GAMBARAN HISTOLOGI GINJAL TIKUS BETINA (Rattus rattus) YANG DIINJEKSI VITAMIN C DOSIS TINGGI DALAM JANGKA WAKTU LAMA

Transkripsi

1 GAMBARAN HISTOLOGI GINJAL TIKUS BETINA (Rattus rattus) YANG DIINJEKSI VITAMIN C DOSIS TINGGI DALAM JANGKA WAKTU LAMA TIM PENELITI : 1. NI WAYAN SUDATRI, S.Si., M.Si, 2. IRIANI SEYAWATI, S.Si.,M.Si. 3. NI MADE SUARTINI, S.Si.,M.Si. 4. DWI ARIANI YULIHASTUTI, S.Si.,M.Si. PROGRAM STUDI / JURUSAN BIOLOGI FAKULTAS MIPA UNIVERSITAS UDAYANA TAHUN 2015

2 LatarBelakang - Kesehatan adalah aset paling berharga bagi kita. -Salah satu vitamin yang dibutuhkan untuk menjaga kesehatan tubuh adalah vitamin C. - Fungsivitamin C; meningkatkansistemimunitas(daya tahan) Tubuh, mempercepat proses penyembuhan serta membuat kulit lebih segardancerah. - Saat ini untuk mendapatkan kulit cerah dan bersih dengan cara injeksi vitamin C sudah banyak ditawarkan baik oleh dokter kulit maupun oleh praktisi-praktisi kecantikan. - Sekali injeksi vitamin C dosis yang diberikan sekitar mg sedangkan dosisvitamin C yang disarankanuntukmenjagakesehatansekitar50-75 mg/hari

3 HATI Organ detoksifikasi Untuk mengetahui adanya kerusakan hati dilakukan uji kadar Serum glutamate oxalloacetate transaminase (SGOT) dan Serum glutamate pyruvate transaminase (SGPT) Enzim-enzim ini biasanya terkandung dalam sel-sel hati. Jika hati terluka, sel-sel hati menumpahkan enzim-enzim kedalam darah, menaikan tingkat-tingkat enzim dalam darah dan menandai kerusakan hati.(ashoka Babu et al., 2012).

4 GINJAL Fungsi, yaitu menyaring dan mengeluarkan racun maupun kelebihan mineral dari dalam tubuh melalui urin. Jika fungsi ginjal terganggu akibat peradangan atau karena penyakit batu ginjal maka dengan sendirinya tubuh akan mengalami keracunan. Selain itu, indikasi adanya kerusakan atau penurunan fungsi ginjal bisa dilihat dari kadar kreatinin plasma yang meningkat. Hal ini sebagai akibat ketidakmampuan ginjal mengeluarkan kreatinin ke dalam urin dan dalam jumlah besar kreatinin masuk kembali ke dalam darah hingga kadarnya dalam plasma meningkat di atas batas normal (Soesanti dan Darmawan, 2009).

5 Tujuan umum: Mengetahui efek samping dari injeksi vitamin C dosis tinggi dalam jangka waktu yang lama terhadap kesehatan Tujuan khusus 1. Untuk mengetahui kadar kolagen kulit dan tulang tikus betina yang diinjeksi dengan vitamin C dosis tinggi. 2. Untuk mengetahui gambaran histologis hati tikus betina yang diinjeksi dengan vitamin C dosis tinggi. 3. Untuk mengetahui kadar SGPT dan SGOT plasma darah sebagai indikator kerja hati tikus betina yang diinjeksi dengan vitamin C dosis tinggi. 4. Untuk mengetahui gambaran histologis ginjal tikus betina yang diinjeksi dengan vitamin C dosis tinggi. 5. Untuk mengetahui kadar kreatinin plasma darah sebagai indikator fungsi ginjal tikus betina yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi. 6. Untuk mengetahui kemampuan reproduksi tikus betina yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi

6 Bahan penelitian Bahanutamayang digunakandalampenelitianiniadalahvitamin C dosistinggi(4000 mg/sekaliinjeksi) untukmanusia. Hewanmodel yang digunakanadalahtikusbetinadewasausia3-4 bulandenganbobotbadanantara gram. Dosis yang digunakan dikonversikan dari dosis yang digunakan pada manusiaketikus. Faktorkonversidaritikuskemanusiaadalah0.14 Beratbadanwanitadewasayang diinjeksidiperkirakankuranglebih70 kg, sehinggadosisvitamin C yang diberikanpadatikusadalah 0.14 x 0.02 x 4000 = 11,2 mg/sekalisuntik/ ekor

7 Tahun sebelumnya ( ) Tahun Tikus jantan Tikus jantan Hati: -Histologi hati -- Kadar SGOT -KadarSGPT Tikus betina Tahun I Testis Histologi Testis Kualitas sperma Testosteron Ginjal: -Kadar kreatinin -Histologi ginjal darah Penurunan kualiatas Sistem reproduksi jantan Imunohistokimia testis Tulang: Sediaan Histologi Tulang Tahun II Analisis darah perifer Kadar MDA Kemampuan Reproduksi: - Panjang Siklus estrus -Kadar Estrogen,Progesteron -Perkembangan embrio - Jumlah anak

8 Persiapan kandang, vitamin C, zat-zat Kimia Pemeliharaan hewan, aklimatisasi, berat badan awal Injeksi vitamin C dosis tinggi sesuai lama perlakuan TAHUN I Beratbadanakhir, pembedahan, plasma darah, organ hati, ginjal, kulit, tulang Tulang: Histologis tulang Hati: Sediaan histologi hati Penentuan kadar: -SGOT -SGPT Pengamatan Analisis Data Ginjal: Sediaan histologi ginjal Penentuan Kreatin Histologis tulang? Histologishati? Kadar SGOT, SGPT plasma? Histologis ginjal? Kadar kreatin plasma?

9 Persiapan kandang, zat-zat Kimia Pemeliharaan hewan, aklimatisasi, berat badan awal Perlakuan injeksi vitamin C dosis tinggi Panjang siklus estrus TAHUN 2 Perkawinan, kemampuan reproduksi ada/tidaknya aborsi Beratbadanakhir, pembedahan, plasma darah, organ Ovarium Kadar Estrogen,Progesteron Perkembangan embrio Jumlah anak Pengamatan Analisis Data

10 Proses pembuatan blok parafin dan preparat histologi 1. Fiksasi; BNF 10 % 2. Dehidrasididalamlarutanetanolbertingkat70%, 80%, 95%, dan alkohol absolut 3. Penjernihan(clearing) denganlarutanxiloltigapemindahan, masing-masing tahap berlangsung selama 60 menit pada suhu kamar. 4. Infiltrasi parafin dengan memasakkan jaringan pada parafin cair(suhu 60ºC) tiga kali pemindahan masing-masing selama 45 menit. 5. Embeding/jaringan dibenamkan di dalam cetakan berisi parafin cair, kemudian didinginkan dalam suhu kamar sehingga menjadi blok parafin. 6. Blok parafin disayat setebal 5μm dengan menggunakan rotary microtome. 7. Kemudian sayatan diletakkan dipermukaan air hangat dengansuhu45ºc danditempelkanpadagelasobyekyang telah dilapisi gelatin. Preparat dikeringkan dengan cara diletakkan secara vertikal, kemudian diletakkan pada pada objeck glass.

11 Pewarnaan Hematoksilin Eosin (HE) Potongan jaringan dalam parafin yang akan diwarnai dengan hematoxilin-eosin diaturdalamrakuntukpewarnaan, kemudiandiinkubasipadasuhu60ºc selama45 menit, setelah itu diletakkan pada suhu ruangan sampai dingin. Selanjutnya dilakukan deparafinisasi melalui tahap-tahap pelarutan parafin dalam xilol sebanyak 3 kali, kemudian dilanjutkan dengan proses rehidrasi dalam alkohol bertingkat100%, 95%, dan80%, 70%m masing-masing tahap berlangsungselama 5 menit, kemudian dimasukkan dalam akuades selama 10 celup atau sampai alkohol larut. Prosesselanjutnyaadalahpewarnaandalamhematoksilindenganmerendamslide dengan larutan hematoxilin selama 5 menit kemudian dicuci pada pada air mengalir selama5 menit, dandilanjutkandenganpewarnaanmenggunakaneosin selama3 menit, Setelah diwarnai dalam eosin, slide dimasukkan dalam larutan alkohol bertingkat dari 70%, 80%, 90%, sampai 100% masing-masing selama 10 celup., kemudian dilanjutkan dengan proses clearing menggunakan xilol sebanyak dua kali masing-masing selama 2 menit, setelahitupreparatditutupdengankacapenutupdenganmedia balsam kanada. Dan preparat siap untuk diamati.

12 Analisis Data Data yang didapatkan dianalisis secara statistika dengan menggunakan software SPSS dan bila terdapat pengaruh nyata atau sangat nyata akan dilanjutkan dengan uji Duncan pada taraf α 0.05 dan α0.01.dan biladata tidakterdistribusisecaranormal maka diuji dengan Test Kruskal Wallis dan dilanjutkan dengan uji Mann Whitney.

13 HASIL PENELITIAN Kelaian Histologi ginjal yang ditemukan dalam penelitian ini adalah : Edema Glomelurus, Penyempitan kapsula bowman, Kongesti glomelurus, Endapan protein di tubulus, degenerasi di tubulus, Inti piknotik di tubulus, Infiltrasi sel radang, Hemorragi. Histologi ginjal dengan pewarnaan HE (pembesaran 100x insert 500X) A.Glomerulus normal B.Edema glomerulus C. Penyempitan glomerulus D. Hemorrage

14 Histologi ginjal dengan pewarnaan HE (pembesaran 400x) insert 300x) A.Endapan protein di tubulus B. Inti piknotik C. Kongesti glomerulus D.Infiltasi sel radang E. Degenerasi lemak di tubulus

15 Tabel 9. Uji ANOVA dan standar error Edema Glomelurus, Penyempitan kapsula bowman, KongestiglomelurusHistologiginjaltikusbetina(MusmusculusL.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi dilanjutkan dengan uji Duncans No Perlakuan Edema glomelurus Penyempitan kapsula bowman Kongesti glomelurus (%) Endapan protein tubulus 1 K (Kontrol) 13.0 ± 3.0 a 12.0 ± 2.54 a ± 4.06 a 6.0 ± 1.0 a 2 P1 (30 hari) 46.0 ± 6.52 b ± b ± b 14.8 ±2.74 b 3 P2 (50 hari) 60.0 ± 18.7 b ± b ± b 19.0 ± 2.91 b 4 P3 (70 hari) 60.0 ± 4.08 b ± b ± 3.82 b 18.0 ±1.57 b 5 P4 (90 hari) 64,3 ± b ± 6.43 b ± 20.0 b ± 20.0 b

16 Tabel 10. Uji ANOVA dan standar error degenerasi di tubulus, inti piknotik di tubulus, infiltrasi sel radang, danhemorragi ginjaltikusbetina(musmusculusl.) yang diinjeksivitamin C dosis tinggi dilanjutkan dengan uji Duncans No Perlakuan Degenerasi tubulus Inti piknotik tubulus Infiltrasi sel radang(%) Hemorragi (%) 1 K (Kontrol) 7.0 ± 1.22 a 9.0 ± 1.87 a 6.0 ± 1.0 a 6.0 ± 2.46 a 2 P1 (30 hari) 4470 ± 3.88 b ± 4.90 b 8.66 ± 0.97 a 16.0 ±3.67 a b 3 P2 (50 hari) 47.0 ± 3.0 b ± 4.0 b c 11.0 ± 4.19 a 14.0 ± 2.91 b 4 P3 (70 hari) 56.0 ± 6.96 b c ± 4.89 c 17.0 ±1.22 b 19.0 ±2.91 b 5 P4 (90 hari) 66.0 ± 8.57 c 52.0 ± 6.44 b c 10.6 ± 2.0 a 20.0 ± 4.18 b

17 KESIMPULAN Terjadi peningkatan kelainan histologi ginjal pada tikus betina yang yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi dalam waktu yang lama.

18 UcapanTerimakasih Penulis mengucapkan banyak terima kepada Lembaga Penelitian dan Pengabdian kepada Masyarakat Universitas Udayana dan Dikti atas dana yang diberikan melalalui dana Desentralisasi Hibah Bersaing tahun anggaran 2014.