Lampiran 1. Prosedur analisa proksimat serbuk daun dan ranting jarak pagar kering. diulangi hingga diperoleh bobot tetap.

Transkripsi

1 LAMPIRAN 53

2 Lampiran 1. Prosedur analisa proksimat serbuk daun dan ranting jarak pagar kering a. Kadar Air (SNI ) Sebanyak 2-5 g sampel serbuk kering dimasukkan ke dalam cawan aluminium yang telah diketahui bobotnya. Cawan yang berisi contoh kemudian dikeringkan pada oven suhu 1050C selama 3 jam, setelah itu cawan didinginkan dal am desikator dan ditimbang. Pengeringan diulangi hingga diperoleh bobot tetap. Perhitungan: % 1 Ket: w1 : Bobot sampel awal (g) w2 : Bobot sampel akhir setelah dikeringkan (g) b. Kadar Abu (SNI ) Sebanyak 2-3 g sampel dimasukkan ke dalam sebuah cawan porselin yang telah diketahui bobotnya. Untuk sampel berbentuk cairan, sampel diuapkan di atas penangas air terlebih dahulu hingga kering. Cawan yang berisi sampel selanjutnya diarangkan di atas nyala pembakar, lalu diabukan dalam tanur listrik pada suhu maksimum C sampai pengabuan sempurna (sesekali pintu tanur dibuka sedikit agar oksigen bisa masuk). Kemudian cawan didinginkan dalam desikator dan ditimbang. Perhitungan: 1 2 Ket: w : Bobot sampel sebelum diabukan (g) w1: Bobot sampel + cawan setelah diabukan (g) w2: Bobot cawan kosong (g) 100% c. Kadar Lemak (SNI ) Sebanyak 1-2 g sampel dimasukkan ke dalam selongsong kertas yang dialasi dengan kapas. Selongsongan kertas berisi contoh tersebut disumbat dengan kapas, kemudian dikeringkan dalam oven pada suhu tidak lebih dari 80 0 C selama kurang lebih 1 jam. Selanjutnya selongsong dimasukkan ke dalam alat soxhlet yang telah dihubungkan dengan labu lemak berisi batu didih yang telah dikeringkan dan diketahui bobotnya. Kemudian dilakukan proses ekstraksi dengan pelarut heksan atau pelarut lemak lainnya selama kurang lebih 6 jam. Heksan lalu disuling dan ekstrak lemak dikeringkan dalam oven pengering pada suhu C. Labu lemak didinginkan dan ditimbang. Pengeringan dilakukan ulang hingg a tercapai bobot tetap. Perhitungan: 1 2 % Ket: w : Bobot sampel (g) w1: Bobot labu lemak kosong (g) w2: Bobot labu lemak setelah diekstraksi (g) 100% 54

3 d. Kadar Karbohidrat Sejumlah kecil sampel yaitu sekitar 0.1 g ditimbang dan diletakkan ke dalam labu kjeldahl 30 ml. Kemudian tambahkan 0.9 g K 2 SO 4, 40 mg HgO, dan 2 ml H 2 SO 4 untuk setiap 10 mg bahan organik di atas 15 mg. Sampel dididihkan selama 1-15 jam hingga cairan menjadi jernih. Larutan kemudian dimasukkan ke dalam alat destilasi, dibilas dengan aquadest dan ditambahkan 10 ml larutan NaOH-Na 2 S 2 O 3. Gas NH 3 yang dihasilkan dari reaksi dalam alat destilasi ditangkap oleh 5 ml H 3 BO 3 dalam Erlenmeyer yang telah ditambahkan 3 tetes indikator (canpuran 2 bagian merah metil 0.2% dalam alkohol dan 1 bagian methylene blue 0.2% dalam alkohol). Kondensat tersebut kemudian dititrasi dengan HCl 0.02 N yang sudah distandarisasi hingga terjadi perubahan warna kondensat menjadi abu-abu. Penetapan blanko dilakukan dengan menggunakan metode yang sama seperti pada penetapan sampel. Kadar protein dihitung dengan menggunakan rumus: % % % 55

4 Lampiran 2. Prosedur analisa sabun a. Bagian Tak Larut dalam Alkohol (SNI ) Sebanyak 10 gram sabun ditimbang dan dimasukkan ke dalam gelas piala lalu ditambahkan 100 ml alkohol dan dipanaskan pada 80 0 C selama 30 menit sambil diaduk. Kemudian disaring dengan kertas saring yang telah diketahui bobotnya (W1). Kertas saring beserta isinya dikeringkan pada suhu C selama 60 menit, didinginkan dalam desikator dan ditimbang hingga bobotnya tetap (W2). Perhitungan: W % Ket: W : berat contoh b. ph (SNI ) Kalibrasi ph meter dengan larutan buffer ph setiap akan melakukan pengukuran. Pengukuran ph dilakukan pada kondisi penetapan larutan sabun 10% dalam air. c. Stabilitas Busa Larutan sabun 10% dalam air dikocok selama 1 menit, kemudian ukur tinggi busa yang terbentuk (a) dan setelah 1 jam ukur kembali tinggi busa yang masih ada (b). Perhitungan: % 100% 56

5 Lampiran 3. Hasil analisis total fenol Absorbansi y = x R² = Konsentrasi (ppm) Gambar 22. Kurva Standar Asam Tanat Persamaan regresi linear asam tanat : y = x Tabel nilai absorbansi dan total fenol sampel Jenis Ekstrak Ulangan Total Fenol (mg TAE/g sampel) Rata-rata Ekstrak kasar soxhlet Fraksi Etanol Air Fraksi Etil Asetat Ekstrak Kasar Maserasi

6 Lampiran 4. Perhitungan daya antioksidan sampel uji a. Tabel aktivitas antioksidan (% penghambatan) Jenis ekstrak/fraksi ekstrak Ekstrak Kasar Soxhlet Fraksi Etanol Air Soxhlet Fraksi Etil Asetat Soxhlet Konsentrasi (ppm) Absorbansi Kontrol Ulangan Absorbansi Sampel % Penghambatan Rataan

7 Ekstrak Kasar Maserasi b. Perhitungan aktivitas antioksidan (% penghambatan) % 100% Contoh : Perhitungan aktivitas antioksidan ekstrak kasar soxhlet pada konsentrasi 4 ppm ulangan ke % 100% % c. Aktivitas antioksidan vitamin C % Daya Antioksidan Konsentrasi Ekstrak (ppm) 59

8 Lampiran 5. Perhitungan nilai IC 50 sampel uji dan vitamin C a. Tabel regresi linear dan nilai IC 50 Jenis Ekstrak Persamaan Regresi R 2 IC 50 (ppm) Ekstrak Kasar Soxhlet y = x Etanol Air y = x Etil Asetat y = x Ekstrak Kasar Maserasi y = x Vitamin C y = x b. Perhitungan nilai IC 50 Keterangan: y = % Penghambatan x = Konsentrasi zat IC 50 = Konsentrasi suatu zat antioksidan yang dapat menyebabkan 50% DPPH kehilangan karakter radikal atau konsentrasi suatu zat antioksidan yang memberikan persen penghambatan sebesar 50% (Suratmo, 2009) y = 50% Contoh perhitungan IC 50 untuk ekstrak kasar soxhlet :

9 Lampiran 6. Hasil uji antimikroba Jenis Ekstrak Ekstrak Kasar Soxhlet Fraksi Etanol Air Soxhlet Fraksi Etil Asetat Soxhlet Ekstrak Kasar Maserasi Konsentrasi Ekstrak Candida albicans Diameter Zona Bening (mm) Microsporum gypseum Pseudomonas aeruginosa

10 Lampiran 7. Hasil analisis statistika a. Aktivitas antioksidan ekstrak/fraksi ekstrak jarak pagar The SAS System The GLM Procedure Class Level Information Class Levels Values Tingkat konsentrasi Jenis ekstrak 4 A B C D Number of Observations Read 56 Number of Observations Used 56 Dependent Variable: respon Source DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F Model <.0001 Error Corrected Total R-Square Coeff Var Root MSE respon Mean Nilai R-Square sebesar atau sebesar % menunjukkan bahwa sebesar % keragaman respon yang diamati dapat dijelaskan oleh faktor dalam model (tingkat konsentrasi dan jenis ekstrak) sedangkan sisanya dijelaskan oleh faktor-faktor lain di luar model. Sementara, koefisien keragaman menyatakan seberapa besar variasi/ragam dalam data. Nilai koefisien keragaman yang wajar adalah 0 sampai 30. Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F Tingkat Konsentrasi <.0001 Jenis Ekstrak <.0001 Tingkat konsentrasi*jenis ekstrak Terlihat bahwa faktor tingkat konsentrasi dan jenis ekstrak memiliki p-value sebesar < Nilai ini kurang dari 0.05 sehingga dapat dikatakan bahwa baik tingkat konsentrasi maupun jenis ekstrak berpengaruh nyata terhadap respon. Sehingga dapat dilakukan uji lanjut terhadap kedua faktor tersebut. Adapun interaksi antara tingkat konsentrasi dan jenis ekstrak mempunyai p-value lebih besar dari 0.05 yang berarti bahwa interaksi antara tingkat konsentrasi dan jenis ekstrak ini tidak berpengaruh nyata terhadap respon. Uji Anova Untuk melihat pengaruh tingkat konsetrasi Hipotesis: H0 : α 1 = α 2 = α 3 =... = α 7 =0 H1 : minimal ada satu α i 0 62

11 Keputusan : Karena p-value (<0.0001) < alpha(0,05) maka tolak H0 sehingga dapat dinyatakan bahwa tingkat konsentrasi berpengaruh signifikan terhadap respon. Uji Lanjut Duncan The SAS System Duncan's Multiple Range Test for respon Note: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate. Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 28 Error Mean Square Number of Means Critical Range Means with the same letter are not significantly different. Duncan Grouping Mean N konsentrasi A A A B C D E F Pada tabel di atas terlihat bahwa antara tingkat konsentrasi 20 ppm dan 16 ppm tidak berbeda nyata, namun keduanya berbeda nyata terhadap tingkat konsentrasi lainnya. Adapun tingkat konsentrasi 12, 10, 8, 6,dan 4 ppm, kesemuanya berbeda nyata satu sama lain. Note: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate. Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 28 Error Mean Square Number of Means Critical Range

12 Means with the same letter are not significantly different. Duncan Grouping Mean N ekstrak A D A A C B A C B Pada tabel di atas terlihat bahwa antara ekstrak D (ekstrak kasar maserasi) dan ekstrak C (fraksi etil asetat) tidak berbeda nyata, namun keduanya berbeda nyata terhadap kedua jenis ekstrak lainnya. Adapun ekstrak A (ekstrak kasar soxhlet) dan ekstrak B (fraksi etanol air) berbeda nyata satu sama lain. b. Analisis statistika terhadap nilai ph pada saat pengamatan sabun Analisis statistika untuk mengetahui pengaruh jenis sabun dan lama penyimpanan (hari pengamatan) terhadap nilai ph sabun. Adapun jenis sabun yang digunakan dapat dilihat pada tabel berikut : Kode Jenis Sabun A BHT B EA 0.25 C EA 0.5 D EA 1.0 E Etas 0.25 F Etas 0.5 G Etas 1.0 Faktorial RAL in time The GLM Procedure Class Level Information Class Levels Values Hari Jenis 7 A B C D E F G ulangan Number of Observations Read 42 Number of Observations Used 42 64

13 Dependent Variable: respon Source DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F Model Error Corrected Total R-Square Coeff Var Root MSE respon Mean Nilai R-Square sebesar atau sebesar % menunjukkan bahwa sebesar % keragaman respon yang diamati dapat dijelaskan oleh faktor dalam model (tingkat konsentrasi dan jenis ekstrak) sedangkan sisanya dijelaskan oleh faktor-faktor lain di luar model. Sementara, koefisien keragaman menyatakan seberapa besar variasi/ragam dalam data. Nilai koefisien keragaman yang wajar adalah 0 sampai 30. Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F Jenis ulangan(jenis) Hari ulangan(hari) hari*jenis Tests of Hypotheses Using the Type III MS for ulangan(jenis) as an Error Term Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F Jenis Tests of Hypotheses Using the Type III MS for ulangan(hari) as an Error Term Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F Hari Terlihat bahwa faktor jenis (jenis sabun) memiliki p-value sebesar Nilai ini lebih besar dari 0.05 yang berarti bahwa jenis sabun tidak berpengaruh nyata terhadap nilai ph sabun. Sedangkan faktor hari memiliki p-value sebesar Nilai ini kurang dari 0.05 sehingga dapat dikatakan bahwa faktor hari berpengaruh nyata terhadap respon dan dapat dilakukan uji lanjut terhadap kedua faktor tersebut. Adapun interaksi antara jenis dan hari memiliki nilai p-value sebesar (lebih besar dari 0.05) yang berarti bahwa interaksi antara jenis dan hari tidak berpengaruh nyata terhadap respon. Uji Anova Untuk melihat pengaruh faktor Hipotesis: H0 : α 1 = α 2 = α 3 =... = α 7 =0 H1 : minimal ada satu α i 0 Keputusan : Karena p-value (<0.0001) < alpha(0,05) maka tolak H0 sehingga dapat dinyatakan bahwa faktor berpengaruh signifikan terhadap respon. 65

14 Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 2 Error Mean Square Number of Means 2 3 Critical Range Means with the same letter are not significantly different. Duncan Grouping Mean N hari A A A A A Pada tabel di atas terlihat bahwa respon yang berupa nilai ph sabun, nilainya tidak berbeda nyata antara hari pengamatan pertama, kedua, dan ketiga yang berarti nilai ph sabun masih relatif stabil pada ketiga hari pengamatan tersebut. c. Analisis statistika terhadap nilai aktivitas antioksidan pada saat pengamatan sabun Analisis statistika untuk mengetahui pengaruh jenis sabun dan lama penyimpanan (hari pengamatan) terhadap aktivitas antioksidan sabun. Adapun jenis sabun yang digunakan dapat dilihat pada tabel berikut : Kode Jenis Sabun A BHT B EA 0.25 C EA 0.5 D EA 1.0 E Etas 0.25 F Etas 0.5 G Etas 1.0 The GLM Procedure Class Level Information Class Levels Values Hari Jenis 7 A B C D E F G ulangan Number of Observations Read 42 Number of Observations Used 42 66

15 Dependent Variable: respon Source DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F Model <.0001 Error Corrected Total R-Square Coeff Var Root MSE respon Mean Nilai R-Square sebesar atau sebesar % menunjukkan bahwa sebesar % keragaman respon yang diamati dapat dijelaskan oleh faktor dalam model (tingkat konsentrasi dan jenis sabun) sedangkan sisanya dijelaskan oleh faktor-faktor lain di luar model. Sementara, koefisien keragaman menyatakan seberapa besar variasi/ragam dalam data. Nilai koefisien keragaman yang wajar adalah 0 sampai 30. Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F Jenis <.0001 ulangan(jenis) Hari <.0001 ulangan(hari) hari*jenis Tests of Hypotheses Using the Type III MS for ulangan(jenis) as an Error Term Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F Jenis <.0001 Tests of Hypotheses Using the Type III MS for ulangan(hari) as an Error Term Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F Hari Terlihat bahwa faktor jenis (jenis sabun) dan hari memiliki p-value sebesar < Nilai ini kurang dari 0.05 sehingga dapat dikatakan bahwa baik jenis sabun maupun hari berpengaruh nyata terhadap respon. Sehingga dapat dilakukan uji lanjut terhadap kedua faktor tersebut. Adapun interaksi antara jenis dan hari memiliki nilai p-value sebesar Nilai ini juga lebih kecil dari 0.05 yang berarti bahwa interaksi antara jenis dan hari juga berpengaruh nyata terhadap respon. Uji Anova Untuk melihat pengaruh jenis Hipotesis: H0 : α 1 = α 2 = α 3 =... = α 7 =0 H1 : minimal ada satu α i 0 Keputusan : Karena p-value (<0.0001) < alpha(0,05) maka tolak H0 sehingga dapat dinyatakan bahwa jenis sabun berpengaruh signifikan terhadap respon. The GLM Procedure Duncan's Multiple Range Test for respon Note: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate. 67

16 Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 6 Error Mean Square Number of Means Critical Range Means with the same letter are not significantly different. Duncan Grouping Mean N jenis A A B G C F D D E E E E C F B Pada tabel di atas terlihat bahwa nilai antioksidan pada semua jenis sabun berbeda secara signifikan kecuali antara sabun dengan kode E dan C yaitu sabun dengan penambahan fraksi etil asetat 0.25% dan sabun dengan penambahan fraksi etanol air 0.5%. Duncan's Multiple Range Test for respon Note: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate. Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 2 Error Mean Square Number of Means 2 3 Critical Range Means with the same letter are not significantly different. Duncan Grouping Mean N hari A A B A B B Pada tabel di atas terlihat bahwa respon yang berupa aktivitas antioksidan sabun, nilainya tidak berbeda nyata antara hari pengamatan pertama dan kedua, begitu pula dengan hari pengamatan kedua dan ketiga. Namun nilai aktivitas antioksidan antara hari pertama dan hari ketiga berbeda secara signifikan. 68

17 Lampiran 8. Hasil analisis GC-MS ekstrak dan fraksi ekstrak daun dan ranting jarak pagar a. Ekstrak kasar soxhlet Abundance TIC: A_1.D Time-->

18 b. Fraksi Etanol Air Abundance TIC: A2.D Time-->

19 c. Fraksi etil asetat Abundance TIC: A3.D Time-->

20 d. Ekstrak kasar maserasi Abundance TIC: SAMPEL_UL.D Time-->