BAB IV METODOLOGI PENELITIAN. Penelitian ini merupakan penelitian dibidang Farmakologi dan Terapi.

Transkripsi

1 BAB IV METODOLOGI PENELITIAN 4.1 Ruang Lingkup Penelitian Penelitian ini merupakan penelitian dibidang Farmaklgi dan Terapi. 4.2 Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian ini termasuk dalam penelitian eksperimental labratrik menggunakan Pre and Pst Test Cntrl Grup Design pada 3 kelmpk hewan cba tikus Wistar dengan rancangan penelitian seperti diuraikan pada Gambar 9. dibawah ini : O1 O2 X1 O3 N O4 O5 X2 O6 O7 O8 K O9 Gambar 9. Rancang Bangun Penelitian 48

2 49 Keterangan : N = Besar sampel penelitian X1 = Kelmpk perlakuan yang diberi MSG merek A yang dijual di pasaran dengan mencantumkan kadar mnsdium glutamat sebesar 99% yang diberikan secara per ral dsis 5 mg / kgbb / hari X2 = Kelmpk perlakuan yang diberi MSG merek B yang dijual di pasaran tanpa mencantumkan kadar mnsdium glutamat yang diberikan secara per ral dsis 5mg / kgbb / hari K = Kelmpk Kntrl O1 = Evaluasi awal fungsi memri spasial pada kelmpk pemberian MSG merek A yang dijual di pasaran dengan mencantumkan kadar mnsdium glutamat sebesar 99% yang diberikan secara per ral dsis 5 mg / kgbb / hari O2 = Evaluasi fungsi memri spasial sebelum perlakuan ( seusai prses pengadaptasian alat ) pada kelmpk pemberian MSG merek A yang dijual di pasaran dengan mencantumkan kadar mnsdium glutamat sebesar 99% yang diberikan secara per ral dsis 5 mg / kgbb / hari O3 = Evaluasi fungsi memri spasial pada 3 minggu setelah perlakuan pada kelmpk pemberian MSG merek A yang dijual di pasaran dengan mencantumkan kadar mnsdium glutamat sebesar 99% yang diberikan secara per ral dsis 5 mg / kgbb / hari

3 50 O4 = Evaluasi awal fungsi memri spasial pada kelmpk pemberian MSG merek B yang dijual di pasaran tanpa mencantumkan kadar mnsdium glutamat yang diberikan secara per ral dsis 5 mg / kgbb / hari O5 = Evaluasi fungsi memri spasial sebelum perlakuan ( seusai prses pengadaptasian alat ) pada kelmpk pemberian MSG merek B yang dijual di pasaran tanpa mencantumkan kadar mnsdium glutamat yang diberikan secara per ral dsis 5 mg / kgbb / hari O6 = Evaluasi fungsi memri spasial pada 3 minggu setelah perlakuan pada kelmpk pemberian MSG merek B yang dijual di pasaran tanpa mencantumkan kadar mnsdium glutamat yang diberikan secara per ral dsis 5 mg / kgbb / hari O7 = Evaluasi awal fungsi memri spasial pada kelmpk kntrl O8 = fungsi memri spasial sebelum perlakuan pada kelmpk kntrl O9 = Evaluasi fungsi memri spasial pada 3 minggu setelah perlakuan pada kelmpk kntrl

4 Tempat dan Waktu Penelitian Penelitian dengan tikus Wistar berlangsung selama tiga minggu 26 Mei Mei Pemeliharaan hewan cba dan pemberian MSG per ral merek A yang dijual di pasaran dengan mencantumkan kadar mnsdium glutamat sebesar 99% dan merek B yang dijual di pasaran tanpa mencantumkan kadar mnsdium glutamat dilaksanakan di labratrium Parasitlgi Fakultas Kedkteran Universitas Dipnegr. 4.4 Ppulasi dan Sampel Ppulasi penelitian yang akan dilaksanakan memakai tikus Wistar jantan berusia 8 minggu dengan berat 200 gram. Berkenaan dengan alasan pemilihan jenis Wistar dikarenakan dalam beberapa penelitian sebelumnya leh peneliti peneliti lain memberikan hasil pada memri spasial. Besar sampel yang digunakan menurut Wrld Health Organizatin ( WHO ) adalah 5 ekr 78, sehingga pada penelitian ini jumlah sampel yang digunakan adalah 15 ekr, tiap kelmpk masing masing berisi 5 ekr. Sedangkan untuk mengantisipasi dikeluarkannya tikus akibat adanya kriteria drp ut, maka pada tiap kelmpk akan ditambahkan satu ekr tikus sehingga jumlah sampel yang digunakan adalah sebesar 18 ekr.

5 52 Randminasi : 18 tikus Wistar dikelmpkkan secara randm menjadi 3 kelmpk yaitu : Kelmpk Kntrl : 5 ekr tikus + 1 ekr tikus sebagai cadangan Kelmpk Perlakuan 1 : 5 ekr tikus + 1 ekr tikus sebagai cadangan Kelmpk Perlakuan 2 : 5 ekr tikus + 1 ekr tikus sebagai cadangan 4.5 Kriteria Inklusi dan Eksklusi Kriteria Inklusi Tikus Wistar jantan usia 8 minggu dengan bbt badan 200 gram Aktifitas tingkah laku nrmal Kriteria Eksklusi Tikus Wistar yang mengalami stress : mutisme, agresif 4.6 Kriteria Drp Out Tikus yang menderita sakit ( diare ) selama penelitian Bbt tikus yang menurun hingga kurang dari 200 gram Tikus mati selama percbaan berlangsung

6 Variabel data Variabel Bebas Variable bebas pada penelitian ini adalah berupa pemberian mnsdium glutamat merek A yang dijual di pasaran dengan mencantumkan kadar mnsdium glutamat sebesar 99% diberikan secara per ral dengan dsis 5 mg / kgbb / hari dan pemberian mnsdium glutamat merek B yang dijual di pasaran tanpa mencantumkan kadar mnsdium glutamat diberikan secara per ral dengan dsis 5 mg / kgbb / hari dan akan dilakukan penelitian selama 3 minggu Variabel Tergantung Variabel tergantung pada penelitian ini adalah fungsi memri spasial yang dinilai dengan perangkat Mrris Water Maze ( MWM )

7 Definisi Operatinal Tabel 4. Definisi Operasinal Variabel N Nama Variabel Batasan Instrumen Skala 1 Pemberian Pemberian mnsdium Timbangan mnsdium glutamat perral merk A yang elektrik glutamat per ral dijual di pasaran dengan mencantumkan kadar mnsdium glutamat sebesar 99% dengan dsis 5 mg / KgBB / hari dan mnsdium glutamat per ral merk B yang dijual di pasaran tanpa mencantumkan kadar mnsdium glutamat dengan dsis 5 mg / KgBB / hari 2 Fungsi Memri Spasial Kemampuan untuk menentukan arah dan tujuan dinilai menggunakan alat Mrris Water Maze dengan menghitung lama waktu tempuh ( detik ) dari lima rute yang ditentukan Mrris Water Maze Skala Nminal Skala Rasi 4.8 Alat dan Bahan Alat Alat-alat yang diperlukan pada saat penelitian adalah kandang hewan, timbangan elektrnik, snde lambung, alat Mrris Water Maze ( mdifikasi ). Mrris ( 1981 ) ; Mrris, Garrud, Rwalins dan O Keefe ( 1982 ) memberi pendapat bahwa Mrris Water Maze adalah alat yang baik dan juga ppuler untuk memeriksa status memri spasial dari tikus. Dengan alat ini, tikus memperleh

8 55 keterampilan yang dapat digunakan untuk menjalankan tugasnya, yaitu : berenang, berenang menjauhi dinding bejana, menemukan tujuan untuk istirahat serta memanjat untuk mencapai bagian atas. Selain itu tikus juga dapat belajar untuk menentukan arah yang tepat serta menemukan landasan yang tersembunyi sehingga menurut D Hge dan De Deyn ( 2001 ) bahwa Mrris Water Maze merupakan alat yang baik untuk menilai fungsi belajar dan fungsi mengingat pada hewan cba tikus. 29, 31 Perangkat Mrris Water Maze yang digunakan pada percbaan mempunyai dimensi ruang berupa : dasar Maze yang berbentuk lingkaran dengan diameter 160 cm, dibagi menjadi delapan kuadran ( kuadran satu sampai delapan ), tinggi 45 cm, diisi air sampai setinggi 35 cm dengan suhu air yang disesuaikan dengan suhu kamar. Landasan yang digunakan leh hewan cba tikus terbuat dari kaca tembus pandang berdimensi alas dan atap 10 x 10 cm, tinggi 34 cm dan tebal kaca 0,8 cm serta permukaan landasan kaca terletak 1 cm dibawah permukaan air dan diletakkan pada kuadran nmr lima. 79 Kandang tikus pada percbaan ini menyesuaikan pada kaidah kebutuhan ruang setiap ekr tikus jantan dengan berat 200 gram akan memerlukan area seluas 450 cm 2 untuk melakukan aktifitasnya dan tinggi maksimal saat tikus berdiri pada kedua tungkai belakang adalah 30 cm. Kandang tikus berjumlah 4 buah dengan rincian : tiga buah kandang untuk ke tiga macam kelmpk penelitian sedangkan satu kandang sebagai tempat transit setelah melakukan tes Mrris Water Maze sebelum dimasukkan ke dalam kandang. Sedangkan untuk kandangnya akan diletakkan pada ruangan dengan penerangan berupa lampu

9 56 antara lux yang menyala selama dua belas jam dimulai pada pukul hingga dan pada dua belas jam selanjutnya pada pukul hingga lampu akan dimatikan Bahan a. Tikus Wistar jantan yang diperleh dari Unit Pemeliharaan Hewan Cba Labratrium Bilgi ( FMIPA ) Universitas Negeri Semarang dan untuk memenuhi kriteria inklusi, maka diberikan pakan standar BR 2 dan minum secara ad libitum. Selama waktu penelitian hewan cba tikus akan ditempatkan pada tiga kandang terpisah sesuai dengan kelmpk penelitian ( P1, P2, dan P3 ) b. Mnsdium glutamat per ral merek A yang dijual di pasaran dengan mencantumkan kadar mnsdium glutamat sebesar 99% dengan dsis 5 mg / KgBB / hari dan mnsdium glutamat per ral merek B yang dijual di pasaran tanpa mencantumkan kadar mnsdium glutamat dengan dsis 5 mg / kgbb / hari diberikan selama tiga minggu.

10 Alur Penelitian Pembagian Kelmpk Sampel penelitian dibagi menjadi tiga kelmpk yang pada masing-masing kelmpk terdiri atas enam ekr tikus dan dimasukkan dalam tiga buah kandang yang berbeda sesuai dengan kelmpk penelitian hingga penelitian berakhir. Kelmpk K ( P1 ) merupakan tikus kntrl yang tidak diberi paparan mnsdium glutamat, Kelmpk I ( P2 ) merupakan kelmpk tikus yang diberi paparan mnsdium glutamat per ral merek A yang dijual di pasaran dengan mencantumkan kadar mnsdium glutamat sebesar 99% dengan dsis 5 mg / KgBB / hari satu kali sehari dan Kelmpk II ( P3 ) merupakan kelmpk tikus yang diberi paparan mnsdium glutamat per ral merek B yang dijual di pasaran tanpa mencantumkan kadar mnsdium glutamat dengan dsis 5 mg / KgBB / hari satu kali sehari, dengan waktu perlakuan masing masing selama tiga minggu Pengenalan Metde Pemeriksaan Hewan cba tikus diberi perlakuan berupa pengenalan pada metde pemeriksaan berupa latihan sebanyak dua kali sehari dengan tempat yang dipindah pindah, sedangkan psisi landasan yang dituju tetap ( pada kuadran lima ) sesuai dengan pembagian kuadran. Terdapat lima rute yang harus ditempuh masing masing tikus, yaitu I : 1 5 ; II : 2 5 ; III : 8 5 ; IV : 3 5 dan V : 7 5

11 58 dengan waktu tempuh maksimal dalam prses mencari landasan yang dituju adalah selama 120 detik, serta diperkenankan berada diatas landasan selama maksimal lima belas detik. 79 Tes pengenalan mula-mula dilakukan selama tiga hari, dan tiap usai melakukan tes maka tikus akan diletakkan dalam kandang transit yang diletakkan pada ruangan terbuka dibawah sinar matahari selama lima belas menit dan dikeringkan sebelum dimasukkan kembali kedalam kandang. Hal ini mempunyai tujuan agar menghindari terjadinya hiptermia. Sedang untuk kebersihan alat cba, air dalam bejana dibuang kemudian bejana dicuci dengan desinfektan serta dikeringkan untuk menghindari adanya rganisme infeksius Prsedur Persiapan Dan Pemeriksaan Memri Spasial Selama tiga hari pertama percbaan, hewan cba tikus hanya akan diberi pakan standar BR-2 dan dibiarkan beradaptasi terhadap lingkungan kandang, dan pada hari ke empat mulailah seluruh hewan cba diberi pengenalan pada perangkat Mrris Water Maze sebanyak dua kali sehari selama tiga hari sesuai metde pengenalan terhadap lingkungan pada awal percbaan, serta pada akhir sesi pengenalan alat sebelum dilakukannya perlakuan dihitunglah rerata waktu tempuh leh rang lain selain peneliti ( untuk menghilangkan bias penelitian ) dari masing masing kelmpk pada hewan cba. Pada akhir perlakuan ( pada akhir minggu ke tiga ) dilakukan perhitungan kembali rerata waktu tempuh dengan alat Mrris Water Maze pada ketiga kelmpk hewan cba. 79

12 Prtkl Penelitian Penelitian diawali dengan membagi tikus kedalam tiga kelmpk dengan masing masing kelmpk berisi lima ekr tikus dengan 1 cadangan ( untuk mengantisipasi terjadinya drp ut ), yaitu Kelmpk I ( P1 ) yang merupakan kelmpk kntrl yaitu kelmpk yang tidak diberi paparan mnsdium glutamat, Kelmpk II ( P2 ) yaitu kelmpk yang diberi paparan mnsdium glutamat per ral merek A yang dijual di pasaran dengan mencantumkan kadar mnsdium glutamat sebesar 99% dengan dsis 5 mg / KgBB / hari sebanyak satu kali sehari dan Kelmpk III ( P3 ) paparan mnsdium glutamat per ral merek B yang dijual di pasaran tanpa mencantumkan kadar mnsdium glutamat dengan dsis 5 mg / KgBB / hari sebanyak satu kali sehari Pada hari pertama hingga hari ketiga penelitian, ketiga kelmpk tikus tersebut hanya akan diberi pakan standar BR-2 dan dibiarkan beradaptasi dengan lingkungan kandang. Pada hari keempat hingga ketujuh penelitian, ketiga kelmpk tikus tersebut akan diberi pengenalan pada perangkat Mrris Water Maze sebanyak dua kali sehari dan pada awal dan akhir ( sebelum dimulainya perlakuan ) pengenalan perangkat Mrris Water Maze akan dihitung waktu tempuh tikus Wistar dengan waktu tempuh maksimal yang dibutuhkan leh tikus adalah 120 detik serta diperkenankan berada diatas landasan selama maksimum 15 detik

13 60 menuju landasan yang dituju yaitu kuadran lima dengan rute sebagai berikut, I : 1 5 ; II : 2 5 ; III : 8 5 ; IV : 3 5 dan V : 7 5. Pada hari kedelapan hingga mencapai waktu tiga minggu, kelmpk II dan kelmpk III akan mendapat perlakuan yaitu pemberian mnsdium glutamat dalam bumbu masak dengan menggunakan alat snde lambung, sedangkan pada kelmpk I tetap diberi pakan standar. Selama tiga minggu paparan, ketiga kelmpk tikus tidak melakukan pengukuran waktu tempuh pada Mrris Water Maze. Pada akhir perlakuan ( setelah tiga minggu perlakuan terpenuhi ) akan dilakukan kembali pengukuran waktu tempuh pada ketiga kelmpk perlakuan.

14 Analisis Data Analisis data dilakukan sebagai berikut : Uji nrmalitas dengan Saphir Wilk, untuk mengetahui distribusi dan kenrmalan data ( p > 0,05 ). Uji beda berpasangan dengan dua variabel digunakan Paired T Test saat data berdistribusi nrmal dan Wilcxn Signed Rank Test saat data berdistribusi tidak nrmal. Uji beda berpasangan dua variabel dengan Paired T Test dan juga Wilcxn Signed Rank Test untuk melihat pada masing-masing kelmpk: Perbedaan antara rerata waktu tempuh antara awal pengenalan alat dengan sebelum perlakuan, Perbedaan antara rerata waktu tempuh antara pada saat sebelum perlakuan dengan tiga minggu setelah perlakuan. Uji beda berpasangan dua variable dengan Paired T Test dan juga Wilcxn Signed Rank Test untuk melihat pada masing-masing kelmpk: Perbedaan antara selisih waktu tempuh antara awal pengenalan alat dan sebelum perlakuan dengan selisih waktu tempuh antara awal pengenalan alat dan tiga minggu setelah perlakuan, Perbedaan antara selisih waktu tempuh antara awal pengenalan alat dan sebelum perlakuan dengan selisih waktu tempuh antara sebelum perlakuan dan tiga minggu setelah perlakuan

15 62 Perbedaan antara selisih waktu tempuh antara awal pengenalan alat dan tiga minggu setelah perlakuan dengan selisih waktu tempuh antara sebelum perlakuan dan tiga minggu setelah perlakuan. Uji beda tidak berpasangan dua variabel menggunakan uji Independent T Test saat data berdistribusi nrmal dan uji Mann Whitney saat data berditribusi tidak nrmal. Uji beda tidak berpasangan dua variabel menggunakan uji Independent T Test dan uji Mann Whitney untuk melihat pada kelmpk yang berbeda: Perbedaan antara rerata waktu tempuh awal pengenalan alat untuk kelmpk kntrl-kelmpk 1 ; kelmpk kntrl-kelmpk 2 ; kelmpk 1-kelmpk 2. Perbedaan antara rerata waktu tempuh pada saat sebelum perlakuan untuk kelmpk kntrl - kelmpk 1 ; kelmpk kntrl - kelmpk 2 ; kelmpk 1 - kelmpk 2. Perbedaan antara rerata waktu tempuh tiga minggu setelah perlakuan untuk kelmpk kntrl - kelmpk 1 ; kelmpk kntrl - kelmpk 2 ; kelmpk 1 - kelmpk 2. Uji beda tidak berpasangan dua variabel menggunakan uji Independent T Test dan uji Mann Whitney untuk melihat pada kelmpk yang berbeda: Perbedaan antara selisih waktu tempuh antara awal pengenalan alat dan sebelum perlakuan untuk kelmpk kntrl - kelmpk 1 ; kelmpk kntrl - kelmpk 2 ; kelmpk 1 - kelmpk 2

16 63 Perbedaan antara selisih waktu tempuh antara awal pengenalan alat dan tiga minggu setelah perlakuan untuk kelmpk kntrl - kelmpk 1 ; kelmpk kntrl - kelmpk 2 ; kelmpk 1 - kelmpk 2 Perbedaan antara selisih waktu tempuh antara sebelum perlakuan dan tiga minggu setelah perlakuan untuk kelmpk kntrl - kelmpk 1 ; kelmpk kntrl - kelmpk 2 ; kelmpk 1 - kelmpk 2 Data dilah dengan SPSS fr windws dan menunjukkan hasil signifikan jika ( p < 0,05 ).

17 Etika Penelitian Sebelum dilakukannya penelitian terhadap hewan cba tikus Wistar pada percbaan ini, maka terlebih dahulu dimintakan perihal Ethical Clearance dari Kmisi Etik Penelitian Kesehatan ( KPEK ) Fakultas Kedkteran Universitas Dipnegr / RSUP dr Kariadi, Semarang. Pada saat dilakukannya penelitian ini, akan memperhatikan prinsip prinsip dalam deklarasi Helsinki dan juga Pedman Nasinal Etik Penelitian Kesehatan Departemen Kesehatan RI Jadwal Penelitian Tabel 5. Jadwal Penelitian N Bulan Keterangan 1. Nvember hingga Februari Prses pembuatan prpsal 2. Maret hingga April Prses pengumpulan alat dan bahan April 21 Mei Prses percbaan hewan cba tikus Wistar menggunakan alat Mrris Water Maze selama tiga minggu 4. Mei - Juli Prses pengumpulan data serta pembuatan lapran hasil Juli Juli 2014 Pelaksanaan ujian hasil leh tim KTI Pengumpulan revisi lapran hasil