MATERI DAN METODE. Prosedur

Transkripsi

1 MATERI DAN METODE Lokasi dan Waktu Penelitian ini berlangsung selama 2 bulan sejak Desember 2011-Februari Analisa proksimat pakan dilakukan di Laboratorium PAU (Pusat Antar Universitas) IPB. Pembuatan Cr organik dan Co organik serta analisa konsentrasi NH 3, VFA, dan kecernaan pakan dilakukan di Laboratorium Ilmu Nutrisi Ternak Perah, Departemen Ilmu Nutrisi dan Teknologi Pakan, Fakultas Peternakan, Institut Pertanian Bogor. Materi Metode in vitro menggunakan larutan Mc. Dougall, gas CO 2, dan cairan rumen segar. Cairan rumen yang digunakan berasal dari rumah pemotongan hewan Bubulak, Bogor. Ransum basal yang digunakan terdiri dari rumput gajah, jagung, onggok, dedak halus, dan urea. Kedelai tanpa kulit yang direbus, CrCl 3, CoCl 2, dan kapang Rhizopus sp. digunakan dalam pembuatan Cr organik dan Co organik. Peralatan yang digunakan berupa pisau, tampah, plastik, lilin, korek api, rak bambu, oven 60 0 C, hammer mill, timbangan 5 kg, separangkat alat analisa in vitro yang terdiri dari tabung fermentor, tutup karet, shaker water bath, pipet mohr, bulp, labu erlenmeyer, sentrifuse, vortex mixer, pipet tetes, tabung reaksi, botol film, freezzer, cawan Conway, mikro pipet, buret, statip, stirrer, serangkaian alat VFA, cawan porselen, kertas saring Whattman, alat penyaring, oven C, tanur, eksikator, neraca, dan gegep. Prosedur Persiapan pembuatan kromium organik Sebanyak 2 kg kacang kedelai direbus hingga lunak, dikupas dan kemudian dicampurkan dengan 4 g ragi tempe (Rhizopus sp.). Bahan tersebut kemudian ditambah 50 ml larutan CrCl 2 hingga bahan kering campuran mengandung 3000 ppm Cr. Kemudian campuran tersebut dimasukkan ke dalam kantong plastik yang telah dilubangi permukaannya dan lalu difermentasi selama 9 hari. Hasil fermentasi tersebut dipotong-potong kecil dan dikeringkan dalam oven 60 0 C, kemudian digiling menggunakan hummer mill dan disimpan dalam kemasan plastik serta diletakkan pada ruangan yang tidak lembab. 15

2 Persiapan pembuatan kobalt organik Sebanyak 2 kg kacang kedelai yang telahdirebus hingga lunak, dikupas dan dicampurkan dengan 4 g ragi tempe (Rhizopus sp.). Bahan tersebut kemudian ditambah 50 larutan CoCl 3 hingga kadar Cr dalam bahan kering bahan mencapai 3000 ppm. Kemudian campuran tersebut dimasukkan ke dalam plastik yang telah dilubangi permukaannya dan difermentasi selama 9 hari. Hasil fermentasi tersebut dipotong-potong kecil, dikeringkan dalam oven 60 0 C, kemudian digiling menggunakan hummer mill dan disimpan dalam kemasan plastik serta diletakkan pada ruangan yang tidak lembab. Pembuatan ransum basal Bahan pakan ransum basal yang digunakan terdiri dari rumput gajah, jagung, onggok, dedak halus, dan urea. Rumput gajah yang digunakan dikeringkan terlebih dahulu dan digiling. Masing-masing bahan yang dicampurkan dalam keadaan kering dan telah digiling halus. Bahan yang dicampurkan pertama kali adalah urea dengan dedak halus, kemudian dilanjutkan dengan onggok dan jagung, dan yang terakhir dicampurkan dengan rumput gajah hingga semua tercampur merata. Pengambilan cairan rumen Cairan rumen diambil dari rumah pemotongan hewan Bubulak, Bogor. Cairan rumen dibawa menggunakan termos yang sebelumnya diisi dengan air panas hingga mencapai suhu 39 C. Air di dalam termos tidak boleh dibuang hingga cairan rumen didapatkan sehingga suhu cairan rumen dapat dipertahankan pada 39 o C. Dinding rumen dari sapi yang telah dipotong dirobek dengan pisau kemudian isi rumen diambil dan dimasukkan ke dalam termos yang baru saja dikeluarkan air panasnya. Isi rumen diperas dengan menggunakan kain kasa dan dimasukkan ke dalam tabung fermentor yang telah dikondisikan suhunya sekitar 39 o C kemudian dialiri CO 2. Teknik In Vitro Metode ini diawali dengan pencernaan fermentatif. Sampel ransum sebanyak 0,5 g dimasukkan ke dalam tabung fermentor kemudian ditambahkan 40 ml larutan McDougall dan dimasukkan dalam shaker bath dengan suhu 39 o C. Setelah itu cairan rumen dimasukkan sebanyak 10 ml, tabung dikocok dengan dialiri gas CO 2 selama 30 detik dan tabung fermentor ditutup. Pengambilan sampel supernatan hasil 16

3 pencernaan fermentatif dilakukan pada jam ke-1, ke-3, ke-5, ke-7, ke-24, dan ke-48. Pada saat akhir fermentasi tersebut, tutup karet tabung fermentor dibuka, diteteskan 2-3 tetes HgCl 2 untuk membunuh mikroba. Tabung fermentor dimasukkan ke dalam sentrifuge untuk sentrifuge selama 10 menit. Substrat terpisah menjadi endapan di bagian bawah dan supernatan yang bening berada di bagian atas. Supernatan diambil untuk analisa kadar NH 3 dan VFA. Supernatan dimasukkan ke botol film, apabila tidak dilakukan analisis segera, sampel disimpan di freezer. Rancangan Percobaan Penelitian ini menggunakan 4 perlakuan dan 6 waktu fermentasi. Perlakuan ransum tersebut adalah P1 (ransum basal+cr organik 3 ppm), P2 (ransum basal+cr inorganik 3 ppm), P3 (ransum basal+co organik 3 ppm), dan P4 (ransum basal+co inorganik 3 ppm). Waktu fermentasi adalah 1, 3, 5, 7, 24 dan 48 untuk analisa konsentrasi NH 3 dan VFA, sedangkan analisa kecernaan bahan kering (KCBK) dan kecernaan bahan organik (KCBO) dilakukan fermentasi hingga 48 jam. Data yang diperoleh dianalisis dengan uji deskriptif. Perlakuan Ransum basal yang digunakan pada penelitian ini disusun atas 30% hijauan dalam bentuk kering dan 70% bahan penyusun konsentrat. Proporsi komponen ransum dan kandungan nutrien ransum dapat dilihat pada Tabel 1. Perlakuan dalam kajian ini adalah penambahan Cr organik, Cr inorganik, Co organik dan Co inorganik. Ransum perlakuan tersebut adalah: P1 = ransum basal + Kromium organik 3 ppm P2 = ransum basal + Kromium inorganik (CrCl 3 ) 3 ppm P3 = ransum basal + Kobalt organik 3 ppm P4 = ransum basal + Kobalt inorganik (CoCl 2 ) 3 ppm 17

4 Tabel 1. Kandungan Nutrien Ransum Basal yang Digunakan Sebagai Media Fermentasi In vitro Bahan Ransum Penggunaan Nutrien Komposisi (% BK) (%BK) Rumput gajah 30 Bahan kering 87,57 Jagung 29 Abu 8,53 Onggok 26 Protein kasar 14,81 Dedak halus 12 Lemak kasar 2,40 Urea 3 Serat kasar 17,64 Beta- N 56,62 TDN 70,02 Keterangan : ransum tanpa menggunakan urea mengandung 7,79 % protein kasar. Peubah yang Diamati Konsentrasi NH 3 (Conway Micro Difussion Methode) Pengukuran NH 3 menggunakan cawan Conway. Bibir cawan Conway dan tutup diolesi dengan vaselin, supernatan yang berasal dari proses fermentasi di ambil 1,0 ml kemudian ditempatkan pada salah satu ujung alur cawan Conway. Larutan Na 2 CO 3 jenuh sebanyak 1,0 ml di tempatkan pada salah satu ujung cawan Conway bersebelahan dengan supernatan (tidak boleh campur). Larutan asam borat berindikator sebanyak 1,0 ml di tempatkan dalam cawan kecil yang terletak di tengah cawan Conway. Cawan Conway yang sudah di olesi vaselin di tutup rapat hingga kedap udara, larutan Na 2 CO 3 dicampur dengan supernatan hingga merata dengan cara menggoyang-goyangkan dan memiringkan cawan tersebut. Setelah itu dibiarkan selama 24 jam dalam suhu kamar. Setelah 24 jam tutup cawan dibuka, asam borat berindikator dititrasi dengan H 2 SO 4 0,005 N sampai terjadi perubahan warna dari biru menjadi merah. Hasil titrasi dihitung dengan menggunakan rumus. mm NH 3 = ml H 2 SO 4 x N H 2 SO 4 x 1000 g sampel x Bksampel Konsentrasi VFA (Steam Destilation Methode) Pengukuran VFA dilakukan menggunakan presscooker. Presscooker diisi dengan aquadest. Kemudian pastikan air dari kran mengalir yang berfungsi sebagai pendingin. Kompor gas dinyalakan, sehingga aquadest yang ada dalam presscooker 18

5 mendidih dan menghasilkan uap yang akan masuk ke tabung destilasi. Saat terbentuk uap air maka analisis VFA bisa dimulai. Supernatan yang sama dengan analisa NH 3 diambil sebanyak 5 ml, kemudian dimasukan ke dalam tabung destilasi, Erlenmeyer yang berisi 5 ml NaOH 0.5 N ditempatkan di bawah selang penampungan. Sebanyak 1 ml H 2 SO 4 15% dimasukkan ke dalam tabung destilasi yang sebelumnya diisi larutan sampel, kemudian segera penutup kacanya ditutup. Uap air panas akan mendesak VFA dan akan terkondensasi dalam pendingin. Air yang terbentuk ditampung dengan labu Erlenmeyer yang berisi 5 ml NaOH 0,5N sampai mencapai 300 ml. Phenolphtalein ditambahkan sebanyak 2-3 tetes dan destilat dititrasi dengan HCl 0,5N sampai warna titrat berubah dari merah menjadi berubah menjadi merah muda. Produksi VFA total dihitung menggunakan rumus. mm VFA = (a-b)ml x N HCl x 1000/5ml g sampel x BK sampel Keterangan: a = volume titran blangko; b = volume titran contoh. Kecernaan Bahan Kering dan Organik Pada akhir fermentasi selama 48 jam dalam kondisi anaerob, tabung disentrifuse pada kecepatan 4000 rpm selama 15 menit dan supernatan dibuang. Endapan hasil sentrifuge selama 15 menit yang selanjutnya endapat ditambah 50 ml larutan pepsin-hcl 0,2%. Campuran tersebut lalu diinkubasi kembali selama 48 jam tanpa tutup karet. Pada akhir inkubasi seluruh isi tabung disaring dengan kertas saring Whatman no 41 (yang sudah diketahui bobotnya) dengan bantuan pompa vacum. Endapan yang tersaring kertas saring dimasukkan ke dalam cawan porselen, setelah itu dimasukkan ke dalam oven 105⁰C selama 24 jam. Setelah 24 jam, cawan porselen+kertas saring+residu dikeluarkan, dimasukkan ke dalam eksikator dan ditimbang untuk mengetahui kadar bahan keringnya. Selanjutnya bahan dalam cawan dipijarkan atau diabukan dalam tanur listrik selama 6 jam pada suhu o C, kemudian ditimbang untuk mengetahui kadar bahan organiknya. Sebagai blanko, dipakai residu isi tabung asal fermentasi tanpa sampel. %KCBK = BK sampel (g) ((BK residu (g) BK blanko (g)) BK sampel x 100% %KCBO = BO sampel (g) - ((BO residu (g) BO blanko (g)) BO sampel x 100% 19