EFEK SITOTOKSIK DAN PENGHAMBATAN KINETIKA PROLIFERASI FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOLIK TANAMAN CEPLUKAN (Physalis angulata Linn.) TERHADAP SEL HeLa

Transkripsi

1 EFEK SITOTOKSIK DAN PENGHAMBATAN KINETIKA PROLIFERASI FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOLIK TANAMAN CEPLUKAN (Physalis angulata Linn.) TERHADAP SEL HeLa SKRIPSI OLEH : ALIA EVANINGRUM K FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA SURAKARTA 2007

2 EFEK SITOTOKSIK DAN PENGHAMBATAN KINETIKA PROLIFERASI FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOLIK TANAMAN CEPLUKAN (Physalis angulata Linn.) TERHADAP SEL HeLa SKRIPSI Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai Derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta di Surakarta Oleh : Alia Evaningrum K FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA SURAKARTA 2007 ii

3 PENGESAHAN SKRIPSI Berjudul : EFEK SITOTOKSIK DAN PENGHAMBATAN KINETIKA PROLIFERASI FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOLIK TANAMAN CEPLUKAN (Physalis angulata Linn.) TERHADAP SEL HeLa Oleh : Alia Evaningrum K Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Skripsi Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta Pada tanggal 27 Januari 2007 Mengetahui, Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta Dekan, Dra. Nurul Mutmainah, M.Si., Apt. Pembimbing Utama Pembimbing Pendamping Maryati, M.Si., Apt. dr. EM Sutrisna, M.Kes Penguji : 1. Dr. M. Kuswandi, SU., M.Phil., Apt Wahyu Utami, M.Si., Apt Maryati, M.Si., Apt dr. EM Sutrisna, M.Kes. 4. iii

4 PERSEMBAHAN Kebenaran itu datang dari Tuhanmu, maka janganlah kamu menjadi orang yang ragu-ragu (QS. Al Baqarah : 147) Barang siapa yang melanggar janji, berarti ia melanggar janji setia kepada dirinya sendiri, dan barang siapa menepati janjinya kepada Allah maka Allah akan memberinya pahala yang besar (QS. A l Fat-h : 10) Karya ini kupersembahkan kepada- Mu ya Allah sebagai pencipta alam semesta, sumber kekuatan serta tujuan akhir hidupku Kepada Bapak dan Ibuku, terimakasih atas tiap do a, cinta serta curahan kasih sayangnya Untuk adik dan kakak-kakakku tersayang, terimakasih atas dukungannya Untuk teman dan sahabatku Untuk Mas Edwin, terim akasih atas waktu, perhatian, pengorbanan dan kasih sayangnya selama ini Untuk Almamaterku iv

5 DEKLARASI Saya menyatakan bahwa skripsi ini adalah hasil pekerjaan saya sendiri dan sepanjang pengetahuan saya tidak berisi materi yang dipublikasikan atau ditulis orang atau telah dipergunakan dan diterima sebagai persyaratan penyelesaian studi pada universitas lain, kecuali pada bagian-bagian tertentu yang telah dikatakan dalam teks. Apabila skripsi ini merupakan jiplakan dari karya orang lain, maka saya siap menerima sanksi baik secara akademik maupun hukum. Surakarta, Januari 2007 Peneliti (Alia Evaningrum) v

6 KATA PENGANTAR Alhamdulillahhirabbilalamin, berkat anugerahnya penulis dapat menyelesaikan skripsi ini. Segala ciptaannya baik di langit ataupun di bumi, merupakan tanda kebesarannya, bagi orang yang berfikir. Skripsi yang berjudul EFEK SITOTOKSIK DAN PENGHAMBATAN KINETIKA PROLIFERASI FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOLIK TANAMAN CEPLUKAN (Physalis angulata Linn.) TERHADAP SEL HeLa ini disusun sebagai salah satu syarat untuk mencapai derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. Penelitian yang dikerjakan dalam skripsi ini merupakan sekelumit kecil dari upaya untuk memerangi penyakit kanker. Manfaat yang besar maupun kecil sangat kami harapkan dari karya ini, khususnya bagi pengembangan ilmu pengetahuan. Kritik dan saran yang membangun sangat kami harapkan untuk meningkatkan bobot ilmiah dari karya ini. Dalam penyusunan skripsi ini penulis banyak mendapatkan bimbingan dan dorongan dari berbagai pihak, sehingga penyusunan skripsi ini dapat terealisasikan. Untuk itu penulis menyampaikan terimakasih kepada : 1. Dra. Nurul Mutmainah, M.Si., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. 2. Maryati, M.Si., Apt., selaku pembimbing utama yang telah meluangkan waktu, tenaga dan pikiran dalam membimbing kami serta untuk semua nasehat yang sangat berharga bagi kami. vi

7 3. dr. EM Sutrisna, M.Kes, selaku pembimbing pendamping yang telah meluangkan waktu, tenaga dan pikiran untuk membimbing kami. 4. Dr. M. Kuswandi, SU., M.Phil., Apt., selaku dosen penguji, atas saran dan koreksinya untuk memperbaiki skripsi ini. 5. Wahyu Utami, M.Si., Apt., selaku dosen penguji, atas saran dan koreksinya untuk memperbaiki skripsi ini. 6. Kru Laboratorium Fakultas Farmasi UMS. 7. Kru Laboratorium Parasitologi UGM, khususnya Mbak Rumbi yang telah banyak membantu pengerjaan skripsi ini. 8. Ayah, ibu, kakak, adik yang selalu memberi dukungan dalam pengerjaan skripsi ini. 9. Teman-teman seperjuangan (Zaenab, Laila, Dewi Andon, Rina, Dewi Nur, Isna, mbak Sri ) yang telah bersama-sama berjuang dalam pelaksanaan penelitian ini. 10. Sahabat-sahabatku (Yuni, Avi, Rika, Winda, Nina, Feri, Jarwo, Ari, Yusuf, Leo, Fahmi) yang selalu memberi semangat, dukungan dan keceriaan. 11. Semua pihak yang telah membantu dalam penyusunan skripsi ini yang tidak dapat kami sebutkan. Semoga semua yang kita lakukan selalu dinaungi semangat keikhlasan sehingga senantiasa menjadi amal ibadah di sisinya. Surakarta, Januari 2007 Penulis vii

8 DAFTAR ISI HALAMAN JUDUL... HALAMAN PENGESAHAN... i ii HALAMAN PERSEMBAHAN... iii HALAMAN DEKLARASI... iv KATA PENGANTAR... v DAFTAR ISI... vii DAFTAR TABEL... x DAFTAR GAMBAR... xi DAFTAR LAMPIRAN... xii DAFTAR SINGKATAN... ivx INTISARI... xv BAB I. PENDAHULUAN A. Latar Belakang Masalah... 1 B. Perumusan Masalah... 4 C. Tujuan Penelitian... 4 D. Tinjauan Pustaka 1. Kanker Kanker cervix Sel HeLa Skrining aktifitas tanaman obat Indonesia Uji sitotoksik viii

9 E. HIPOTESIS BAB II. METODE PENELITIAN A. Rancangan Penelitian 1. Jenis penelitian Variabel penelitian B. Bahan dan Alat 1. Bahan penelitian Alat penelitian C. Jalannya Penelitian 1. Determinasi tanaman Pembuatan serbuk simplisia Ekstraksi dan fraksinasi Preparasi sel Panen sel Pembuatan larutan uji Uji sitotoksik dengan metode MTT Uji penghambatan kinetika proliferasi Analisis data BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN A. Determinasi Tanaman Physalis angulata Linn B. Ekstraksi dan Fraksinasi C. Hasil Uji Aktivitas Sitotoksik Physalis angulata Linn. 1. Uji sitotoksik dengan metode MTT ix

10 2. Uji penghambatan kinetika proliferasi BAB 1V. KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan B. Saran DAFTAR PUSTAKA LAMPIRAN x

11 DAFTAR TABEL Tabel I. Hasil Uji Sitotoksik Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Physalis angulata Linn. terhadap Sel HeLa dengan Metode MTT Tabel II. Data Konsentrasi dan Probit Akibat Pemberian Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Physalis angulata Linn. dengan Metode MTT Tabel III. Hasil Uji Penghambatan Kinetika Proliferasi Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Physalis angulata Linn Tabel IV. Persamaan Kurva Absorbansi Sel Hidup sebagai Fungsi Waktu pada Uji Penghambatan Kinetika Proliferasi dengan Metode MTT xi

12 DAFTAR GAMBAR Gambar 1. Skema Pembelahan Sel pada Sel Kanker Gambar 2. Cell Cycle Progression dan Regulator-regulatornya Gambar 3. Reaksi Reduksi MTT Menjadi Formazan Gambar 4. Skema Kerja Penelitian Gambar 5. Kristal Formazan Gambar 6. Profil Efek Sitotoksik Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Physalis angulata Linn. terhadap Sel HeLa dengan Metode MTT Gambar 7. Kurva Probit Jumlah Sel vs Log Berbagai Kadar Sampel dengan Metode MTT.. 36 Gambar 8. Morfologi Sel HeLa Gambar 9. Profil Pertumbuhan Sel HeLa Hasil Uji Penghambatan Kinetika Proliferasi dengan Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Physalis angulata Linn Gambar 10. Tanaman Ceplukan (Physalis angulata Linn.) Gambar 11. Bunga Ceplukan (Physalis angulata Linn.) Gambar 12. Buah Ceplukan 51 Gambar 13. Alat Soxhlet xii

13 DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1. Surat Keterangan Determinasi Lampiran 2. Gambar Tanaman Ceplukan (Physalis angulata Linn.) Lampiran 3 Gambar Bunga dan Buah Ceplukan (Physalis angulata Linn.) 51 Lampiran 4. Gambar Alat Soxhlet Lampiran 5. Data Uji Sitotoksik Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Tanaman Ceplukan (Physalis angulata Linn.) terhadap Sel HeLa dengan Metode MTT...53 Lampiran 6. Tabel Probit Lampiran 7. Perhitungan IC 50 Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Tanaman Ceplukan (Physalis angulata Linn.) terhadap Sel HeLa Lampiran 8. Data Absorbansi Uji Penghambatan Kinetika Proliferasi Sel HeLa Akibat Perlakuan dengan Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Tanaman Ceplukan (Physalis angulata Linn.).. 56 Lampiran 9. Hasil Uji T Penghambatan Kinetika Proliferasi Sel HeLa Akibat Perlakuan dengan Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Tanaman Ceplukan (Physalis angulata Linn.) Kadar 50 µg/ml dan 100 µg/ml.. 57 Lampiran 10. Data Uji T Penghambatan Kinetika Proliferasi Sel HeLa Akibat Perlakuan dengan Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Tanaman Ceplukan (Physalis angulata Linn.) Kadar 50 µg/ml dan 100 µg/ml pada Jam ke xiii

14 Lampiran 11. Data Uji T Penghambatan Kinetika Proliferasi Sel HeLa Akibat Perlakuan dengan Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Tanaman Ceplukan (Physalis angulata Linn.) Kadar 50 µg/ml dan 100 µg/ml pada Jam ke Lampiran 12. Data Uji T Penghambatan Kinetika Proliferasi Sel HeLa Akibat Perlakuan dengan Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Tanaman Ceplukan (Physalis angulata Linn.) Kadar 50 µg/ml dan 100 µg/ml pada Jam ke xiv

15 DAFTAR SINGKATAN Cdk Cyc DMSO DNA ELISA FBS G 1 G 2 HPV IC MTT PBS prb RPMI SDS VS : Cyclin Dependent Kinase : Cyclin : Dimethyl Sulfokside : Deoxyribo Nucleic Acid : Enzim Linked Immuno Absorbent Assay : Fetal Bovine Serum : Growth phase-1 : Growth phase-2 : Human Papilloma Virus : Inhibitory Consentration : (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) : Phospat Buffer Saline : Protein Retino Blastoma : Rosewell Park Memorial Institute : Sodium Dodecyl Sulphat : Versus xv

16 INTISARI Kanker merupakan salah satu penyakit penyebab kematian utama di dunia, sedangkan kanker cervix masih menempati urutan pertama penyakit yang paling banyak menyerang wanita di Indonesia. Usaha penyembuhan kanker dengan obat (farmakoterapi) atau dengan senyawa kimia (kemoterapi) pada umumnya belum mampu memberikan hasil yang memuaskan sehingga banyak dijumpai cara-cara pengobatan alternatif antara lain dengan menggunakan obat-obat dari alam. Berdasarkan penelitian Sutrisna (2006), ekstrak etanol tanaman ceplukan mempunyai efek sitotoksik terhadap sel kanker payudara MCF-7 dengan IC 50 sebesar 36,674 µg/ml. Penelitian ini bertujuan untuk menguji aktivitas sitotoksik fraksi etil asetat ekstrak etanolik tanaman ceplukan (Physalis angulata Linn.) serta mempelajari pengaruhnya terhadap kinetika proliferasi sel HeLa. Preparasi ekstrak dilakukan dengan alat Soxhlet menggunakan pelarut etanol 96%, dan dilanjutkan dengan fraksinasi cair-cair menggunakan petroleum eter, kloroform dan etil asetat. Fraksi etil asetat diuji aktivitas sitotoksiknya terhadap sel HeLa dengan metode MTT dengan konsentrasi 31,25 ì g/ml; 62,5 ì g/ml; 125 ì g/ml; 250 ì g/ml; 500 ì g/ml, kemudian diinkubasi selama 24 jam dan dibaca absor bansi nya dengan ELISA reader pada panjang gelombang 550 nm. Analisis akhir dilakukan dengan perhitungan nilai IC 50. Uji penghambatan kinetika proliferasi dilakukan dengan konsentrasi 50 µg/ml dan 100 µg/ml dan dibaca absorbansinya pada jam ke 24, 48 dan 72. Hasil penelitian menunjukkan bahwa fraksi etil asetat ekstrak etanolik tanaman ceplukan mempunyai efek sitotoksik terhadap sel HeLa dengan IC 50 sebesar 461,64 µg/ml. Uji penghambatan kinetika proliferasi menunjukkan bahwa fraksi etil asetat ekstrak etanolik tanaman ceplukan mampu memperpanjang kinetika proliferasi sel HeLa. Kata kunci : Tanaman ceplukan (Physalis angulata Linn.), sel HeLa, efek sitotoksik xvi