The JaMMiLT ISSN The Journal of Muhammadiyah Medical Laboratory Technologist

Transkripsi

1 PENGARUH LAMA PERENDAMAN KUPANG (Musculita senhausia) DALAM SARI BELIMBING WULUH (Averrhoa bilimbi) TERHADAP KADAR LOGAM BERAT Pb Drs. Sudirman, Apt Prodi D3 Analis Kesehatan UM Surabaya Abstract Kupang is one category of animals with complete protein that has a high tolerance for concentrations of certain metals that can accumulate heavy metals than other animals, one of the heavy metals that can be accumulated by mussels body is lead (Pb). Starfruit has antioxidants that can bind to the levels of Pb in Pb in mussels mussels that can be reduced. The formulation of this research is there any effect of soaking mussels in cider starfruit on levels of lead (Pb)? The purpose of this study was to determine the effect of starfruit juice on levels of Pb in mussels, to analyze laboratory Pb levels in mussels without giving starfruit juice, and to analyze laboratory Pb levels in mussels by giving starfruit juice. Type of research is experimental. The samples analyzed were mussels mussels sold by traders in the Market Village Kenjeran Sukolilo Bulak district, a total of 6 samples obtained from 7 merchants. Traders - traders were selected at random from 7 vendors selling mussels. Taking mussels each merchant mussels sampled as many as 1 in order to obtain the number of 6 samples. Of 6 samples obtained such that each - each sample to get 4 treatments, ie the one without treatment and the three treated (soaked in cider starfruit with immersion length variation). From the results of examination by using Graphite Furnace Atomic Absorption Spectrophotometer obtained average - average levels of Pb in mussels without soaking the starfruit juice at ppm, and after soaking in starfruit juice Pb levels in mussels, marinated for 30 minutes, 60 minutes, and 90 minutes respectively - were in the amount of 8.04 ppm, 4.67 ppm, and 3.79 ppm. Statistical analyzes Anova test showed the influence of duration of immersion in starfruit juice on levels of Pb in mussels with significance level (P) where the value is less than Keyword : Kupang (Musculita senhausia), Averrhoa bilimbi, lead (Pb) Kedua, makanan sebagai zat pembangun 1. PENDAHULUAN Berdasarkan definisi dari WHO, makanan adalah semua substansi yang dibutuhkan oleh tubuh tidak termasuk air, obat-obatan, dan substansi-substansi lain yang digunakan untuk pengobatan. Air tidak termasuk dalam makanan karena merupakan elemen yang vital bagi kehidupan manusia. Terdapat tiga fungsi makanan. Pertama, makanan sebagai sumber energi karena panas dapat dihasilkan dari makan seperti juga energi. 10 karena makanan berguna untuk membangun jaringan tubuh yang sudah tua. Fungsi ketiga, makanan sebagai zat pengatur karena makanan turut serta mengatur proses alami, kimia, dan proses faal dalam tubuh. Keamanan pangan merupakan kondisi dan upaya yang diperlukan untuk mencegah pangan dari kemungkinan cemaran biologis, kimia dan benda lain yang dapat mengganggu, merugikan dan membahayakan kesehatan manusia

2 (Saparinto, 2006). Salah satu bahaya yang ada adalah terdapatnya cemaran logam berat yang terkandung pada makanan yang sekarang ini menjadi bahan yang sering diperbincangkan. Logam berat tersebut dapat menyebabkan terjadinya keracunan dalam tubuh makhluk hidup yaitu timbal (Pb), merkuri (Hg), arsen (As), kadmium (Cd) dan aluminium (Al) (Darmono, 1995). Laut yang menjadi tempat bermuaranya sungai, telah menjadi tempat berkumpulnya zat-zat pencemar seperti logam berat yang dibawa oleh aliran sungai tersebut. Zat-zat pencemar yang ada di sungai berasal dari limbah pabrik atau limbah rumah tangga yang semua merupakan hasil kegiatan manusia. Banyak industri atau pabrik yang membuang limbah industrinya ke sungai. Dengan demikian kegiatan manusia memberikan kontribusi yang amat besar terhadap terjadinya pencemaran lingkungan. Terkontaminasinya makanan laut dengan berbagai jenis logam berat dan berbahaya tentu akan mempengaruhi kesehatan manusia, seperti yang terjadi pada kasus Minamata di Jepang yang diakibatkan keracunan merkuri, keracunan logam berat kadmium pada masyarakat yang tinggal di sekitar sungai Jitsu di Jepang serta kasus teluk Buyat di Sulawesi Utara akibat adanya kontaminasi logam berat seperti arsen (As), antimon (Sb), merkuri (Hg) dan mangan (Mn) (Anonim, 2009). Logam berat dapat ditemui pada perairan dan menyerang biota-biota yang ada di dalamnya. Salah satunya adalah hewan kupang merah (Musculita senhausia) yang dapat mengabsorbsi logam berat dalam perairan pantai. Kupang merupakan salah satu hasil perikanan laut yang masuk dalam kelompok kerangkerangan. Kupang mempunyai habitat di laut. Cara hidup kupang bergerombol di dasar perairan bercampur lumpur dan pasir (Purwati, 2001). Kupang merupakan salah satu hewan dengan kategori complete protein yang memiliki toleransi tinggi terhadap konsentrasi logam tertentu sehingga dapat mengakumulasi logam berat dari pada hewan lainnya (Darmono, 2001). Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Pikir (1993) ditemukan kandungan logam dalam kupang bervariasi tergantung daerahnya. Di daerah Kenjeran ditemukan kandungan Pb dalam kupang adalah ppm. Sedangkan batas keamanan yang ditetapkan oleh Dirjen POM NO /B/SK/VII/89 untuk Pb dalam kupang adalah 2.0 mg/kg. Banyak tanaman di Indonesia ini yang sebenarnya dapat memberikan banyak manfaat, namun belum 11

3 dibudidayakan secara khusus. Salah satu diantaranya adalah belimbing wuluh (Averhoa bilimbi). Tumbuhan ini biasa ditanam di pekarangan untuk diambil buahnya. Buahnya yang memiliki rasa asam sering digunakan sebagai bumbu masakan dan campuran ramuan jamu. Belimbing wuluh mengandung banyak zat anti oksidan. Salah satu kandungan anti oksidan yang terkandung dalam belimbing buluh yaitu dihasilkan dari vitamin A dan C ampuh melawan radikal bebas sebagai pemicu timbulnya berbagai penyakit degeneratif. Penyebab radikal bebas salah satunya yaitu akibat pencemaran logam berat (Tranggono, 1990). Dengan adanya logam berat pada tubuh kupang maka perlu dilakukan upaya penurunan logam berat Pb dengan menggunakan pengikat logam atau yang biasa disebut dengan sekuestran (chelating agent) yaitu dengan belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi) karena belimbing wuluh mempunyai zat antioksidan yang merupakan suatu chelator untuk logam. Rumusan Masalahnya adalah Adakah pengaruh sari belimbing wuluh terhadap kadar Timbal (Pb) pada kupang. Tujuannya adalah Mengetahui pengaruh sari belimbing wuluh terhadap kadar Pb pada kupang. Menganalisis secara Laboratorium kadar Pb pada kupang tanpa pemberian sari belimbing wuluh. Menganalisis secara Laboratorium kadar Pb pada kupang dengan pemberian sari belimbing wuluh. Hasil penelitian ini dapat digunakan sebagai masukan dan sumber informasi kepada masyarakat mengenai manfaat penambahan sari belimbing wuluh dalam upaya mengikat logam berat khususnya Pb untuk menghindari adanya toksikasi logam. 2. Metode Penelitian Penelitian ini bersifat eksperimental laboratorik sehingga diperoleh data yang kuantitatif. Penelitian ini menggunakan rancangan dengan menggunakan The Pretest Postest Control Group Design. Populasi Penelitian adalah kupang yang dijual oleh pedagang kupang di Pasar Kenjeran Kelurahan Sukolilo Kecamatan Bulak, yaitu diperoleh 7 pedagang kupang. Sampel yang dianalisis adalah kupang yang dijual oleh pedagang di Pasar Kenjeran Kelurahan Sukolilo Kecamatan Bulak, sebanyak 6 sampel yang diperoleh dari 7 pedagang. Pedagang pedagang tersebut dipilih secara acak dari 7 pedagang yang menjual kupang. Pengambilan kupang masing masing pedagang sebanyak 1 sampel kupang sehingga diperoleh jumlah 6 sampel. Dari 6 sampel yang diperoleh tersebut yang masing masing sampel 12

4 mendapatkan 4 perlakuan, yaitu yang satu tanpa perlakuan dan yang tiga mendapat perlakuan (100 gram kupang direndam dalam sari belimbing wuluh 100 gram dengan variasi lamanya perendaman). Lokasi Penelitian, Pengambilan sampel kupang diambil di Pasar Kenjeran Kelurahan Sukolilo kecamatan Bulak. Pemeriksaan sampel dilakukan di Balai Penelitian dan Konsultasi Industri Surabaya (BPKI). Penelitian dilakukan pada bulan Januari sampai dengan Juli Pemeriksaan sampel dilaksanakan pada bulan Mei Variabel Bebas Penelitian adalah Perendaman dalam sari belimbing wuluh, Perendaman sari belimbing wuluh dikategorikan menjadi: Tanpa perendaman dalam sari belimbing wuluh, yaitu kupang tanpa direndam dalam sari belimbing wuluh langsung dihitung kadar timbalnya. Dengan perendaman dalam sari belimbing wuluh selama 30 menit, yaitu kupang direndam selama 30 menit dalam sari belimbing wuluh (100 gram) kemudian dihitung kadar timbalnya. Dengan selama 60 menit, yaitu kupang direndam selama 60 menit dalam sari belimbing wuluh (100 gram) kemudian dihitung kadar timbalnya. Dengan perendaman dalam sari belimbing wuluh selama 90 menit, yaitu kupang direndam selama 90 menit dalam sari belimbing wuluh (100 gram) kemudian dihitung kadar timbalnya. Variabel Terikat, Kadar Pb dalam penelitian ini berupa angka dengan satuan ppm yang ditetapkan berdasarkan metode Atomic Absorption Spectrophotometry (AAS) dengan sistem pembakaran (Graphite Furnace AAS/GFAAS). Variabel Kontrol adalah Berat buah belimbing wuluh Metode Pengumpulan Data Metode pengumpulan data dalam penelitian ini dilakukan dengan observasi uji laboratorium dengan metode Atomic Absorption Spectrophotometry (AAS) dengan sistem pembakaran (Graphite Furnace AAS/GFAAS), sehingga didapatkan data kuantitatif Tahapan pemeriksaan Pembuatan Sari Belimbing Wuluh a) Tujuan, Untuk mendapatkan sari belimbing wuluh dari 100 gr buah belimbing wuluh segar. b) Alat dan Instrumen Pemeriksaan : Neraca/Timbangan, Blender, penyaring/saringan, Wadah penampung c) Bahan, Buah belimbing wuluh segar d) Prosedur Pemeriksaan : Buah belimbing wuluh dicuci bersih. Ditimbang dengan teliti masing masing 100 gr sebanyak jumlah sampel perlakuan. Setiap 100 gr dihaluskan 13

5 dengan menggunakan blender. Belimbing wuluh yang sudah dihaluskan diperas sambil disaring dalam wadah penampung Persiapan Perlakuan Sampel Kupang dicuci bersih. Ditimbang dengan teliti masing masing 100 gram sebanyak jumlah sampel perlakuan. Kupang yang tidak direndam dalam sari belimbing wuluh masing masing dblender hingga halus. Sedangkan setiap 100 gram kupang mendapat perlakuan perendaman tersebut direndam dalam 100 gram buah belimbing wuluh segar yang sudah dibuat sari tersebut di atas. Kupang direndam dalam sari belimbing wuluh dengan waktu berturut berturut 30 menit, 60 menit, dan 90 menit. Pada waktu perendaman, setiap 10 menit sampel diaduk aduk agar perendaman dalam sari belimbing wuluh lebih merata. Setelah direndam, kupang dititiskan kemudian masing masing kupang diblender hingga halus Analisa Kadar Timbal a) Prinsip, Unsur logam Pb dilepaskan dari jaringan daging dengan cara digesti kering (pengabuan) pada suhu C. Logam dalam abu selanjutnya diikat dalam asam klorida (HCl) dan asam nitrat (HNO 3 ) secara berurutan. Larutan yang dihasilkan selanjutnya diatomisasi menggunakan graphite furnace. Atom atom unsur Pb berinteraksi dengan sinar dari lampu Pb. Interaksi tersebut berupa serapan sinar yang besarnya dapat dilihat pada tampilan (monitor) spektrofotometer serapan atom (Atomic Absorption Spectrophotometer). Jumlah serapan sinar sebanding dengan konsentrasi unsur logam Pb tersebut. b) Alat dan Instrumen Pemeriksaan, Beaker glass 25 ml, 100 ml dan 250 ml, Blender, Cawan porselein bertutup, Desikator, Gelas ukur 25 ml dan 50 ml, Hot plate, Labu ukur 50 ml, 100 ml dan 1000 ml, Mikropipet, Oven, Pipet tetes, Pipet volum 10,0 ml, 5,0 ml, dan 1,0 ml, Seperangkat alat spektrofotometer serapan atom, Neraca analitik dengan ketelitian ±0,0001 gr, Tungku pengabuan (furnace) c) Pereaksi, HCl 4 N, HNO 3 d) Prosedur Pemeriksaan, Daging kupang yang telah telah bersih ditimbang sebanyak 20,0 gram dalam cawan porselein.dipanaskan perlahan lahan pada suhu 300 C sampai kering, kemudian dibakar atau diabukan. Setelah jadi abu ditambah larutan HCl encer (4N) sebanyak 50 ml sampai semua abu larut kemudian disaring. Filtrat yang diperoleh dan jernih kemudian ditambah HNO 3 60 % sebanyak 2 3 ml. Dimasukkan ke 14

6 labu ukur 100 ml kemudian ditambah aquadest sampai tanda batas. Pindahkan ke beaker glass 100 ml. Pasang kapiler AAS sehingga larutan akan terbakar sempurna. Diukur nilai absorbansinya dengan panjang gelombang 260 nm.dibuat larutan standart Pb 0 10 ppm dan diukur nilai absorbansinya.data absorbansi standart dipakai untuk membuat kurva kalibrasi standart. 3. HASIL PENELITIAN Berdasarkan hasil pemeriksaan Kadar Pb Kadar Pb Dengan No. Tanpa Perendaman (ppm) Sampel Perendaman (ppm) Mnt Mnt Mnt 1 16,15 10,43 6,54 4, ,56 8,16 4,81 3, ,32 9,34 5,66 5, ,58 7,12 3,44 3,11 5 9,98 6,18 2,53 2, ,52 7,02 5,05 4,8 pengaruh lama perendaman dalam sari belimbing wuluh terhadap kadar Pb pada kupang yang dilakukan di laboratorium Balai Penelitian dan Konsultasi Industri (BPKI) Surabaya pada tanggal 7 Mei 2012 didapatkan hasil pada tabel 4.1. Tabel 4.1. Hasil Pemeriksaan Kadar Pb Pada Kupang Dengan Satuan ppm 3.1. Analisis Hasil Penelitian Dari data pemeriksaan didapatkan hasil rata rata seperti pada tabel 4.2. Tabel 4.2. Rata Rata Kadar Pb Dengan Satuan ppm Pada Kupang Berdasarkan Lamanya Perendaman Dalam Sari Belimbing Wuluh. No. Sampel Kadar Pb Tanpa Perendaman/0 Menit (ppm) Berdasarkan tabel 4.2 kadar Pb terbesar pada kupang tanpa perendaman dalam sari belimbing wuluh adalah 16,15 ppm, kadar Pb terkecil adalah 9,98 ppm. Sedangkan kadar Pb terbesar pada kupang dengan perendaman dalam sari belimbing wuluh selama 30 menit adalah 10,43 ppm, kadar Pb terkecil adalah 6,18 ppm. Kadar Pb terbesar pada kupang dengan selama 60 menit adalah 6,54 ppm, kadar Pb terkecil adalah 2,53 ppm. Kadar Pb terbesar pada kupang dengan perendaman dalam sari belimbing wuluh selama 90 menit adalah 4,15 ppm, kadar Pb terkecil adalah 2,25 ppm. Kadar Pb Dengan Perendaman (ppm) 30 Mnt 60 Mnt 90 Mnt 1 16,15 10,43 6,54 4, ,56 8,16 4,81 3, ,32 9,34 5,66 5, ,58 7,12 3,44 3,11 5 9,98 6,18 2,53 2, ,52 7,02 5,05 4,8 Jumlah 74,11 48,25 28,03 22,76 Rata Rata 12,3517 8, , ,79333 SD 2, , , ,05778 Kadar Pb pada kupang tanpa dan kadar Pb pada kupang yang direndam dalam sari belimbing wuluh selama 30 15

7 menit, 60 menit dan 90 menit juga disajikan dalam bentuk diagaram batang seperti pada gambar 4.1 berikut ini. Gambar 4.2. Diagram rata rata kadar Pb Gambar 4.1 Diagram Batang Kadar Pb Dari tabel 4.2 dapat dilihat rata rata kadar Pb dengan lama perendaman dalam sari belimbing wuluh tanpa perendaman sebesar 12,35 ppm dan dengan perendaman selama 30 menit, 60 menit dan 90 menit berturut turut sebesar 8,04 ppm, 4,67 ppm dan 3,79 ppm. Adapun rata rata kadar Pb pada kupang dengan berdasarkan lamanya perendaman dalam sari belimbing wuluh dan tanpa dapat dilihat seperti pada gambar 4.2 berikut ini. Berdasarkan tabel uji ANOVA diatas menunjukkan bahwa ada pengaruh pemberian sari belimbing wuluh berdasarkan lamanya variasi perendaman terhadap kadar Pb pada kupang yang ditunjukkan dengan nilai F hitung sebesar 30,389 dengan taraf signifikan (P) 0,000 dimana lebih kecil dari 0,05. Jadi, Hipotesis alternatif (Ha) diterima. 4. PEMBAHASAN Dari hasil pemeriksaan dengan menggunakan Spektrofotometer Serapan Atom Graphite Furnace didapatkan rata rata kadar Pb pada kupang tanpa sebesar 12,35 ppm, dan setelah dilakukan kadar Pb pada kupang yang direndam selama 30 menit, 60 menit, dan 90 menit berturut turut yaitu sebesar 8,04 ppm, 4,67 ppm, dan 3,79 ppm. Analisa secara statistik dengan uji Anova menunjukkan adanya pengaruh lamanya perendaman 16

8 dalam sari belimbing wuluh terhadap kadar Pb pada kupang dengan taraf signifikan (P) 0,000 dimana nilai tersebut lebih kecil dari 0,05. Sehingga semakin lama perendaman kupang dalam sari belimbing wuluh akan semakin rendah kadar Pb-nya. Hasil ini menunjukkan bahwa selama perendaman terjadi ikatan kimia antara logam Pb dengan zat antioksidan yang terkandung dalam sari belimbing wuluh. Menurut Mursito (2002), buah belimbing wuluh mengandung senyawa kimia antara lain asam format, asam sitrat, asam askorbat (Vitamin C), saponin, tanin, glukosid, flavonoid. Senyawa senyawa tersebut merupakan zat antioksidan. Belimbing wuluh mengandung zat antioksidan yang berfungsi sebagai sekuestran yaitu senyawa kimia pengikat logam dalam bentuk ikatan kompleks. Sifat tersebut dapat mengalahkan sifat dan pengaruh jelek logam dalam bahan pangan (Tranggono, 1990). Menurut Lisdiana (2002), buah belimbing wuluh mempunyai kandungan vitamin C yang sangat tinggi. Setiap 100 g belimbing wuluh segar mengandung vitamin C 35 mg. Dengan jumlah vitamin C yang sangat tinggi tersebut dan dengan adanya zat antioksidan lain dalam buah belimbing wuluh maka buah belimbing wuluh dapat menurunkan kadar Pb pada kupang. Data hasil pemeriksaan Pb pada kupang tanpa perendaman dalam sari belimbing wuluh mempunyai kadar yang sangat tinggi dengan rata rata sebesar 12,35 ppm melebihi nilai batas keamanan untuk dikonsumsi. Setelah dilakukan rata rata kadar Pb pada kupang sebesar 3,79 ppm dalam waktu 90 menit. Hasil rata rata kadar Pb setelah perendaman dalam sari belimbing wuluh selama 90 menit tersebut masih melebihi nilai batas keamanan untuk dikonsumsi sedangkan batas keamanan yang ditetapkan oleh Dirjen POM NO /B/SK/VII/89 untuk Pb dalam kupang adalah 2.0 mg/kg. Penambahan waktu lebih dari 90 menit untuk perendaman kupang dalam sari belimbing wuluh dimungkinkan akan menurunkan kadar Pb pada kupang. Semakin lama perendaman dalam sari belimbing wuluh maka reaksi antara zat antioksidan dengan Pb akan lebih sempurna sehingga Pb bebas akan berkurang membentuk senyawa khelat dengan antioksidan. 5. KESIMPULAN DAN SARAN Dari hasil penelitian didapatkan 6 sampel kupang. Setiap sampel mendapatkan 4 perlakuan yaitu kupang tanpa perendaman dalam sari belimbing wuluh, dan kupang dengan perendaman 17

9 dalam sari belimbing wuluh selama 30 menit, 60 menit dan 90 menit. Hasil rata rata pemeriksaan kadar Pb pada kupang dengan menggunakan metode pemeriksaan AAS Graphite Furnace dari keenam sampel tersebut adalah 12,35 ppm tanpa. Sedangkan setelah dilakukan perendaman dalam sari belimbing wuluh kadar Pb pada kupang yang direndam selama 30 menit, 60 menit, dan 90 menit didapatkan rata rata berturut turut yaitu sebesar 8,04 ppm, 4,67 ppm, dan 3,79 ppm. Jadi, sari belimbing wuluh berpengaruh menurunkan kadar logam Pb pada kupang. Saran Bagi masyarakat yang mengkonsumsi kupang agar lebih berhati hati dalam mengkonsumsi kupang karena kupang mengandung logam Pb yang sangat tinggi. Bagi masyarakat yang memproduksi bahan olahan dari kupang agar lebih memperhatikan dan meningkatkan proses pengolahan bahan olahan dari kupang. Bagi seluruh masyarakat atau industri yang menghasilkan limbah kimia seperti halnya logam Pb untuk lebih meningkatkan proses pengolahan limbah sehingga dapat mengurangi pencemaran logam berat. DAFTAR PUSTAKA Alimul, Aziz Metode Penelitian dan Analisis Data. Salemba Medika: Jakarta Anonim. Nilai Gizi Belimbing Wuluh. m/2010/11/nilai-gizi-belimbingwuluh.html diakses 8 Januari 2012 Anonim. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Belimbing Wuluh Terhadap 1,1- Diphenyl-2-Picrylhidrazyl. %20UJI%20AKTIVITAS%20ANTIOK SIDAN%20EKSTRAK%20%20BELIM BING%20WULUH%20_Averrhoa%20b ilimbi,%20l._%20terhadap%201,1- DIPHENYL-2- PICRYLHIDRAZYL%20_DPPH_.pdf diakses 8 Januari 2012 Arbai Harian Kompas; Kupang Manfaat dan Keamanannya Bagi Kesehatan. diakses 8 Januari 2012 Arisman DR. MB, M Kes Buku Ajar Ilmu Gizi Keracunan Makanan. EGC: Jakarta Budiman Candra Dr Pengantar Kesehatan Lingkungan. EGC: Jakarta Darmono Logam Dalam Sistem Biologi Makhluk Hidup. Universitas Indonesia (UI Press): Jakarta DeRoss Fj Smelters and Metal Reclaimenrs. In Occupational, Industrial, and Environmental Toxicology. Mosby-Year book: New York Fardiaz, Srikandi Polutan Air & Udara. Kanisius: Yoyakarta 18

10 Lisdiana Membuat Aneka Sari Buah. Kanisius: Yogyakarta Palar, Heryando Pencemaran dan Toksikologi Logam Berat. PT Rineka Cipta: Jakarta Parikesit, Mario Khasiat dan Manfaat Belimbing Wuluh. Stomata: Bandung Prayitno dkk Kupang dan Produk Olahannya. Kanisius: Yogyakarta Purwaningsing, Eko Multiguna Belimbing Wuluh. Ganeca Exact: Jakarta W.D. Connel, J.M. Gregory Kimia dan Ekotoksikologi Pencemaran. Universitas Indonesia: Jakarta Wijaya, A Radikal Bebas dan Parameter Status Antioksidan. Forum Diagnosticum. Laboratorium Klinik Prodia: Bandung Winarsi Antioksidan Alami dan Radikal Bebas. Kanisius: Yogyakarta Zainudin, Muhammad Metodologi Penelitian. Airlangga Press: Surabaya. Rachmad, Mochamad. Khasiat Belimbing Wuluh. m/ diakses 8 Januari 2012 Saparinto dkk Bahan Tambahan Makanan. Kanisius (IKAPI): Yogyakarta Sastrawijaya, Tresna Pencemaran Lingkungan. PT Rineka Cipta. Jakarta. Setiawan dr Atlas Tumbuhan Obat Indonesia Jilid 5. Pustaka Bunda: Jakarta Silalahi, Jansen Makanan Fungsional. Kanisius: Yogyakarta Soedjiran R. DR. Prof Pengantar Ekologi. PT Remaja Rosdakarya: Bandung Sudjana Metoda Statistika. Tarsito: Bandung Svehla G Vogel Buku Teks Analisis Anorganik Kualitatif Makro dan Semimikro. PT Kalman Media Pusaka: Jakarta 19