LAMPIRAN. Sterilisasi alat dan bahan. Mengisolasi dan Menghitung Populasi Awal dari Bakteri yang Terkandung dalam Biofertilizer komersial

Transkripsi

1 LAMPIRAN 22

2 LAMPIRAN Lampiran 1: Bagan Alir Cara Kerja Persiapan alat dan bahan penelitian di laboratorium Sterilisasi alat dan bahan Mengisolasi dan Menghitung Populasi Awal dari Bakteri yang Terkandung dalam Biofertilizer komersial Fermentasi Media Carrier Biofertilizer Uji Viabilitas Mikroba Hasil Fermentasi dengan Metode Total Plate Count (TPC) Uji Kemampuan Biofertilizer Hasil Fermentasi pada Media Carrier Alami Terhadap Pertumbuhan Tanaman Cabai (Capsicum annum) yang diinfeksi dengan F. oxysporum 23

3 Lampiran 2. Komposisi Dan Pembuatan Medium Selektif Pertumbuhan Bakteri a. Media King s B Komposisi: Protease 20 gr, gliserol 1,5 ml, K2HPO4.H 2 O 2,5 gr, MgSO4.7H 2 O 6 gr, agar 5 gr, dan aquades 1000 ml. Metode Pembuatan: air yang tersedia direbus dengan agar, setelah mencair semua bahan dimasukan dan diaduk hingga homogen. volume medium diusahakan tetap 1000 ml, jika volume berkurang ditambahkan aquades. Medium yang telah jadi kemudian disterilkan dengan menggunakan autoklaf pada suhu C tekanan 15 psi selama 20 menit. Setelah dingin medium siap digunakan. b. Media Asbhy Komposisi: Mannitol 10 gr, K2HPO4 0,2 gr, MgSO4.7 H2O 0,2 gr, NaCl 0,2 gr, K2SO4 0,1 gr, CaCO 3 5 gr, agar 15 gr dan akuades 1000 ml. Metode Pembuatan: air yang tersedia direbus dengan agar, setelah mencair semua bahan dimasukan dan diaduk hingga homogen. volume medium diusahakan tetap 1000 ml, jika volume berkurang ditambahkan aquades. Medium yang telah jadi kemudian disterilkan dengan menggunakan autoklaf pada suhu C tekanan 15 psi selama 20 menit. Setelah dingin medium siap digunakan. c. Media PDA (Potato Dextrose Agar) Komposisi: Kentang 200 gr, agar 20 gr, dekstros 10 gr, aquades 1000 ml. Metode Pembuatan: PDA dibuat dengan mendidihkan potongan kentang yang telah dikupas, dicuci dan ditimbang kemudian diekstrak dalam 500 ml akuades. dan dicampurkan dalam larutan agar dalam 500 ml akuades. Larutan diaduk dan ditambahkan dekstros dengan memperhatikan volume larutan tetap 1000 ml. larutan diaduk sampai homogen, kemudian disterilkan dengan menggunakan autoklaf pada suhu C, tekanan 15 psi selama 20 menit. d. Media Cares (Caceres, 1982). Komposisi : K 2 HPO 4 0,5 gr, MgSO 4. 7H 2 O 0,2 gr, Yeast ekstrak 0,5 gr, CaCl 2 0,02 gr, FeCl 3. 6H 2 O 0,015 gr, D-L Malic Acid 5,09 gr, KOH 4,8 gr, agar 20 gr, Red Congo 0,25% dan aquades 1000 ml. Metode pembuatan Aquadess dibagi dua sama banyak dalam beker glass. Agar dilarutkan pada salah salah satu bagian aquades, sedangkan satu bagian yang lain dugunakan untuk melarutkan bahan-bahan. Kedua larutan dicampur kemudian dipanaskan sabil diaduk-aduk dan diatur pada ph 7 dengan menggunakan 0,1% KOH. Media disterilkan dengan menggunakan autoklaf pada suhu 121 o C, tekanan 2 atm selama 15 menit. Red congo 0,25% diseteril terpisah dan ditambah sebelum media digunakan. 24

4 e. Media YEMA (Yeast Extract Mannitol Agar) Komposisi: K 2 HPO 4 0,5 gr, MgSO 4 0,2 gr, NaCl 0,1 gr, CaCO 3 3 gr, Manitol 10 gr, Yeast Ekstrak 3 gr, agar 20 gr dan aquade 1000 ml. Metode pembuatan Semua bahan dilarutkan dalam aquades kemudian dipanaskan sambil diaduk. Media disteril dengan menggunakan autoklaf pada suhu 121 o C dengan tekanan 2 atm selama 15 menit. f. Media TSA (Tryptic Soy Agar) Komposisi : Tripton 15.0 gr, soya pepton 5.0 gr, NaCl 5 gr, agar 15 gr dan aquades 1000 ml. Metode pembuatan Semua bahan dilarutkan dalam aquades kemudian dipanaskan sambil diaduk. Media disteril dengan menggunakan autoklaf pada suhu 121 o C dengan tekanan 2 atm selama 15 menit. 25

5 Lampiran 3: Data Pengamatan Koloni Bakteri pada Populasi Awal Media Bakteri Pengenceran Ashby Azotobacter Sp Kings B Pseudomonas Sp Caceres Azospirillum Sp YEMA Rhizobium Sp TSA Bacillus Sp Lampiran 4: Data Pengamatan Koloni Bakteri Akhir (fermentasi Hari Ke -7) Media Pengenceran Bakteri BP AK CO CA Caceres 10-6 Azospirillum Sp Ashby 10-3 Azotobacter Sp King s B 10-3 Pseudomonas Sp YEMA 10-6 Rhizobium Sp TSA 10-6 Bacillus Sp Keterangan: 1. BP : Media carrier Bonggol Pisang 2. AK : Media carrier Air Kelapa 3. CO : Media carrier Cocopeat 4. CA : Media carrier Campuran ketiga bahan 26

6 Lampiran 5 : Hasil Uji Kemampuan Biofertilizer pada Media Carrier Alami Terhadap Pertumbuhan Tanaman Cabai ( Capsicum annum) yang diinfeksi dengan F. oxysporum Perlakuan BP AK CO CA KN Ulangan Hasil Pengamatan Tanaman Sakit Indeks Hari Ke 7 Hari ke 14 Penyakit (%) 1 5 berkecambah Mati semua berdaun, 3 berkecambah Mati semua berdaun, 3 berkecambah 3 hidup, 7 mati berdaun, 2 berkecambah Mati semua berdaun, 2 berkecambah 1 hidup, 9 mati cambah layu Mati semua berdaun, 4 kecambah 6 Hidup, 4 mati berdaun, 7 berkecambah 1 hidup, 9 mati berdaun, 4 kecambah Mati semua kecambah 1 hidup, 9 mati berdaun, 5 kecambah 5 hidup, 5 mati berdaun, 5 kecambah 5 hidup, 5 mati kecambah Mati semua kecambah Mati semua kecambah Mati semua 100 Keterangan: 1. BP : Media carrier Bonggol Pisang 2. AK : Media carrier Air Kelapa 3. CO : Media carrier Cocopeat 4. CA : Media carrier Campuran ketiga bahan 27

7 Lampiran 6. Hasil analisis ragam (Uji F) Kemampuan Biofertilizer pada Media Carrier Alami Terhadap Pertumbuhan Tanaman Cabai ( Capsicum annum) yang diinfeksi dengan F. oxysporum Data : Indeks Penyakit (%) Tabulasi data Ulangan Total Rataan Standar Perlakuan Deviasi K K K K K Total SD sampel = 21.7 Perhitungan jumlah kuadrat (JK) FK = 1280^2 / 15 = JK Total = ( 100^ ^2 ) - FK = JK Perl = ( 270^ ^2 ) / 3 - FK = JK Error = JK Total - JK Perlakuan = Data : Indeks Penyakit (%) Tabel analisis variansi Sumber Derajat Jumlah Kuadrat F F Tabel Variasi Bebas Kuadrat Tengah Hitung Perlakuan Error SD = Total KK = % Ringkasan Hasil Data Indeks Penyakit(%) F hit K 1.82 F tab 5% K K K K K Angka yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada BNT 5% 28

8 Lampiran 7. Gambar hasil penelitian A B C D Gambar hasil fermentasi bioertilizer pada media carrier alami: (A) Media cocopeat, pisang, (C) Air kelapa dan (D) Campuran ketiga bahan (B) bonggol A B C D E F Gambar proses dan hasil uji viabilitas bakteri bioertilizer pada media carrier alami: (A) plating media slektif, (B) koloni Pseudomonas SP., (C) Bacillus SPP., (D) Rhizobium SP., (E) Azotobacter SP. dan (F) Azospirillum SP. 29

9 A B C Gambar Inokulasi Fusarium oxysporum: (A) miselium F. oxysporum pada cawan, (B) miselium F. oxysporum pada media organik, (C) inokulasi F. oxysporum kedalam media semai cabai (Capsicum annum) Gambar tanaman cabai (Capsicum annum) yang sehat dan terserang patogen F. oxysporum 30