiferensiasi di dalam janin berkembang menjadi testis daripada sel telur. Jika banyak cetakan gen ini dapat disisipkan ke dalam autosom melalui transgenesis, maka selain 50% dari keturunan yang akan menjadi jantan XY normal, semua ternak XX yang menurunkan satu atau lebih autosom ini secara fenotipik akan menjadi jantan. Akan tetapi, mereka Pengantar ke Genetika Veteriner

8 juga akan menjadi mandul, yang akan membatasi pemanfaatannya untuk menghasilkan generasi sapi potong komersial. Protein Rekombinan Seperti diterangkan pada Bab 2, satu dari banyak keuntungan munculnya teknologi molekuler adalah kemampuan merekayasa satu spesies (biasanya mikroorganisme, tetapi juga ada mamalia biak-biakan sel atau transgenik) untuk menghasilkan protein secara masal dari spesies lain, yang mencakup mikrooganisme lain, mamalia dan burung. Protein semacam ini disebut protein rekombinan. Satu dari kegunaan teknologi ini adalah menghasilkan vaksin generasi baru yang dirancang untuk melawan berbagai penyakit parasit dan patogen, setelah mengklon dan mengekspresikan gen atau gen-gen yang menyandi bagian protein yang bersifat saling melindungi secara antigenik dari patogen atau parasit. Beberapa vaksin tersebut telah tersedia di pasaran, dan sangat berhasil; beberapa lainnya belum berhasil. Satu contoh menarik protein rekombinan adalah vaksin pelawan kutu sapi, Boophilus microplus. Setelah adanya penemuan bahwa ekstrak dari usus kutu memberikan resistensi yang bersifat melindungi, penelitian lebih lanjut secara ekstensif akhirnya menghasilkan sebagian sekuens protein dalam ekstrak tersebut, yang selanjutnya memungkinkan probe DNA dapat dibuat (membuat penggunaan kode genetik universal) yang cocok dengan gen kutu penyandi protein yang bersifat melindungi tersebut. Kemudian pustaka genom kutu diperiksa satu persatu (screening) dengan probe itu, dan akhirnya gen kutu yang diingingan diisolasi, diklon dan diekspresikan dalam E. coli. Walaupun vaksin merupakan satu contoh yang amat penting dari penggunaan protein rekombinan, ada juga banyak penggunaan penggunan lainnya. Pada kenyataannya, kemungkinan untuk protein rekombinan tidak ada habisnya. Sayang sekali, demikian juga untuk tantangan biaya dan teknis yang muncul dalam menterjemahkan suatu ide ke dalam produk yang laku secara komersial. Ada juga kepedulian masyarakat mengenai konsumsi makanan ternak dari yang menerima protein rekombinan seperti somatotrofin (hormon pertumbuhan). Selain itu, ada kepedulian mengenai pengaruh protein semacam itu terhadap ternak (akankah mereka ditekan terlalu jauh?), dan terhadap kehidupan peternak (akankah peningkatan secara dramatis produksi per peternak menyebabkan penurunan jumlah perusahaan peternakan yang baik?). Dalam hal somatotrofin sapi, ada juga kepedulian mengenai potensi penggunaan bovine somatotropin (bst) yang tak tersingkap dalam peternakan sapi perah untuk menghasilkan EBV yang bias. Pemberian izin akhir-akhir ini tentang somatotrofin babi dan sapi di Bioteknologi dan Masa Depan - 331

9 beberapa negara akan memberikan uji kasus dalam penerimaan bentuk bioteknologi ini. Trangenesis Teknologi transgenesis secara mendasar telah dijelaskan pada Bab 2. Satu dari tujuan utama penerapan transgenesis pada perusahan peternakan adalah untuk memperoleh perbaikan ekstra untuk sifat-sifat yang penting secara ekonomis, misalnya dengan menyisipkan gen hormon pertumbuhan. Akan tetapi pengaruh pemindahan gen (transgen) tersebut haruslah cukup besar sebelum penggunaan transgenesis ini lebih efektif daripada seleksi konvensional. Alasan untuk ini adalah bahwa pada saat ternak transgenik telah diciptakan, diperlukan beberapa generasi untuk menyebarkan gen yang dipindahkan ke ternak transgenik tersebut ke dalam populasi, dan untuk mengevaluasi efeknya. Selama kurun waktu tersebut, perbaikan ekstra akan bisa dibuat melalui seleksi konvensional. Akibatnya menjelang saat galur ternak transgenik siap untuk dilepaskan secara komersial, galur ternak non transgenik juga telah membuat kemajuan ekstra melalui seleksi konvensional. Berdasarkan keterbatasan seperti itu, tampaknya ada kecenderungan bahwa keuntungan terbesar dari transgenesis berkaitan dengan produksi ternak akan berasal dari mengenalkan novel effect, seperti memanfaatkan bahan makanan novel, atau mengatasi masalah yang berhubungan dengan kesejahteraan (daya tahan penyakit alamiah) atau polusi atau menghasilkan bentuk baru produk ternak konvensional yang mempunyai kesinambungan asam amino yang diinginkan. Potensi transgenesis dalam area ini hanya terbatas oleh kemampuan kita merancang pendekatan novel, dan pengetahuan kita tentang eksistensi dalam modes dari fungsi gen. Dalam jangka pendek, penggunaan transgenesis yang paling mungkin adalah dalam memproduksi polipeptida manusia yang diperlukan untuk aplikasi farmasi. Akan tetapi, karena hanya satu atau dua ternak transgenik sudah cukup untuk menghasilkan kebutuhan dunia untuk berbagai protein manusia, penggunaan transgenesis ini cenderung tidak mempunyai dampak pada produksi ternak secara praktis. Isu penting yang harus dihadapi berkaitan dengan transgenesis adalah pertanyaan resmi (siapa yang memiliki transgen tersebut, dan akankah ternak transgenik tersebut dipatenkan?) dan pertanyaan pertanyaan tentang kesejahteraan ternak dan etika. Sebagaimana dengan EMT, banyak orang merasa bahwa trasgenesis merupakan satu tahap yang terlalu jauh. Beberapa ilmuan yang bekerja dengan transgenesis telah menempatkan banyak waktu untuk menginformasikan kepada ilmuwan lain dan anggota masyarakat mengenai apa yang sedang terjadi, dan sebaliknya menerima masukan yang Pengantar ke Genetika Veteriner

10 bermanfaat seperti apa yang benar-benar dapat diterima. Ini merupakan pendekatan yang perlu disebarluaskan, dan sebaliknya diikuti oleh ilmuwan yang bekerja di semua bidang bioteknologi. Bacaan Lebih Lanjut Umum Anon. (1993). International Symposium on Animal Biotecnology. Molecular Reproduction and Development, 36, Anon. (1993). Issues arising from recent advances in biotecnology. Veterinary Record, 133, Harlander, S. (1993). Genetic engineering of food--a United-Stated perspective. Trends in Food Science & Tecnology, 4, Hess, C. E. (1992). Biotecnology derived foods from animals. Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 32, Robinson, J. J. and McEvoy, T. G. (1993). Biotecnology the possibilities. Animal Production, 57, Sellier, P. (1994) The future role of molecular genetics in the control of meat production and meat quality. Meat Science, 36, Stelwagen, K., Gibbins, A. M. V., and McBride, B. W. (1992). Application of recombinant DNA tecnology to improve milk production--a review. Livestock Production Science, 31, Wilmut, I., Haley, C. S. and Woolliams, J. A. (1992). Impact of biotecnology on animal breeding. Animal Reproduction Science, 28, Wilson, M. and Lindow, S. E. (1993). Release of recombinant microorganisms. Annual Review of Microbiology, 47, Ovulasi ganda dan transfer embrio Bondoc, O. L. and Smith, C (1993). Optimized testing schemes using nucleus progeny, adult MOET siblings, or juvenile MOET pedigrees in dairy cattle closed populations. Journal of Animal Breeding and Genetics, 110, Christie, W. B., McGuirk, B. J., Strahie, R. J., and Mullan, J. S. (1992). Practical experience with the implementation of a MOET breeding scheme with dairy cattle. Annales de Zootechnie, 41, Lohuis, M. M,. Smith, C,. and Dekkers, J. C. M. (1993). MOET result from of dispersed hybrid nucleus programme in dairy cattle. Animal Production, 57, Mpofu, N., Smith, C., Van Vuuren, W., and Burnside, E. B. (1993). Breeding strategies for genetic improvement of diary cattle in Zimbabwe. Journal of Dairy Science, 76, , Bioteknologi dan Masa Depan - 333

11 Multiplikasi dan transfer embrio Colleau, J. J. (1992). Combining use of embyo sexing and cloning within mixed MOETs for selection on dairy cattle. Génétique Sélection Evolutions 24, De Boer, I. J. M. and Van Arendonk, J. A. M. (1991). Genetic and clonal responses in closed dairy cattle nucleus scheme. Animal Production, 53, 1 9. Pengendalian rasio jenis kelamin Bishop, S. C. and Woolliams, J. A. (1991). Utilizationof the sexdeterminating region Y gene in beef cattle breeding scheme. Animal Production, 53, Halverson, J. L. and Dvorak, J. (1993). Genetic control of sex-determining in birds and potential for its manipulation. Poultry Science, 72, Johnson, L. A., Cran, D. G., and Polge, C (1994). Recent advances in sex preselection of cattle--flow cytometric sorting of X-chromosome and Y- chromoshome bearing sperm based on DNA to produce progeny. Theriogenology, 41, Kirkpatrick, B. W. and Monson, R. L. (1993). Sensitive sex determination assay applicable to bovine embryos derived from IVM and IVF. Journal of Reproduction and Fertility, 98, Protein rekombinan Etherton, T. D., Krisetherton, P. M., and Mills, E. W. (1993). Recombinant bovine and porcine somatotropin--safety and benefits of these biotechnologies. Journal of the American Dietetic Association, 93, Kimman, T. G. (1992). Risks connected with the use of conventional and genetically engineered vaccines. Veterinary Quarterly, 14, Transgenesis Berkowitz, D. B. and Kryspinsorensen, I. (1994). Transgenic fish--safe to eat-- a look at the safety considerations regarding foot transgenics. Bio/Technology, 12, Ebert, K. M. and Schindler, J. E. S. (1993). Transgenic farm animal--progress report. Theriogenology, 39, Gama, L. T., Smith, C., and Gibson, J. P. (1992). Transgene effects, introgression strategies and testing schemes in pigs. Animal Production, 54, Hafs, H. D, (ed.) (1993). Genetically modified livestock: progress, prospects and issues. Journal of Animal Science, 71, (Suppl. 3), Pengantar ke Genetika Veteriner

12 Martin, P. and Grosclaude, F. (1993). Improvement of milk protein quality by gene technology. Livestock Production Science, 35, Perry, M. M. and Sang, H. M. (1993). Transgenesis in chickens. Transgenic Research, 2, Paten pada hewan Lesser, W. H. (ed.) (1990). Animal patents. Macmillan, London. Etika dan kesejahteraan hewan Anon. (1993). Syimposium on biotechnology and animal welfare. Livestock Production Science, 36, Loew, F. M. (1994). Beyond transgenic--ethics and values. British Veterinary Journal, 150, 3 5. Mepham, T. B. (1993). Approaches to the ethical evaluation of animal biotechnologies. Animal Production, 57, Thomson, P. B. (1992). Designing animals--ethical issues for genetic engineers. Journal of Dairy Science, 75, Bioteknologi dan Masa Depan - 335