LAMPIRAN. Biakan Jamur Ganoderma boninense

Transkripsi

1 62 LAMPIRAN FLOW SHEET A. Alur Kerja Antagonisme In Vitro Biakan Jamur Ganoderma boninense Hasil Pengamatan Diinokulasikan pada media MGMC pada jarak 3, cm dari tempat inokulum bakteri. Diteteskan 10 µl suspensi bakteri kitinolitik pada cakram standard Oxoid Diinkubasi pada suhu 30 o C dan dilakukan pengamatan selama lima hari Dilakukan pengukuran zona hambat B. Pengamatan abnormalitas miselium G. boninense setelah uji antagonis Biakan Jamur Ganoderma boninense Dipotong ujung miselium G. boninense pada permukaan PDA berbentuk block suare Diletakkan pada objek glass Hasil Pengamatan Diamati adanya abnormalitas pertumbuhan miselium G. boninense

2 63 C. Pembuatan Suspensi Bakteri Kitinolitik Biakan bakteri kitinolitik Suspensi Bakteri Disubkultur dalam media NA dan diinkubasi ± 2 hari Diambil biakan bakteri kitinolitik dengan jarum ose Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi akuades steril sebanyak 10ml Dihomogenkan dengan cara divortex Disamakan kekeruhannya dengan Standar Mac Farland yaitu 10 8 CFU/ml D. Pembuatan Suspensi Jamur Ganoderma boninense Tubuh buah Jamur Ganoderma boninense Suspensi Jamur Dicuci dengan aquadest steril Ditimbang seberat 1 gram Dimasukkan ke dalam 10 ml aquadest steril Dihomogenkan Suspensi Jamur Ganoderma boninense Diambil 1 tetes Dihitung dalam kamar hitung/haemositometer Diencerkan sehingga mencapai Kerapatan 2 x 10 konidia / ml

3 64 E. Penyediaan Media Tanam Tanah dari Perkebunan Di pasteurisasi selama 3- jam pada suhu 80 o C Hasil Dicampur dengan pupuk kandang yang steril dengan perbandingan 3:1 F. Uji Patogenisitas Bibit Kelapa Sawit (umur 3-4 bulan) Kontrol Positif : Pemberian G. boninense Kontrol Negatif: Tanpa Pemberian G. boninense Perlakuan : 1. Suspensi bakteri kitinolitik KR0 + Spora G. boninense 2. Suspensi bakteri kitinolitik LK 08 + Spora G. boninense 3. Suspensi bakteri kitinolitik BK 17 + Spora G. boninense 4. Suspensi bakteri kitinolitik BK 1 + Spora G. Boninense. Suspensi bakteri kitinolitik BK 13 + Spora G. boninense

4 6 G. Uji Efektifitas Bakteri Kitinolitik dengan Aplikasi Siram Bibit kelapa sawit yang berumur 3-4 bulan Ditumbuhkan dalam polybag berukuran 17 x 3cm Disemprotkan 20 ml suspensi bakteri kitinolitik pada bagian permukaan tanah polybag berisi bibit sawit Dibiarkan selama 24 jam Disemprotkan konidia G. boninense dengan kerapatan 2x10 spora/ml pada permukaan tanah sampai merata Hasil Dilakukan pengamatan setiap minggu selama + 3 bulan dari minggu ke-0

5 66 H. Pengamatan Percobaan Perlakuan pada Bibit Kelapa sawit Pengamatan Gejala Diatas Permukaan Tanah Pengamatan Luas Serangan Di Bawah Permukaan Tanah Hasil Diamati morfologi daun tanaman dengan melihat gejala penyakit seperti daun pucat/nekrosis dan layu Hasil Di cabut bibit dari polibag Diamati morfologi akar dan pangkal batang dari bibit kelapa sawit Diamati ada atau tidaknya miselium atau basidiocarp jamur pada akar dan pangkal batang

6 67 I. Reisolasi Jamur Patogen dan Bakteri Kitinolitik dari Akar Kelapa Sawit Akar tanaman kelapa sawit Akar tanaman sawit steril Koloni fungi/bakteri dari akar kelapa sawit Dicuci akar tanaman dengan air mengalir selama 20 menit Disterilisasi bagian permukaan akar tanaman dengan merendam bagian tanaman dengan etanol 7% selama 2 menit Direndam dalam larutan sodium hypoklorit,3% selama menit Direndam dalam larutan ethanol 7% selama 30 detik Dibilas dengan akuades steril sebanyak 2 kali Dikeringkan pada kertas saring steril Dipotong menjadi 3 bagian Diletakkan di permukaan media PDA (Potato Dextrose agar) dan media khitin Dinkubasi pada suhu ruang (2 o -30 o C) selama ± hari

7 68 J. Reisolasi Bakteri Kitinolitik dari Tanah Perlakuan Tanah dari perlakuan Suspensi tanah Ditimbang seberat 1 gram Dimasukkan ke dalam aquadest steril 10 ml Divorteks sampai homogen Diencerkan sampai pengenceran 10 Hasil Dipipet 0.1 ml suspensi ke dalam media khitin Disebarkan dan diratakan dengan hockey stick Diinkubasi pada suhu ruang (2 o -30 o C) selama ± hari Dihitung koloni yang muncul pada permukaan media khitin dari hari pertama sampai hari kelima

8 69 K. Luas Serangan patogen Minggu Ke-1 Kontrol Positif BK LK Fk = (40.32) 2 = = Jk T = (1.87) (0.70) 2 - Fk = JK P = ()2 +...()2 - Fk = = % 1% Perlakuan tn Galat Keterangan: tn = tidak berbeda nyata

9 70 L. Luas Serangan patogen Minggu Ke-2 Kontrol Positif BK LK Fk = (40.32) 2 = = Jk T = (1.87) (0.70) 2 - Fk = JK P = ()2 +...()2 - Fk = = % 1% Perlakuan tn Galat Keterangan: tn = tidak berbeda nyata

10 71 M. Luas Serangan patogen Minggu Ke-3 Kontrol Positif BK LK Fk = (41.72) 2 = = Jk T = (1.87) (0.70) 2 - Fk = 8.30 JK P = ()2 +...()2 - Fk = 0.89 = % 1% Perlakuan tn Galat Keterangan: tn = tidak berbeda nyata

11 72 N. Luas Serangan patogen Minggu Ke-4 Kontrol Positif BK LK Fk = (44.00) 2 = 1936 =.314 Jk T = (1.87) (0.70) 2 - Fk = JK P = ()2 +...()2 - Fk = = 6.81 % 1% Perlakuan tn Galat Keterangan: tn = tidak berbeda nyata

12 73 O. Luas Serangan patogen Minggu Ke- Kontrol Positif BK LK Fk = (44.00) 2 = 1936 =.314 Jk T = (1.87) (0.70) 2 - Fk = JK P = ()2 +...()2 - Fk = = 6.81 % 1% Perlakuan tn Galat Keterangan: tn = tidak berbeda nyata

13 74 P. Luas Serangan patogen Minggu Ke-6 Kontrol Positif BK LK Fk = (4.48) 2 = = Jk T = (1.87) (0.70) 2 - Fk = JK P = ()2 +...()2 - Fk = = % 1% Perlakuan tn Galat Keterangan: tn = tidak berbeda nyata

14 7 Q. Luas Serangan patogen Minggu Ke-7 Kontrol Positif BK LK Fk = (48.84) 2 = = Jk T = (1.87) (0.70) 2 - Fk = JK P = ()2 +...()2 - Fk = 3.89 = % 1% Perlakuan ** Galat Keterangan: ** = berbeda sangat nyata

15 76 R. Luas Serangan patogen Minggu Ke-8 Kontrol Positif BK LK Fk = (48.84) 2 = = Jk T = (1.87) (0.70) 2 - Fk = JK P = ()2 +...()2 - Fk = 3.89 = % 1% Perlakuan ** Galat Keterangan: ** = berbeda sangat nyata

16 77 S. Luas Serangan patogen Minggu Ke-9 Kontrol Positif BK LK Fk = (49.97) 2 = = Jk T = (1.87) (0.70) 2 - Fk = JK P = ()2 +...()2 - Fk =.738 = % 1% Perlakuan ** Galat Keterangan: ** = berbeda sangat nyata

17 78 T. Luas Serangan patogen Minggu Ke-10 Kontrol Positif BK LK Fk = (49.97) 2 = = Jk T = (1.87) (0.70) 2 - Fk = JK P = ()2 +...()2 - Fk =.738 = % 1% Perlakuan ** Galat Keterangan: ** = berbeda sangat nyata

18 79 U. Luas Serangan patogen Minggu Ke-11 Kontrol Positif BK LK Fk = (49.97) 2 = = Jk T = (1.87) (0.70) 2 - Fk = JK P = ()2 +...()2 - Fk =.738 = % 1% Perlakuan ** Galat Keterangan: ** = berbeda sangat nyata

19 80 V. Luas Serangan patogen Minggu Ke-12 Kontrol Positif BK LK Fk = (49.97) 2 = = Jk T = (1.87) (0.70) 2 - Fk = JK P = ()2 +...()2 - Fk =.738 = % 1% Perlakuan ** Galat Keterangan: ** = berbeda sangat nyata