Kata kunci : Myrmecodia pendens, SP-C1, Balb/c Jantan

Transkripsi

1 EFEK KEMOTERAPI EKSTRAK ETANOL SARANG SEMUT (MYRMECODIA PENDENS) TERHADAP SEL KANKER LIDAH MANUSIA (SP-C1) YANG DIINJEKSI PADA MENCIT Balb/c JANTAN Anjar Ariansyah Sejati 1, Indrayanti 2, Ana Medawati 3 1 Mahasiswa Kedokteran Gigi Universitas Muhammadiyah Yogyakarta 2 Bagian Patologi Anatomi Universitas Muhammadiyah Yogyakarta 3 Bagian Oral Biomedis Universitas Muhammadiyah Yogyakarta Abstrak : Pengobatan kanker seperti pembedahan dan kemoterapi hingga saat ini masih menimbulkan efek yang tidak diinginkan. Salah satu pengobatan yang sedang dikembangkan dalam beberapa dekade ini adalah penggunaan obat herbal, di antaranya adalah tanaman sarang semut (Myrmecodia pendens). Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui efek kemoterapi ekstrak etanol Myrmecodia pendens terhadap perkembangan sel kanker lidah manusia supri clone one (SP-C1) yang diinjeksi pada mencit Balb/c. Subyek penelitian ini menggunakan 8 ekor mencit Balb/c jantan yang diinjeksi sel kanker lidah manusia SP-C1 sebanyak sel per ekor secara subkutan, kemudian dibagi menjadi 4 kelompok. Kelompok 1 tidak diinjeksi sel SP-C1, kelompok 2 diinjeksikan sel SP-C1 dan diberi aquades, kelompok 3 diinjeksi sel SP-C1 dan diberi ekstrak etanol Myrmecodia pendens 3 mg dan kelompok 4 diinjeksi sel SP-C1 serta diberi cisplatin 0,27mg. Kemudian dilakukan perhitungan terhadap berat badan dan perubahan volume tumor. Data yang diperoleh diolah menggunakan uji Shapiro wilk, dilanjutkan menggunakan uji kruskal wallis dan one way ANOVA. Hasil pada pengukuran berat badan menunjukkan terjadi penurunan berat badan pada kelompok kontrol negatif (2) (1,25 gram) dan kelompok perlakuan (3) (1 gram). Uji analisis statistik antara kelompok menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,05) antara kelompok kontrol negatif (2) dengan kelompok perlakuan (p=0,004). Hasil pada pengukuran volume tumor menunjukkan terjadi penurunan sebesar 45% pada kelompok kontrol negatif (2), 73% pada kelompok perlakuan (3) dan 88% pada kelompok kontrol positif (4). Uji statistik membuktikan terjadi perbedaan yang signifikan (p<0,05) antara kelompok perlakuan (3) dengan kelompok negatif (2) (p=0,037). Pemberian ekstrak etanol sarang semut pada mencit Balb/c yang diinjeksi sel kanker lidah manusia terbukti dapat memperbaiki berat badan serta menekan perkembangan volume tumor. Kata kunci : Myrmecodia pendens, SP-C1, Balb/c Jantan Pendahuluan Kanker rongga mulut merupakan bagian dari kanker kepala dan leher. Kanker rongga mulut memiliki banyak jenis, namun 90% kanker yang ada tergolong jenis karsinoma sel skuamosa (KSS) (Cawson dan Odell, 2008). Menurut Gothia et al.(2007) sebanyak pasien di seluruh dunia terserang 1

2 karsinoma sel skuamosa rongga mulut tiap tahunnya. Lidah merupakan bagian yang paling sering mengalami keganasan rongga mulut. Karsinoma sel skuamosa pada lidah sering terjadi pada bagian posterior dan samping lidah. Angka kejadiannya mencapai 45% dari seluruh insidensi kanker lidah (Regezi et al., 2008). Terapi kanker yang dilakukan saat ini seperti pengangkatan jaringan kanker dan kemoterapi, masih dirasakan belum efektif. Pengangkatan jaringan kanker biasanya dilakukan dengan dan pada umumnya tidak bisa tuntas menghilangkan kanker karena kemungkinan ada jaringan yang masih tertinggal dan dapat tumbuh menjadi jaringan kanker baru. Sedangkan kemoterapi dan penyinaran kurang selektif dalam membunuh sel kanker, seringkali sel normal juga ikut rusak dan mati. Oleh karena itu perlu diupayakan suatu pengobatan kanker yang relatif aman (Meiyanto, 1999). Tanaman sarang semut (Myrmecodia pendens) merupakan tanaman herbal yang dipercaya oleh masyarakat untuk mengobati kanker. Myrmecodia pendens mengandung senyawa-senyawa kimia dari golongan flavonoid dan tanin yang diketahui mampu menyembuhkan berbagai macam penyakit (Soeksmanto et al., 2010). Oleh sebab itu, perlu dilakukan penelitian untuk mengetahui efek ekstrak Myrmecodia pendens terhadap perkembangan sel kanker. Bahan dan Cara Penelitian Penelitian ini adalah penelitian eksperimental laboratoris untuk menguji ekstrak etanol Myrmecodia pendens terhadap perkembangan tumor mencit Balb/c yang diinjeksi sel kanker lidah manusia Supri Clone 1(SP-C1). Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah ekstrak etanol Myrmecodia pendens, cisplatin. Untuk kultur sel SP-C1, diperlukan bahan antara lain Methanol Absolute, Aquadest, media RPMI 1640, FCS 10%, Phosphat Buffernet Salin (PBS), dan Nitroblue Tetraziolum (NBT), Alat yang digunakan untuk kultur sel SP-C1 antara lain inkubator, sentrifuge, mikro pipet, objek gelas dan kulkas. Untuk uji karsinogenesis adalah spuit injeksi 0,5 ml, kandang individual, meja operasi, seperangkat alat bedah (pinset, scalpet, blade, gunting), neraca elektrik (Shimazu, type LS-6DT), mikroskop, kamera dan sliding caliper. Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Pengujian dan Penelitian Terpadu (LPPT) Unit 4 Universitas Gadjah Mada Yogyakarta dengan tahap kerja sebagai berikut : tanaman sarang semut dicuci dengan air biasa, kemudian dikeringkan lalu dibuat simplisia dan diserbuk menggunakan mesin blender. Serbuk Myrmecodia pendens ditambahi dengan alkohol 70%, diaduk selama 30 menit, lalu diamkan selama 24 jam. Kemudian disaring sebanyak 3 kali. Filtrat yang dihasilkan diuapkan dengan kompor listrik. Kultur sel dilakukan di LPPT Unit 1 UGM dengan cara sel diambil dari tangki nitrogen cair dan segera dicairkan dengan suhu 37 o C kemudian disemprot dengan etanol 70%. Ampul dibuka dan sel dipindahkan kedalam tabung conical steril yang berisi media RPMI Suspensi sel disentrifus dengan kecepatan 1500 rpm suhu dingin selama 5 menit kemudian supernatant dibuang dan ditambah dengan medium penumbuh yang mengandung 10% FBS. Selanjutnya diresuspensi perlahan hingga homogen. Sel ditumbuhkan dalam beberapa culture 2

3 flask kecil (2 jam) kemudian medium diganti dan sel ditumbuhkan lagi hingga kofluen sampai jam dan ketika jumlahnya mencapai lalu dipanen. Sampel yang diuji adalah 8 ekor mencit balb/c jantan. Terdapat 4 kelompok pada pengukuran perubahan berat badan mencit. Kelompok 1 tanpa injeksi kelompok 2,3 dan 4 (Kelompok perlakuan) diinjeksi sel kanker lidah manusia (SP-C1) secara subkutan pada punggung mencit. Kelompok 2 diberi aquades, kelompok 3 diberi ekstrak etanol Myrmecodia pendens 3mg/KgBB dan kelompok 4 diberi cisplatin sebanyak 0,27mg/Kg BB. Setiap kelompok diberi perlakuan melalui intubasi oral. Pengumpulan data melalui pengamatan jumlah volume nodul tumor dan berat badan mencit tiap-tiap kelompok. Pengukuran volume nodul dilakukan dengan mengukur panjang (L) dan lebar (W) diameter tumor, lalu dimasukkan kedalam rumus V= L xw 2 (Supriatno, 2007). Analisa data menggunakan uji Shapiro wilk, lalu diikuti menggunakan One Way Anova dan Mann whitney. Hasil Penelitian Hasil pengamatan pengukuran berat badan dapat dilihat pada tabel 2 dibawah ini Tabel 1. Hasil Penimbangan Berat Badan Mencit Hari Berat Badan Kelompok (gram) Kelompok 1 Kelompok 2 Kelompok 3 Kelompok ,5 40,1 39, ,1 42,05 38,85 34, ,4 39,25 38,45 34, ,2 39,6 38,45 34,4 5 36,45 39,1 37,9 33, ,75 39,35 38,3 34,4 7 36,35 38,75 38,15 35,7 P (%) + 2,4% -3,4% -2,6% +4,8% P : Persentasi Perubahan Berat Badan Mencit Dari tabel diatas didapatkan perubahan berat badan mencit selama diberi perlakuan. Pada kelompok 1 tanpa di injeksi sel kanker terjadi penambahan berat badan (+) sebanyak 2,4%. Pada kelompok 2 yang diberi aquades terjadi penurunan berat badan (-) sebanyak 3,4%. Pada Kelompok 3 yang diberi perlakuan berupa ekstrak etanol sarang semut terjadi penurunan berat badan (-) sebanyak 2,6%. Dan pada kelompok yang diberikan cisplatin terjadi penambahan berat badan (+) sebanyak 4,8%. Hasil pengamatan yang dilakukan terhadap pengukuran nodul tumor dapat dilihat pada tabel 1 dibawah ini Tabel 2. Volume Tumor Hari 1 Hari 2 Hari 3 Hari 4 Hari 5 Hari 6 P ( %) Sig Kelompok Cisplatin 0,211 0,157 0,125 0,107 0,069 0, % 0,99 Kelompok Sarang 0,647 0,495 0,393 0,231 0,158 0, % 0,80 Semut Kelompok Aquades 0,554 0,485 0,394 0,311 0,280 0, % 0,51 3

4 P : Persentasi Pengurangan Volume Tumor Dari tabel diatas diketahui bahwa persentase penurunan volume nodul tumor terbesar terjadi pada kelompok cisplatin 0,27mg. Perbandingan penurunan volume nodul pada hari pertama dan hari ke 6 sebesar 88%. Pada kelompok yang diberi ekstrak etanol sarang semut sebanyak 3mg mampu menghambat perkembangan nodul tumor sebesar 73 %. Dan pada kelompok yang diberi aquades terjadi penurunan volume tumor sebanyak 45%. Uji menggunakan Shapiro-wilk menunjukkan distribusi semua kelompok tergolong normal. Diskusi Tabel 1. menunjukkan bahwa terjadi perubahan berat badan antara pada masing masing kelompok selama pemberian perlakuan. Pada kelompok sarang semut terjadi pengurangan berat badan dari 39,15 gram menjadi 38,15 gram (2,6 %). Berbeda dengan kelompok yang diberikan cisplatin. Pada hari ke 1 hingga hari ke 4 berat badan mencit berkurang namun hingga pada hari ke enam berat badan mencit bertambah. Hal tersebut dapat disebabkan oleh berbagai macam faktor. Untuk mengetahui signifikansi perbedaan efektivitas ekstrak sarang semut terhadap berat badan mencit yang diinjeksi sel kanker dilakukan dengan menggunakan uji statistik One way Anova. Uji Anova dilakukan atas hasil penimbangan berat badan mencit tiap kelompok selama 6 hari. Uji Anova menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang signifikan antara kelompok kontrol positif (pemberian cisplatin) dengan kelompok lainnya (p<0,05). Perubahan berat badan mungkin disebabkan karena serat ekstrak Myrmecodia pendens yang tinggi. Menurut Muchtadi (2001) serat pangan dapat menghalangi penyerapan zat gizi seperti gula, protein dan lemak. Penurunan berat badan mencit sama dengan pertambahan berat badan manusia, yang dipengaruhi oleh zat gizi yang dimakan meliputi : protein, karbohidrat, lemak, vitamin dan mineral yang cukup seimbang (Linder 1992). Respon imun tubuh mencit terhadap penolakan sel kanker lidah manusia juga diduga berperan dalam terjadinyan penurunan berat badan mencit. Pengerusakan sel yang terjadi menyebabkan reaksi inflamasi, peningkatan sitokin proinflamasi antara lain IL-1,TNF alpha dan IL-2. Sitokin IL-1 dan TNF alpha bersifat termogen, kebutuhan kalori tubuh meningkat sehingga kanker, lemak dan karbohidrat diubah menjadi kalor atau panas tubuh yang menyebabkan penurunan berat badan hewan coba (Akrom, 2012). Tabel 2. menunjukkan kontrol positif (Pemberian cisplatin) lebih cepat menghambat perkembangan sel kanker lidah manusia SP-C1 dibandingkan kelompok yang diberikan perlakuan (ekstrak etanol Myrmecodia pendens) dan diberikan akuades, dan kelompok ekstrak etanol sarang semut lebih efektif menghambat perkembangan sel kanker bila dibandingkan dengan kelompok aquades. Untuk mengetahui signifikansi perbedaan efektivitas ekstrak sarang semut terhadap penurunan volume tumor mencit yang diinjeksi sel kanker dilakukan dengan menggunakan uji statistik One way Anova. Uji Anova dilakukan atas hasil pengukuran volume mencit tiap kelompok setelah diberi perlakuan selama 6 hari. Uji Anova menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang signifikan antara 4

5 kelompok kontrol positif (pemberian cisplatin) dengan kelompok lainnya (p<0,05). Hasil penelitian ini juga senada dengan yang dilakukan oleh para peneliti lainnya.sumarno 2010, mencoba menguji keefektifan ekstrak sarang semut dalam menghambat perkembangan kanker payudara menggunakan mencit model kanker C3H dengan dosis yang berbeda. Dosis ekstrak Myrmecodia pendens tertinggi yang digunakan adalah 8mg, dan hasilnya adalah ekstrak ethanol sarang semut dapat menurunkan aktifitas proliferasi dan menginduksi apoptosis sel kanker. Sejalan dengan Sumarno (2010), Suwondo et al. (2011) secara in vitro mencoba mengkaji efek ekstrak etanol Myrmecodia pendens terhadap jalur apoptosis sel kanker payudara. Hasil yang didapatkan adalah ekstrak etanol Myrmecodia pendens dapat menghambat perkembangan tumor dengan meningkatkan ekspresi caspase-9, Bcl-2, Bax, dan p53 melalui pengamatan immunohistokimia. Kemampuan ekstrak etanol Myrmecodia pendens dalam menghambat perkembangan kanker diduga karena terkandung senyawa flavonoid. Flavonoid telah terbukti dapat menghambat perkembangan sel-sel kanker dengan cara menstimulasi produksi interferon-ɣ (IFN- ɣ ) dalam populasi immunosit, yang sangat penting dalam memacu aktivitas CTL s dan sel NK pada sistem perondaan imun terhadap sel-sel kanker. senyawa flavonoid dapat menghambat perkembangan tumor melalui jalur siklus sel, pelepasan sitokrom c, aktivasi caspase 9, caspase 3, meningkatkan ekspresi protein p21, p27, Bax, penurunan ekspresi protein cyclin B1, cyclin A dan Cdc2 (Aryapour et al., 2012). Kesimpulan Hasil penelitian ini dapat disimpulkan sebagai berikut : 1. Kontrol positif (Cisplatin) paling efektif menghambat perkembangan volume tumor mencit Balb/c yang diinjeksi sel kanker lidah manusia. Hal ini ditunjukkan dengan adanya perbedaan yang signifikan antara kelompok cisplatin dengan kelompok lainnya 2. Kelompok perlakuan yang diberikan ekstrak etanol sarang semut efektif menghambat perkembangan volume tumor bila dibandingkan dengan kelompok negatif yang diberikan aquades. Hal ini ditunjukkan dengan adanya perbedaan yang signifikan dengan kelompok negatif. Saran Dari penelitian diatas diharapkan peneliti selanjutnya lebih mengungkap efektifitas tanaman sarang semut sebagai agen antikanker untuk karsinogenesis lainnya, serta perlu diungkapkan efeknya terhadap toksisitas organ lainnya seperti ginjal dan hepar. Daftar Pustaka Cawson, R.A, Odell, E.W. (2008). Oral Cancer. Cawson s Essentials of Oral Pathology and Oral Medicine. 8thEdition. New York : Churchill Livingston Elsevier :

6 Gothia, S., Urtila, E., Paraschivescu., Gotia, S, R., (2009). Risk Faktors In Oral Mucosa Cancer. Journal of Experimental Medical and Surgery Research. 16(2) : Regezi, Joseph, A., Sciubba, J.J., Jordan, R.C.K. (2008). Oral Pathology, Clinical Pathologic Correlations. 5th ed. Missouri : Saunders. Meiyanto, E Kurkumin Sebagai Obat Anti Kanker: Menelusuri Mekanisme Aksinya, MFI, 10(4), Soeksmanto, A., Subroto, M.A., Wiajaya, H., Simanjuntak, P. (2010). Anticancer Activity Test for Extracts of Sarang Semut Plant (Myrmecodya pendens) to HeLa and MCM-B2 Cells. Journal of Biological Sciences. 13(3): Supriatno. (2007). Electro-gene therapy in a human oral tongue cancer cell by intratumoral injection of pcdna3.-p27 Kip1wt. Dent. Journal.Vol.40. No. : 1 5 Muchtadi D. (1989). Aspek Biokimia dan Gizi dalam Keamanan Pangan. Departemen Pendidikan dan Kebudayaan. Dirjen Pendidikan Tinggi. Pusat Antar Universitas,IPB. Bogor. Linder MC. (1994). Biokimia nutrisi dan Metabolisme. Parakkasi. Penerjemah. UI Press. Jakarta Akrom. (2012). Mekanisme Kemopreventif Ekstrak Heksan Biji Jinten Hitam (Nigella sativa Lor Pada Tikus Sprague Dawley Diinduksi 7,12 DimethylBenz(a)antracene : Kajian Antioksidan dan Immunomodulator. Disertasi. Universitas Gadjah Mada. Sumarno. (2010). Pengaruh Ekstrak Sarang Semut (Myrmecodia pendens Merr & Perry) Terhadap Aktivitas Proliferasi Sel dan Indeks Apoptosis Kanker Payudara Mencit C3H). Tesis. Universitas Diponegoro Suwondo. (2011). Myrmecodia pendens : Alternatifkemoterapi kanker payudara dengan efek samping minimal. Universita Gadjah Mada. Aryapour, H., Riazi, G, H., Ahmadian, S., Foroumadi, A., Mahdavi,M., Emami,S. (2012). Induction of Apoptosis Through Tubulin Inhibition in Human Cancer Cells by New Chromene-Based Chalcones. Pharmaeutical Biology. 50(12);