Persiapan alat dan bahan. Sterilisasi alat yang akan digunakan. Pembuatan media dan sterilisasi media

Transkripsi

1 104 Lampiran 1: Skema Kerja Penelitian Persiapan alat dan bahan Sterilisasi alat yang akan digunakan Pembuatan media dan sterilisasi media Sterilisasi ekplan stevia (Stevia rebaudiana Bert.) Inisiasi (penanaman) eksplan dalam media di LAF Inkubasi planlet setelah penanaman Pengamatan selama 4 minggu (terbentuknya kalus) Uji metabolit sekunder kalus ekplan stevia (Stevia rebaudiana Bert. Dengan HPLC Hasil

2 105 Lampiran 2: Skema Kerja Sterilisasi 1. Sterilisasi Alat Botol kultur, cawan petri, dan alat diseksi Dicuci bersih dengan detergen dan direndam tepol selama 24 jam Botol kultur ditutup dengan plastik dan diikat dengan karet sedangkan cawan petri dan alat diseksi dibungkus dengan aluminium foil, dimasukkan plastik dan diikat karet Dioven untuk mengeringkan Sterilisasi dengan autoklaf 30 menit dengan suhu C Dibilas dengan air mengalir Diletakkan dalam ruang inkubasi dan siap digunakan 2. Sterilisasi eksplan Eksplan stevia (Stevia rebaudiana Bert.) Sterilisasi luar Sterilisasi LAF Dibilas air mengalir dan direndam larutan detergent 5 menit Direndam larutan bayclin 30%, 20%, 10% selama 10 menit Dibilas air mengalir dan direndam larutan fungisida 75% selama 10 menit Dibilas aquades 3 kali Dicelupkan larutan betadin

3 106 Lampiran 3: Komposisi Media MS No Bahan Kimia Komposisi Komposisi Komposisi mg/l mg/50ml mg/100ml 1 NH 4 NO ,25 16,5 2 KNO 3 100,5 1 3 CaCl 440 2,2 4,4 4 MgSO ,85 3,7 5 KH 2 PO ,85 1,78 6 FeSO 4 7H 2 O 27,8 0,13 0,278 7 Na 2 EDTA 37,3 0,1865 0,373 8 MnSO 4 4H 2 O 22,3 0,1115 0,223 ZnSO 4 7H 2 O 8,6 0,043 0, H 3 BO 3 6,2 0,031 0, KL , , Na 2 M 0 O 4 2H 2 O 0,25 0, , CuSO 4 5H 2 O 0,025 0, , CoCl 2 6H 2 O 0,025 0, , Miyoinosital 100 0, Niacin 0,5 0,0025 0, Pyrodoxyne-HCL 0,5 0,0025 0, Thiamin-HCL 0,5 0,0025 0,005 1 Glycine 2,0 0,01 0,02 20 Sukrose Lampiran 4: Hari Muncul Kalus No Perlakuan Ulangan Rata-Rata 1 K1P , K1P , K1P , K1P K2P , K2P K2P , K2P , K3P , K3P K3P K3P ,

4 107 Lampiran 5: Hasil ANAVA pengaruh 2,4-D dan PEG 6000 terhadap hari munculnya kalus Dependent Variable:Data Tests of Between-Subjects Effects Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig. Model a Auksin PEG Ulangan Auksin * PEG Error Total a. R Squared =,4 (Adjusted R Squared =,8) Lampiran 6: Hasil uji DMRT 5% 2,4-D terhadap hari munculnya kalus Duncan Data Subset Auksin N Sig

5 108 Lampiran 7: Persentase Pertumbuhan Kalus No Perlakuan Jumlah Ekplan Jumlah Eksplan Persentase Eksplan yang ditanam yang Tumbuh yang tumbuh 1 K1P1 7 77, K1P2 8 88, K1P3 6 66, K1P4 8 88, K2P1 7 77, K2P2 7 77, K2P3 8 88, K2P4 6 66, K3P1 8 88, K3P2 5 55, K3P3 7 77, K3P4 4 44, Lampiran 8: Hasil ANAVA antara 2,4-D dengan PEG 6000 terhadap persentase pertumbuhan kalus Dependent Variable:Data Tests of Between-Subjects Effects Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig. Model a Auksin PEG Ulangan Auksin * PEG Error Total a. R Squared =,43 (Adjusted R Squared =,07)

6 10 Lampiran : Berat Kalus No Perlakuan Ulangan Rata-Rata 1 K1P1 0,37 0,25 0,25 0,2 2 K1P2 0,1 0,3 0,18 0, K1P3 0,13 0,12 0,05 0,1 4 K1P4 0,1 0,13 0,08 0, K2P1 0,27 0,4 0,25 0, K2P2 0,25 0,36 0,1 0, K2P3 0,1 0,12 0,08 0,155 8 K2P4 0,12 0,1 0,07 0, K3P1 0,23 0,21 0,2 0, K3P2 0,1 0,33 0,18 0, K3P3 0,27 0,07 0,06 0, K3P4 0,1 0,2 0,03 0,11 Lampiran 10: Hasil ANAVA antara 2,4-D dengan PEG 6000 terhadap berat kalus Dependent Variable:Data Tests of Between-Subjects Effects Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig. Model a Auksin PEG Ulangan Auksin * PEG Error Total a. R Squared =,48 (Adjusted R Squared =,15)

7 110 Lampiran 11: Hasil uji DMRT 5 % PEG 6000 terhadap berat kalus Duncan Data Subset PEG N Sig Lampiran 12: Perhitungan Eksplan Berkalus 1. K1P1: 7 x 100% = 77,78 % 2. K1P2: 8 x 100% = 88,8% 3. K1P3: 6 x 100% = 66,67% 4. K1P4: 8 x 100% = 88,8% 5. K2P1: 7 x 100% =77.78% 6. K2P2: 7 x 100% = 77,7% 7. K2P3: 8 x 100% = 88,8% 8. K2P4: 6 x 100% = 66,67%. K3P1: 8 x 100% = 88,8% 10. K3P2: 5 x 100% = 55,56% 11. K3P3: 7 x 100% = 77,78% 12. K3P4: 4 x 100% = 44,44%

8 111 Lampiran 13: Gamnbar Hasil Pengamatan Kalus Berumur 4 Minggu Konsentrasi Ulangan I Ulangan II Ulangan III K1PI (1 mg/l 2,4- D + 0 mg/l K1P2 (1 mg/l 2,4- D + 5 mg/l K1P3 (1 mg/l 2,4- D + 15 mg/l K1P4 (1 mg/l 2,4- D + 25 mg/l

9 112 K2P1 (2 mg/l 2,4- D + 0 mg/l K2P2 (2 mg/l 2,4- D + 5 mg/l K2P3 (2 mg/l 2,4- D + 15 mg/l K2P4 (2 mg/l 2,4- D + 25 mg/l

10 113 K3P1 (3 mg/l 2,4- D + 0 mg/l K3P2 (3 mg/l 2,4- D + 5 mg/l K3P3 (3 mg/l 2,4- D + 15 mg/l K3P4 (3 mg/l 2,4- D + 25 mg/l

11 114 Lampiran 14: Gambar Alat, Bahan, dan Kegiatan Penelitian 1. Alat a. Alat-Alat Penelitian Hot Plate Oven Autoklaf Refrigator LAF Timbangan Analitik PH Meter Alat Gelas Cawan Petri dan Alat Diseksi b. Alat-Alat High Performance Liquid Cromatography (HPLC) Kolom C18 Layar Panel Kendali Panel Kendali HPLC

12 115 Ruang Kolom Set Kromatografi Kolom Tampilan Pengendalian 2. Bahan Tempat Injek Sample Bahan Pembuatan Media Bahan Sterilisasi Eksplan (Luar LAF) Bahan Sterilisasi Eksplan (Dalam LAF) Karet, Label, dan Plastik Tahan Panas Bahan Sterilisasi Ruang dan Alat Media Tanam

13 Kegiatan Penelitian Sterilisasi Basah Sterilisasi Kering Penimbangan Bahan Pemasakan Media Penuangan Media dalam Botol Kultur Sterilisasi Eksplan (Luar LAF) Sterilisasi Eksplan (Dalam LAF) Inisiasi Inkubasi Pengukuran PH Media

14 117 Lampiran 15: Gambar Hasil Analisis HPLC 1. Daun Stevia 2. K1P1

15 K1P2 4. K1P3

16 11 5. K1P4 6. K2P1

17 K2P2 8. K2P3

18 121. K2P4 10. K3P1

19 K3P2 12. K3P3

20 13. K3P4 123

21 124 KEMENTERIAN AGAMA RI UNIVERSITAS ISLAM NEGERI (UIN) MAULANA MALIK IBRAHIM MALANG FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI Jl. Gajayana No. 50 Dinoyo Malang (0341)55833Fax.(0341) BUKTI KONSULTASI SKRIPSI Nama : Fittriya Nur Laila NIM : Fakultas/Jurusan : Sains dan Teknologi/Biologi Judul Skripsi : Pengaruh Penambahan ZPT 2,4-D dan PEG (Polyethylene Glykol) 6000 pada Media MS (Murashige & Skoog) untuk Produksi Metabolit Sekunder Steviosida pada Kultur Kalus Stevia (Stevia rebaudiana Bert. M.) Pembimbing : Dr. Evika Sandi Savitri, M. P.

22 125 KEMENTERIAN AGAMA RI UNIVERSITAS ISLAM NEGERI (UIN) MAULANA MALIK IBRAHIM MALANG FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI Jl. Gajayana No. 50 Dinoyo Malang (0341)55833Fax.(0341) BUKTI KONSULTASI AGAMA Nama : Fittriya Nur Laila NIM : Fakultas/Jurusan : Sains dan Teknologi/Biologi Judul Skripsi : Pengaruh Penambahan ZPT 2,4-D dan PEG (Polyethylene Glykol) 6000 pada Media MS (Murashige & Skoog) untuk Produksi Metabolit Sekunder Steviosida pada Kultur Kalus Stevia (Stevia rebaudiana Bert. M.) Pembimbing : Achmad Nasichuddin, M. A.

23 126 DAFTAR RIWAYAT HIDUP Nama Fittriya Nur Laila Tempat, Tanggal Lahir Pasuruan, 15 September 10 JL. Lukman Hakim RT. 02 RW. 01 Alamat Desa Jogonalan Kecamatan Pandaan Kabupaten Pasuruan Jenis Kelamin Perempuan Agama / Status Islam / Belum Nikah Kewarganegaraan Indonesia No. HP RIWAYAT PENDIDIKAN Tingkat Tahun Lembaga Lokasi Keterangan SD SDN. Jogosari Pandaan Lulus SMP / Mts Mts. Ma arif Sukorejo Lulus SMA / MA MA. Ma arif Sukorejo Lulus