BAB III METODE PENGUJIAN. Analisis kuantitatif bakteri Escherichia Coli pada makanan di rumah

Transkripsi

1 BAB III METODE PENGUJIAN 3.1 Tempat Analisis kuantitatif bakteri Escherichia Coli pada makanan di rumah makan, dilakukan di Balai Teknik Kesehatan Lingkungan dan Pengendalian Penyakit (BTKL-PP) Kelas I Medan yang bertempat di Jalan K.H. Wahid Hasyim No. 15 Medan. 3.2 Sampel, Alat, dan Bahan Sampel Sampel yang digunakan adalah makanan dari beberapa rumah makan di Kabupaten Balige yang berupa nasi putih, sayur, dan ayam Alat Alat yang digunakan adalah autoklaf (LabTech), gelas beker, bola karet, bunsen, erlenmeyer, inkubator 35ºC (Memmert) dan inkubator 44ºC (Incucell), jarum ose, kapas, magnetic stirrer (LabTech), neraca analitik (Pioneer), oven (Memmert), pipet volume, rak tabung, spatula, tabung durham, dan tabung reaksi Bahan Bahan-bahan yang digunakan adalah akuades steril, media Lactose Broth (OXOID), media Tryptone (MERCK), dan pereaksi Kovacs (MERCK).

2 3.3 Prosedur Pembuatan Media Media Lactose Broth a. Pembuatan Media Lactose Broth Single Strength Ditimbang seksama media Lactose Broth sebanyak 13 g. Dimasukkan kedalam beker gelas, dilarutkan kedalam akuades sebanyak 1 liter. Dimasukkan magnetic bar. Dipanaskan diatas magnetic stirrer sampai homogen. Dimasukkan kedalam tabung reaksi yang telah berisi tabung durham masing-masing 10 ml. Disterilkan di dalam autoklaf dengan tekanan 1 atm pada suhu 121ºC selama 15 menit, setelah dingin disimpan di tempat yang bersih dan kering. b. Pembuatan Media Lactose Broth Double Strength Ditimbang seksama media Lactose Broth sebanyak 26 g. Dimasukkan kedalam beker gelas, dilarutkan kedalam akuades sebanyak 500 ml. Dimasukkan magnetic bar. Dipanaskan diatas magnetic stirrersampai homogen. Dimasukkan kedalam tabung reaksi yang telah berisi tabung durham masing-masing 5 ml. Disterilkan di dalam autoklaf dengan tekanan 1 atm pada suhu 121ºC selama 15 menit, setelah dingin disimpan di tempat yang bersih dan kering Media Tryptone Ditimbang seksama media Tryptone sebanyak 15 g. Dimasukkan kedalam beker glass, dilarutkan kedalam akuades sebanyak 1 liter. Dimasukkan magnetic bar. Dipanaskan diatas magnetic stirrersampai homogen. Dimasukkan kedalam tabung reaksi masing-masing 10 ml. Disterilkan di dalam autoklaf dengan tekanan 1 atm pada suhu 121ºC selama 15 menit, setelah dingin disimpan di tempat yang bersih dan kering.

3 3.3.2 Preparasi Sampel Untuk sampel makanan diperlukan preparasi sampel yaitu: a. Ditimbang sampel sebanyak 25 g, kemudian dimasukkan ke dalam beker gelas steril. b. Ditambahkan akuades steril sampai 100 ml, aduk hingga homogen. c. Larutan digunakan sebagai larutan uji (sampel) Uji Pendugaan a. Disiapkan sebanyak 5 tabung reaksi yang berisi 5 ml media Lactose Broth double strenght dan sebanyak 10 tabung reaksi yang telah berisi 10 ml media Lactose Broth single strenght untuk masing-masing sampel. b. Tabung kemudian disusun pada rak tabung dan diberi tanda kode sampel. Penyusunan dilakukan dengan cara 5 tabung pertama double strenght di bagian depan sebelah kiri, 5 tabung kedua single strenght di bagian depan sebelah kanan, dan 5 tabung kedua terakhir single strenght di bagian belakang. c. Sampel dikocok terlebih dahulu agar homogen. d. Dimasukkan sampel dengan cara dipipet dengan pipet volum steril sebanyak 10 ml kedalam 5 tabung pertama, 1 ml kedalam 5 tabung kedua, dan 0,1 ml kedalam 5 tabung terakhir. e. Dimasukkan seluruh tabung kedalam inkubator pada suhu 35ºC selama 2 24 jam. f. Selanjutnya, diamati pembentukan gas yang terjadi di dalam tabung durham. g. Dicatat tabung yang dinyatakan positif dengan terbentuknya gas. Selanjutnya dilakukan uji penegasan (Cappuccino dan Sherman, 2013).

4 3.3.4 Uji Penegasan Bakteri E.Coli a. Tabung yang dinyatakan positif pada uji pendugaan, diinokulasikan kedalam tabung yang berisi media Tryptone masing-masing satu ose dan dilakukan secara aseptis. b. Diinkubasi pada suhu 44ºC selama 2 24 jam. c. Selanjutnya setelah 48 jam, ditambahkan larutan kovaks sebanyak 0,5 ml dan dinyatakan positif jika terbentuk cincin merah. d. Pembacaan hasil dilakukan dengan menghitung jumlah tabung yang positif. Angka yang diperoleh dicocokkan dengan tabel MPN (Cappuccino dan Sherman, 2013). 3.4 Persyaratan Sesuai Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia No.1098/Menkes/Per/VI/2003, tentang persyaratan hygiene sanitasi rumah makan dan restoran bahwa kadar maksimum yang diperbolehkan untuk parameter bakteri E. Coli pada makanan adalah 0/gram.

5 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 Hasil Dari hasil yang dilakukan terhadap sampel makanan rumah makan dari Kabupaten Balige yang diuji di Laboratorium Biologi Balai Teknik Kesehatan Lingkungan dan Pengendalian Penyakit (BTKL-PP) Kelas I Medan maka diperoleh hasil seperti tertera pada Tabel 4.1 dan Tabel 4.2. Tabel 4.1 Hasil uji pendugaan dan penegasan pemeriksaan bakteri Escherichia Coli pada makanan dengan metode MPN dari rumah makan I Jenis Kode Uji pendugaan Uji penegasan LB LB LB TB TB TB MPN sampel sampel 10 ml 1 ml 0,1 ml 10 ml 1 ml 0,1 ml Nasi putih Sayur tauco Ayam sambal 181/B/M 182/B/M 183/B/M < 1,8* < 1,8* ** Keterangan: *) Memenuhi persyaratan Permenkes RI No.1098/Menkes/Per/VI/2003 **) Tidak memenuhi persyaratan Permenkes RINo.1098/Menkes/Per/VI/2003 LB: Lactose Broth TB: Tryptone Broth

6 Tabel 4.2 Hasil uji pendugaan dan penegasan pemeriksaan bakteri Escherichia Coli pada makanan dengan metode MPN dari rumah makan II Jenis Kode Uji pendugaan Uji penegasan LB LB LB TB TB TB MPN sampel sampel 10 ml 1 ml 0,1 ml 10 ml 1 ml 0,1 ml Nasi putih Sayur buncis Gulai ayam 193/B/M 194/B/M 195/B/M <1,8* <1,8* <1,8* Keterangan: *) Memenuhi persyaratan Permenkes RI No.1098/Menkes/Per/VI/2003 LB: Lactose Broth TB: Tryptone Broth 4.2 Pembahasan Makanan merupakan salah satu kebutuhan pokok manusia untuk dapat melangsungkan kehidupan selain kebutuhan sandang dan perumahan. Makanan selain mengandung nilai gizi juga merupakan media untuk dapat berkembang biaknya mikroba atau kuman terutama makanan yang mudah membusuk yaitu makanan yang banyak mengandung kadar air serta nilai protein yang tinggi. Kemungkinan lain masuknya atau beradanya bahan-bahan berbahaya seperti bahan kimia, residu pestisida serta bahan lainnya antara lain debu, tanah, rambut

7 manusia dapat berpengaruh buruk terhadap kesehatan manusia. (Depkes RI, 2010). Berdasarkan hasil pemeriksaan yang telah dilakukan di laboratorium biologi Balai Teknik Kesehatan Lingkungan dan Pengendalian Penyakit (BTKL- PP) Kelas I Medan, diperoleh bahwa dari keenam sampel makanan yang disajikan oleh dua rumah makan di Kabupaten Balige ada 1 jenis makanan yang tidak memenuhi syarat kesehatan ditinjau dari keberadaan E.coli dan karena tidak sesuai denganperaturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia No.1098/Menkes/Per/VI/2003, tentang persyaratan higien sanitasi rumah makan dan restoran bahwa kadar maksimum yang diperbolehkan untuk parameter bakteri E. Coli pada makanan adalah 0/gram. Sebagaimana dapat dilihat pada tabel 4.1. Makanan yang terinfeksi atau tercemar E.coli tersebut adalah sampel dengan kode 183/B/M yaitu ayam sambal, dengan nilai MPN bakteri E.coli adalah 12/g. Pada dasarnya makanan yang telah diolah, bakteri atau mikroorganisme pada bahan makanan akan mati pada suhu tertentu sesuai tingkat kematangan dari makanan yang diharapkan. Namun tidak semua bakteri dapat mati pada proses pemanasan tersebut. Selain itu pula makanan yang telah dimasak atau diolah tersebut menjadi kurang layak dikonsumsi akibat cara penyimpanan, cara pengangkutan maupun cara penyajian sehingga pada ketiga tahap ini perlu mendapatkan prioritas mengingat proses rekontaminasi atau terjadinya kontaminasi ulang pada makanan yang telah diolah tadi (Mukono, 2000). Kontaminasi dapat terjadi selama tahapan pengelolaan makanan mulai dari pemilihan bahan, penyimpanan bahan makanan, pengolahan makanan,

8 penyimpanan makanan, pengangkutan dan penyajian makanan contohnya tercemarnya bahan baku, kebersihan peralatan masak dan makan, air pencuci peralatan, dan serangga serta binatang penganggu sebagai vektor penyakit (Mukono, 2000). E.coli merupakan salah satu bakteri yang mudah mencemari makanan.e.coli merupakan flora normal di dalam saluran pencernaan manusia. Bahan makanan yang sering terkontaminasi oleh E. coli diantaranya daging ayam, daging sapi, ikan, telur, sayuran, buah - buahan, sari buah dan makanan - makanan hasil laut lainnya serta bahan minuman seperti susu dan lainnya (Anwar, 1988). Walaupun E.coli adalah bagian flora normal bagian usus, E.coli bertahuntahun dicurigai sebagai penyebab diare sedang sampai gawat yang kadang-kadang timbul pada manusia dan hewan. Walaupun hal ini sukar dibuktikan, kini telah ditetapkan bahwa berbagai galur E.coli mungkin menyebabkan diare dengan salah satu dari dua mekanisme: (1) dengan produksi enterotoksin yang secara tidak langsung menyebabkan kehilangan cairan; dan (2) dengan invasi yang sebenarnya lapisan epitelium dinding usus, yang menyebabkan peradangan dan kehilangan cairan (Volk dan Wheeler, 1989). Pencemaran materi fekal sangat tidak diharapkan. Pada suatu kadar tertentu, bakteri E. coli terbukti dapat menyebabkan berbagai infeksi, antara lain diare, infeksi pada saluran kencing dan meningitis. E. coli tidak menimbulkan penyakit kecuali dalam jumlah yang sangat banyak (Nugroho, 2004). Metode MPN (Most Probable Number) adalah metode yang digunakan untuk menghitung koliform di dalam air dengan menggunakan pengujian fermentasi dalam tabung. Tiga pengujian itu diantaranya adalah uji penduga

9 (Presumtive Test), uji penegas (Confirmed Test), dan uji pelengkap (Completed Test). Output metode MPN adalah nilai MPN. Nilai MPN adalah perkiraan jumlah unit tumbuh (growth unit) atau unit pembentuk koloni dalam sampel (Dwidjoseputro, 1994). Metode MPN biasanya digunakan untuk menghitung jumlah jasad renik di dalam contoh yang berbentuk cair, namun dapat pula digunakan untuk contoh berbentuk padat dengan terlebih dahulu membuat suspensi 1:10 dari contoh tersebut (Fardiaz, 1992). Pada uji penegasan untuk bakteri spesifik yaitu Escherichia Coli digunakan metode indol. Metode ini memberikan hasil yang spesifik untuk bakteri Escherichia Coli dengan penambahan larutan KOVACS pada media Tryptone yang telah diinkubasi selama 48 jam pada suhu 44ºC menghasilkan cincin merah. Uji Indol bertujuan untuk menentukan kemampuan bakteri dalam memecah asam amino triptofan.media ini biasanya digunakan dalam indetifikasi yang cepat.hasil uji indol yang diperoleh positif karena terbentuk lapisan (cincin) berwarna merah muda pada permukaan biakan, artinya bakteri ini membentuk indol dari tryptopan sebagai sumber karbon, yang dapat diketahui dengan menambahkan larutan kovacs (Volk, dan Wheeler 1989).

10 BAB V KESIMPULAN DAN SARAN 5.1 Kesimpulan Dari hasil yang diperoleh didapat satu sampel yang mengandung bakteri Escherichia Coli yaitu sampel kode 183/B/M dengan nilai MPN bakteri E.coli adalah 12/gram. Hasil tersebut menunjukkan bahwa sampel tidak memenuhi persyaratan Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia No.1098/Menkes/Per/VI/2003, tentang persyaratan higien sanitasi rumah makan dan restoran bahwa kadar maksimum yang diperbolehkan untuk parameter bakteri E. Coli pada makanan adalah 0/g. 5.2 Saran Sebaiknya pada uji penegasan untuk bakteri Escherichia Coli digunakan media EMBA atau EC Broth yang sesuai dengan metode yang telah ditetapkan oleh beberapa literatur. Hasil penelitian ini sebaiknya dapat menjadi tolak ukur bagi rumah makan terkait untuk menjaga dan meningkatkan higien dan sanitasi rumah makan baik dari lingkungan dan makanan yang disajikan.