BAB II TINJAUAN PUSTAKA. cukup atau tubuh tidak mampu menggunakan insulin secara efektif sehingga

Transkripsi

1 BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Diabetes Mellitus Diabetes mellitus merupakan penyakit metabolik yang berlangsung kronik dimana penderita diabetes tidak bisa memproduksi insulin dalam jumlah yang cukup atau tubuh tidak mampu menggunakan insulin secara efektif sehingga terjadilah kelebihan gula di dalam darah dan baru dirasakan setelah terjadi komplikasi lanjut pada organ tubuh (Misnadiarly, 2006). Diabetes mellitus sering disebut dengan the great imitator, yaitu penyakit yang dapat menyerang semua organ tubuh dan menimbulkan berbagai komplikasi. Penyakit ini timbul secara perlahan-lahan, sehingga seserang tidak menyadari adanya berbagai perubahan dalam dirinya (Maulana, 2008). Tiga hal klasik mengenai gelaja diabetes mellitus adalah poliuri, polidipsi, dan polifagi. Jika kadar gula darah sampai diatas md/dl, maka glukosa akan sampai ke air kemih. Jika kadarnya lebih tinggi lagi, ginjal akan membuang air tambahan untuk mengencerkan sejumlah besar glukosa yang hilang. leh karena ginjal menghasilkan air kemih dalam jumlah yang berlebihan, maka penderita akan mengalami urinasi yang sering (poliuri) dan penderita merasa haus yang berlebihan sehingga banyak minum (polidipsi). Akibat dari menurunnya kemampuan insulin mengelola kadar gula dalam darah maka sering terjadi keadaan dimana walaupun kadar gula darah tubuh dalam keadaan normal namun 5

2 tubuh merespon lain sehingga penderita dipaksa untuk makan untuk mencukupi kadar gula darah yang bisa direspon oleh insulin (polifagi). Diabetes sendiri terdiri dari dua jenis yang masing-masing dapat diobati dengan cara tersendiri, yaitu: a. Diabetes mellitus yang tergantung pada insulin (Diabetes Tipe I) Diabetes mellitus tipe I dicirikan dengan hilangnya sel pada pulau-pulau Langerhans pankreas sehingga terjadi kekurangan insulin pada tubuh. Diabetes tipe ini dapat diderita oleh anak-anak maupun orang dewasa. Saat ini, diabetes tipe I hanya dapat diobati dengan menggunakan insulin dan pengawasan yang teliti terhadap tingkat glukosa darah melalui alat monitor pengujian darah. b. Diabetes mellitus yang tidak tergantung pada insulin (Diabetes Tipe II) Diabetes tipe II ini disebabkan oleh kurang sensitifnya jaringan tubuh terhadap insulin. Pankreas tetap menghasilkan insulin, kadang kadarnya lebih tinggi dari normal. Dengan pola hidup sehat, yaitu mengonsumsi makanan bergizi seimbang dan olahraga teratur biasanya penderita berangsur pulih. Penderita juga harus dapat mempertahankan berat badan yang normal. Namun, bagi penderita stadium terakhir, kemungkinan akan diberikan suntikan insulin. Perbedaan dari kedua tipe diabetes mellitus ini diperlihatkan pada tabel

3 Tabel 2.1. Perbedaan Diabetes Mellitus Tipe I dan Diabetes Mellitus Tipe II Diabetes Mellitus tipe I Diabetes Mellitus tipe II Penderita menghasilkan sedikit insulin atau sama sekali tidak menghasilkan insulin. Umumnya terjadi sebelum usia 30 tahun, yaitu anak-anak dan remaja. Para ilmuwan percaya bahwa faktor lingkungan (berupa infeksi virus atau faktor gizi pada masa kanak-kanak atau dewasa awal) menyebabkan sistem kekebalan menghancurkan sel penghasil insulin di pankreas. Untuk terjadinya hal ini, diperlukan kecenderungan genetik. 90% sel penghasil insulin (sel ) mengalami kerusakan permanen. Terjadinya kekurangan insulin yang berat dan penderita harus mendapatkan suntikan insulin secara teratur. Pakreas tetap menghasilkan insulin, kadang kadarnya lebih tinggi dari normal. Terapi tubuh membentuk kekebalan terhadap efeknya, sehingga terjadinya kekurangan insulin relatif. Bisa terjadi pada anak-anak dan dewasa, tetapi biasanya terjadi setelah usia 30 tahun. Faktor risiko untuk diabetes tipe II adalah obesitas dimana sekitar 80-90% penderita mengalami obesitas. Diabetes mellitus tipe II juga cenderung diturunkan secara genetik dalam keluarga. Sumber : Maulana,

4 2.2. Pengobatan Diabetes Mellitus Tujuan utama pengobatan diabetes adalah untuk mempertahankan kadar gula darah dalam kisaran yang normal, maka kemungkinan terjadinya komplikasi sementara atau jangka panjang semakin berkurang. Pengobatan diabetes mellitus meliputi : a. Pengobatan Non-Farmakologi Pengobatan non farmakologi ini dapat dilakukan dengan beberapa cara seperti pengaturan pola makan yang diperlukan bagi semua penderita diabetes mellitus terutama pembatasan lemak total dan lemak jenuh untuk mencapai normalisasi kadar glukosa dan lipid darah. Bila terdapat resistensi insulin, gerak badan secara teratur (jalan kaki, bersepeda, olah raga) dapat menguranginya. asilnya insulin dapat dipergunakan secara lebih baik oleh sel tubuh dan dosis pada pada umumnya dapat diturunkan. b. Pengobatan Farmakologi Bila pengobatan non farmakologi tidak atau kurang efektif untuk menormalkan glukosa darah, perlu digunakan bat ipoglikemik ral () diantaranya golongan sulfonilurea, biguanida, thiazolidindion, dan glukosidase inhibitor. bat-obatan yang termasuk dalam jenis sulfonilurea diperlihatkan pada tabel

5 Tabel 2.2. Jenis Sulfonilurea Sub Golongan Jenis Sulfonamida Jenis Tolbutamid Nama Dagang Karbutamid (invenol, Nasan ) Tolbuta (Artosin, Rastinon ) Rumus 2 N S 2 N C N 3 C S 2 N C N C 4 9 C 4 9 Jenis Glibenklamid Klorpropamid (Diabetoral ) Glibenklamid (Euglucon ) Cl Cl S 2 N C N C 3 7 C N C 2 C 2 S 2 N C N Glisoksepid (Prodiaban ) Sumber : ingkua, C N C N C 2 C 2 S 2 N C N N Pengobatan dengan bat ipoglikemik ral () sering kali menimbulkan efek samping bagi penderita seperti ketergantungan terhadap obat hipoglikemik yang disertai dengan peningkatan dosis apabila tidak dapat mengontrol kadar gula darah dengan baik, mual, diare, sakit perut, sakit kepala, dan sebagainya. leh karena itu, untuk menanggulangi hal tersebut dicarikan pengobatan cara lain dengan memanfaat tumbuh-tumbuhan yang dapat mengobati diabetes mellitus salah satunya Momordica charantia. Pada penelitian ini, akan diketahui pada fraksi apakah buah Momordica charantia tersebut memberikan hasil yang signifikan dalam menurunkan kadar gula darah. 9

6 2.3 Tumbuhan Paria Tumbuhan paria dikenal oleh semua orang karena buahnya yang pahit dan dapat ditemukan di pasar-pasar setiap saat tanpa mengenal musim. Kedudukan tumbuhan paria dalam urutan taksonomi diperlihatkan dalam tabel 2.3. Tabel 2.3. Urutan Taksonomi Tumbuhan Paria Kingdom Plantae Divisi Magnoliophyta Kelas Magnoliopsida rdo Cucurbitales Famili Cucurbitaceae Genus Momordica Spesies Momordica charantia Sumber : Genus Momordica terdiri dari 45 spesies dan tersebar di wilayah tropika. Sebagian besar spesiesnya terdapat di benua Afrika yang berudara panas, sedangkan di Asia hanya terdapat sekitar 5-7 spesies, tiga diantaranya terdapat di Malaysia. M. charantia mungkin pertama kali dibudidayakan di bagian timur India dan selatan Cina. Pada saat ini, M. charantia tersebar di berbagai wilayah tropika baik sebagai tumbuhan yang dibudidayakan maupun tumbuh secara liar. (Achmad, 2007). M. charantia adalah tumbuhan herba berumur kurang lebih satu tahun yang tumbuh menjalar dan merambat. Tumbuhan yang merupakan sayuran buah ini mempunyai daun yang berbentuk menjari dengan bunga yang berwarna 10

7 kuning. Permukaan buahnya berbintil-bintil dan rasa buahnya pahit. M. charantia sangat mudah dibudidayakan dan tumbuhnya tidak tergantung pada musim. Persyaratan tumbuh dari M. charantia dalam budidaya, yaitu : a. Membutuhkan drainase tanah yang cukup baik b. Memerlukan tanah yang gembur dan banyak mengandung bahan organik c. Memerlukan P antara 5-6 d. Ketinggian antara 1 meter hingga 1500 meter dpl. Dari beberapa analisa bahan gizi yang ada dalam M. charantia didapat kandungan gizi seperti yang tercantum dalam tabel 2.4. Tabel 2.4. Kandungan gizi tiap 100 gram daun dan buah M. charantia Zat gizi Buah M. charantia Daun M. charantia Air 91,2 gram 80 gram Kalori 29 gram 44 gram Protein 1,1 gram 5,6 gram Lemak 1,1 gram 0,4 gram Karbohidrat 0,5 gram 12 gram Kalsium 45 mg 264 mg Zat besi 1,4 mg 5 gram Fosfor 64 mg 666 mg Vitamin A 18 SI 5,1 mg Vitamin B 0,08 mg 0,05 mg Vitamin C 52 mg 170 mg Folasin - 88 mg Sumber : Instalasi Penelitian dan Pengkajian Teknologi Pertanian 11

8 Mengenai gambar dari bunga, daun, dan buah dari tumbuhan M. charantia diperlihatkan pada gambar 2.1. Gambar 2.1. Bunga, Daun, dan Buah Tumbuhan Paria (Momordica charantia) Sumber : Beberapa jenis tumbuhan paria (M. charantia) yang ada dan sering dibudidayakan antara lain : a. Paria Gajih Paria ini paling banyak dibudidayakan dan paling disukai. Paria seperti ysng diperlihatkan pada gambar 2.2 ini biasa disebut paria putih atau paria mentega. Bentuk buahnya panjang dengan ukuran cm diameter 3-7 cm, berat rata-rata antara gram/buah. Paria ini berasal dari India dan Afrika. Gambar 2.2. Paria Gajih 12

9 Sumber : Instalasi Penelitian dan Pengkajian Teknologi Pertanian b. Paria ijau Paria hijau berbentuk lonjong, kecil dan berwarna hijau dengan bintilbintil agak halus. Paria ini banyak sekali macamnya, diantaranya paria ayam, paria kodok, paria alas atau paria ginggae. Dari berbagai jenis tersebut paling banyak ditanam adalah paria ayam. Buah paria ayam mempunyai panjang cm. Sedangkan paria ginggae buahnya kecil hanya sekitar 5 cm. Rasanya pahit dan daging buahnya tipis. Paria hijau ini mudah sekali pemeliharaannya, tanpa lanjaran atau para-para tumbuhan paria hijau ini dapat tumbuh dengan baik. c. Paria Import Jenis paria ini berasal dari Taiwan. Benih Paria ini merupakan hibrida yang final stock sehingga jika ditanam tidak dapat menghasilkan bibit baru. Jika dipaksakan juga akan menghasilkan produksi yang jelek dan menyimpang dari asalnya. Di Indonesia terdapat tiga varietas yang telah beredar yaitu Known-you green, Known-you no. 2, dan Moonshine. Perbedaan ketiga jenis paria import ini adalah mengenai permukaan kulit kecepatan tumbuh, kekuatan penampilan, bentuk buah, ukuran buah. d. Paria Belut Paria jenis ini memang kurang populer. Bentuknya yang memanjang seperti belut panjangnya antara cm dan berdiameter 4-8 cm. Paria belut seperti yang diperlihatkan pada gambar 2.3 ini tidak termasuk Momordica sp, 13

10 melainkan tergolong jenis Trichosanthus anguina L. Meskipun demikian orang lebih terbiasa memasukkan paria belut ini masuk kedalam jenis paria. Gambar 2.3. Paria Belut Sumber : Instalasi Penelitian dan Pengkajian Teknologi Pertanian Kajian Farmakologi Tumbuhan M. charantia telah digunakan dalam pengobatan tradisional di banyak negara untuk berbagai penyakit seperti antidiabetes, antimalaria, sakit saluran pencernaan, ginjal, dan sebagainya. leh karena itu, selama beberapa dekade terakhir banyak penyelidikan farmakologi telah dilakukan terhadap tumbuhan ini. Kajian antidiabetes terhadap buah ini telah banyak dilakukan (Grover, 2004), dan telah memperlihatkan aktivitas hipoglikemia pada hewan normal (Sarkar et al.,1996); aktivitas antihiperglikemia pada hewan diabetes yang diinduksi aloksan (Singh et al., 1989; Kar et al., 2003); atau hewan diabetes yang diinduksi streptozotosin (Ahmed et al., 2001; Grover et al., 2002), dan hewan diabetes secara genetik (Miura et al., 2001). Momordica charantia memperlihatkan adanya peningkatan jumlah dari sel-sel beta (Ahmed et al., 1998). 14

11 Pada penelitian yang lain, Momordica charantia juga memperlihatkan suatu aktivitas seperti insulin atau merangsang pankreas dalam mengeluarkan insulin (igashino et al., 1992). Selain itu, ekstrak etanol dari buah ini juga telah terbukti mampu menurunkan kadar gula darah setingkat dengan efek glibenklamid pada percobaan menggunakan hewan mencit (Virdi et al. 2003). Dalam percobaan klinik, ekstrak buah M. charantia yang menggunakan pelarut air dapat menurunkan kadar glukosa dalam darah pada diabetes mellitus tipe II (Grover, 2004). Evaluasi dari efek antidiabetik dari buah Momordica cymbalaria, yang merupakan tumbuhan satu genus, terhadap tikus yang diinduksi aloksan telah dilakukan. asil dari penelitian ini adalah adanya antihiperglikemik yang signifikan dengan metode oral dari ekstrak air seperti hasil yang ditunjukkan pada efek antihiperglikemia dengan induksi aloksan (Rao, 2003). Ekstrak daun M. charantia juga memperlihatkan aktivitas antibakteri dengan spektrum yang luas. Aktivitas antibakteri ekstrak daun M. charantia diperlihatkan terhadap Ascherchia coli, Salmonella paratyphi, Shigella dysenterae, dan Streptomyces griseus (Grover, 2004). Pemanis alami (glikosida cucurbitane) yang diisolasi dari buah M. grosvenori memiliki aktivitas antikarsinogenik dengan memperlihatkan efek inhibitor pada virus Epstein-Barr yang diinduksi promoter tumor kulit, 12--Tetradecanoylphorbol-13-asetat yang merupakan menyebab tumor (Takasaki, 2003). Buah dari M. charantia dapat memberikan efek menurunkan kadar trigliserida dalam hati secara signifikan dalam fraksi metanol pada tikus (Gamarallage, 2004). Dilaporkan pula bahwa, dari berbagai penyelidikan ternyata ekstrak M. charantia memperlihatkan 15

12 aktivitas antikanker terhadap leukimia limfoid, melanoma, kanker payudara, tumor kulit, kanker prostat, dan lain-lain (Grover, 2004) Kajian Fitokimia Selain kajian farmakologi, tumbuhan ini juga telah secara intensif dikaji aspek fitokimianya. Berdasarkan kajian pustaka yang telah dilakukan, sekurangkurangnya terdapat 50 senyawa metabolit sekunder dari golongan triterpena aglikon dan triterpena glikosida (Buckingham, 2006). Beberapa senyawa tersebut seperti diperlihatkan pada gambar 2.4 diantaranya adalah 3, 7, 23- trihidroksicucurbita-5,24-dien-19-al (1); 3, 7, 25-trihidroksicucurbita-5,23-dien- 19-al (2); 3,7 -dihidroksi-25-metoksi cucurbita-5,23-dien-19-al (3); 5,19- epoksi-25-metoksi cucurbita-6,23-dien-3,19-diol (4); 5,19-epoksi cucurbita- 6,23-dien-3,19,25-triol (5); 5,19-epoksi-19-metoksi cucurbita-6,23-dien-3,25- diol (6); 5,19-epoksi-19,25-dimetoksi cucurbita-6,23-dien-3 -ol (7); dan 5,19- epoksi-25-metoksi cucurbita-6,23-dien-3 ol (8) seperti pada gambar 2.4 (Mulholland, 1996). 16

13 C C R 1 2 R = 3 R = R' R R R' Gambar 2.4. Beberapa senyawa metabolit sekunder dari golongan triterpena aglikon dan triterpena glikosida Salah satu ciri kimia tumbuhan Momordica charantia ialah dihasilkannya berbagai glikosida triterpen jenis kukurbitan, yang ditemukan antara lain pada buah tanaman ini. Dari fraksi n-butanol ekstrak metanol buah segar Momordica charantia ditemukan sejumlah glikosida triterpen jenis kukurbitan, yang diberi nama berturut-turut goyaglikosida-a (9), goyaglikosida-b (10), goyaglikosida-c (11), goyaglikosida-d (12) (Murakami,2001). 17

14 3 C 3 C C 2 3 C 3 C 3 C (9) C 2 3 C (10) 3 C 3 C C 2 3 C (11) 3 C 3 C C 2 3 C (12) Gambar 2.5. Glikosida Triterpen Jenis Kukurbitan 18

15 Kandungan senyawa kimia lainnya di dalam M. charantia berdasarkan penelitian (Begum, 1996), seperti yang diperlihatkan pada gambar 2.6 diantaranya yaitu momordicin (C ) (13), momordicinin (C ) (14), momordicilin (C ) (15), momordenol (C ) (16), dan momordol (C ) (17). C 2 (13) (14) C 2 C C C C 2 (15) (16) (17) C 2 Gambar 2.6. Struktur Senyawa-Senyawa Kimia Dalam M. charantia 19

16 2.4. Ekstraksi Metode ekstraksi yang digunakan dalam mengisolasi suatu senyawa dari bahan alam tergantung pada tekstur, kandungan senyawa, dan sifat senyawa yang ingin diisolasi dalam bahan. Untuk mengisolasi suatu senyawa organik dari bahan alam, diperlukan informasi mengenai sifat-sifat kelompok senyawa yang akan diisolasi. Terdapat dua jenis metode ekstraksi, yaitu ekstraksi cair-padat dan ekstraksi cair-cair. Sedangkan dalam melakukan ekstraksi dapat dilakukan dengan berbagai cara, yaitu : Maserasi Teknik ini biasanya digunakan jika kandungan senyawa organik yang ada dalam bahan cukup tinggi dan telah diketahui jenis pelarut yang dapat melarutkan senyawa yang akan diisolasi. Pelarut yang digunakan sebaiknya tidak mudah menguap dan dengan menggunakan metode ini membutuhkan waktu yang cukup lama. Teknik maserasi hampir sama dengan metode perendaman, pelarut yang digunakan biasanya merupakan pelarut yang dapat melarutkan hampir semua senyawa yang terdapat dalam bahan Perkolasi Teknik ini dilakukan dengan cara melewatkan pelarut tetes demi tetes pada bahan yang akan diekstrak sehingga diperlukan pelarut yang lebih banyak. Pelarut yang digunakan tidak mudah menguap dan dapat melerutkan senyawa kimia yang akan diisolasi dengan baik. 20

17 Soksletasi Teknik ekstrasi ini dilakukan dengan menggunakan alat sokslet (soxhlet extractor) dan merupakan metode ekstraksi panas. Penggunaan alat ini dapat mengekstrak secara kontinu sehingga dapat menghemat pelarut yang digunakan dan dapat melarutkan senyawa yang lebih banyak. Cara kerja alat ini yaitu dengan menggunakan pelarut, lalu uap pelarut yang naik ke bagian atas sokslet yang akan didinginkan oleh pendingin sehingga pelarut akan mengembun kembali dan mengalir ke bawah membasahi bahan. Setelah pelarut mencapai ketinggian tertentu, maka pelarut yang telah mengandung zat terlarut (senyawa-senyawa kimia dari bahan) akan turun kembali ke labu awal. Proses ini berlangsung secara terus-menerus sehingga bahan akan terendam secara kontinu Fraksinasi Fraksinasi bertujuan untuk memisahkan senyawa-senyawa kimia dalam campuran senyawa dengan menggunakan beberapa metode pemisahan. Fraksinasi dilakukan dengan bertahap. Fraksinasi dapat dilakukan dengan memperhatikan kepolaran pelarut yang digunakan dengan metode cair-cair (merupakan cara sangat sederhana dan umum dilakukan) Uji Aktivitas Antidiabetes Keadaan diabetes dapat diinduksi pada hewan percobaan dengan cara pankreatomi dan juga secara kimia. Zat-zat kimia yang dapat digunakan sebagai induktor (diabetogen) seperti aloksan, streptozosin, glukagon, diaksosida, larutan glukosa dan sebagainya pada umumnya diberikan secara parenteral. Zat-zat 21

18 tersebut mampu menginduksi diabetes secara pemanen ataupun sementara dimana terjadi gejala hiperglikemia. Uji efek antidiabetes dapat dilakukan dengan dua metode, yaitu : a. Metode Uji Toleransi Glukosa Pada prinsipnya metode ini dilakukan pada hewan percobaan yang telah dipuasakan selama kurang lebih jam, diberikan larutan glukosa secara oral setengah jam sesudah pemberian sediaan obat yang diuji. Pada awal percobaan, sebelum pemberian obat dilakukan pengambilan cuplikan darah. Pengambilan cuplikan darah diulangi setelah perlakuan pada waktu-waktu tertentu. b. Metode Uji Induksi Aloksan Pada prinsipnya metode ini dilakukan pada mencit yang diberi suntikan aloksan monohidrat dengan dosis 70 mg/kg berat badan. Penyuntikan dilakukan secara intravena pada ekor mencit. Perkembangan hiperglikemia diperiksa setiap hari. Pemberian obat antidiabetika secara oral yang dapat menurunkan kadar glukosa darah dibandingkan terhadap mencit pada kontrol positif. Penurunan kadar glukosa darah pada kelompok uji diketahui dengan membandingkan hasil yang diperoleh dengan hasil dari kelompok kontrol positif. Semua data yang diperoleh dimuat dalam tabel dan dievaluasi secara statistik dengan menghitung standar deviasinya dan dengan menggunakan ANAVA untuk mengetahui yang berbeda makna. 22

19 2.6. Karakterisasi Senyawa dalam Fraksi Karakterisasi senyawa dalam fraksi dapat dilakukan dengan beberapa cara, diantranya uji fitokimia, analisis dengan menggunakan spektrometri IR (Infra Red), analisis menggunakan PLC (igh Performance Liquid Chromatography). a. Uji Fitokimia Uji fitokimia dilakukan untuk menentuan golongan senyawa pada suatu sampel dengan metode pereaksi warna. Dalam metode ini dapat diketahui secara kualitatif golongan senyawa yang terdapat pada masing-masing ekstrak. Senyawa yang diperiksa adalah senyawa golongan alkaloid, flavonoid, kuinon, tanin, steroid dan terpenoid. b. Spektrometri IR (Infra Red) Fungsi utama dari spektrometri IR adalah untuk mengenal struktur molekul khususnya gugus fungsional beserta lingkungannya. Prinsip kerja dari spektrometri IR adalah interaksi antara sinar IR dengan materi dimana suatu molekul akan bervibrasi apabila sinar pada panjang gelombang IR terserap. Seperti yang telah dikemukakan sebelumnya, kegunaan spektrometri IR adalah untuk mengenal struktur suatu senyawa organik, terutama gugus fungsional seperti, C=, C=C dan lain-lain. Atau lebih tepatnya dengan melihat spektrum IR suatu senyawa, kita dapat melihat adanya potongan-potongan molekul dalam suatu molekul. Untuk melihat struktur sampel secara keseluruhan dapat dilakukan dengan membandingkan spektrum sampel dengan spektrum standar. 23

20 c. PLC (igh Performance Liquid Chromatography) Prinsip dasar dari PLC adalah perbedaan distribusi molekul molekul komponen diantara dua fasa (fasa gerak dan fasa diam) yang kepolarannya berbeda. PLC menggunakan cairan sebagai fasa gerak. Fasa gerak selain berfungsi sebagai pembawa komponen-komponen campuran menuju detektor, juga dapat berinteraksi dengan solut-solut. leh karena itu, fasa gerak dalam PLC merupakan salah satu faktor penentu keberhasilan proses pemisahan Sistem kerja dari PLC, dimana bila eluen bersifat polar, maka sampel yang memiliki sifat kepolaran sama seperti eluen akan terelusi terlebih dahulu sedangkan bila eluen bersifat non polar, maka sampel yang memiliki sifat kepolaran sama seperti eluen akan terelusi terlebih dahulu yang kemudian terdeteksi oleh detektor. 24