Berna Elya, Abdul Mun im, Eva Kurnia Septiana. Departemen Farmasi FMIPA-UI

Transkripsi

1 1 UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN α GLUKOSIDASE DARI BEBERAPA TANAMAN FAMILI CLUSIACEAE Berna Elya, Abdul Mun im, Eva Kurnia Septiana Departemen Farmasi FMIPA-UI

2 Diabetes Melitus 2030: 2005: 2030: 366 juta orang 2000: Indonesia posisi ke-4 8,4 juta orang 21,3 juta orang 173 juta orang Latar Belakang

3 Diabetes Melitus Tipe % Kendala : resistensi obat Tujuan ideal: obat yang bekerja pada target dan juga tanpa masalah toleransi penghambat enzim α-glukosidase akarbose, miglitol, voglibose Latar Belakang

4 4 Latar Belakang Eksplorasi tanaman Indonesia Keanekaragaman Flora Indonesia Salah satu metode pengobatan diabetes mellitus tipe II Beberapa Jenis dari Famili Clusiaceae diketahui memiliki efek inhibisi terhadap enzim α-glukosidase (Garcinia atriviridis, G. brevipedicellata, G.kola, G.indica,G. cambogia,)

5 Menghambat enzim α-amylase pankreatik & α-glukosidase di usus halus Mencegah hidrolisis karbohidrat menjadi glukosa & monosakarida lainnya Akarbose(Indo: Glucobay) perut kembung, diare, nyeri perut, hepatotoksik (Andrade et al., 1998).

6 Tujuan untuk mengetahui golongan senyawa kimia yang terkandung pada ekstrak beberapa tanaman famili Clusiaceae untuk mengetahui aktivitas penghambatan enzim α-glukosidase oleh ekstrak tanaman-tanaman tersebut untuk mengetahui jenis mekanisme penghambatan enzim α-glukosidase dari ekstrak tanaman dengan aktivitas penghambatan baik

7 7 Bahan dan Alat Simplisia Uji 1. Calophyllum tomentosum Wight. Folium, 2. Garcinia bancana Miq. Folium, 3. Garcinia daedalanthera Pierre. Folium, 4. Garcinia hombroniana Pierre. Folium, 5. Garcinia kydia Roxb. Folium, 6. Garcinia rigida Miq. Folium

8 8 Bahan-Bahan enzim α glukosidase substrat para-nitrofenil-α-d-glukopiranosida bovine serum albumin akarbose natrium karbonat pelarut untuk uji aktivitas penghambatan enzimatis

9 9 ALAT Alat refluks, spektofotometer UV-Vis penguap vakum putar shaking bath incubator oven timbangan analitik vortex

10 Cara Kerja penyiapan bahan uji ekstraksi identifikasi golongan senyawa kimia penentuan kinetika penghambatan enzim α- glukosidase uji aktivitas penghambatan enzim α-glukosidase uji pendahuluan

11 Penyiapan Bahan Uji pengumpulan bahan baku sortasi basah dan pencucian perajangan pengeringan pembuatan serbuk

12 Ekstraksi serbuk simplisia direfluks dengan etanol 80% 3 x 1 jam pelarut diuapkan ekstrak kental

13 alkaloid antrakuinon flavonoid saponin identifikasi golongan senyawa kimia terpenoid glikosida tanin

14 Pengujian Aktivitas Penghambatan α Glukosidase

15 Prinsip Uji Aktivitas p-nitrofenil-α-dglukopiranosida p-nitrofenol glukosa

16 Uji Pendahuluan 0,3 U/mL Optimasi Konsentrasi Enzim 0,0375 U/mL 10 mm 20 mm 0,15 U/mL 0,075 U/mL 0,03125 mm 20 mm 10 mm 0,625 mm enzim 5 mm Optimasi Konsentrasi Substrat 1,25 mm 2,5 mm

17 Penyiapan Standar/Sampel Timbang 100 mg standar/ sampel Larutkan dengan buffer fosfat ph 6,8 cukupkan hingga 10,0 ml (konsentrasi 1 %) Pipet 5 ml, tambahkan buffer fosfat ph 6,8 Cukupkan hingga 10,0 ml (konsentrasi 0,5%) Pengenceran dilakukan kembali hingga diperoleh konsentrasi 0,25% dan 0,125 %

18 10 µl DMSO atau sampel Pengujian B 0 atau S 0 (kontrol blangko atau kontrol sampel) 490 µl dapar fosfat ph 6,8 250 µl PNP-G 5mM inkubasi selama 5 menit pada suhu 37 o C tambahkan 2000 µl 200 mm Na 2 CO 3 inkubasi selama 15 menit pada suhu 37 o C tambahkan 250 µl enzim 0,15 U/ml ukur absorbansi pada panjang gelombang 400 nm

19 Pengujian B1 atau S1 (Blangko dan Sampel) 10 µl DMSO atau sampel 490 µl dapar fosfat ph 6,8 250 µl PNP-G 5mM inkubasi selama 5 menit pada suhu 37 o C tambahkan 250 µl enzim 0,15 U/ml inkubasi selama 15 menit pada suhu 37 o C tambahkan 2000 µl 200 mm Na 2 CO 3 ukur absorbansi pada panjang gelombang 400 nm

20 20 Penghitungan Aktivitas Penghambatan α-glukosidase % Inhibisi dihitung dengan rumus : Keterangan : C = selisih absorbansi blangko dan absorbansi kontrol blangko S = selisih absorbansi sampel dan absorbansi kontrol sampel

21 21 Penghitungan IC 50 α-glukosidase Penghitungan IC 50 : menggunakan persamaan regresi linear, y = a + bx x : konsentrasi sampel y : % inhibisi Persamaan: IC 50 =

22 Tabel. sistem Reaksi Uji Inhibisi α glukosidase 22 Blanko (µl) tanpa enzim Blanko (µl) dengan enzim So (µl) S1 (µl) Sampel DMSO Dapar fosfat ph 6, PNP Inkubasi pada suhu 37 o C selama 5 menit Enzim α-glukosidase Natrium Karbonat Inkubasi pada suhu 37 o C selama 15 menit Enzim α-glukosidase Natrium Karbonat

23 23 Metode Penentuan kinetika inhibisi enzim Substrat : pnp (5 konsentrasi) Jenis inhibisi : metode Lineweaver-Burk Sampel uji/ inhibitor : larutan ekstrak (4 konsentrasi) Blangko : satu kontrol blangko Penghitungan Tetapan kinetika Michaelis-Menten : y = a + b x

24 24 Grafik Lineweaver-Burk

25 25 Hasil : Nilai IC 50 No Simplisia Uji Bagian yang Digunakan IC 50 (µg/ml) 1. Akarbose - 116,95 2. Calophyllum tomentosum Wight. daun 15,83 3. Garcinia bancana Miq. daun 22,41 4. Garcinia daedalanthera Pierre. daun 2,33 5. Garcinia hombroniana Pierre. daun 11,30 6. Garcinia kydia Roxb. daun 3,88 7. Garcinia rigida Miq. daun 24,48

26 26 Grafik Kinetika Enzimatis G.kydia 6 5 y = 3.140x /v 3 2 y = 1.571x /vb 1/v16 1/v33 1 y = 0.420x /CS

27 KESIMPULAN Hasil identifikasi menunjukkan pada famili Clusiaceae umumnya mengandung tanin, terpen, saponin, glikosida, flavonoid dan antrakuinon. Nilai IC 50 ekstrak etanol dalam penelitian ini berkisar antara yang paling tinggi dengan nilai IC 50 2,33 µg/ml sampai dengan yang paling rendah dengan nilai IC 50 24,48 µg/ml Ekstrak etanol daun Garcinia kydia merupakan simplisia yang memiliki aktivitas penghambatan dengan nilai IC 50 3,88 µg/ml, jenis mekanisme penghambatan enzim α-glukosidase oleh ekstrak etanol daun Garcinia kydia adalah penghambat non kompetitif

28 SARAN Perlu diadakan penelitian lebih lanjut meliputi fraksinasi dan karakterisasi senyawa aktif dari simplisia-simplisia yang digunakan pada penelitian ini. Selain itu, pengujian secara in vivo juga disarankan untuk lebih memastikan potensi dari dari simplisia-simplisia yang digunakan pada penelitian ini

29

30 30 Hasil Uji Terpen Pada Simplisia Simplisia Uji Terpen Daun Calophyllum tomentosum + Daun Garcinia bancana + Daun Garcinia daedalanthera + Kulit batang Garcinia daedalanthera Garcinia hombroniana + Garcinia kydia + Garcinia rigida + +

31 31 Hasil Uji Tanin pada Simplisia Simplisia FeCl 3 1% Gelatin 10% Na-Cl gelatin Daun Calophyllum tomentosum Daun Garcinia bancana Daun Garcinia daedalanthera Kulit batang Garcinia daedalanthera Garcinia hombroniana Garcinia kydia Garcinia rigida + + +

32 32 Hasil Uji Saponin Pada Simplisia Simplisia Saponin Daun Calophyllum tomentosum + Daun Garcinia bancana + Daun Garcinia daedalanthera + Kulit batang Garcinia daedalanthera Garcinia hombroniana + Garcinia kydia + Garcinia rigida + +

33 33 Hasil Uji Glikosida pada Simplisia Simplisia Molisch Liebermann burchard Daun Calophyllum tomentosum + - Daun Garcinia bancana + - Daun Garcinia daedalanthera + + Kulit batang Garcinia daedalanthera + - Garcinia hombroniana + + Garcinia kydia + - Garcinia rigida + -

34 34 Hasil Uji Flavonoid pada Simplisia Simplisia Reduksi Zn Reduksi Mg Kompleks Aseton-Borat Daun Calophyllum tomentosum Daun Garcinia bancana Daun Garcinia daedalanthera Kulit batang Garcinia daedalanthera Garcinia hombroniana Garcinia kydia Garcinia rigida + + +

35 35 Hasil Uji Antrakuinon pada Simplisia Simplisia Uji Antrakuinon Daun Calophyllum tomentosum - Daun Garcinia bancana - Daun Garcinia daedalanthera + Kulit batang Garcinia daedalanthera Garcinia hombroniana + Garcinia kydia + Garcinia rigida + +