BAB 4 METODE PENELITIAN. komparasi tanpa memberikan perlakuan pada sampel Populasi Sampel, Sampel, dan Besar Sampel

Transkripsi

1 BAB 4 METODE PENELITIAN 4.1. Jenis Penelitian Jenis penelitian yang dilakukan adalah observasional analitik yaitu penelitian yang dilakukan untuk menyelidiki adanya hubungan atau komparasi tanpa memberikan perlakuan pada sampel Populasi Sampel, Sampel, dan Besar Sampel Populasi Sampel Populasi penelitian diambil dari pasien klinik Konservasi Rumah Sakit Gigi dan Mulut Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Airlangga periode Agustus-Oktober 2012 yang memiliki karies tinggi Sampel Sampel penelitian adalah pasien klinik Konservasi Rumah Sakit Gigi dan Mulut Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Airlangga periode Agustus-Oktober 2012 yang memiliki karies tinggi, dengan saliva pasien sebagai unit analisis Kriteria Sampel Kriteria sampel adalah pasien pria dan wanita berusia 20 hingga 40 tahun yang memiliki karies tinggi dengan keadaan umum baik, tidak memiliki kelainan sistemik seperti demam, diare yang terlalu lama, diabetes, gagal ginjal kronis, tidak berada di bawah pengaruh

2 obat-obatan yang dapat mempengaruhi sekresi saliva seperti analgesik, antikonvulsan, antiemetik, antihistamin, antihipertensi, antinausea, antiparkinson, antipruritik, diuretik, dekongestan, ekspektoran, muscle relaxant, obat-obatan psikotropik, sedatif dan antispasmodic, tidak mengkonsumsi antibiotik dalam kurun waktu satu bulan, tidak sedang hamil, tidak sedang dalam radioterapi kepala dan leher, dan tidak merokok Perkiraan Besar Sampel Sampel dipilih secara consecutive sampling dengan perkiraan besar sampel yang akan diteliti dipakai rumus uji hipotesa menurut Lemeshaw: n = 2ơ (Z ½α + Zβ) 2 (µ 1 - µ 2 ) 2 = 2(0,97853) ((1,96 + 0,842) 2 ) (12, ,8333) 2 = 2ơ 2 (Z ½α + Zβ) 2 (µ 1 - µ 2 ) 2 = 6, = 6 N ơ = jumlah sampel = standart deviasi µ1 = rerata respon kelompok 1 µ2 = rerata respon kelompok 2 Z ½α = adjusted SD untuk α Zβ = adjusted SD untuk β

3 42 Jumlah sampel yang diambil pada penelitian ini adalah 18 sampel pria dan 18 sampel wanita untuk meningkatkan validasi penelitian Teknik Pengambilan Sampel Pengambilan sampel diambil dengan menggunakan teknik simple random sampling Variabel Penelitian Variabel Bebas Variabel Terikat : Jenis kelamin : Jumlah koloni Streptococcus mutans dalam saliva 4.4. Definisi Operasional Jumlah Streptococcus mutans adalah angka yang menunjukkan jumlah Streptococcus mutans yang ada dalam saliva penderita pria dan wanita dengan karies tinggi, yang diperoleh dengan cara menghitung koloni bakteri atau Colony Forming Unit (CFU/ml) yaitu hasil perkalian jumlah koloni pada plate agar dengan faktor pengencer. Penderita karies tinggi ditentukan melalui pemeriksaan DMF T dan pemeriksaan saliva menggunakan GC Saliva Check Buffer Kit. Pemeriksaan DMF T dilakukan dengan cara melihat dan menghitung jumlah gigi karies, gigi yang hilang atau diekstraksi karena karies, dan gigi yang telah ditumpat. Penderita dikatakan memiliki resiko karies tinggi jika memiliki skor DMF T >6. Pemeriksaan saliva dengan menggunakan GC Saliva Check Buffer Kit meliputi pemeriksaan hidrasi, viskositas, ph,

4 43 kuantitas dan kapasitas buffer saliva. Masing-masing pemeriksaan dinilai dengan skor merah untuk hasil paling paling buruk, kuning untuk hasil yang baik, dan hijau untuk keadaan saliva yang paling baik. Penderita dikatakan memiliki resiko karies tinggi jika hasil pemeriksaan terdiri dari skor merah, skor kuning, dan maksimal 1 skor hijau Lokasi dan Waktu Penelitian Pengambilan sampel dilakukan di klinik Konservasi Rumah Sakit Gigi dan Mulut Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Airlangga, sedangkan pekerjaan laboratorium dikerjakan di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Airlangga. Penelitian dilakukan bulan Agustus hingga Oktober Alat dan Bahan Penelitian Alat: 1. Kaca mulut 2. Pinset 3. Sonde 4. Ekskavator 5. Nier bekken 6. Tabung reaksi steril 7. Mikropipet 8. Bunsen burner 9. Rak tabung reaksi

5 Inkubator 11. Colony counter Bahan: 1. Kapas 2. Cotton roll 3. Alkohol 70% 4. Spiritus 5. Korek api 6. GC Saliva Check Buffer Kit 7. Media TYC (Trypton Yeast Cystine) agar 8. Larutan BHI (Brain Heart Infusion) steril. A C B D E F G H I J Keterangan Gambar: Gambar 4.1. Alat dan Bahan A. Alkohol 70% B. Tabung reaksi steril C. Larutan BHI D. Rak tabung reaksi E. GC Saliva Check Buffer Kit F. Bunsen burner G. Mikropipet H. Alat diagnostic (kaca mulut, sonde)

6 I. Cotton roll J. Media TYC ag 4.7. Cara Kerja Pengambilan Sampel 1. Sampel penelitian adalah pasien klinik Konservasi Rumah Sakit Gigi dan Mulut Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Airlangga periode bulan Agustus-Oktober 2012 berusia 20 hingga 40 tahun berkeadaan umum baik dengan resiko karies tinggi berdasarkan pemeriksaan DMF T dan pemeriksaan GC Saliva Check Buffer Kit. Pemeriksaan dilakukan di klinik Konservasi Rumah Sakit Gigi dan Mulut Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Airlangga. 2. Pemeriksaan DMF T dilakukan dengan cara memeriksa keadaan klinis rongga mulut dan menghitungan jumlah gigi yang karies, gigi yang hilang atau diekstraksi karena karies, dan gigi yang telah ditumpat. Pasien dikatakan memiliki karies tinggi jika memiliki skor DMF T lebih dari Pemeriksaan saliva dengan menggunakan GC Saliva Check Buffer Kit mencakup pemeriksaan derajat hidrasi, viskositas, ph, kuantitas, dan kapasitas buffer. Pengambilan dan pemeriksaan saliva dilakukan pada pagi hari. Pada tes hidrasi, bibir bawah pasien ditarik dan dikeringkan dengan kasa, untuk kemudian dicatat waktu yang diperlukan untuk muculnya titik-titik saliva dari kelenjar saliva minor.

7 Kriteria merah diberikan jika waktu yang dibutuhkan lebih dari 60 detik, kuning jika waktu yang dibutuhkan 30 hingga 60 detik, dan hijau jika waktu yang dibutuhkan kurang dari 30 detik. Pada tes viskositas, pasien diminta untuk meletakkan ujung lidah pada daerah palatum untuk kemudian dilihat konsistensi saliva pada mukosa dasar mulut. Kemudian dilakukan web test dengan bantuan tongue blade atau kaca mulut dengan cara mengangkat saliva dengan instrumen tersebut, lalu diamati panjang maksimal regangan salivanya. Saliva normal dapat membentuk web dengan panjang 2 hingga 5 cm, sedangkan saliva yang kental seperti pada pasien xerostomia, dapat memiliki panjang hingga 15 cm. Kriteria merah menunjukkan saliva yang tampak kental, berbusa, dengan web yang panjang, sedangkan kuning menunjukkan saliva yang tampak tidak terkumpul pada dasar mulut dan tampak sedikit lengket, dan hijau menunjukkan adanya saliva yang terkumpul dan membentuk lapisan yang tipis dan berkilau pada dasar mulut. Tes ph dilakukan pada unstimulated saliva yang dianggap sebagai indikator umum tingkat keasaman rongga mulut, dengan cara pasien diminta untuk meludah pada tempat yang telah disediakan sebanyak 1 ml, kemudian strip ph dimasukkan ke dalam saliva. Setelah 10 detik, ph ditentukan berdasarkan instruksi pabrik. Kriteria merah, menunjukkan ph

8 kurang dari 5,8, sedangkan kuning menunjukkan ph antara 5,8 sampai 6,8, dan hijau menunjukkan ph di atas 6,8. Pada tes kuantitas, pasien diminta untuk mengunyah permen paraffin tanpa rasa. Setelah 30 detik, pasien diminta untuk membuang saliva. Kemudian pasien diminta untuk mengunyah permen paraffin lagi dan diminta untuk tidak menelan salivanya. Selama 5 menit, saliva yang keluar setelah stimulasi pengunyahan permen paraffin dikumpulkan dalam wadah yang telah disiapkan setiap 1 menit. Nilai ambang flow rate saliva adalah 0,7 ml/menit, apabila flow rate lebih rendah dari ambang tersebut maka akan terdapat peningkatan resiko karies. Kriteria merah dipilih jika volume saliva kurang dari 3,5 ml, kuning jika volume saliva antara 3,5 hingga 5 ml, dan hijau jika volume saliva lebih dari 5 ml. Setelah volume diukur, saliva yang telah terkumpul digunakan untuk tes kapasitas buffer. Pada tes kapasitas buffer, 3 ml saliva diambil dengan pipet untuk kemudian diteteskan pada test strip, masing-masing 1 ml untuk 3 kolom pad pada test strip. Apabila terdapat kelebihan saliva, test strip dimiringkan sebesar 90 o. Setelah 5 menit, warna-warna pada test strip dibandingkan dengan panduan dari pabrik. Masing-masing warna memiliki skor yang kemudian dijumlah dan dinilai berdasarkan kriteria warna. Kriteria merah

9 digunakan jika skor akhir antara 0-5, kuning jika skor akhir antara 6-9, dan hijau jika skor akhir antara Pasien dikatakan memenuhi kriteria resiko karies tinggi, jika hasil pemeriksaan menunjukkan skor merah, kuning, dan maksimal 1 skor hijau. 4. Pasien diinstruksikan untuk menghindari asupan makanan dan minuman (kecuali air) satu jam sebelum pengambilan saliva. 5. Sebelum dilakukan pengambilan saliva, pasien diminta untuk berkumur dan dalam kondisi tenang. Selama pengambilan saliva, kepala harus sedikit condong ke depan dan mulut harus tetap terbuka dan saliva dibiarkan mengalir ke dalam wadah yang telah disediakan hingga terkumpul saliva sebanyak 2 cc. 6. Transport saliva dari klinik Konservasi ke Laboratorium Mikrobiologi dengan cara meletakkan tabung yang berisi saliva ke dalam termos es Penanaman Streptococcus mutans 1. Penanaman Streptococcus mutans dilakukan dengan pengenceran sampai 10 2 sesuai dengan standart McFarland. Sebagai pengencer digunakan larutan BHI steril. 2. Pada pengeceran pertama, 0,5 ml sedimen keruh diambil dengan mikropipet dan dimasukkan ke dalam tabung pertama yang berisi 4,5 ml larutan BHI (pengenceran 10 1 ).

10 3. Kemudian untuk pengenceran berikutnya dari sedimen yang telah diencerkan 10 1, diambil 0,5 ml dengan mikropipet, lalu dimasukkan ke dalam tabung kedua yang juga berisi 4,5 ml larutan BHI (pengenceran 10 2 ). 4. Larutan yang sudah diencerkan hingga 10 2 diambil 0,1 ml kemudian dituang pada media TYC, kemudian diratakan dengan spreader. 5. Media agar yang sudah ditanami bakteri dimasukkan ke dalam candle jar, lalu disimpan di dalam inkubator pada suhu 37 o C selama 1x24 jam Identifikasi dan Penghitungan Koloni 1. Setelah diinkubasi selama 1x24 jam, candle jar dikeluarkan dari inkubator dan petri dish dikeluarkan 2. Koloni berwarna putih keabuan, tampak seperti frosted glass, cembung, berdiameter ± 1 mm, dan dapat mengandung cairan (glukan larut air) pada bagian atas atau berupa genangan polisakarida di sekitar koloni. 3. Penghitungan dibantu dengan menggunakan colony counter Analisis Data Analisis statistik pada penelitian dilakukan dengan menggunakan program SPSS. Uji analisis statistik ini dilakukan untuk melihat normalitas distribusi data penelitian dengan uji Kolmogrov Smirnov Test. Selanjutnya

11 dilakukan uji homogenitas data menggunakan Levene Test. Kemudian membandingkan dua variabel yang berbeda menggunakan uji Independent T Test dan Mann Whitney Test Alur Penelitian Populasi pasien pria dan wanita dengan karies tinggi di RSGMP FKG Unair periode Agustus-Oktober 2012 Saliva 2 cc Sedimen 1 cc Pengenceran 10 2 Penanaman pada media TYC Penghitungan jumlah koloni dengan colony counter Data Analisis data Kesimpulan