ISOLASI STEROIDDARI FRAKSI N-HEKSANA BATANG BAJAKAH TAMPALA (Spatholobus littoralis Hassk.)

Transkripsi

1 ISOLASI STEROIDDARI FRAKSI N-HEKSANA BATANG BAJAKAH TAMPALA (Spatholobus littoralis Hassk.) Maria Dewi Astuti 1, Abdi Maulana 2, Evi Mintorini Kuntowati 3 Program Studi Kimia FMIPA Universitas Lambung Mangkurat Program StudiFarmasi FMIPA Universitas Lambung Mangkurat Program StudiBiologi FMIPA Universitas Lambung Mangkurat Jl. A. Yani Km. 38 Banjarbaru Kalsel Telp astuti_md17@yahoo.co.id Abstrak. Telah dilakukan penelitian tentang isolasi senyawa steroid dari fraksi n-heksana batang bajakah tampala. Isolasi senyawa dilakukan dengan mengekstraksi batang bajakah tampala dengan metanol, dilanjutkan dengan ekstraksi cair-cair dengan n-heksana, kemudian difraksinasi dengan kromatografi vakum cair dihasilkan fraksi A-H. Fraksi F dimurnikan dengan kromatografi lapis tipis preparatif dihasilkan isolat. Isolat berupa serbuk berwarna putih. Berdasarkan uji kualitatif dan analisis spektra UV, IR, 1 H dan 13 C NMR menunjukkan bahwa isolat merupakan senyawa steroid yang mengandung gugus OH, karbon ikatan rangkap dua (C=C), karbonil (C=O). Isolat disarankan sebagai 6α-hidroksistigmas-4-en-3-on. Kata kunci:bajakah tampala, Spatholobus littoralis Hassk, steroid, 6α-hidroksistigmas-4-en-3-on Abstract. It has been done a research about isolation of steroid compound from n-hexane bajakah tampala (Spatholobus littoralis Hassk) stem. Isolation compounds was did by macerated bajakah tampala stem in methanol, partioned by liquid-liquid extraction in n-hexane, fractionated by liquid vacuum chromatography produced A-H fraction. Fraction F was purified by preparative thin layer chromatography produced isolate. Isolate was white powder. Based on qualitative test and UV, IR, 1 H dan 13 C NMR spectra analysis showed that isolate is an steroid has OH grup, C double bond (C=C), carbonil (C=O). Isolat suggested as 6α-hidroksistigmas-4-en-3-on. Key words:bajakah tampala, Spatholobus littoralis Hassk, steroid, 6α-hidroksistigmas-4-en-3-on PENDAHULUAN Masyarakat Indonesia telah menggunakan tumbuhan sebagai salah satu alternatif pengobatan secara turun temurun. Bajakah tampala (Spatholobus littoralis Hassk) dari famili Fabaceaetelah digunakan oleh masyarakat Pulang Pisau (Kalimantan Tengah) secara empiris sebagai obat disentri, obat pegal dan mengobati luka. Belum ada literatur yang mengkaji tentang tumbuhan ini dilihat dari kandungan senyawa kimia di dalamnya. Penelitian pada Spatholubus suberectus dilaporkan bahwa terdapat 3,4,7- trihidroksiflavon, eriodiktiol, platimenin, dihidroksikuarsetin, butin, neoisilikuiritigenin, dihidrokaemferol, likuiritigenin, 6- metoksieriodiktiol, formonetin, daedezin, dan kalikosin [1]. Selain itu dilaporkan juga terdapat steroid pada Spatholubus suberectus yaitu stigmastan-3β-6α-diol [2]. Senyawa steroid lainnya yaitu stigmas-5,22-dien-3β-21-diol-3β,2- diheksadekanoat telah dilaporkan dari famili Fabaceae [3]. Isolasi steroid dari bajakah tampala dilakukan dengan memfraksinasi ekstrak metanol dengan n-heksana dan dilanjutkan dengan fraksinasi fraksi n-heksana secara kromatografi vakum cair, dan kromatografi lapis tipis preparatif (KLTp) hingga diperoleh isolat. Karakterisasi steroid dilakukan berdasarkan data B - 9

2 spektra Ultraviolet (UV), inframerah (IR), dan 1 H dan 13 C-NMR BAHAN DAN METODE Alat Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini antara lain alat maserasi (maserator), ayakan, blender, botol vial, chamber, corong kaca, corong pisah, cutter, destilator, gelas beker, gelas ukur, kolom kromatografi vakum cair diameter 7 cm dan tinggi 5 cm, lampu UV λ 254 nm dan 366 nm, oven (Finco Inc), pipet ukur, plat kaca untuk kromatografi lapis tipis preparatif (KLTp), Chamber, propipet, rotary evapavorator (Buchi), spatula, spektrofotometer 1 H-NMR (JEOL type JNM-ECA 500)spektrofotometer IR (Shimadzu prestige 21), spektrofotometeruv-visible (Hitachi u- 2100), sudip, sentrifuge, statif, tabung sentrifuge, timbangan analitik, dan waterbath(memmert). Bahan Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian ini antara lainbatang bajakah tampala, air suling, aluminium foil, n-heksana yang telah didistilasi, kertas saring, kloroform p.a., metanol yang telah didistilasi, metanol p.a., plat KLT (Macherey Nagel D-5160 Duren), silika gel 60 for coloum ( mesh), silika gel 60 GF 254. Prosedur Penelitian Pembuatan serbuk batang bajakah tampala Sampel berupa batang bajakah tampala dicuci hingga bersih dan dirajang. Setelah dirajang, sampel dikeringanginkan dan dihaluskan sehingga didapatkan serbuk batang bajakah tampala. Isolasi Serbuk kering bajakah tampalasebanyak 2975,5g dimaserasi dengan pelarut metanol selama 3 x 24 jam sambil sesekali diaduk.. Setiap 24 jam campuran disaring kemudian filtratnya diuapkan dengan rotary evaporator dan dikentalkan di atas waterbath sehingga diperoleh ekstrak metanol (44,55g). Selanjutnya ekstrak metanol disuspensikan dengan air suling (90mL) dan difraksinasi dengan dengan pelarut n-heksana (180mL). Lapisan n-heksana dipekatkan dengan rotary evaporator kemudian dikentalkan di atas waterbath hingga mengental sehingga diperoleh fraksi n-heksana (10,33g). Kemudian fraksi n-heksana dipisahkan dengan kromatografi kolom vakum cair dengan eluen n- heksana,n-heksana : kloroform dengan perbandingan 95:5 dan terakhir menggunakan kloroform. Hasil dari isolasi dengan kromatografi vakum cair ditampung dalam vial kemudian dipantau dengan KLT menggunakan eluen n-heksana : kloroform (1:1). Hasil isolasi dengan pola/nilai Rf yang sama digabungkan sehingga diperoleh 7 fraksi, yaitu fraksi A (40mg), B 40mg, C (20mg), D (57mg), E (29mg), F (197mg) dan G (191mg). Kemudian Fraksi F dipisahkan lebih lanjut dengan KLT preparatif silika gel GF254 menggunakan eluen n-heksana-kloroform (1:1) menghasilkan isolat. Selanjutnya dilakukan uji kemurnian pada isolat dengan eluen (n-heksana, n-heksana : kloroform (6:4), (1:1), dan kloroform, dan dengan KLT dua dimensi (n-heksana : kloroform (1:1) dan (2:3). Semua kromatogram KLT menunjukkan noda tunggal dan berflouresensi dibawah lampu UV 366 nm. Identifikasi Isolat dengan Spektrofotometri UV, IR dan 1 H dan 13 C-NMR Isolat yang telah dinyatakan murni kemudian diidentifikasi dengan spektrofotometri UV, IR, dan 1 H dan 13 C-NMR. HASIL DAN PEMBAHASAN Isolat yang diperoleh berupa serbuk berwarna putih. Uji kualitatif isolat dengan pereaksi Lieberman-Buchard(asetat anhidrat + asam sulfat pekat) menghasilkan warna hijau B - 10

3 kebiruan. Hal ini mengindikasikan bahwa isolat merupakan steroid. Spektra UV isolat menunjukkan adanya serapan maksimum pada λmaks 240 nm. Hal ini menunjukkan adanya transisi elektronik π-π*, diduga dari gugus etilen yang terkonjugasi dengan gugus karbonil. Menurut [4] serapan pada λmaks 240±2 nm dimiliki oleh steroid 4- en-3-on. Jadi isolat diduga memiliki ikatan rangkap yang terkonjugasi dengan gugus karbonil. Adanya ikatan rangkap dan karbonil pada isolat dikuatkan oleh adanya vibrasi C=C pada bilangan gelombang 1614,42 cm -1 dan 1670,35 cm -1 untuk vibrasi gugus C=O pada spektra inframerah.pita serapan pada 3446,79 cm -1 yang melebar menujukkan adanya gugus O-H pada isolat. Selain itu terdapat pula vibrasi C-H ulur pada 2937,59 dan 2868,22 cm -1 dan dan vibrasi C-H tekuk pada 1460,11cm -1 dan 1379,10 cm -1. Adanya vibrasi C-H tekuk pada spektra inframerah mengindikasikan adanya gugus gem dimetil yang lazim ditemukan pada senyawa terpenoid dan steroid. Berdasarkan hasil ini maka isolat diduga merupakan steroid yang memiliki C=C, C=O, OH dan gem dimetil. Spektra 1 H-NMR memperlihatkan sejumlah pergeseran kimia dari 0,78-5,70 ppm, dan menunjukkan puncak yang sangat rapat pada daerah pergeseran kimia 0-2,5 ppm. Data pergeseran kimia tersebut menunjukkan bahwa isolat memiliki proton pada karbon alifatik. Adanya sinyal pada δh 5,72 ppm (1H,s) menunjukkan adanya proton olefin pada isolat. Menurut [5] pergeseran kimia pada 5,72 ppm (1H,s) menyatakan kehadiran proton pada sistem CO-CH=C-. Data tersebut didukung oleh adanya pergeseran kimia dengan 2,2-2,4 ppm yang mengindikasikan adanya metilen yang berdekatan dengan gugus karbonil. Terdapat pergeseran kimia pada 4,46 (0,5H,s) dan 4,67 (0,5H, s) ppm yang menunjukkan adanya sinyal untuk karbon metin yang mengikat gugus hidroksil (-OH). Terdapat pula sinyal-sinyal yang khas untuk gugus metil yaitu pada pergeseran kimia 1,17 (3H,s), 0,70 (3H,s), 0,92 (3H,d), 0,85 (3H,d), 0,80 (3H,d) dan 0,82 (3H,t). Sinyal 2 metil dublet menunjukkan adanya gemdimetil. Spektra 13 C-NMR menunjukkan adanya C karbonil (C=O) pada pergeseran kimia 199,9 ppm dan karbon olefin (C=C) pada pergeseran kimia 172,0 dan 123,9 ppm. Data ini mendukung bahwa terdapat gugus karbonil dan C=C pada kerangka steroid. Pergeseran kimia 79,2 ppm menunjukkan adanya karbon teroksigenasi (C-OH) yang mendukung adanya OH pada isolat. Selain itu terdapat pula sinyal karbon metil pada pergeseran kimia 20,0; 19,2; 18,8; 17,5; 12,2; dan 12,1 ppm. Berdasarkan data spektra UV, inframerah, 1 H- dan 13 C-NMR isolat maka dilakukan penelusuran literatur yang sesuai dengan data isolat. Senyawa tersebut adalah 6αhidrokisistigmas-4-en-3-on[6]. Perbandingan nilai pergeseran kimia proton dan karbon dapat dilihat pada Tabel 1. Tabel 1. Nilai Pergeseran Kimia Senyawa Pembanding Hidrokisistigmas-4-en-3-on [6] dan Isolat No δc (ppm) δh (ppm) C Pembanding Isolat Pembanding Isolat 1 36,3 38,2 2 33,8 34,2 2,38 (2H, m) 3 199,5 199, ,5 123,9 6,16 (1H,s) 5,72 (1H,s) 5 171,7 172,0 6 68,7 79,2 4,33 (1H, ddd, J=12,0;5,6;1,6Hz) 4,56 (1H,s) 7 41,5 39,8 8 29,7 32,2 9 53,7 53, ,5 38, ,1 21, ,5 40, ,5 42, ,9 56, ,2 24, ,2 28, ,5 56, ,0 12,1 0,71 (3H,s) 0,70 B - 11

4 (3H,s) 19 19,1 19,2 1,17 (3H,s) 1,17 (3H,s) 20 36,1 36, ,3 17,5 0,92 J=6,8 Hz) 22 34,1 35, ,1 26, ,8 45, ,1 29, ,9 20,0 0,85 J=6,8Hz) 27 18,7 18,8 0,82 (3H,d, J=6,9Hz) 28 23,1 23, ,0 12,2 0,86 (3H, t, J=7,6Hz) 0,92 J=6,5Hz) 0,80 J=6,5Hz) 0,85 J=5,8Hz) 0,82 (3H, t, J=12,3) Tabel 1 memperlihatkan data pergeseran kimia yang mirip antara senyawa pembanding dan isolat. Satu proton pada C ikatan rangkap (C4) senyawa pembanding muncul pada pergeseran kimia 6,16 (1H,s) tidak jauh berbeda dengan isolat yang muncul pada δh 5,97 (1H,s). Gugus gem dimetil isolat muncul pada 0,80 (3H,d, J=6,5) dan 0,85 J=0,58) sedangkan senyawa pembanding pada 0,85 (3H, d, J=6,8) dan 0,82 J= 6,9). Adanya ikatan rangkap (C=C) pada C5 dan C4 isolat ditunjukkan oleh pergeseran kimia 172,0 dan 123,9 ppm yang tidak berbeda jauh dengan senyawa pembanding yang muncul 171,7 dan 119,5 ppm. Ikatan rangkap ini terkonjugasi dengan karbon karbonil (C3) yang muncul pada pergeseran kimia 199,9 ppm seperti halnya karbon karbonil pada senyawa pembanding di δc 199,5 ppm [6]. Berdasarkan analisis di atas maka isolat adalah 6α-hidrokisistigmas-4-en-3-on seperti Gambar 1. Senyawa 6α-hidrokisistigmas-4-en- 3-on pernah diisolasi dari Cornus cousa Burg (Cornaceae). Gambar 1. Struktur 6α-hidrokisistigmas-4-en-3-on KESIMPULAN Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa adalah steroid yang memiliki gugus OH, C=C dan C=O. Berdasarkan data spektra UV, inframerah dan 1 H dan 13 C-NMR isolat adalah 6α-hidrokisistigmas- 4-en-3-on. DAFTAR PUSTAKA 1. Lee, M. H., Y.P. Lin, F.L. Hsu, G.R. Zhan & K.Y. Yen Bioactive Constituents of Spatholubus suberectus In Regulating Tyrosine-Related Proteins and mrna in Hemn Cells. Phytochemistry67: Garcez, F.R., W.S. Garcez, D.L.S. Miguel, A.A.T.Serea, F.C. Frado Chemical Constituents from Terminalia glabrescents. J. Bram. Chem. Soc.14 (3): Sharma, K.S., N. Vasudeva, P. Rathi & M. Ali Isolation and Identification of a New Phytosterol Ester from Tephrosia purpurea (Linn.) Pers. Root. Int. J. Chem. Sci.6 (4) : Kasal,A., M. Budesinsky, W.J. Griffiths Spectroscopic Methods of Steroid Analysis. a_downloaddocument/ c2.pdf?sgwid= P Georges, P., M. Sylvestre, H. Ruegger& P. Bourgeois Ketosteroids and B - 12

5 Hydroxyketosteroids, Minor Metabolites of Sugarcane Wax. Steroids71: Lee, D. Y., L. Jung. K. H. Yoo, M.C. Song, I.S. Cung. E.M. Ahn, D. K. Kim& N.I. Back Cytotoxic Sterols from the Fruits of Cornus kousa Burg. J. App. Biol. Chem5 (12):73-75 Prosiding Seminar Nasional Kimia, ISBN : B - 13