PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK SARANG SEMUT

Transkripsi

1 1 PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK SARANG SEMUT (Myrmecodia pendens Merr & Perry) TERHADAP MORFOLOGI SPERMATOZOA TIKUS PUTIH (Rattus norvegicus L) YANG DIPAPAR ASAP ROKOK Tria Wilandari Dondo 1, Aryati Abdul 2 dan Mustamin Ibrahim 2 1) Mahasiswa Jurusan Biologi, 2) Dosen Jurusan Biologi Program Studi Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Negeri Gorontalo wilandari.dondo@gmaill.com

2 2 PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK SARANG SEMUT (Myrmecodia pendens Merr & Perry) TERHADAP MORFOLOGI SPERMATOZOA TIKUS PUTIH (Rattus norvegicus L) YANG DIPAPAR ASAP ROKOK Tria Wilandari Dondo 1, Aryati Abdul 2 dan Mustamin Ibrahim 2 1) Mahasiswa Jurusan Biologi, 2) Dosen Jurusan Biologi Program Studi Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Negeri Gorontalo wilandari.dondo@gmaill.com Abstrak: Tria Wilandari Dondo The effect of ant extract (Myrmecodia pendens Merr & Perry) of the morphology of spermatozoa white rats (Rattus norvegicus L) exposed cigarette smoke. Skripsi, Department of Biology, Faculty of Mathematics and Science, Gorontalo State University. Supervisor I Dra. Aryati Abdul, M.Kes dan Drs. Mustamin Ibrahim, M.Si. The study aimed to determine effect of extract Myrmecodia pendens Merr & Perry on the morphology white Rats (Rattus norvegicus L) were exposed by cigarette smoke. This study used completely random design with 3 treatments and 6 replication on day 14. In each treatment group is Rats were exsposed by cigarette smoke without extract Myrmecodia pendens Merr & Perry, white Rats were exposed by cigarette and administered by extract of Myrmecodia pendens Merr & Perry and control (-) untreated exposed cigarette smoke and extract Myrmecodia pendens Merr & Perry. Data were collected on day 14, Based on a statistical hypothesis test F count = 96,7 > F table = 3,68 which means that H 0 rejected and H1 accepted. The extract Myrmecodia pendens Merr & Perry of white Rats exposed to cigarette smoke afects the morphologi of sperm. Keywords : Morphology of spermatozoa, extract Myrmecodia pendens Merr & Perry, smoke cigarette. PENDAHULUAN Sarang semut merupakan salah satu tanaman yang biasa digunakan sebagai tanaman obat. Sarang semut (Myrmecodia pendens Merr. & Perry) dari famili Rubiaceae ini memiliki kandungan senyawa kimia dari golongan flavonoid dan tanin. Selain itu, sarang semut kaya akan antioksidan tokoferol (vitamin E) dan beberapa mineral penting untuk tubuh seperti kalsium, natrium, kalium, seng, besi, fosfor dan magnesium (Subroto, 2008). Tokoferol sebagai antioksidan dapat bereaksi dengan ROS dan radikal bebas lain. Pada proses ini tokoferol berperan sebagai radikal bebas yang tidak reaktif sehingga akan berikatan dengan elektron bebas dari radikal bebas reaktif lain (Quratul ainy, 2006). Radikal bebas merupakan suatu molekul yang sangat reaktif karena mempunyai satu atau lebih elektron yang tidak berpasangan (Wardatun, 2011). Radikal bebas yang beredar dalam tubuh

3 3 berusaha untuk mencuri elektron yang ada pada molekul lain seperti DNA dan sel (Fitria, 2010). Salah satu sumber utama radikal bebas yang berasal dari lingkungan adalah asap rokok. Diketahui bahwa asap rokok mengandung radikal bebas dalam jumlah yang sangat tinggi. Asap rokok terdiri dari asap utama (main stream smoke) dan asap samping (side stream smoke). Asap utama adalah asap tembakau yang dihisap langsung oleh perokok, sedangkan asap samping adalah asap tembakau yang disebarkan ke udara bebas, sehingga dapat terhirup oleh orang lain yang dikenal sebagai perokok pasif (Sitepoe, 2000). Dalam satu kali hisap diperkirakan sebanyak 1014 molekul radikal bebas masuk ke dalam tubuh (Yuniwati Y, Mulyohadi, 1989 dalam Anggraini, 2006). Hasil riset Larson dkk., (Theodorus, 1994 dalam Komalasari dan Avin, 2005) menemukan bahwa sensivitas ketajaman penciuman dan pengecapan para perokok berkurang bila dibandingkan dengan nonperokok. Setiap satu batang rokok dibakar, mengeluarkan sekitar bahan kimia diantaranya adalah nikotin, gas karbon monoksida, nitrogen oksida, hidrogen sianida, ammonia, akrolein, benzene, tar dan etanol (Aditama, 1992 dalam Fitriani dkk., 2010). Dengan kata lain bahwa kadar nikotin yang dilepaskan ke lingkungan lebih banyak daripada yang dihisap oleh perokok, hal ini disebabkan karena asap rokok arus samping terus menerus dihasilkan selama rokok menyala walaupun tidak sedang dihisap (Susanna dkk., 2003). Banyak peneliti telah berhasil menemukan kaitan bahwa asap rokok dapat menimbulkan ketidaksuburan, terbukti bahwa asap rokok dapat mengganggu fungsi spermatozoa (Purbandari, 2010). Rokok dapat berpengaruh terhadap kualitas dan kuantitas sperma (Hafiz, 2006). Selain itu asap rokok juga memberikan pengaruh yang sangat besar terhadap spermatozoa seperti mengubah bentuk spermatozoa menjadi tidak normal, merendahkan jumlah bilangan spermatozoa, dan melambatkan spermatozoa menuju sel telur (Aditama, 1992 dalam Fitriani dkk., 2010). Untuk menghindari dampak buruk dari radikal bebas, tubuh membutuhkan asupan antioksidan dari luar tubuh. Antioksidan adalah senyawa kimia yang dapat menyumbangkan satu atau lebih elektron pada radikal bebas, sehingga radikal bebas tersebut dapat dihambat (Suhartono, 2002 dalam Sumarno, 2010). Antioksidan merupakan senyawa yang mampu menunda, memperlambat, atau

4 4 menghambat reaksi oksidasi pada makanan maupun obat dimana senyawa-senyawa tersebut mudah teroksidasi sehingaa sel-sel lain terhindar dari radikal bebas. Antioksidan tersebut antara lain seperti vitamin C, vitamin E, piruvat, glutation, dan carnitin (Ramadan. et al 2002., dalam Quraitul ainy, 2006). Selain itu antioksidan berasal dari buah-buahan maupun tumbuhan. Salah satu tumbuhan yang mengandung senyawa antioksidan adalah sarang semut (Myrmecodia pendens Merr. & Perry). Melihat manfaat dari sarang semut sebagai antioksidan, hingga kini belum ada studi empiris yang menggunakan sarang semut untuk melihat morfologi spermatozoa pada Tikus putih (Rattus norvegicus L) jantan yang diberi paparan asap rokok. Oleh karena itu penelitian ini bertujuan untuk melihat Pengaruh pemberian ekstrak Sarang semut (Myrmecodia pendens Merr & Perry) terhadap morfologi spermatozoa Tikus putih (Rattus norvegicus L) yang dipapar asap rokok. METODE PENELITIAN Penelitian ini merupakan penelitian kuantitatif. Metode penelitian yang digunakan adalah metode eksperimen, metode eksperimen dengan desain rancangan acak lengkap (RAL). Desain ini gunakan dalam penelitian karena perlakuan dikenakan sepenuhnya secara acak kepada unit-unit eksperimen serta dilakukan dalam skala laboratorium jadi kondisi lingkungan dianggap homogeny. Desain Rancangan Acak Lengkap (RAL) ini bertujuan untuk mengetahui kemungkinan adanya hubungan sebab akibat antar variable dalam penelitian. Tumbuhan yang digunakan berasal dari ekstrak sarang semut. Radikal bebas yang digunakan berasal dari asap rokok Jenis rokok yang digunakan adalah rokok kretek jenis Gudang Garam Merah. Hewan coba yang digunakan adalah Tikus putih jantan dewasa yang memenuhi kriteria ( baik umur maupun berat badan ) sebanyak 18 ekor. Sampel penelitian diperoleh secara acak dengan kriteria inklusi : Tikus putih jantan, umur 8-12 minggu, berat badan gram. Langkah-langkah persiapan hewan uji sebagai berikut : Tikus terlebih dulu diadaptasikan selama 2 minggu serta diberikan makan dan minum secara ad ibitum. Menimbang hewan uji sebanyak 18 ekor Semua Tikus dibagi menjadi tiga kelompok secarau acak, masing masing terdiri dari 6 ekor tikus dengan tiga perlakuan berbeda pada tiap kelompoknya. Kelompok K- (kontrol negatif) : tidak

5 5 mendapat perlakuan paparan asap rokok dan pemberian ekstrak sarang semut, Kelompok K+ (kontrol positif) : hanya diberi paparan asap rokok tanpa pemberian ekstrak sarang semut, Kelompok P1 : diberi paparan asap rokok dan ekstrak sarang semut dosis 129 mg/200 gram BB Tikus. Perlakuan dilakukan selama 14 hari. Pemaparan asap rokok dilakukan dengan cara setiap kelompok kontrol Tikus putih yang akan diberikan perlakuan dengan asap rokok dimasukkan pada kandang dengan ukuran 30 x 15 x 15 cm dengan menggunakan spuid yang ujungnya diberi rokok yang dibakar, dipapar dengan menghabiskan 1 batang rokok. Pemberian ekstrak sarang semut (Myrmecodia pendens Merr & Perry) diberikan satu kali dalam sehari selama 14 hari penelitian, tiap tikus dalam kelompok perlakuan diberi ekstrak sarang semut sesuai dosis yang telah ditentukan. Setelah 14 hari perlakuan pada hewan uji, pada hari ke-15 Tikus hewan uji tersebut dimatikan dengan cara didislokasi leher kemudian dibedah dan dipisahkan organ reproduksinya, kemudian diambil sampel spermatozoa pada tiap-tiap kelompok untuk diperiksa morfologi spermatozoa. Sampel diambil dari kauda epididimis diamati dengan cara mengambil organ testis beserta epididimis lalu diletakkan di dalam cawan petri yang berisi NaCl 0,9 %, kemudian kauda epididimis dipisahkan dengan cara memotong bagian proksimal korpus epididimis dan bagian distal vas deferens. Bagian kauda epididimis yang telah dipotong tersebut dimasukkan ke dalam gelas arloji yang berisi 1 ml NaCl 0,9 % untuk dipotong sedikit pada bagian proksimal kauda dengan gunting kemudian menekan kauda dengan perlahan hingga cairan epididimis keluar dan tersuspensi dengan NaCl 0,9 %. Selanjutnya, untuk mengetahui morfologi spermatozoa diperiksa dengan cara pewarnaan supravital dengan eosin Pada gelas objek, diteteskan satu tetes suspensi sperma ditambah dengan satu tetes eosin, kemudian dibuat sediaan hapus. Pengamatan sediaan dilakukan di bawah mikroskop dengan perbesaran 100 kali dan dihitung dengan menggunakan counter. Perhitungan dilakukan pada 200 spermatozoa, diamati bentuk spermatozoa normal, dan abnormal. Teknik analisis data yang digunakan pada penelitian ini yaitu dengan teknik analisis data statistik. Data yang diperoleh dianalisis dengan analisis varians (ANAVA) untuk melihat ada tidaknya pengaruh Pemberian ekstrak sarang semut

6 6 (Myrmecodia pendens Merr & Perry) terhadap morfologi spermatozoa tikus putih (Rattus norvegicus L) yang dipapar asap rokok. Jika hasil analisis varians (ANAVA) menunjukkan bahwa ekstrak sarang semut (Myrmecodia pendens Merr & Perry) berpengaruh terhadap viabilitas spermatozoa tikus putih (Rattus novergicus L) yang dipapar asap rokok, maka uji dilanjutkan dengan uji BNT untuk melihat ada tidaknya perbedaan dari setiap perlakuan. Hasil HASIL DAN PEMBAHASAN Dari hasil penelitian, pemberian ekstrak sarang semut (Myrmecodia pendens Merr & Perry) berpengaruh terhadap morfologi spermatozoa tikus putih (Rattus norvegicus L) yang dipapar asap rokok, hasil penelitian menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang sangat nyata antar kontrol (P1) terhadap kontrol (+) menunjukkan penurunan nyata terhadap rendahnya rata-rata morfologi normal spermatozoa. Sedangkan kelompok kontrol (P1) dan kontrol (-) tidak menunjukkan perbedaan nyata rata-rata normal spermatozoa. Hal ini dapat dilihat pada tabel di bawah ini : Tabel 1. Rata-rata jumlah morfologi normal dan abnormal spermatozoa Per Ulangan Rata-rata ± sd Notasi (P1) 6 70,36 ± 3,90 A (+) 6 46,89 ± 2,75 B (-) 6 70,98 ± 3,50 A Keterangan : huruf yang berbeda pada kolom yang berbeda menunjukkan perbedaan nyata pada morfologi normal spermatozoa. Dari Tabel diatas dapat dilihat bahwa pemberian ekstrak sarang semut memperkecil abnormalitas spermatozoa tikus putih yang dipapar asap rokok. Hal ini juga dapat dilihat pada hasil pengamatan mikroskopis ditemukan abnormalitas pada morfologi spermatozoa Tikus putih. Bentukbentuk abnormalitas spermatozoaa dapat dilihat pada gambar. 1: (a) (b) (c) (d) (e) (f) Gambar. 1 (a). Normal, (b). Abnormal:hanya kepala, (c) Abnormal:hanya, (d) Abnormal: ekor putus, (e) Abnormal: ekor melipat, (f) Abnormal:kepala ganda

7 7 Pembahasan Hasil pengamatan mikroskopis spermatozoa yang diberi perlakuan dengan asap rokok tanpa ekstrak Sarang semut terlihat adanya dominasi sel-sel spermatozoa tikus putih yang tidak normal yaitu tidak adanya ekor atau kepala, ekor melipat, ekor putus dibagian tengah dan juga bentuk kepala ganda. Menurut Hafez et al. (2000) dalam Azlina (2009) bahwa sel-sel tersebut mengalami degenerasi. Dalam penelitian ini diduga radikal bebas pada asap rokok dapat mempengaruhi abnormalitas spermatozoa. Hal ini sesuai dengan pendapat Purnawati (2006) bahwa meningkatnya abnormalitas morfologi dapat disebabkan adanya radikal bebas yang terdapat pada asap rokok. Menurut Yueniwati Y, Ali M (2004) dalam Zulfa (2006) dalam asap rokok terkandung radikal bebas (radikal hidroksil). Paparan asap rokok diduga menyebabkan produksi radikal bebas meningkat pesat. Radikal bebas merupakan suatu molekul yang sifatnya tidak stabil sehingga untuk memperoleh pasangan elektron, molekul ini cenderung bersifat sangat reaktif dan korosif bagi sel-sel yang sehat. Jumlah radikal bebas yang berlebihan akan menyebabkan kerusakan membran spermatozoa akibat terbentuknya lipid peroksida pada membran plasma. Zulfa (2006) juga menyatakan bahwa membran plasma spermatozoa mengandung fosfolipid dan asam lemak tak jenuh dalam jumlah besar, dimana asam lemak tak jenuh itu justru sangat rentan terhadap serangan radikal bebas, terutama radikal hidroksil, sehingga ROS dapat dengan mudah menembus masuk membran plasma. Mekanisme utama dalam proses kerusakan membran spermatozoa oleh ROS ini adalah pada reaksi peroksidasi lipid atau LPO (Lipidperoxidation). Mekanisme terjadinya peroksida lipid adalah sebagai berikut: Inisiasi : RH R* + H* Propagasi: R* + O2 ROO* ROO* + RH ROOH + R* Terminasi: ROO* + ROO* ROOR + O 2 R* + ROO* ROO R* + R* RR Bentuk abnormal pada morfologi spermatozoa berkaitan dengan radikal bebas pada asap rokok yang terbukti bahwa asap rokok dapat mengganggu fungsi spermatozoa (Purbandari, 2010). Kelainan abnormal kepala dan ekor pada penelitian ini ditandai dengan keadaan dimana spermatozoa hanya mempunyai bagian kepala tanpa ekor atau ekor tanpa kepala. Abnormalitas pada keadaan ini diduga bisa

8 8 terjadi secara primer maupun sekunder, kelainan terjadi secara primer akibat adanya gangguan selama proses spermatogenesis, sedangkan kelainan sekunder terjadi karena kerusakan spermatozoa selama perjalanannya di dalam epididimis atau kesalahan dalam preparasi preparat. Kepala dan ekor spermatozoa dihubungkan oleh membran sel sehingga memungkinkan terjadinya pemisahan selama pergerakan sel dan perpindahan sitoplasma. Pada spermatozoa yang mengalami abnormalitas pada bagian posterior kepala, kadang tidak terbentuk membran yang sempurna sehingga kontak dengan basal ekor kurang kuat (Prastowo, 2008), hal ini karena kerusakan membran spermatozoa oleh ROS. Kelainan pada abnormal kepala ganda diduga terjadi pada saat spermatogenesis. Spematogenesis dapat terjadi melalui beberapa tahap pembelahan. Tahap awalnya spermatogonia akan mengalami perubahan menjadi spermatosit primer, kemudian menjadi spermatosit sekunder dan menjadi spermatid. Sebelum spermatid menjadi spermatozoa ada fase yang dilewati spermatid yang disebut fase spermiogenesis. Fase ini terdiri dari fase golgi, tutup, akrosom dan pematangan bertujuan untuk membentuk morfologi normal spermatozoa yang terdiri dari kepala, leher dan ekor. Gangguan kelainan ini bisa disebabkan oleh akibat hormonal, radikal bebas dan bahan makanan. Radikal bebas akan menyebabkan terjadinya peroksidasi lipid membran sel dan merusak organisasi membran sel. Membran sel ini sangat penting bagi fungsi reseptor dan fungsi enzim, sehingga terjadinya peroksidasi lipid mengakibatkan hilangnya fungsi seluler secara total (Evan, 2000; Singh, 1998 dalam Amarudin, 2012). Gangguan pada saat spermatogenesis ini terjadi akibat kekurangan energi, hal ini karena senyawa kimia dalam rokok dapat mengubah mekanisme kerja hormon dan enzim yang mengatur hitungan atau kelincahan gerak (motilitas) serta morfologi sperma (Mangoenprasodjo dan Hidayati, 2005 dalam Putra, 2006). Pembentukan ROS adalah proses fisiologi tubuh, namun apabila terjadi peningkatan yang berlebihan maka akan dapat berpengaruh negatif terhadap tubuh (Quratul ainy, 2006). Antioksidan pada semen dapat mengendalikan kadar ROS. Sehingga kadar ROS tidak akan meningkat lebih dari fungsi normalnya. Dalam penelitian ini menunjukkan peningkatan morfologi spermatozoa normal pada perlakuan dengan ekstrak sarang semut setelah dipapar asap rokok, hal ini dapat

9 9 dilihat pada rata-rata kontrol (-) terhadap P1 yang tidak berbeda nyata. Pemberian ekstrak Saranag semut dapat mengembalikan jumlah spermatozoa normal. Peningkatan rerata spermatozoa normal ini diduga karena kandungan yang terdapat dalam Sarang semut, dimana Flavonoid merupakan golongan senyawa bahan alam dari senyawa fenolik yang banyak merupakan pigmen tumbuhan. Fungsi kebanyakan flavonoid dalam tubuh kita adalah sebagai antioksidan. Flavonoid merupakan antioksidan alam yang mampu bertindak sebagai pereduksi radikal hidroksil (*OH), superoksida (O2*-), dan radikal peroksil (ROO*) (Harun & Syari 2002 dalam Soeksmanto dkk, 2009). Tokoferol sebagai antioksidan dapat bereaksi dengan ROS dan radikal bebas lain. Vitamin E, terutama tokoferol bekerja sebagai antioksidan pemutus rantai (Chain-breaking-anti-oxidants) yang mencegah terjadinya tahap propagasi pada aktivitas radikal dengan cara kelompok hidroksil bereaksi dengan kelompok radikal peroksil yang membentuk hidroperoksid dan tokoferoksil (Suryohudoyo 2000, dalam Anggraini, 2006). Keterangan ROO* = Radikal Peroksil AH = Antioksidan ROOH = Hidroksiperoksid A = Tokoferoksil Ketersediaan antioksidan dalam tubuh harus dipertahankan dan ditingkatkan untuk menanngkal serangan radikal bebas. Serangan radikal bebas pada membran plasma spermatozoa akan menimbulkan reaksi rantai peroksidasi lipid, yang pada akhirnya menyebabkan terputusnya rantai asam lemak menjadi senyawa toksik terhadap sel spermatozoa. Peroksidasi lipid pada kepala dan ekor dapat menyebabkan perubahan morfologi spermatozoa (Saleh RA, Agarwal A, 2002 dalam Puspasari, 2007). Perubahan morfologi tersebut dapat dicegah dengan adanya vitamin E. KESIMPULAN Berdasarkan hasil penelitian dan pembahasan dapat disimpulkan bahwa Pemberian ekstrak sarang semut berpengaruh terhadap morfologi spermatozoa tikus putih jantan (Rattus norvegicus L.) yang dipapar asap rokok dengan dosis 129 mg/200 gr BB tikus. ROO* + AH ROOH + A SARAN Saran dalam penelitian ini diharapkan perlu dilakukan penelitian lebih

10 10 lanjut mengenai pengaruh ekstrak sarang semut (Myrmecodia pendens Merr. & Perry) terhadap komponen-komponen lain yang terdapat pada hasil analisis semen dan pengaruh pemberian ekstrak sarang semut (Myrmecodia pendens Merr. & Perry ) pada organ-organ lain dalam tubuh. DAFTAR PUSTAKA Adiyati, Pradipta Nuri Ragam Jenis Ektoparasit Pada Hewan Coba Tikus Putih (Rattus Norvegicus) Galur Sprague Dawley. Institut Pertanian Bogor. Bogor. Alam, S., Waluyo, S Sarang Semut Primadona Baru Dari Papua. Online, Tersedia di : semut.co.id/nirmala_juli_2006_sar ang_semut.pdf. diakses tanggl 9 februari 2012 Amalia, Rizki Pengaruh Ekstrak Pegagan (Centella asiatica (L.) urban) terhadap efek sedasi pada mencit balb/ c. Karya tulis ilmiah (online). Fakultas Kedokteran. Universitas diponegoro semarang. Diakses 19 oktober Amarudin Pengaruh Merokok terhadap Kualitas Sperma Pada Pria Dengan Masalah Infertilitas Studi Kasus Kontrol Di Jakarta Tahun Fakultas Kesehatan Masyarakat. Depok Anggaraini, Diana, Pengaruh pemberian vitamin e terhadap motilitas spermatozoa mencit Jantan strain balb/c yang diberi Paparan asap rokok. Universitas Diponegoro. Semarang. Arief, Sjamsul Radikal Bebas. Universitas Airlangga. Surabaya. Azlina Pengaruh Pemberian Ekstrak Rumput Kembar (Biophytum petersianum, Klotzsch) Terhadap fertilitas tikus jantan (Rattus norvegicus L). Institut Pertanian Bogor. Bogor Dawit,VC, Pengaruh Pemberian Ekstrak Sarang Semut (Myrmecodia pendens Merr & Perry) terhadap Morfologi Spermatozoa Tikus Putih (Rattus norvegicus ) Hiperlipidemia. UNG, Gorontalo. Fitria, Antioksidan Vs Radikal. Online, tersdedia di : Diakses tanggl 9 februari 2012 Fitriani, Kartini Eriani, Widya Sari The effect of cigarettes smoke exposure Causes fertility of male mice (Mus Musculus). Jurnal Natural. 10 (2), 1-2, (Online) Tersedia di alnatural/images/pdf/hal_12_17_2_ 2010.pdf Hafiz, Alini Pengaruh Pemberian Vitamin C terhadap Motilitas Spermatozoa Mencit Jantan Strain balb/c yang diberi Paparan Asap Rokok. Universitas Diponegoro. Semarang. Hedianto, YE, E. Lisyastutir, E. Najmiyatir, Yetty, YG Pengaruh Pemaparan CD dan CU Terhadap Abnormalitas Spermatozoa Ikan

11 11 Mas (Cyprinas carpio, Linn). lktiologi Indonesia Vol. 3. No.I : 2-5. Univeriitas Padjadjarin, Jatinangor, Sumedang Kuncahyo Ilham, Sunardi Uji aktivitas Antioksidan Ekstrak Belimbing Wuluh (averrhoa bilimbi, l.) Terhadap 1,1-diphenyl- 2- Picrylhidrazyl (DPPH). D-III Teknologi Farmasi Fakultas Teknik Universitas Setia Budi Komalasari, Dian & Avin Fadillah Helmi Faktor-faktor penyebab perilaku merokok pada remaja. Universitas Islam Indonesia dan Universitas Gadjah Mada. Yogjakarta. Muhammad, Ismiyati Efek antioksidan vitamin c terhadap tikus (rattus norvegicus l) jantan akibat Pemaparan asap rokok. Institut Pertanian Bogor. Bogor Nugraheni, Titisari, Okid Parama Astirin, Tetri Widiyani Pengaruh Vitamin C terhadap Perbaikan Spermatogenesis dan Kualitas Spermatozoa Mencit (Mus musculus L.) Setelah Pemberian Ekstrak Tembakau (Nicotiana tabacum L.). Biofarmasi 1 (1): UNS. Surakarta Pramudito, Hendaru Perbandingan Kualitas Spermatozoa Pada Tikus Wistar Diabetes Melitus dan Hiperlipidemia Artifisia. Universitas Diponegoro. Semarang. Prastowo, Agus Morfologi dan Morfometri Spermatozoa Babi Yorkshire dalam Nilai Ejakulat dengan Pewarnaan Williams. Institut Pertanian Bogor. Bogor Purbandari, Rosalia Pengaruh pemberian ekstrak daun Cyclea barbata l. Miers terhadap motilitas spermatozoa Mencit balb/c jantan yang dipapar asap rokok. Universitas Diponegoro. Semarang Purboyo, Agus Efek antioksidan Ekstrak Etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) Pada kelinci yang dibebani glukosa. (Online) Fakultas Farmasi : Universitas Muhamadiyah Surakarta. Purnawati, M. Dian Pengaruh pemberian jus buah tomat ( licopersicum esculentum mill ) terhadap Jumlah spermatozoa mencit strain balb/c jantan yang dipapar asap rokok. Universitas Diponegoro. Semarang. Online. Tersedia di ian.pdf Puspasari, Denti, Pengaruh Pemberian Ekstrak Kedelai Dosis Bertingkat Terhadap Morfologi Spermatozoa Mencit Jantan Strain BALB/C. Fakultas kedokteran Universitas diponegoro.semarang Putra, BP Studi Histopatologi Pengaruh Pajanan Asap Rokok Kretek Terhadap Organ Testis Tikus Putih Galur Sprague-Dawley. Institut Pertanian Bogor. Bogor. Quratul ainy Sari Pengaruh Pemberian Vitamin E terhadap Jumlah Spermatozoa Mencit Jantan Strain balb/c yang diberi Paparan

12 12 Asap Rokok. Universitas Diponegoro. Semarang. Samsuria, Efek Asap Rokok Pada Tikus (Rattus norvegicus) Bunting Terhadap Tampilan Fisiologis Induk Dan Anaknya Setelah Dilahirkan. Institut Pertanian Bogor. Bogor Sitepoe M. Kekhususan Rokok Indonesia. Grasindo : Jakarta Subroto M. Ahkam, Sarang Semut Penakluk Penyakit Maut. Online, tersedia di : m/obat%20alternatif.htm Subroto Ahkam & Hendro Saputro Gempur Penyakit Dengan Sarang Semut. Jakarta: PT Gramedia Pustaka Utama. Sukmaningsih, A.A.SG. A, I Gusti A.M.E, Ngurah, IW, Ni Wayan S Gangguan Spermatogenesis Setelah Pemberian Monosodium Glutamat pada Mencit (Mus musculus L). Jurnal Biologi: XV(2) : Universitas Udayana. Kampus Bukit Jibaran. Wardatun Sri Uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol Akar, kulit batang dan daun tanaman sambiloto (andrographis paniculata ness.) Dengan metode Linoleat tiosianat. Fitofarmaka, Vol. 1 (2).Universitas Pakuan. Widowati Wahyu, Ratu Safitri, Rymond Rumumpuk, Marlinda Siahaan Penapisan Aktivitas Superoksida Dismutase pada Berbagai Tanaman. Universitas Kristen Maranatha. Bandung Yanita Penentuan aktivitas antioksidan dan kadar senyawa Fenolat total pada buah anggur merah (vitis vinifera linn. Var. Red globe) dan anggur hijau (vitis vinifera linn. Var. Chinsiang). Universitas Andalas. Padang. Zulfah, Iffah, Pengaruh Pemberian Jus Tomat (Lycopersicum esculentum Mill) Terhadap Morfologispermatozoa Mencit Strain Balb/C Jantan Yang Dipapar Asap Rokok.Universitas Diponegoro. Semarang. Sumarno Pengaruh Ekstrak Sarang Semut (Myrmecodia pendens Merr. & Perry) Terhadap proliferasi sel dan indeks apoptosis kanker payudara mencit C3H. Universitas Diponegoro. Semarang. Susanna, Dewi., Budi Hartono., Hendra Fauzan Penentuan Kadar Nikotin Dalam Asap Rokok. Depok: Departemen Kesehatan Lingkungan, Fakultas Kesehatan Masyarakat, Universitas Indonesia.