ANTIHIPERGLIKEMIA EKSTRAK ETANOL DAUN SISIK NAGA DENGAN METODE TOLERANSI GLUKOSA. Lisma Yanti, Yuwidia Rise Brasiska, Aang Hanafiah

Transkripsi

1 ANTIHIPERGLIKEMIA EKSTRAK ETANOL DAUN SISIK NAGA DENGAN METODE TOLERANSI GLUKOSA Lisma Yanti, Yuwidia Rise Brasiska, Aang Hanafiah Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia Abstrak Daun sisik naga (Drymoglossum piloselloides (L.) Presl.) telah digunakan secara empiris oleh masyarakat Bengkulu untuk mencegah beberapa penyakit termasuk penurunan kadar gula darah (antihiperglikemia). Pada penelitian ini telah dilakukan uji aktivitas antihiperglikemia ekstrak etanol hasil maserasi daun sisik naga (Drymoglossum piloselloides (L.) Presl.) pada mencit jantan jenis Swiss Webster dengan metode toleransi glukosa. Hewan uji dibagi kedalam 5 kelompok percobaan, yaitu kelompok kontrol negatif yang diberi glukosa 2 g/kg BB, kelompok kontrol positif yang diberi glibenklamida 0,65 mg/kg BB, kelompok dosis 1, dosis 2, dan dosis 3 yang diberi ekstrak etanol daun sisik naga dengan dosis masing-masing 0,3 g/kg BB; 0,45 g/kg BB, dan 0,6 g/kg BB. Penurunan kadar glukosa darah yang paling baik ditunjukkan oleh kelompok dosis 1 dengan persentase penurunan sebesar 31,57%. Dari hasil pengolahan data ANOVA dan uji LSD pada menit ke 30, 60, dan 120 setelah pemberian ekstrak secara oral, kelompok dosis 1 memberikan efek antihiperglikemia paling baik dibandingkan kelompok dosis 2 dan 3. Kata kunci: Ekstrak daun sisik naga (Drymoglossum piloselloides (L.) Presl.), Antihiperglikemia, Metode toleransi glukosa. Abstract Dragon scale leaf (Drymoglossum piloselloides (L.) Presl) have been empirically used by the Bengkulu people to prevent several disease, including decreased blood sugar level (antihyperglycemia. In this study, the antihyperglycemia test were conducted on male Swiss Webster mice using glucose tolerance method. That animals were divided into 5 experimental groups: negative control group that were given glucose 2 g/kg BW, positif control group that were glibenclamide 0.65 g/kg BW, the group of dose 1, dose 2, and dose 3 that were given the ethanol extract of dragon scale leaf with each dose of 0.3 g/kg BW; 0.45 g/kg BW; and 0,6 g/kg BW. The results showed that ethanol extract of dragon scale leaf can lowering the blood sugar level, and it was demonstrated that the dose 1 gave the best antihyperglicemic activity with the percentage of 31.75%. From the processing data by using ANOVA and LSD test, the best antihyperglycemic activity was showed by the dose group 1 periodic ttime of 30, 60, and 120 minutes after oral administration of extract than group dose 2 and dose 3. Keywords: Dragon scale leaf extract, Antihyperglycemic, Glucose tolerance method. 51

2 PENDAHULUAN Diabetes mellitus, penyakit gula atau kencing manis adalah suatu gangguan kronis yang bercirikan hiperglikemia (glukosa darah terlampau meningkat) yang khususnya terkait dengan metabolisme hidrat arang (glukosa) di dalam tubuh. Penyebabnya adalah kekurangan hormon insulin, yang berfungsi memungkinkan glukosa masuk ke dalam sel untuk dimetabolisme dan kemudian dimanfaatkan sebagai energi. Akibatnya adalah glukosa bertumpuk di dalam darah (hiperglikemia), dan akhirnya diekskresikan lewat kemih tanpa digunakan (glycosuria).(tan, 2007) Diabetes mellitus pada umumnya merupakan penyakit degeneratif yang jumlah penderitanya cukup banyak. Penyakit ini sudah menjadi epidemik dan mewabah di dunia. Diabetes mellitus telah dikategorikan sebagai penyakit global oleh World Health Organization (WHO) dengan jumlah penderita di dunia mencapai 199 juta jiwa pada tahun Menurut statistik dari studi Global Burden of Disease WHO pada tahun 2004, Indonesia menempati peringkat pertama di Asia Tenggara, dengan prevalensi penderita sebanyak jiwa di tahun 2000 dan diproyeksi meningkat 2,5 kali lipat sebanyak penderita pada tahun 2030 (Astiyandani, 2010) Dengan semakin meningkatnya penderita hiperglikemia, maka banyak orang mencari obat untuk mengatasi penyakit tersebut, baik dalam bentuk obat sintetis ataupun yang berasal dari tanaman obat. Penggunaan tanaman untuk pengobatan telah lama dikenal oleh masyarakat, namun demikian data-data yang menunjang validitas penggunaannya masih sangat terbatas, karena itu agar penggunaanya dapat dipertanggung jawabkan, penelitian dan pengembangannya secara ilmiah harus terus dilakukan. Hal ini tentu akan lebih mendorong penggunaan tanaman sebagai obat secara meluas oleh masyarakat (Suharmiati, 2003). Tumbuhan sisik naga (Drymoglossum piloselloides (L.) Presl.) adalah salah satu tanaman tradisional yang digunakan oleh masyarakat Bengkulu sebagai pengobatan alternatif untuk penyakit kelebihan kadar gula darah (hiperglikemia). Bagian yang digunakan adalah bagian daun tanaman yang masih segar. Pengobatan ini dilakukan dengan meminum segelas air rebusan daun sisik naga. Air rebusan ini biasanya diminum tiga kali sehari. Atas dasar kepercayaan empiris inilah, penelitian ini dilakukan untuk membuktikan khasiat tanaman secara ilmiah, dan diharapkan dapat menjadi informasi yang berguna untuk masyarakat. Tanaman sisik naga mengandung saponin, polifenol, minyak atsiri, sterol/triterpen, fenol, flavonoid, gula, dan tanin (Hariana, 2006; Dalimartha, 2008). Tanaman ini berkhasiat untuk mengatasi beragam penyakit seperti: radang gusi, sariawan, pendarahan, rematik, batuk, batuk 52

3 darah, sakit kuning, keputihan, kanker payudara, gondongan, TBC, gonorrhoe, dan sukar buang air besar; Juga untuk pemakaian luar, seperti kudis dan kurap, dan penyakit karena infeksi bakteri. (Heyne, 1987; Hariana, 2006; Dalimartha, 2001). Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan oleh Somchit, sisik naga memberikan aktivitas antifungi dan antibakteri. Secara invitro, ekstrak etanol dan ekstrak air dari sisik naga memiliki aktivitas terhadap bakteri Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, dan Streptococcus pneumonia. Sedangkan memiliki aktivitas antifungi terhadap jamur Trichophyton rubrum, dan Trichophyton mentagrophytes ekstrak kloroformnya (Somchit, dkk, 2011) Dalam penelitian ini akan diuji aktivitas antihiperglikemia ekstrak etanol daun sisik naga (Drymoglossum piloselloides (L.) Presl.) terhadap mencit jantan jenis Swiss Webster dengan metode toleransi glukosa. METODOLOGI Alat Alat yang digunakan antara lain alat maserasi, rotary evaporator, gluko test (One Med), strip test (One Med), serta alatalat gelas standar laboratorium. Bahan Bahan yang digunakan untuk proses penelitian ini adalah paku sisik naga (Drymoglossum piloselloides) yang diperoleh dari daerah Bengkulu, etanol, aquadest, glukosa, glibenklamid, amonia, kloroform, HCl, larutan gelatin, amil alkohol, eter, larutan vanilin, H 2SO 4 p, KOH (Semua bahan dari E.Merck). Hewan Uji Hewan Percobaan yang digunakan adalah mencit putih jantan jenis Swiss Webster dengan bobot 20-30g. Hewan percobaan diperoleh dari Jurusan Biologi UPI. Sebelum pengujian hewan uji diadaptasikan selama 7 hari, diberi makan dan minum secara terkontrol setiap hari. Determinasi, karakterisasi simplisia dan skrining fitokimia Tanaman dideterminasi di Laboratorium Herbarium Jurusan Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Padjadjaran Jatinangor. Karakterisasi simplisia yang dilakukan antara lain penentuan kadar abu total, penentuan kadar abu tidak lerut asam, penentuan kadar air, penentuan kadar sari larut air dan etanol. Skrining fitokimia dilakukan terhadap simplisia dan ekstrak daun sisik naga untuk memeriksa adanya senyawa metabolit sekunder. Secara umum senyawa metabolit sekunder ini meliputi senyawa golongan alkaloida, flavonoida, tannin, fenolat, polifenolat, kuinon, steroid, 53

4 triterpenoid, saponin, monoterpen dan seskuiterpen. Ekstraksi Daun sisik naga yang telah dikeringkan sebanyak 70 gram dimasukkan ke dalam maserator, kemudian ditambahkan pelarut etanol 70% sampai daun sisik naga terendam sempurna, ekstrak cair ditampung setiap 2 hari selama 6 hari dengan penambahan pelarut baru. Selama perendaman, dilakukan beberapa kali pengocokan atau pengadukan terhadap ekstrak yang direndam. Kemudian ekstrak cair yang diperoleh diuapkan dengan menggunakan alat rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak kental. Uji Aktivitas Antidiabetes Uji Aktivitas Antidiabetes ekstrak etanol paku sisik naga pada mencit putih jantan jenis Swiss Webster dengan metode toleransi glukosa. a. Persiapan hewan uji Sebelum dilakukan pengujian, mencit dipuasakan terlebih dahulu selama 8-12 jam dan tetap diberi minum, mencit dikelompokkan menjadi 5 kelompok, masing-masing terdiri dari 3 mencit, yaitu kelompok kontrol negatif (K-), kelompok pembanding, kelompok dosis 1, kelompok dosis II, kelompok dosis III. b. Pemberian glukosa Dilakukan pemberian glukosa dengan dosis 40 mg/20 g per oral pada semua kelompok mencit. Setelah 15 menit, kelompok pembanding diberikan glibenklamida dengan dosis 0,013 mg/20 g per oral; kelompok uji masing-masing diberikan ekstrak daun sisik naga dosis I, dosis II, dan dosis III. c. Pengambilan darah Pengambilan darah dilakukan pada semua kelompok mencit pada t-0 dengan cara memotong ekor mencit, darah yang keluar ditampung dalam tabung, kemudian darah diambil dengan menggunakan pipa kapiler (1 tetes) dan diukur dengan menggunakan alat gluko test. Setelah 30 menit dilakukan pengambilan darah kembali, dan dilanjutkan pada menit ke 60, 90, dan 120 (t-60, t-90, dan t-120). d. Perhitungan kadar glukosa Data kadar glukosa darah yang diperoleh dihitung sebagai berikut : Kadar glukosa darah relatif (Cr) dengan rumus : Cr =...(3.1) Ct = kadar glukosa darah pada waktu t C 0 = kadar glukosa darah awal (t-0) e. Presentase penurunan kadar glukosa darah relatif (%P) Persentase penurunan (% P) kadar glukosa darah relatif dihitung dengan rumus: % P =...(3.2) Cr (p) = kadar glukosa darah relatif kelompok uji Cr (-) = kadar glukosa darah relatif kelompok negatif 54

5 Kadar Glukosa darah relatif (Cr) dianalisis menggunakan metode Analysis of Variance (ANOVA) HASIL DAN PEMBAHASAN Simplisia daun sisik naga diekstraksi dengan menggunakan pelarut etanol 70%. Ektrak cair yang diperoleh kemudian di evaporasi dengan menggunakan alat evaporatory, pada suhu tidak lebih dari 50 0 C. Hasil ekstraksi daun sisik naga yang diperoleh dari 70 gram simplisia yaitu sebanyak 20,45 gram ekstrak kental, dengan randemen terhadap simplisia sebesar 29,21%. Hasil uji karakteristik menunjukkan bahwa simplisia daun sisik naga yang digunakan memenuhi persyaratan untuk digunakan sebagai tanaman obat. Hasil penetapan karakteristik simplisia daun sisik naga dapat dilihat pada Tabel 1. Tabel 1. Hasil Penetapan Karakteristik Simplisia Daun Sisik Naga Karakteristik Hasil Persyaratan MMI Simplisia (%) Simplisia (%) Kadar air 8 < 10 Kadar sari larut etanol 9,54 > 6 Kadar sari larut air 26,09 > 25,5 Kadar Abu 7,22 < 8 Kadar Abu yang tidak larut asam 3,7 < 4,5 Hasil Skrining Fitokimia Simplisia dan Ekstrak Daun Sisisk Naga Hasil skrining pada penelitian ini diketahui bahwa simplisia dan ekstrak daun sisik naga mengandung flavonoid, tanin, fenolat, kuinon, saponin, monoterpena dan seskuiterpena, steroid dan triterpenoid. Hasil skrining fitokimia simplisia dan ekstrak daun sisik naga dapat dilihat pada Tabel 2. Tabel 2. Hasil Skrining Fitokimia Simplisia dan Ekstrak Daun Sisik Naga Golongan Senyawa Simplisia Hasil Ekstrak Alkaloid - Mayer - Dragendorff Flavonoid + + Tanin + + Fenolat + + Monoterpen dan Seskuiterpen + + Steroid dan Triterpenoid + + Kuinon + + Saponin

6 Hasil Uji Aktivitas Antidiabetes Sebelum dilakukan pengujian aktivitas antihiperglikemia pada kelompok uji, terlebih dahulu dilakukan uji pendahuluan. Uji pendahuluan berfungsi untuk melihat bahwa glukosa hasil induksi dapat bertahan selama pengujian (t-30 sampai t-120). Glukosa yang diberikan sebesar 40 g/kg BB mencit. Hasil uji pendahuluan menunjukkan perbedaan yang signifikan pada waktu t-30, t-60, t-90, t-120 terhadap t-0, terlihat pada gambar 1. Dari data tersebut dapat disimpulkan bahwa hewan uji yang diinduksi positif mengalami kelebihan kadar glukosa darah (hiperglikemia). Pada menit ke-30 kadar glukosa darah sangat tinggi, menandakan bahwa model hewan hiperglikemia sudah terbentuk mulai menit ke-30, oleh sebab itu obat pembanding dan ekstrak sisik naga diberikan 15 menit setelah pemberian glukosa, dengan anggapan bahwa pada menit ke-30 obat dan ekstrak dapat memberikan efek penurunan kadar glukosa darah. Gambar 1. Diagram Rata-rata Kadar Glukosa Darah Relatif Uji Pendahuluan * : signifikan terhadap kelompok t0 Hewan uji dibagi ke dalam 5 kelompok yaitu kelompok kontrol negatif, kelompok kontrol positif, kelompok dosis 1, kelompok dosis 2, dan kelompok dosis 3. Pembagian kelompok ini bertujuan untuk mengetahui perbedaan kadar glukosa darah dalam setiap perlakuan. Hasil kadar glukosa darah rata-rata dan perhitungan kadar glukosa darah relatif sebagai berikut : 56

7 Tabel 3. Kadar Glukosa Darah Rata-rata (mg/dl) Waktu Kadar Glukosa Darah Rata-rata (mg/dl) (Menit) K- K+ D1 D2 D ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±3.06 Tabel 4. Kadar Rata-rata Glukosa Relatif(%) pada Masing-masing Perlakuan Waktu (Menit) Kadar Rata-rata Glukosa Darah Relatif (%) K- K+ D1 D2 D ±0 100 ±0 100 ±0 100 ±0 100 ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±12.50 K- : Kontrol Negatif (Glukosa 2 g/kg BB) K+ : Kontrol positif (glibenklamid 0,65 mg/kg BB + glukosa 2 g/kg BB) D1 : Dosis 1 (ektsrak etanol daun sisik naga 0,3 g/kg BB + glukosa 2 g/kg BB) D2 : Dosis 1 (ektsrak etanol daun sisik naga 0,45 g/kg BB + glukosa 2 g/kg BB) D3 : Dosis 1 (ekstrak etanol daun sisik naga 0,6 g/kg BB + glukosa 2 g/kg BB) Pada tabel 3 dan 4 perhitungan standar deviasi sangat tinggi, hal ini karena pengambilan data melibatkan hewan. Percobaan dengan menggunakan hewan tidak bisa memperoleh hasil yang merata, disebabkan karena metabolisme setiap hewan akan berbeda sehingga mengakibatkan parameter masing-masing individu sangat variatif. Penurunan kadar glukosa darah relatif paling besar terjadi pada menit ke- 60, dapat diliht pada tabel 5 dan gambar 2. Penurunan glukosa darah relatif yang bermakna pada kelompok kontrol positif dengan persentase penurunan sebesar 34,16% dan penurunan kadar glukosa darah dari kelompok dosis yang paling bermakna ditunjukkan oleh kelompok dosis 1 (ekstrak etanol daun sisik naga dengan dosis 0,3 g/kg BB) dengan persentase penurunan sebesar 31,57%. 57

8 Tabel 5. Persentase Penurunan Kadar Glukosa Darah Relatif (%) Waktu (Menit) Kadar Rata-rata Glukosa Darah Relatif (%) K+ D1 D2 D K- : Kontrol Negatif (Glukosa 2 g/kg BB) K+ : Kontrol positif (glibenklamid 0,65 mg/kg BB + glukosa 2 g/kg BB) D1 : Dosis 1 (ektsrak etanol daun sisik naga 0,3 g/kg BB + glukosa 2 g/kg BB) D2 : Dosis 1 (ektsrak etanol daun sisik naga 0,45 g/kg BB + glukosa 2 g/kg BB) D3 : Dosis 1 (ekstrak etanol daun sisik naga 0,6 g/kg BB + glukosa 2 g/kg BB) Gambar 2. Grafik Persentase Penurunan Kadar Glukosa Darah Relatif (%) K- : Kontrol Negatif (Glukosa 2 g/kg BB) K+ : Kontrol positif (glibenklamid 0,65 mg/kg BB + glukosa 2 g/kg BB) D1 : Dosis 1 (ektsrak etanol daun sisik naga 0,3 g/kg BB + glukosa 2 g/kg BB) D2 : Dosis 1 (ektsrak etanol daun sisik naga 0,45 g/kg BB + glukosa 2 g/kg BB) D3 : Dosis 1 (ekstrak etanol daun sisik naga 0,6 g/kg BB + glukosa 2 g/kg BB) Analisis data Dari data analisis ANOVA dan uji LSD (Least Significant Difference) kelompok uji dosis 1 (0,3 g/kg BB mencit), dosis 2 (0,45 g/kg BB mencit), dan dosis 3 (0,6 g/kg BB mencit) memberikan aktivitas penurunan kadar glukosa darah. Kelompok uji yang memberikan persentase penurunan kadar glukosa darah paling besar ditunjukkan oleh kelompok uji dosis 1 dengan persentase penurunan terbesar pada menit ke 60 yaitu sebesar 31,57%. Pada menit ke-30, 60, dan 120 kelompok dosis 1 menunjukkan tingkat signifikasi yang paling besar terhadap kelompok kontrol negatif dibandingkan dengan kelompok dosis 2 dan dosis 3. Selain itu juga hasil uji LSD menunjukkan bahwa kelompok dosis 1 tidak memberikan perbedaan yang bermakna secara statistik (P<0,05) terhadap kelompok kontrol positif, artinya aktivitas dari kelompok dosis 1 hampir sama dengan 58

9 kelompok pembanding glibenklamid. Pada menit ke-30 sampai menit ke-120 kadar glukosa darah relatif kelompok dosis 3 memberikan perbedaan yang bermakna secara statistik (P<0,05) terhadap kelompok kontrol positif, perbedaan yang bermakna ini dapat diartikan bahwa aktivitas antihiperglikemia kelompok dosis 3 tidak sama dengan kelompok kontrol positif. Sedangkan kelompok dosis 1 dan 2 tidak memberikan perbedaan yang bermakna secara statistik terhadap kelompok kontrol positif. Dosis 3 merupakan dosis kelompok uji yang paling tinggi, namun kelompok ini memberikan aktivitas penurunan glukosa darah yang lebih kecil dibandingkan kelompok dosis 1 dan 2, hal ini disebabkan karena obat herbal berbeda dengan obat sintetik. Dosis dari obat sintetik akan berbanding lurus dengan efek, sedangkan obat herbal merupakan obat yang memberikan efek resultante, artinya dosis tidak berbanding lurus dengan efek, hal ini disebabkan karena di dalam tumbuhan banyak terkandung senyawa berkhasiat, dan pada dosis yang tinggi, kerja dari masingmasing senyawa ini dapat saling menutupi. Tumbuhan sisik naga ini memiliki kandungan gula, dapat dimungkinkan pada dosis tinggi gula yang terkandung dalam sisik naga ini akan menutupi kerja senyawa metabolit sekunder lain yang memberikan khasiat untuk menurunkan glukosa darah. Pada taraf signifikansi 95%, kadar glukosa darah semua kelompok perlakuan perbedaan yang bermakna secara statistik (P<0,05) terhadap kelompok kontrol negatif. Dari data kadar glukosa darah relatif pada menit ke-30, 60, 90, 120 kelompok dosis 1 memberikan hasil aktivitas antihiperglikemia yang paling baik dan bermakna secarara statistik (P<0,05) dibandingkan kelompok uji dosis 2 dan dosis 3 SIMPULAN Penurunan kadar glukosa darah pada semua kelompok perlakuan menunjukkan adanya perbedaan bermakna secara statistik (P<0,05) terhadap kelompok kontrol negatif. Bila dibandingkan dengan kelompok kontrol positif, kadar glukosa darah dosis 1 tidak menunjukkan perbedaan yang bermakna secara statistik (P<0,05), hal ini menunjukkan bahwa efek penurunan glukosa darah kelompok dosis 1 hampir sama dengan kelompok kontrol positif. DAFTAR PUSTAKA Agoes, Goeswin Teknologi Bahan Alam. Penerbit ITB. Bandung Astiyandani Uji klinis in vivo pengaruh konsumsi daluman (Cycllea barbata) terhadap penurunan kadar gula darah pada tikus wistar jantan dengan diabetes mellitus tipe 2. IPTEKMA Dalimartha, S Atlas Tumbuhan Obat Indonesia. Jilid 2.Trubus Agriwidya. Jakarta

10 Departemen Kesehatan RI Materia Medika Jilid V. Jakarta Ditjen POM, Depkes RI Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Jakarta Gunawan, Sulistia (Ed) Farmakologi dan Terapi, edisi kelima. Departemen Farmakologi dan Terapeutik Fakultas Kedokteran- Universitas Indonesia. Jakarta Harbone. J. B Metode Fitokimia. diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro. Penerbit ITB. Bandung Hariana, A Tumbuhan Bahan Obat dan Khasiatnya, Seri 3. Penebar Swadaya. Bandung Heyne, K Tumbuhan Berguna Indonesia I, Badan Penelitian dan Pengembangan Kehutanan, jilid III. Yayasan Sarana Wana Jaya. Jakarta. 88. Katzung, B.G Hormon Pankreas dan Obat Antidiabetes, Farmakologi Dasar dan Klinik, M.S. Notle, dan J.H karam (Eds) terjemahan D.Sjabana, vol. 2, ed.8. penerbit Salemba Medika. Jakarta Mutschler, Ernst Dinamika Obat Farmakologi dan Toksikologi, edisi 5. Bandung: ITB Price, Sylvia Anderson Patofisiologi Konsep Klinis Proses-Proses Penyakit, Penerbit Buku Kedokteran. Jakarta Setiadi Anatomi & Fisiologi Manusia. Graha Ilmu. Yogyakarta Sirait Midian, dkk Penapisan Farmakologi, Pengujian Fitokimia dan Pengujian Klinik, Kelompok Kerja Ilmiah Phyto Medica Somchit, dkk In vitro anti-fungal and anti-bacterial activity of Drymoglossum piloselloides L. Presl. Against several fungi responsible for Athlete s foot and common pathogenic. Department of Biomedical Sciences, Faculty of Medicine and Health Sciences, Universiti Putra Malaysia, PM Serdang, Selangor, Malaysia. Suharmiati Pengujian Bioaktivasi Antidiabetes Mellitus Tumbuhan Obat. Cermin Kedokteran. No 140. Surabaya ; Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Pusat Penelitian dan Pengembangan Pelayanan dan Teknologi Kesehatan Departemen Kesehatan RI. Sukandar, Elin Yulinah ISO Farmakoterapi, cetakan kedua, PT.ISFI Penerbitan. Jakarta. 26 Tjay, Tan Hoan, Kirana, Rahardja Obat-Obat Penting, Khasiat, Penggunaan, dan Efek -Efek Sampingnya, edisi keenam. PT. Elex Media Komputindo. Jakarta