Kajian Sistem Kendali Mutu Pupuk Hayati Pra- Komersialisasi

Transkripsi

1 Kajian Sistem Kendali Mutu Pupuk Hayati Pra- Komersialisasi 70 Edi Husen Peneliti Badan Litbang Pertanian di Balai Besar Litbang Sumberdaya Lahan Pertanian, Jl. Tentara Pelajar No. 12, Bogor ( Abstrak. Keunggulan suatu produk pupuk hayati ditentukan oleh jumlah populasi, viabilitas mikroba dalam kurun waktu tertentu, dan efikasinya pada tanaman pada berbagai kondisi di lapangan. Sistem kendali mutu pupuk hayati merupakan salah instrumen penting untuk menjamin keefektifan pupuk hayati dalam meningkatkan pertumbuhan dan hasil tanaman serta menjaga keberlanjutan produktivitas tanah. Sebagai makhluk hidup yang tersimpan dalam bahan pembawa (carrier), keberhasilan penggunaan pupuk hayati tidak hanya ditentukan oleh keungulan inokulan, tetapi juga oleh proses formulasi yang terkait dengan higienisitas produksi dan kecocokan bahan pembawa. Sistem kendali mutu internal yang diterapkan saat ini masih terbatas pada uji laboratorium dan belum sampai pada uji efikasi pada tanaman dan tanah dengan penetapan masa kedaluara pupuk. Makalah ini menyajikan proposal sistem kendali mutu pupuk hayati prakomersialisasi yang dimulai dari sampling pupuk untuk uji laboratorium dan efektivitas, serta penetapan masa kedaluarsa pupuk. Parameter uji mencakup viabilitas dan karakter funsional mikroba selama masa simpan, patogenisitas, dan tingkat kontaminasi serta pengaruhnya pada tanaman dan aktivitas mikroba tanah pasca inokulasi. Kata kunci: kendali mutu, pupuk hayati, mikroba, viabilitas, komersialisasi Abstract. The quality of a product of biofertilizer is determined mainly by the number of population, viability of microbes in a particular period of time, and its efficacy on plants in various field conditions. A system of quality control is one important instrument to ensure the effectiveness of a biofertilizer in increasing plant growth and yield and sustaining soil productivity. As a living organism lived in the carrier material, the succsessful use of biofertilizer is not only determined by its excellent traits, but also by its formulation process associated with higienist procedures and material compatibility (carrier). Current internal quality control system implemented is still limited to laboratory tests and not to the efficacy trials on plants and soil as well as determination of expiring date. This paper presents a proposed quality control system of biofertilizer prior to commercialization starting from sampling procedures for laboratory testing and its efficacy, as well as the determination of the expiring date period. Test parameters include microbial viability and traits during storage, pathogenicity, and the level of contamination and its effects on plant growth and soil microbial activity after inoculation. Keywords: quality control, biofertilizer, microbes, viability, commercialization 749

2 E. Husen PENDAHULUAN Sistem kendali mutu pupuk hayati merupakan salah satu aspek penting untuk menjamin keefektifan pupuk hayati dalam meningkatkan pertumbuhan dan hasil tanaman serta menjaga keberlanjutan produktivitas tanah. Sebagai makhluk hidup yang disimpan dalam bahan pembawa (carrier), keberhasilan penggunaan pupuk hayati tidak hanya ditentukan oleh mutu inokulan saat diproduksi, tetapi juga oleh mutu inokulan pasca produksi yang terkait dengan penyimpanan dan pengangkutan pupuk (Simanungkalit et al. 2006). Mutu inokulan saat diproduksi antara lain berhubungan dengan higienisitas produksi dan bahan pembawa yang digunakan. Teknik produksi yang terkontrol berpengaruh pada kepadatan populasi yang diinginkan dan viabilitas inokulan selama penyimpanan serta mengurangi tingkat kontaminasi, sehingga inokulan yang dihasilkan memiliki masa kedaluarsa yang lebih panjang. Saat ini berbagai jenis pupuk hayati telah dihasilkan oleh berbagai lembaga penelitian dan perguruan tinggi dan sebagian sudah dikomersialkan (beredar di pasaran). Pupuk hayati yang ditawarkan untuk meningkatkan produktivitas tanah dan tanaman cukup beragam, antara lain pupuk hayati yang mengandung mikroba penambat N (simbiotik dan non-simbiotik), pelarut fosfat, penghasil zat pemacu tumbuh, pengendali cekaman lingkungan ekstrim dan patogen, baik yang diproduksi dalam bentuk pupuk hayati tunggal maupun dalam bentuk majemuk (consortia). Beragamnya jenis pupuk hayati yang beredar saat ini, pada satu sisi memberi keuntungan bagi pengguna/ petani karena banyak pilihan yang tersedia. Namun pada sisi lain, biaya tambahan yang dikeluarkan untuk membeli pupuk hayati dapat saja tidak seimbang dengan kenaikan produksi tanaman bila mutu pupuk rendah. Hasil penelitian pada tahun memperlihatkan bahwa tidak semua pupuk hayati komersial yang beredar memiliki mutu sesuai dengan promosi yang dijanjikan (Husen et al. 2007). Penyebabnya antara lain bisa dari teknologi produksi yang belum sempurna atau pupuk yang digunakan telah melewati masa kedaluarsa. Untuk itu, sistem pengendalian mutu pupuk hayati terpadu pasca komersialisasi yaitu sebelum pupuk diproduksi dalam skala komersial diperlukan agar pupuk yang dihasilkan memberikan hasil yang sepadan dengan harga jual produk. Penggunaan pupuk hayati bermutu tidak saja akan meningkatkan kepercayaan konsumen terhadap manfaat pupuk hayati, tetapi juga dapat meningkatkan daya saing produk-produk pupuk hayati lokal terhadap pupuk hayati sejenis dari luar negeri. Makalah ini menyajikan proposal sistem pengendalian mutu pupuk hayati internal pra-komersialisasi sebagai salah satu instrumen penting dalam pengembangan pupuk hayati pada skala industri. Konsep kanjian sistem pengujian mutu ini mengacu pada sistem yang sudah dikembangkan sebelumnya dengan menambahkan beberapa aspek penting sesuai dengan perkembangan teknologi saat ini. 750

3 Kajian Sistem Kendali Mutu Pupuk Hayati Pra-Komersialisasi TINJAUAN SISTEM KENDALI DAN SYARAT MUTU Regulasi Sistem Kendali Mutu Sistem kendali mutu pupuk hayati yang pertama kali diberlakukan di Indonesia diatur berdasarkan Surat Keputusan Direktorat Jenderal Tanaman Pangan No.SK.I.A , tahun 1984 yang selanjutnya disempurnakan dengan SK.I.HK A, tahun Regulasi ini dikeluarkan dalam rangka pelaksanaan program intensifikasi kedelai pada masa itu. Mekanisme pengujian dan penetapan kelayakan mutu produk pupuk hayati pada tahun 1991 tersebut di atas secara rinci diuraikan oleh Simanungkalit et al. (2006). Pupuk hayati diuji di laboratorium pengawasan mutu benih yang ditunjuk untuk menentukan kelayakan mutu inokulan sesuai standar yang ditetapkan. Mengingat pupuk hayati ini digunakan untuk program intensifikasi kedelai, maka pengambilan contohnya untuk diuji di laboratorium juga dilakukan oleh lembaga resmi, yaitu Balai Pengawasan Sertifikasi Benih. Syarat mutu dan sistem kendalinya relatif mudah dipenuhi oleh produsen pupuk karena pupuk hayati yang diproduksi hanya mengandung satu jenis mikroba (pupuk hayati tunggal), yaitu bakteri bintil akar kedelai Rhizobium. Salah satu syarat mutu yang diutamakan adalah jumlah populasi bakteri minimum yang terdapat dalam kemasan pupuk, yaitu >10 9 sel g -1 atau ml -1 pada saat diproduksi dan >10 7 sel g -1 atau ml -1 pada masa kedaluarsa. Syarat mutu pupuk hayati ini sangat jauh berbeda dengan yang diberlakukan saat ini karena mikroba yang dikandung oleh pupuk hayati umumnya lebih dari satu jenis mikroba (pupuk hayati majemuk). Penggabungan berbagai jenis mikroba dalam pupuk hayati yang saat ini banyak diproduksi dan diperdagangkan hampir umum dijumpai. Bakteri penambat N (simbiotik maupun non-simbiotik) disatukan dengan pelarut fosfat, penghasil zat pemacu tumbuh ataupun pengendali cekaman (stres) yang juga dikenal dengan istilah konsorsia mikroba. Kemajuan di bidang mikrobiologi dewasa ini juga memungkinkan menyatukan lebih dari satu jenis kelompok fungsional mikroba di dalam satu kemasan pupuk hayati seperti kelompok bakteri yang disatukan dengan aktinomisetes dan/atau fungi (cendawan) dengan fungsi beragam. Terlepas dari keraguan apakah pupuk hayati majemuk ini efektif meningkatkan pertumbuhan tanaman (karena potensi munculnya sifat kompetisi antar mikroba pasca aplikasi), yang jelas penetapan syarat mutu dan sistem kendalinya menjadi semakin kompleks. Syarat Mutu dan Sertifikasi (Permentan No.70/2011) Dalam rangka pengendalian mutu dan memberikan kepastian usaha bagi produsen/ pelaku usaha pupuk hayati, Kementerian Pertanian telah mengeluarkan Peraturan Menteri Pertanian Nomor: 70/Permentan/SR.140/10/2011 tentang Pupuk Organik, Pupuk Hayati 751

4 E. Husen dan Pembenah Tanah. Di dalam Permentan ini diatur alur sistem uji mutu dan efektivitas pupuk hayati sampai pada serifikasi ijin edar. Penetapan syarat mutu pupuk hayati sebagaimana yang diatur dalam Permentan ini didasarkan atas hasil penelitian dan pengkajian yang dilakukan oleh Badan Litbang Petanian (Simanungkalit et al. 2006; Husen et al. 2007) dan sumber-sumber lain yang terkait (Ghosh, 2001; Roughley et al. 1990). Selain pengujian jumlah populasi mikroba yang dikandung pupuk hayati, juga disyaratkan uji fungsional yang mencakup uji kemampuan menambat N, melarutkan P, menghasilkan hormon, dan uji fungsional lainnya. Tabel 1 menyajikan contoh syarat teknis jumlah populasi mikroba pada pupuk hayati tunggal dan majemuk yang disarikan dari Permentan Nomor: 70/Permentan/SR.140/ 10/2011. Tabel 1. Ringkasan syarat teknis jumlah populasi mikroba pada pupuk hayati tunggal dan majemuk (Permentan Nomor: 70/Permentan/SR.140/ 10/2011) Jenis Pupuk Hayati/Mikroba Syarat Teknis Menurut Jenis Bahan Pembawa Tepung/serbuk Granul/pelet Cair Pupuk Hayati Tunggal A. Bakteri bintil akar (Rhizobium/dll) > 10 7 cfu/g > 10 7 cfu/g > 10 7 cfu/ml B. Endomikoriza - Mikoriza Arbuskular (total propagul) > 50 MPN/g > 50 MPN/g - Gigaspora margarita (total spora) spora/g spora/g - Glomus manihotis (total spora) > 50 spora/g > 50 spora/g - Glomus agregatum (total spora) > 10 spora/g > 10 spora/g C. Ektomikoriza - Sceloderma columnare, Pisholitus tintorius/dll (total propagul/spora) D. Mikroba non-simbiotik dan/atau Endofitik - Bakteri: Azospirilum/Azotobacter/Bacillus/ Pseudomonas/ dll. (total sel) > 5% dari volume > 5% dari volume > 10 7 cfu/g > 10 7 cfu/g > 10 8 cfu/ml - Aktinomiset: Streptomyces/ dll. (total sel) > 10 6 cfu/g > 10 5 cfu/g > 10 5 cfu/ml - Fungi/Cendawan: Aspergillus/Penicillium/ dll (total sel) > 10 5 cfu/g > 10 4 cfu/g > 10 4 cfu/ml Pupuk Hayati Majemuk (Konsorsia) Total sel masing-masing jenis mikroba: - Bakteri: Azospirilum/Azotobacter/Bacillus/ > 10 7 cfu/g > 10 7 cfu/g > 10 8 cfu/ml Pseudomonas/ dll. - Aktinomiset: Streptomyces/ dll. > 10 6 cfu/g > 10 5 cfu/g > 10 5 cfu/ml - Fungi/Cendawan: Aspergillus/Penicillium/ dll > 10 5 cfu/g > 10 4 cfu/g > 10 4 cfu/ml Keterangan: - Nama-nama mikroba yang disebutkan dalam tabel adalah contoh mikroba. - Cfu = colony forming unit (satuan bentukan koloni); MPN = most probable number Uji efikasi pada tanaman dilakukan setelah lolos persyaratan teknis dari hasil uji mutu di laboratorium. Pengujian umumnya dilakukan di rumah kaca menggunakan tanaman semusim atau sesuai dengan peruntukan pupuk hayati yang diuji. Basis dari uji efikasi adalah bahwa pupuk hayati yang diuji mampu meningkatkan pertumbuhan tanaman dan atau mampu menghemat penggunaan pupuk anorganik minimal sampai 25% 752

5 Kajian Sistem Kendali Mutu Pupuk Hayati Pra-Komersialisasi dari dosis rekomendasi (dosis standar). Hasil ini didapatkan bila nilai RA E (relative agronomic effectiveness), yaitu perbandingan antara kenaikan hasil pada pupuk yang diuji dengan kenaikan hasil pada pupuk standar lebih dari 100% (Machay et al. 1984). Sertifikat lolos uji (izin edar) diberikan untuk jangka waktu lima tahun dan setelah itu pemilik pupuk dapat memperpanjang kembali. Uraian di atas memperlihatkan bahwa untuk mendapatkan sertifikat izin edar pupuk hayati diperlukan berbagai pengujian. Hal ini menyiratkan bahwa hanya pupuk hayati yang betul-betul bermutu dengan hasil konsisten yang akan memperoleh sertifikat izin edar. Hasil ini sesuai dengan fakta bahwa jumlah pupuk hayati yang beredar masih sangat sedikit, yaitu sekitar 35 merek pupuk hayati pada tahun 2003 dan popularitasnya masih tergolong rendah yang diukur dari jumlah petani pemakai yang kurang dari 10% (Husen et al. 2007). Berbeda dengan pupuk anorganik atau pupuk kimia lainnya, pupuk hayati mengandung makhluk hidup yang disimpan dalam bahan pembawa, sehingga viabilitas mikrobanya perlu dipertahankan dengan baik selama kurun waktu sebelum masa kedaluarsa, yakni sekitar 6 bulan. Dengan demikian, teknik formulasi pupuk hayati yang tepat dengan sistem kendali mutu terpadu sangat diperlukan. PROPOSAL SISTEM KENDALI MUTU PRA-KOMERSIALISASI Sistem kendali mutu terpadu sebaiknya dimulai pada waktu pupuk hayati sudah diproduksi dalam skala pilot (berupa prototipe produk) atau sebelum pupuk diproduksi dalam skala komersial. Tahapannya mencakup: (i) sampling pupuk, penataan (layout) tempat penyimpanan, uji lapangan dan laboratorium. Secara skematis diagram alir tahapan pelaksanaan sistem kendali mutu pupuk hayati yang diusulkan disajikan pada Gambar 1. Sampling pupuk hayati dan tanah Sampling pupuk hayati untuk pengujian dilakukan terhadap produk pupuk dalam satu batch (seri) produksi. Sebanyak 12 sampai 15 kemasan diambil secara acak. Masingmasing 5 kemasan ditempatkan dalam wadah terbuka yang selanjutnya 5 kemasan pertama disimpan di ruangan (indoor) dan 5 kemasan kedua disimpan di tempat terbuka (outdoor) untuk uji daya simpan 0, 3, 6, 9 dan 12 bulan. Sisanya digunakan untuk keperluan uji efikasi di lapangan. Pupuk hayati yang sudah dibuka dan digunakan untuk uji efikasi selanjutnya ditempatkan di ruangan untuk uji daya simpan seperti di atas. Pengujian pada perlakuan penyimpanan mencakup uji viabilitas, uji karakter fungsional, patogenisitias, dan higienisitas pupuk hayati. Sampling contoh tanah dilakukan pada tiap petak percobaan pasca aplikasi pupuk hayati, termasuk perlakuan tanpa pupuk hayati. Pengambilan contoh tanah dapat 753

6 E. Husen dilakukan dua kali, yaitu pada kurun waktu 2 minggu setelah aplikasi dan pada fase awal pembungan. Pengaruh aplikasi pupuk hayati terhadap perbaikan kualitas tanah dapat dievaluasi dari tingkat aktivitas mikroba. Gambar 1. Diagram alir sistem kendali mutu pupuk hayati pra-komersialisasi Uji viabilitas Viabilitas mikroba selama masa penyimpanan diuji berdasarkan kepadatan populasi mikroba per gram atau ml contoh pupuk yang dihitung dengan teknik pengenceran bertingkat ( ). Mikroba dalam larutan yang sudah diencerkan ditumbuhkan dalam media agar selektif dengan metode spread plate (Zuberer, 1994). Media agar yang akan digunakan dapat menggunakan media agar umum untuk menghitung pupulasi total bakteri, aktinomisetes, dan fungi/cendawan atau media selektif berdasarkan fungsi mikroba seperti media bakteri penambat N 2 dan media pelarut P maupun media selektif untuk species spesifik. Media untuk menghitung populasi total bakteri antara lain nutrient agar (NA), tryptone-yeast (TY), total aktinomisetes yaitu media M3 ditambah antibiotik dan anti fungi, total fungi dengan media potato dextrose agar (PDA) yang ditambahkan antibiotik. Media selektif penambat N2 hidup bebas (freeliving) yaitu dengan media bebas-n. Media selektif bakteri pelarut P dapat menggunakan media Pikovskaya atau yang dimodifikasi. Selain media tersebut, juga dapat digunakan media MRS (Man, Rogosa & Sharpe) untuk pengujian Lactobacillus dan yeast mannitol 754

7 Kajian Sistem Kendali Mutu Pupuk Hayati Pra-Komersialisasi agar untuk Rhizobium. Komposisi media tersebut di atas mengikuti media yang diuraikan oleh Weaver et al. (1994), Somasegaran dan Hoben (1994), Alef (1995), Cowan (1974), dan Subba-Rao (1999). Hasil uji viabilitas mikroba selama masa penyimpanan akan menentukan masa kedaluarsa pupuk. Jumlah populasi yang masih berada di atas batas minimal populasi (Tabel 1) pada tahapan pengujian tertentu menjadi patokan masa kedaluarsa pupuk. Uji karakter fenotip (fungsional) Pengujian karakter fenotip/fungsional mikroba yang mencerminkan fungsi dan kegunaan pupuk hayati dapat dilakukan secara selektif, antara lain uji kemampuan melarutkan P terikat, menambat N 2, dan menghasilkan hormon seperti IAA (indoleacetic acid). Pengujian secara kualitatif dapat dilakukan dengan menggunakan media agar selektif seperti diuraikan di atas. Mikroba pelarut P pada media agar dicirikan oleh zona terang (halo zone) di sekeliling koloni. Kemampuan menambat N 2 ditentukan oleh kemampuannya tumbuh pada media tanpa N (N-free) seperti media Azotobacter atau media yeast mannitol agar (YMA). Pengujian secara kuantitatif karakter fungsional mikroba dapat dilakukan secara kolorimetri menggunakan spektrofotometer, yaitu untuk mikroba pelarut P dan penghasil IAA. Mikroba penghasil hormon IAA dapat diuji dengan menumbuhkan mikroba pada pupuk hayati pada dalam media cair garam minimal yang diperkaya dengan L-tryptophan (Frankenberger dan Poth, 1988) atau media tanpa L-tryptophan yaitu media yeast-glucose (Benizri et al. 1998). Kemampuan mikroba menghasilkan IAA dari media yeast-glucose atau mengubah L-tryptophan (prekursor IAA) menjadi IAA diukur secara kolorimetri mengikuti metode Gordon dan Weber (1951). Pengukuran umumnya dilakukan setelah masa inkubasi selama 0 (kontrol) dan 48 jam (Husen et al. 2007). Uji kuantitatif mikroba pelarut P dapat dilakukan dengan menumbuhkan mikroba pada pupuk hayati pada media cair Pikovskaya (2,5 g/l Ca 2 PO 4 ). Pengukuran konsentrasi P tersedia (yang dibebaskan oleh mikroba) dapat dihitung mengikuti metode Puslittanak (1998). Uji patogenisitas dan k ontaminan Uji patogenisitas perlu dilakukan untuk menjamin bahwa mikroba dalam pupuk hayati tidak mengalami perubahan menjadi patogen baik setelah diproduksi maupun selama penyimpanan. Pengujian umumnya dilakukan melalui reaksi hipersensitif tanaman tembakau yang diinokulasi dengan mikroba pada pupuk hayati. Reaksi hipersensitif yang menandakan mikroba pada pupuk hayati bersifat patogen dicirikan oleh timbulnya gejala bercak nekrosis pada daun tembakau. 755

8 E. Husen Uji kontaminan umumnya dikaitkan dengan tingkat higienisitas bahan dan media yang digunakan untuk keamanan pengguna dan kesehatan lingkungan. Tingkat kontaminan diindikasikan oleh jumlah populasi bakteri Salmonella dan Eschericia coli. Bila masing-masing jumlah pupulasi bakteri kontaminan ini tidak terdeteksi pada media agar dengan tingkat pengenceran 1000 kali, maka pupuk hayati dinyatakan aman. Uji kontaminan ini juga untuk menentukan apakah pupuk bekas pakai masih layak digunakan atau tidak tercemar selama masa penyimpanan. Uji aktivitas mikroba Tingkat aktivitas mikroba tanah pasca aplikasi pupuk hayati dapat diuji berdasarkan tingkat respirasi tanah. Prosedur pengukuran laju respirasi dapat menggunakan metode trapping alkali mengikuti metode Isermeyer (Alef 1995) yang dimodifikasi Zibilske (1994). Prinsip dari metode pengukuran respirasi ini adalah mengukur CO 2 yang berevolusi (menandakan aktivitas mikroba) selama masa inkubasi tanah dengan NaOH. Larutan NaOH yang menangkap CO 2 dititrasi dengan HCl. Beberagai tahapan uji yang dilakukan di atas akan dapat ditentukan tingkat efikasi pupuk terhadap tanaman dan pengaruhnya pada kualitas tanah pasca aplikasi. Selain itu, akan diperoleh cara penyimpanan pupuk yang baik, masa kedaluarsa pupuk, tingkat keamanan pupuk, dan stabilitas karakter fungsional mikroba selama masa produksi dan penyimpanan. KES IMPULAN Pupuk hayati yang mengandung makhluk hidup yang disimpan dalam bahan pembawa rentan terhadap gangguan lingkungan yang akan berpengaruh pada tingkat viabilitas dan perubahan karakteristik fungsionalnya. Sistem kendali mutu terpadu pupuk hayati prakomersialisasi sangat diperlukan untuk menjamin bahwa pupuk hayati yang akan diproduksi dalam skala industri benar-benar berkualitas. Kualitas pupuk hayati ditentukan oleh jumlah populasi mikroba yang tetap terjaga selama masa penyimpanan (sebelum masa kedaluarsa), efektif meningkatkan pertumbuhan tanaman, dan aman digunakan baik untuk tanaman maupun lingkungan. DAFTAR PUS TAKA Alef, K Microbiological characterization of contaminated soils. p In K. Alef and P. Nannipieri (Eds). Methods in Applied Soil Microbilogy and Biochemistry. Academic Press. London 756

9 Kajian Sistem Kendali Mutu Pupuk Hayati Pra-Komersialisasi Benizri, E., A. Courtade, C. Picard, and A. Guckert Role of maize root exudates in the production of auxins by Pseudomonas fluorescens M.3.1: Short communication. Soil Biol. Biochem. 30: Cowan, S.T Cowan and Steel s Manual for the identification of medical bacteria. 2 nd edition. Cambridge University Press. Australia Frankenberger Jr, W.T. and M. Poth L-tryptophan transaminase of a bacterium isolated from the rhizosphere of Festuca octoflora (Graminae). Soil Biol. Biochem. 20: Ghosh, T.K A Review on quality control of biofertilizer in India Fertiliser Marketing News 32(8): 1-9. Gordon, S.A. and R.P. Weber, Colorimetric estimation of indoleacetic acid. Plant Physiol 26: Husen, E., R.D.M Simanungkalit, and Irawan Characterization and quality assessment of Indonesian commercial biofertilizers. Indonesian Journal of Agricultural Science 8: Machay. A.D., J.K. Syers, and P.E.H. Gregg Ability of chemical extraction procedures to assess the agronomic effectiveness of phosphate rock material. New Zealand Journal of Agricultural Research 27: Peraturan Menteri Pertanian No. 70/Permentan/SR.140/10/2011 tentang Pupuk Organik, Pupuk Hayati, dan Pembenah Tanah. Jakarta. Puslittanak Penuntun analisis kimia tanah dan tanaman. Pusat Penelitian Tanah dan Agroklimat, Bogor. Roughley, R.J., G.W. Griffith, and L.G. Gemell The Australian Inoculants Research and Control Service (AIRCS). Procedures NSW Agriculture & Fisheries, Gosford NSW, Australia. Simanungkalit, R.D.M., E. Husen, dan R. Saraswati Baku Mutu Pupuk Hayati dan Sistem Pengawasannya, p Dalam Pupuk Organik dan Pupuk Hayati. Balai Besar Litbang Sumberdaya lahan. Bogor. Somasegaran, P and H.J. Hoben, Handbook for Rhizobia (Methods in Legume - Rhizobium Technology). Springer-Verlag. New York. Subba Rao, N.S Soil Microbiology (Fourth Edition of Soil Microorganis ms and Plant Growth). Science Publishers, Inc. USA. Weaver, R.W., S. Angle, P. Bottomley, D. Bezdicek, S. Smith, A. Tabatabai, and A. Wolum Methods of Soil Analysis. Part 2 Microbiological and Biochemical Properties. SSSA. Inc. 757

10 E. Husen Zibilske LM (1994) Carbon mineralization, In: RW Weaver RW, Angle S, Bottomley P, Bezdicek D, Smith S, Tabatabai A, Wollum A (eds) Methods of Soil Analysis, Part 2 Microbiological and Biochemical Properties, SSSA, Inc, pp Zuberer. D.A Recovery and enumeration of viable bacteria. P In R.W. Weaver et al (ed) Methods of Soil Analysis. Part 2 Microbiological and Biochemical Properties. SSSA. I 758