PENENTUAN KADAR PROTEIN SECARA SPEKTROFOTOMETRI

Transkripsi

1 K E L O M P O K 4 PENENTUAN KADAR PROTEIN SECARA SPEKTROFOTOMETRI L/O/G/O

2 Pend. Kimia Rombel Vepy Iandasari 46 Gustiyani Eka. S Anggun Dwi Astiningsih 49 Nurul Anggi Ayuningtias 52

3 Tujuan Memahami pengguaan spektrofotometer sebagai alat untuk menganalisis kadar protein. Menjelaskan prinsip dasar penggunaan spektrofotometer dalam analisis kadar protein Terampil menggunakan spektrofotometer untuk menetukan kadar protein

4 Dasar Teori Protein adalah senyawa organik yang bermolekul tinggi berkisar antara beberapa ribu sampai jutaan. Protein ini tersusun dari atom C, H, O dan N serta unsur lainnya seperti P dan S yang membentuk unit-unit asam amino. Urutan susunan asam amino yang satu dengan asam amino yang lainnya, menentukan sifat biologis suatu protein. Di alam ditemukan macam amino yang membangun protein (Girindra, 1990). Penentuan kadar protein secara Biuret berdasarkan atas penggunaan serapan cahaya dengan spektrofotometer oleh ikatan kompleks, yang ungu warnanya. Ini terjadi apabila protein bereaksi dengan tembaga dalam lingkungan alkalis.

5 Alat dan Bahan Serum albumin murni Erlenmeyer NaOH 10% Sampel protein NaOH 3% CuSO 4.5H 2 O Bekerglass Spekronik 20 Kuvet ALAT BAHAN Natrium Kalium Tartrat Labu Takar Aquades Pipet Pipet Volume Tabung Reaksi Kasein

6 Cara Kerja Pembuatan reagen biuret Dilarutkan dengan 500 ml aquades sedikit demi sedikit Ditambahkan sampai tanda batas gr CuSO4.5H2O 6 gr Na.K.Tartrat Dilarutkan dalam labu takar 1 liter

7 Pembuatan Larutan Standart Protein 1 Larutan serum albumin murni/ kasein dalam aquades dibuat 2 Kadar sekitar mg/ml 3 Ditambahkan beberapa tetes 3 % NaOH.

8 Pembuatan kurva kalibrasi Larutanstandart protein dengan konsentrasi 1, 3,5,6,7, 9 mg/ml dan sampel protein disiapkan larutan standar dimasukan dalam 5 tabung reaksi masingmasing 1 ml, 4 ml reagen biuret ditambahkan Dikocok 30 menit pada suhu kama Dimasukan dalam kuvet, diukur absorbansinya menggunakan spektronik 20 pada panjang gelombang 540 nm. Digunakan blanko (1ml aquades+4 ml reagen biuret). Kurva kalibrasi dibuat

9 Data pengamatan Konsentrasi sampel (mg/ml) Panjang gelombang (λ) Absorbansi (A) sampel y = x R 2 = Kadar/konsentrasi sampel y = x = x x 10-3 = x x = 1.44 mg/ml

10 Pembahasan Protein Salah satu unsur makro yang terdapat dalam bahan pangan selain lemak dan karbohidrat. Protein merupakan sumber asam amino yang mengandung unsur-insur C, H, O, dan N protein juga mengandung fosfor, belerang, dan ada beberapa protein yang mengandung tembaga.

11 Pembahasan Analisis protein Analisis protein dalam bahan pangan dapat dilakukan dengan 2 metode, yaitu metode kualitatif dan metode kuantitatif. Metode kualitatif untuk mengetahui ada tidaknya protein dalam suatu bahan, sedangkan metode kuantitatif untuk menganalisis kadar protein dalam suatu bahan.

12 Pembahasan Pada praktikum kali ini, dilakukan analisis kuantitatif protein terhadap sampel dengan menggunakan metode spektrofotometri visible (biuret). Spektrofotometri didasarkan pada pengukuran serapan sinar monokromatis oleh suatu lajur larutan berwarna pada panjang gelombang spesifik dengan menggunakan monokromator prisma atau kisi difraksi dengan detector fototube. Larutan harus jernih agar dapat terbaca oleh spektrofotometer. analisis kuantitatif protein terhadap sampel dengan menggunakan metode spektrofotometri visible (biuret)

13 Pembahasan Pada pembuatan kurva kalibrasi, larutan standar yg digunakan adalah serum albumin murni dengan konsentrasi 1; 3; 5; 6; 7; dan 9mg/ml. kemudian 1 ml dari masingmasing larutan standar ditambah 4ml reagen biuret. Perlakuan yang sama juga diberikan pada sampel protein.

14 Absorbansi Standar Grafik Hubungan Konsentrasi Standar dengan Absorbansi Standar y = x R² = Series1 Linear (Series1) Konsentrasi Standar

15 Pembahasan Selanjutnya diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer sehingga didapatkan persamaan y= 0,0018x+0,0174. dari persamaan tersebut dilakukan perhitungan sehingga dihasilkan kadar protein dalam sampel sebesar 1,44 mg/ml Berdasarkan grafik sebelumnya, membentuk titik-titik yang tidak semuanya berada dalam garis linear. Oleh karena itu, percobaan menentukan kadar protein secara spektrofotometri dikatakan kurang berhasil. Hal tersebut dikarenakan kesalahan praktikan, diantaranya praktikan kurang teliti ketika mencampurkan atau mereaksikan larutan sehingga menghasilkan larutan yang terlalu pekat atau sedikit encer yang berpengaruh terhadap penentuan Content nilai absorbansi standar yg tidak tepat atau terlalu besar

16 Kesimpulan Penentuan kadar protein dapat dilakukan dengan spektrofotometer berdasarkan kurva kalibrasi. Prinsip kerja penentuan kadar protein dengan metode biuret adalah menganalisis adanya ikatan peptida dengan cara menambahkan reagen biuret ke dalam sampel yang kemudian diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer. Berdasarkan percobaan kadar protein dalam sampel ialah sebesar

17 Saran Text in here Praktikan diharuskan menguasai materi sebelum praktikum. Pada saat melakukan pengukuran spektrofotometer, sebaiknya larutan dalam deadaan jernih dan tidak terdapat gelembung.

18 Thank You! L/O/G/O