LAMPIRAN. Lampiran 1. Data hasil analisis perbandingan metode. Kurva standard glukosa

Transkripsi

1 LAMPIRAN Lampiran 1. Data hasil analisis perbandingan metode Kurva standard glukosa Tabel kurva standar glukosa (Metode Anthrone) Absorbansi Konsentrasi glukosa (mg/ml) Tabel hasil analisis total karbohidrat dengan Metode Anthrone Sampel Ulangan Absorbansi % KH Kecap Manis Kecap asin Santan

2 Tabel hasil analisis total karbohidrat dengan metode SNI Sampel Ulangan Pembacaan volume Volume selisih Awal Akhir titran blanko-titran %Karbohidrat Kecap Manis Kecap asin Santan Keterangan: blanko 24, 90 ml Data pendamping (matriks pangan padat) Tabel hasil analisis total karbohidrat dengan Metode Anthrone Sampel Ulangan Berat sampel Absorbansi %KH Tepung beras Susu bubuk Sarden Tabel hasil analisis total karbohidrat dengan metode SNI Sampel Ulangan Berat sampel Volume titran %KH Tepung beras Susu bubuk Sarden Keterangan: blanko 24, 90 ml 57

3 Lampiran 2. Uji Statistik Perbandingan Metode dengan SPSS 17.0 Kecap manis Analisis total karbohidrat Metode N Std. Dev Kandidat SNI Equal Variances Levene's Test for Equality of Variances Lower Upper F t df KH Assumed Not assumed Kecap Asin Metode N Std. Dev Analisis total karbohidrat Kandidat SNI Equal Variances Levene's Test for Equality of Variances Lower Upper F T df KH Assumed Not assumed

4 Santan Metode analisis N Std. Dev Analisis total karbohidrat Kandidat SNI Equal Variances Levene's Test for Equality of Variances F T df Lower Upper KH Assumed Not assumed Uji F (F-test) Hasil uji F F hitung F table, df=2 Hasil Kecap manis Varian tidak berbeda kecap asin Varian tidak berbeda Santan Tidak terdefinisi 19 Tidak terdefinisi 59

5 Lampiran 3. Prosedur Analisis Proksimat A. PROSEDUR ANALISIS 1. Analisis Kadar Air, Metode Oven (AOAC, 1995) Kadar air diukur dengan metode oven biasa karena kandungan bahan volatil pada sampel rendah dan sampel tidak terdegradasi pada suhu 100 o C. Cawan aluminium kosong dikeringkan dalam oven suhu 105 o C selama 15 menit lalu didinginkan dalam desikator selama 5 menit atau sampai tidak panas lagi. Cawan ditimbang dan dicatat beratnya. Lalu ditimbang sampel sebanyak 5 g di dalam cawan tersebut. Dikeringkan sampel dalam oven sampai beratnya konstan (perubahan berat tidak lebih dari g). Setelah itu cawan didinginkan di dalam desikator, ditimbang berat akhirnya, dan dihitung kadar airnya dengan persamaan berikut Keterangan : x = berat cawan dan sampel sebelum dikeringkan y = berat cawan dan sampel setelah dikeringkan a = berat cawan kosong 2. Analisis Kadar Abu, Metode Oven (AOAC, 1995) Cawan porselen dibakar dalam tanur selama 15 menit kemudian didinginkan di dalam desikator. Setelah cawan dingin, ditimbang. Kemudian sampel sebanyak 5 g ditimbang di dalam cawan lalu diabukan di dalam tanur hingga diperoleh abu berwarna putih dan beratnya tetap. Pengabuan dilakukan dalam 2 tahap yaitu tahap pertama pada suhu 400 o C lalu dilanjutkan pada suhu 550 o C, kemudian didinginkan di dalam desikator lalu ditimbang. 100% Perhitungan : Keterangan : W 1 = berat sampel W 2 = berat abu 3. Analisis Kadar Protein (AOAC, 1995) Sampel sebanyak g dimasukkan ke dalam labu Kjedahl 100 ml, lalu ditambahkan 2 g K 2 SO 4, 40 mg HgO, dan 2.5 ml H 2 SO 4 pekat. Setelah itu, didestruksi selama 30 menit sampai cairan berwarna jernih dan dibiarkan sampai dingin. Selanjutnya ditambahkan air suling secukupnya dan 10 ml NaOH pekat sampai berwarna coklat kehitaman dan didestilasi. Hasil destilasi ditampung dalam erlenmeyer 125 ml yang berisi H 2 BO 3 dan indikator, kemudian dititrasi dengan HCl 0.02 N. Larutan blanko juga dianalisis seperti sampel. Kadar nitrogen dihitung berdasarkan rumus : Kadar 4. Analisis Kadar Lemak, Metode Soxhlet (AOAC, 1995) Labu lemak yang telah bebas lemak dikeringkan di dalam oven kemudian ditimbang setelah dingin. Sampel sebanyak 5 g dibungkus dalam kertas saring kemudian ditutup kapas yang bebas lemak. Sampel dimasukkan ke dalam alat ekstraksi soxhlet, kemudian pasang kondensor dan labu pada ujung-ujungnya. Pelarut heksana dimasukkan ke dalam alat lalu sampel direfluks selama 6 jam. Setelah itu pelarut didestilasi dan ditampung pada wadah lain. Labu lemak dikeringkan di dalam oven pada suhu 105 o C sampai diperoleh berat tetap. 60

6 Kemudian labu lemak dipindahkan ke desikator, lalu didinginkan dan ditimbang. Perhitungan : Keterangan : W 1 = Berat sampel W 2 = Berat lemak 5. Analisis Kadar Karbohidrat By (AOAC, 1995) Pengukuran kadar karbohidrat menggunakan metode by difference, dilakukan dengan cara : Kadar karbohidrat (%b/b) = 100% - (kadar air + kadar protein + kadar lemak + kadar abu) 61

7 Lampiran 4. Metode Anthrone dan Luff Schoorl 1. Analisis total karbohidrat Metode Kandidat (dengan Anthrone Sulfat) Penyiapan reagen Reagen disiapkan baru setiap hari dengan melarutkan 0.1 g anthrone dalam 100 ml asam sulfat 98% pada suhu ruang. Persiapan contoh 1. Timbang dengan seksama lebih kurang 5 g cuplikan ke dalam Erlenmeyer 500 ml. 2. Tambahkan 50 ml larutan HCl 3%, didihkan selama 3 jam dengan pendingin tegak. 3. Dinginkan dan netralkan dengan larutan NaOH 30% (dengan lakmus atau fenolftalein) dan ditambahkan sedikit CH3COOH 3 % agar suasana larutan sedikit asam 4. Pindahkan isinya ke dalam labu 500 ml dan impitkan hingga tanda garis kemudian saring dan encerkan seperlunya Prosedur analisis 1. Masukkan 5,0 ml contoh (dari persiapan contoh) ke dalam labu takar 100 ml dan diencerkan sampai tanda tera dengan air destilasi 2. Masukkan sebanyak 1 ml contoh tersebut ke dalam tabung reaksi bertutup 3. Tambahkan 5 ml pereaksi Anthrone dan ditutup.vortex dan kocok hingga merata 4. Panaskan tabung reaksi di atas penangas air C selama 12 menit 5. Setelah didinginkan, pindahkan larutan ke dalam kuvet dan baca absorbansinya dengan UV-Vis spektrofotometer pada panjang gelombang 630 nm 6. Tentukan konsentrasi gula dalam contoh dengan menggunakan kurva standar hubungan antara konsentrasi glukosa standar dengan absorbansinya dan dengan memperhitungkan pengenceran yang dilakukan, yaitu dengan menggunakan rumus sebagai berikut: dimana: G = konsentrasi gula dari kurva standar FP = faktor pengenceran W = berat contoh 2. Analisis total karbohidrat dengan metode SNI Pembuatan pereaksi Luff-Schoorl 1. Larutkan 143,8 g Na 2 CO 3 anhidrat dalam 300 ml air suling. 2. Larutkan 50 g asam sitrat dengan 50 ml air suling. 3. Tambahkan 25 gram Cu 2 SO 4.5H 2 O ke dalam 100 ml air suling 4. Pindahkan larutan tersebut larutan tersebut ke dalam labu 1 liter, tepatkan sampai tanda garis dengan air suling dan kocok. 5. Biarkan semalam dan saring bila perlu. Larutan ini mempunyai kepekatan Cu 2+ 0,1 N Na 2 CO 3 6. Larutkan kalium iodide KI 20% 7. Larutkan asam sulfat H 2 SO 4 25% 8. Larutkan natrium tiosulfat Na 2 S 2 O 3, 0, 1 N 9. Penunjukkan larutan kanji 0,5% Pengujian kepekatan larutan Luff-Schoorl 1. Pipet 25 ml larutan Luff, tambahkan 3 g KI dan 25 ml larutan H 2 SO 4 6N 2. Titar dengan larutan natrium tiosulfat 0,1 M dengan petunjuk larutan kanji 0,5% 3. Larutan natrium tiosulfat yang dipergunakan untuk titrasi 25x2 ml 4. Pipet 10 ml larutan Luff, masukkan ke dalam labu ukur 100 ml, encerkan dengan air 62

8 suling dan kocok 5. Pipet 10 ml larutan hasil pengenceran tersebut dan masukkan ke dalam erlenmeyer berisi 25 ml HCl 0,1 N 6. Masukkan erlenmeyer tersebut ke dalam penangas air mendidih dan biarkan selama 1 jam, kemudian angkat dan dinginkan. 7. Encerkan dengan air suling dan titar dengan larutan NaOH 0,1 N dengan indikator fenolftalein 8. Pipet 10 ml larutan hasil pengenceran (b) masukkan ke dalam erlenmeyer dan titar dengan HCl 0,1 M dengan indikator fenolftalein 9. Larutkan HCl 0,1 M yang dipergunakan untuk titrasi harus sekitar 6,0 sampai 7,6 ml 10. Larutan Luff harus mempunyai ph 9,3-9,4 Cara kerja 1. Timbang dengan seksama lebih kurang cuplikan ke dalam Erlenmeyer 500 ml. 2. Tambahkan 50 ml larutan HCl 3%, didihkan selama 3 jam dengan pendingin tegak. 3. Dinginkan dan netralkan dengan larutan NaOH 30% (dengan lakmus atau fenolftalein) dan ditambahkan sedikit CH 3 COOH 3% agar suasana larutan sedikit asam 4. Pindahkan isinya ke dalam labu 500 ml dan impitkan hingga tanda garis kemudian saring 5. Pipet 10 ml saringan ke dalam Erlenmeyer 500 ml, tambahkan 25 ml larutan Luff (dengan pipet) dan beberapa butir batu didih serta 15 ml air suling. 6. Panaskan campuran tersebut dengan nyala tetap. Usahakan agar larutan dapat mendidih dalam waktu 3 menit (gunakan stopwatch), didihkan terus selama tepat 10 menit (dihitung dari saat mulai mendidih dan gunakan stopwatch) kemudian dengan cepat dinginkan dalam bak berisi es. 7. Setelah dingin tambahkan 15 ml larutan KI 20% dan 25 ml H 2 SO 4 25% perlahan-lahan. 8. Titar secepatnya dengan larutan tiosulfat 0,1 M (gunakan penunjuk larutan kanji 0,5%) Perhitungan: (blanko-penitar) x N tiosulfat x 10, setara dengan terusi yang tereduksi. Kemudian lihat dalam daftar Luff Schoorl berapa mg gula yang terkandung untuk ml tio yang dipergunakan dimana: W1 = bobot cuplikan (mg) W = glukosa yang terkandung untuk ml tio yang dipergunakan (mg) FP = faktor pengenceran Standardisasi larutan tiosulfat 1. Sebanyak 0,5 gram K2Cr2O7 ditimbang dan dilarutkan dengan akuades 2. Ditepatkan hingga 100 ml dengan labu takar 3. Ambil 25 ml ke dalam erlenmeyer 4. Ditambahkan 10mL KI, 25mL HCl, dan akuades hingga 200 ml 5. Titar dengan natrium tiosulfat hingga berwarna kuning 6. Tambahkan indikator kanji 7. Titar dengan natrium tiosulfat hingga berwarna hijau toska (hijau jamrud) 8. Dilakukan sebanyak 3 kali ulangan 63

9 Tabel penetapan gula Luff-Schoorl Na 2 S 2 O 3, Glukosa, Fruktosa, 0,1N Gula Inversi (mg)

10 Lampiran 5 Verifikasi Metode Karbohidrat Total SNI Analisis tanggal 28 Juli 2011 Kacang hijau Ulangan Berat sampel Titer blanko mg glukosa %KH % recovery 1 0, ,95 24,78 28, , , , ,10 24,78 27, , , , ,00 24,78 28, , , , ,10 24,78 27, , , , ,10 24,78 27, , , , ,10 24,78 27, , , , ,10 24,78 27, , ,4392 Rataan : 55,66% Standard deviasi : 0,2827 RSD analisis : 0,51 2x RSD AOAC : 2,18 2/3 RSD Horwitz : 1,45 Kedelai Ulangan Berat sampel blanko Titer mg glukosa %KH % recovery 1 0, ,85 24,78 8, , , , ,15 24,78 7, , , , ,00 24,78 7, , , , ,00 24,78 7, , , , ,90 24,78 8, , , , ,00 24,78 7, , , , ,00 24,78 7, , ,21293 Rataan : 15,90% Standard deviasi : 0,4099 RSD analisis : 2,58 2x RSD AOAC : 2,64 2/3 RSD Horwitz : 1,76 Susu bubuk Ulangan Berat sampel Titer Blanko bl-titer mg glukosa %KH 1 0, ,45 25,50 10, , , , ,40 25,50 10, , , , ,60 25,50 10, , , , ,60 25,50 10, , , , ,45 25,50 10, , , , ,40 25,50 10, , , , ,40 25,50 10, , ,0641 Rataan : 45,72% Standard deviasi : 0,4264 RSD analisis : 0,93 2x RSD AOAC : 2,25 2/3 RSD Horwitz : 1,50 65

11 Analisis tanggal 11 Oktober 2011 Kacang Hijau Ulangan Berat sampel Titer Vblanko-titrant %KH 1 5,1494 7,05 7,05 53,85 2 5,0049 7,10 7,20 56,65 3 5,2058 7,10 7,50 56,86 Kedelai Ulangan Berat sampel Titer Vblanko-titrant %KH 1 5,0613 6,90 13,52 13,52 2 5,0143 7,08 15,38 15,38 3 5,1475 7,95 15,29 15,29 Susu Bubuk Ulangan Berat sampel Titer Vblanko-titrant %KH 1 5,0587 7,65 17,40 35,87 2 5,2166 7,10 17,95 36,00 3 5,0854 7,10 17,95 36,93 Analisis tanggal 7 Oktober 2011 Kecap manis Ulangan Berat sampel Titer Vblanko-titrant %KH 1 5, ,30 9,75 37,33 2 5, ,75 9,30 36,20 3 5, ,55 9,50 37,36 Kecap asin Ulangan Berat sampel Titer Vblanko-titrant %KH 1 5, ,30 9,75 1,83 2 5, ,60 11,45 2,16 3 5, ,55 10, Santan Ulangan Berat sampel Titer Vblanko-titrant %KH 1 5, ,90 7,15 1,35 2 5, ,70 7,35 1,44 3 5, ,15 7,90 1,55 66

12 Hasil uji rekoveri pada berbagai bahan acuan dengan spike glukosa Bahan acuan kacang hijau Ulangan Glukosa Berat bahan acuan W total Titer Blanko mg glukosa %KH %rekoveri 1 0,0505 0,4500 0, ,00 24,30 29, ,41 82,90 2 0,0503 0,4500 0, ,95 24,30 29, ,66 85,55 3 0,0500 0,4501 0, ,00 24,30 29, ,46 83,62 4 0,0506 0,4503 0, ,95 24,30 29, ,59 84,71 5 0,0503 0,4504 0, ,95 24,30 29, ,62 85,11 6 0,0501 0,4504 0, ,00 24,30 29, ,41 83,12 7 0,0504 0,4504 0, ,00 24,30 29, ,37 82,62 Rataan : 58,50% Standard deviasi : 0,1189 RSD analisis : 0,22 2x RSD AOAC : 2,17 2/3 RSD Horwitz :1,47 %Rekoveri Rataan : 83,95% RSD analisis : 1,48 Bahan acuan kedelai Ulangan Glukosa Berat bahan acuan W total Titer Blanko mg glukosa %KH %rekoveri 1 0,0500 0,4500 0, ,65 24,30 11, ,87 95,58 2 0,0504 0,4501 0, ,70 24,30 11, ,63 92,65 3 0,0505 0,4504 0, ,75 24,30 11, ,39 90,23 4 0,0502 0,4500 0, ,80 24,30 11, ,21 88,75 5 0,0500 0,4504 0, ,85 24,30 11, ,99 86,81 6 0,0503 0,4503 0, ,85 24,30 11, ,98 86,33 7 0,0504 0,4502 0, ,60 24,30 12, ,06 96,90 Rataan : 23,44% Standard deviasi : 0,4229 RSD analisis : 1,80 2x RSD AOAC : 2,49 2/3 RSD Horwitz : 1,66 %Rekoveri Rataan : 91,03% RSD analisis : 4,64 67

13 Bahan acuan susu bubuk (9,0066 g susu bubuk+1,0002g glukosa sebagai sampel) Ulangan Berat sampel W total Titer Blanko mg glukosa %KH %rekoveri 1 0,5011 0, ,50 24,90 23, ,40 62,53 2 0,5014 0, ,50 24,90 23, ,37 62,25 3 0,5013 0, ,50 24,90 23, ,38 62,34 4 0,5012 0, ,45 24,90 23, ,63 64,80 5 0,5014 0, ,25 24,90 24, ,55 74,07 6 0,5012 0, ,50 24,90 23, ,39 62,44 7 0,5015 0, ,40 24,90 23, ,84 66,88 Rataan : 47,65% Standard deviasi : 0,4341 RSD analisis : 0,91 2x RSD AOAC : 2,24 2/3 RSD Horwitz : 1,49 %Rekoveri Rataan : 65,05% RSD analisis : 6,68 Hasil uji rekoveri pada berbagai sampel matriks pangan cair dengan spike glukosa Kecap manis Ulangan Glukosa Berat bahan acuan W total Titer Titer-Blanko %KH %rekoveri 1 1,0337 4,0164 5, ,75 9,30 46,17 81,96 2 1,0639 4,0512 5, ,20 9,50 48,60 92,92 3 1,0031 4,1541 5, ,65 10,40 50,15 104,77 4 1,0853 4,0417 5, ,00 11,05 54,90 121,71 5 1,0680 4,1988 5, ,55 9,50 45,16 77,40 6 1,0046 4,0529 5, ,90 8,15 39,85 51,51 7 1,0335 4,1212 5, ,65 9,40 45,50 79,55 Rataan : 47,19% Standard deviasi : 4,69 RSD analisis : 9,94 RSD Horwitz : 2,24 %Rekoveri Rataan : 87,12% RSD analisis : 22,32 68

14 Kecap asin Ulangan Glukosa Berat bahan acuan W total Titer Titer-Blanko %KH %rekoveri 1 1,0403 4,0355 5, ,35 9,70 24,01-26, ,0266 4,0238 5, ,25 9,80 24,34-25, ,1044 4,4452 5, ,15 9,90 22,26-36, ,0538 4,0372 5, ,30 9,75 24,13-25, ,0088 4,0046 5, ,75 9,30 23,15-31, ,0559 4,0839 5, ,05 10,00 24,49-23, ,0172 4,1365 5, ,20 9,50 23,80-29,7159 Rataan : 23,74% Standard deviasi : 0,78 RSD analisis : 3,30 RSD Horwitz : 2,48 %Rekoveri Rataan : -28,34% RSD analisis : 16,63 Santan Ulangan Glukosa Berat bahan acuan W total Titer Titer-Blanko %KH %rekoveri 1 1,0122 4,0625 5, ,05 9,00 22,06-37, ,0123 4,5343 5, ,10 8,95 19,65-57, ,0189 4,1624 5, ,40 8,65 20,65-45, ,0646 4,3420 5, ,15 9,90 22,79-35, ,1356 4,0577 5, ,00 9,05 22,21-30, ,0054 4,1519 5, ,06 9,00 21,50-42, ,0335 4,0895 5, ,50 8,55 20,77-43,2929 Rataan : 21,38% Standard deviasi : 1,08 RSD analisis : 5,07 RSD Horwitz : 2,52 %Rekoveri Rataan : 87,12% RSD analisis : -21,14 69

15 Lampiran 6. Analisis Statistik Reprodusibilitas intralab Kecap manis Tanggal pengerjaan N Std. Deviation Karbohidrat 5 Juli Oktober Equal variances Levene's Test for Equality of Variances Lower Upper F t df KH Assumed not assumed Kecap asin Tanggal pengerjaan N Std. Deviation Karbohidrat 5 Juli Oktober Equal variances Levene's Test for Equality of Variances Lower Upper F t Df KH Assumed not assumed

16 Santan Tanggal pengerjaan N Std. Deviation Karbohidrat 5 Juli Oktober Equal variances Levene's Test for Equality of Variances F t df Lower Upper KH assumed not assumed Susu bubuk Tanggal pengerjaan N Std. Deviation Karbohidrat 5 Juli Oktober Equal variances Levene's Test for Equality of Variances F t df Lower Upper KH Assumed not assumed

17 Kedelai Tanggal pengerjaan N Std. Deviation Karbohidrat 5 Juli Oktober Equal variances Levene's Test for Equality of Variances F t df Lower Upper KH Assumed not assumed Kacang hijau Tanggal pengerjaan N Std. Deviation Karbohidrat 5 Juli Oktober Equal variances Levene's Test for Equality of Variances F t df Lower Upper KH assumed not assumed