AKTIVITAS SITOTOKSIK FRAKSI SEMIPOLAR EKSTRAK ETANOL DAUN SRIKAYA (Annona Squamosa Linn.) TERHADAP SEL T47D SKRIPSI

Transkripsi

1 AKTIVITAS SITOTOKSIK FRAKSI SEMIPOLAR EKSTRAK ETANOL DAUN SRIKAYA (Annona Squamosa Linn.) TERHADAP SEL T47D SKRIPSI Oleh : IWAN SETYA NUGROHO K FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA 2012

2 AKTIVITAS SITOTOKSIK FRAKSI SEMIPOLAR EKSTRAK ETANOL DAUN SRIKAYA (Annona Squamosa Linn.) TERHADAP SEL T47D SKRIPSI Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai Derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta di Surakarta Oleh: IWAN SETYA NUGROHO K FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA SURAKARTA 2012 ii

3 PENGESAHAN SKRIPSI Berjudul: AKTIVITAS SITOTOKSIK FRAKSI SEMIPOLAR EKSTRAK ETANOL DAUN SRIKAYA (Annona Squamosa Linn.) TERHADAP SEL T47D Oleh: IWAN SETYA NUGROHO K Dipertahankan di Hadapan Panitia Penguji Skripsi Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta Pada tanggal: 15 Maret 2012 Mengetahui, Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta Dekan, Dr. Muhammad Da i, M.Si., Apt. Pembimbing Utama Pembimbing Pendamping Dr. Haryoto, M.Sc. Rosita Melannisa, M.Si.,Apt. Penguji : 1. Dr. Muhammad Da i, M.Si., Apt 2. Dr. dr. EM. Sutrisna, M.Kes 3. Dr. Haryoto, M.Sc 4. Rosita Melannisa, M.Si., Apt iii

4 DEKLARASI Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan Tinggi, dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka. Surakarta, Februari 2012 Peneliti (Iwan Setya Nugroho) iv

5 KATA PENGANTAR Assalamu alaikum wr wb. Segala puji bagi Allah SWT, Rabb semesta alam atas limpahan karunia-nya penulis memiliki kesempatan menyelesaikan penyusunan skripsi ini yang berjudul AKTIVITAS SITOTOKSIK FRAKSI SEMIPOLAR EKSTRAK ETANOL DAUN SRIKAYA (Annona Squamosa Linn.) TERHADAP SEL T47D. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh gelar sarjana Strata 1 (S1) Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. Penulis banyak mendapatkan bimbingan, dukungan dan bantuan dari berbagai pihak sehingga penyusunan skripsi ini dapat terselesaikan tepat waktu. Untuk itu penulis menyampaikan terima kasih kepada : 1. Bapak Dr. Muhammad Da i, M.Si., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta dan penguji I. 2. Bapak Dr. Haryoto, M.Sc. selaku pembimbing utama. 3. Ibu Rosita Melannisa, M.Si.,Apt., selaku dosen pembimbing pendamping. 4. Bapak Dr. dr. EM. Sutrisna, M.Kes selaku penguji II. 5. Bapak Andi Suhendi, S. Farm., Apt selaku pembimbing akademik. 6. Bapak Sukiman dan Ibu Ngatiyem, kedua orang tuaku. 7. Adi Christanto, Eva Zulfania, Indah Meiningrum dan seluruh tim uji sitotoksik dengan tanaman srikaya. 8. Semua pihak yang tak bisa disebutkan satu persatu dalam pengantar ini yang telah membantu penyusunan skripsi ini. Akhir kata penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih banyak kekurangan dan jauh dari sempurna. Penulis selalu terbuka untuk menerima kritik dan saran. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi pembaca pada umumnya dan khususnya dapat bermanfaat bagi penulis sendiri. Wassalamu alaikum wr wb. Surakarta, Februari 2012 Penulis v

6 DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL... i HALAMAN PENGESAHAN... iii DEKLARASI... iv KATA PENGANTAR... v DAFTAR ISI... vi DAFTAR TABEL... viii DAFTAR GAMBAR... ix DAFTAR LAMPIRAN... x DAFTAR SINGKATAN... xi INTISARI... xii BAB I. PENDAHULUAN... 1 A. Latar Belakang Masalah... 1 B. Perumusan Masalah... 3 C. Tujuan Penelitian... 3 D. Tinjauan Pustaka... 3 A. Tanaman Srikaya (Annona squamosa Linn.)... 3 a. Kedudukan tanaman srikaya dalam sistem tumbuhan... 3 b. Morfologi Tanaman srikaya... 3 c. Nama Daerah... 4 d. Kandungan kimia dan kegunaan... 4 e. Penelitian sebelumnya... 5 B. Sel T47D... 5 C. Uji Sitotoksik... 6 E. Landasan Teori... 7 F. Hipotesis... 8 BAB II. METODE PENELITIAN... 9 A. Kategori Penelitian... 9 B. Variabel Penelitian... 9 C. Bahan dan Alat Bahan Alat... 9 D. Jalannya Penelitian Pembuatan Ekstrak dan Fraksinasi Daun Srikaya vi

7 2. Uji Sitotiksik a. Sterilisasi LAF b. Sterilisasi Alat c. Pembuatan Media Kultur d. Propagasi Sel e. Panen Sel f. Pembuatan Larutan Uji g. Uji sitotoksik terhadap sel T47D dengan metode MTT assay E. Cara Analisis Data BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN A. Determinasi Tanaman B. Fraksinasi Ekstrak C. Identifikasi Kandungan Kimia D. Uji Sitotoksik BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan B. Saran DAFTAR PUSTAKA LAMPIRAN vii

8 DAFTAR TABEL Halaman Tabel 1. Perbandingan pelarut fraksinasi Tabel 2. Penggabungan hasil dari tiap fraksinasi Tabel 3. Hasil analisis kandungan kimia menggunakan metode KLT Tabel 4. Hasil uji sitotoksik fraksi semipolar ekstrak etanol daun srikaya viii

9 DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 1. Reaksi reduksi MTT menjadi formazan oleh enzim suksinat reduktase... 7 Gambar 2. Optimasi fase gerak ekstrak etanol daun srikaya dengan metode KLT Gambar 3. Profil KLT hasil 3 kali fraksinasi Gambar 4. Profil KLT terhadap hasil penggabungan fraksinasi (I-III) ekstrak etanol daun srikaya Gambar 5. Hasil uji tabung senyawa alkaloid dengan reagen Dragendorff dan Mayer Gambar 6. Profil KLT hasil identifikasi kandungan senyawa fraksi semipolar ekstrak etanol daun srikaya Gambar 7. Morfologi sel kanker T47D Gambar 8. Kristal formazan pada sel T47D setelah diberi perlakuan sampel dan ditambah larutan MTT Gambar 9. Grafik hubungan antara log konsentrasi dengan ratarata % sel hidup abel ix

10 DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1. Tanaman Srikaya (Annona squamosa L.) Lampiran 2. Perhitungan kepadatan stok sel T47D Lampiran 3. Pembuatan larutan stok dan perhitungan konsentrasi fraksi semipolar ekstrak etanol daun srikaya Lampiran 4. Perhitungan kadar akhir dalam tiap sumuran Lampiran 5. Hasil Determinasi Lampiran 6. Rangkaian alat kromatografi cair vakum (KCV) Lampiran 7. Uji tabung keberadaan senyawa flavonoid Lampiran 8. Hasil pembacaan ELISA reader Lampiran 9. Perhitungan konsentrasi DMSO Lampiran 10. Perhitungan harga IC x

11 DAFTAR SINGKATAN Caspase DMSO ELISA FBS cysteinyl aspartate-specific protease Dimetil sulfoksida Enzyme Linked Immuno Sorbant Assay Fetal Bovine Serum IC50 Inhibitory Concentration 50% KLT LAF MTT PBS Penstrep Rf UV Kromatografi Lapis Tipis Laminar Air Flow 3-(4,5-Dimetilltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromide Phosphate Buffered Saline Penicillin Streptomycin Retardation fact Ultraviolet xi

12 INTISARI Senyawa kimia dalam tanaman tertentu terbukti berpotensi sebagai agen kemoterapi. Beberapa penelitian menunjukkan bahwa senyawa asetogenin dalam srikaya mempunyai aktivitas antimikroba dan antikanker. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas sitotoksik fraksi semipolar ekstrak etanol 96% daun srikaya (Annona Squamosa L.) terhadap sel kanker payudara (T47D) Fraksi semipolar dibuat dengan cara fraksinasi dengan metode kromatografi cair vakum (KCV) terhadap ekstrak etanol daun srikaya yang diperoleh secara maserasi menggunakan pelarut etanol 96%. Fraksinasi menggunakan fase diam Silika gel G 254 dan fase gerak kombinasi heksan : etil asetat. Fraksi semipolar ekstrak diuji aktivitas sitotoksiknya terhadap sel T47D dengan seri konsentrasi 150; 100; 50; 25; 10; 5 µg/ml. Análisis kualitatif senyawa yang terkandung dalam fraksi semipolar ekstrak etanol daun srikaya dengan menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT). Fase gerak yang digunakan dalam fraksinasi maupun uji KLT adalah heksan dan etil asetat dengan perbandingan tertentu, sedangkan fase diam adalah silika gel 254 nm. Hasil uji sitotoksik menggunakan metode MTT Assay menunjukkan bahwa fraksi semipolar ekstrak etanol daun srikaya memiliki nilai IC 50 sebesar 184,49,41 µg/ml. Nilai ini menunjukkan bahwa efek toksik dari fraksi semipolar terhadap sel T47D tergolong rendah. Hasil identifikasi kandungan kimia memperlihatkan bahwa fraksi semipolar ekstrak etanol daun srikaya mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, dan tanin. Kata Kunci: Annona squamosa L., Sel T47D, MTT assay, KCV, KLT xii