BAB 4 HASIL PERCOBAAN DAN PEMBAHASAN

Transkripsi

1 BAB 4 HASIL PERCOBAAN DAN PEMBAHASAN Pembuatan homogenat hati tikus dan proses sentrifugasi dilakukan pada suhu 4 o C untuk menghindari kerusakan atau denaturasi enzim karena pengaruh panas. Kebanyakan enzim meningkat aktivitasnya jika temperatur meningkat dari 1-4 o C. Oleh karena itu untuk mengurangi kehilangan aktivitas enzim disimpan pada suhu 2 6 o C. Apabila temperatur dinaikkan terus, energi kinetika molekul molekul enzim menjadi demikian besar sehingga akan memecah ikatan ikatan sekunder yang mempertahankan enzim dalam keadaan aslinya atau dalam keadaan katalitik aktif. Sentrifugasi pada pembuatan homogenat hati tikus bertujuan untuk memisahkan enzim dari partikel partikel lain yang lebih besar dengan kerapatan yang besar misalnya protein dengan berat molekul besar dan sel sel yang rusak pada saat pengukuran. Penentuan kadar protein dilakukan menggunakan larutan standar protein 4 g/dl yang ditambahkan reagen warna (dapar sitrat ph 4,2 3 mmol/l dan brocomol green 26 umol/l). Reagen warna ini ditambahkan untuk tujuan pembentukan kompleks warna pada larutan protein sehingga dapat diukur pada panjang gelombang 7nm. Tabel 4.1 Hasil pengukuran absorbansi larutan standar protein mg protein/ml (7 nm) y = 498x + 73 R 2 = mg protein/ml Gambar 4.1 Kurva kalibrasi larutan protein standar 11

2 12 Dari kurva standar protein didapatkan persamaan garis yang selanjutnya digunakan untuk menentukan kadar protein dalam homogenat hati tikus. Inkubasi dilakukan pada suhu 37 o C dan menggunakan dapar fosfat ph 7 untuk mendapatkan kondisi optimum dari suspensi enzim mikrosomal hati tikus. Untuk kebanyakan enzim, temperatur optimal adalah temperatur sel dimana enzim enzim berada. Tabel 4.2 Pengukuran absorbansi kinin dengan optimasi kadar protein homogenat Homogenat awal λ 28 nm awal 6 menit/ 37 o C λ 28 nm 6 menit/ 37 o C 17,15,5495,9,4845,79 51,45,5495,9,3971,65 85,75,5495,9,2895,47 12,5,5495,9,2885,46 154,36,5495,9,2783,45 kinin homogenat 28nm Gambar 4.2 Kurva degradasi kinin dengan kenaikan protein homogenat Tabel 4.3 Pengukuran absorbansi sinkonin dengan optimasi kadar protein homogenat Homogenat awal λ 3 nm awal 3 menit/37 o C λ 3 nm 3 menit/ 37 o C 17,15,599 2,1,564 1,79 51,45,599 2,1,4977 1,76 85,75,599 2,1,4526 1,61 12,5,599 2,1,4422 1,57 154,36,599 2,1,4375 1,55

3 13 sinkonin homogenat 3nm Gambar 4.3 Kurva degradasi sinkonin dengan kenaikan protein homogenat Tabel 4.4 Pengukuran absorbansi sinkonidin dengan optimasi kadar protein homogenat Homogenat awal λ 315 nm awal 3 menit/37 o C λ 315 nm 3 menit/ 37 o C 17,15,495 2,5,3331 2,5 51,45,495 2,5,3266 1,99 85,75,495 2,5,258 1,81 12,5,495 2,5,231 1,59 154,36,495 2,5,2215 1,49 sinkonidin homogenat 315nm Gambar 4.4 Kurva degradasi sinkonidin dengan kenaikan protein homogenat Dari gambar 4.2, 4.3 dan 4.4 ditunjukkan adanya degradasi dari ketiga senyawa kinin, sinkonin dan sinkonidin oleh suspensi enzim homogenate hati. Kemampuan degradasi suspensi dipengaruhi oleh kadar protein dalam enzim tesebut. Dari ketiga grafik di atas semakin tinggi kadar protein dalam suspensi enzim, kadar ketiga sampel juga menjadi semakin menurun.

4 14 Waktu inkubasi (menit) Tabel 4.5 Pengukuran absorbansi kinin dengan optimasi waktu inkubasi awal λ 28 nm awal 37 o C λ 28 nm 37 o C 3,5463,9,4835,79 6,5463,9,31,49 9,5463,9,386,63 12,5463,9,4725,78 kinin waktu inkubasi (menit) 28nm Gambar 4.5 Kurva degradasi kinin dengan kenaikan waktu inkubasi Tabel 4.6 Pengukuran absorbansi sinkonin dengan optimasi waktu inkubasi Waktu inkubasi (menit) Absorbans awal λ 3 nm awal 37 o C λ 3 nm 37 o C 3,647 2,1,5311 1,84 6,647 2,1,5545 1,93 9,647 2,1,5554 1,92 12,647 2,1,5722 1,98 sinkonin nm waktu inkubasi (menit) Gambar 4.6 Kurva degradasi sinkonin dengan kenaikan waktu inkubasi

5 15 Tabel 4.7 Pengukuran absorbansi sinkonidin dengan optimasi waktu inkubasi Waktu inkubasi (menit) awal λ 315 nm awal 37 o C λ 315 nm 37 o C 3,6998 2,5,5694 2,3 6,6998 2,5,641 2,15 9,6998 2,5,6456 2,3 12,6998 2,5,6874 2,45 sinkonidin nm waktu inkubasi (menit) Gambar 4.7. Kurva degradasi sinkonidin dengan kenaikan waktu inkubasi Pada percobaan selanjutnya (gambar 4.5, 4.6, dan 4.7) dilakukan variasi waktu inkubasi antara 3-12 menit. Pada kinin respon positif didapat hingga 1 jam inkubasi, sedangkan sinkonin dan sinkonidin didapat waktu inkubasi optimum selama 3 menit. Ini menunjukkan kinin dapat lebih lama terdegradasi oleh homogenat hati dibandingkan sinkonin, sinkonidin. Tabel 4.8 Pengukuran absorbansi dengan optimasi kinin kinin awal λ 28 nm 6 menit/37 o C λ 28 nm 6 menit/ 37 o C,9,5268,4378,75 1,3,5711,5236 1,19 1,7,6467,6316 1,66 2,1,6786,6468 2,1 2,5,6988,6592 2,36

6 nm kinin 28nm inkubasi Gambar 4.8 Kurva degradasi dengan peningkatan kinin Tabel 4.9 Pengukuran absorbansi dengan optimasi sinkonin sinkonin awal λ 3 nm 3 menit/37 o C λ 3 nm 3 menit/ 37 o C,9,5488,4744,77 1,3,7371,6858 1,21 1,7,7532,791 1,6 2,1,799,728 1,91 2,5,88,7653 2, nm sinkonin 3nm inkubasi Gambar 4.9 Kurva degradasi dengan peningkatan sinkonin Tabel 4.1 Pengukuran absorbansi dengan optimasi sinkonidin sinkonidin awal λ 315 nm 3 menit/37 o C λ 315 nm 3 menit/ 37 o C,9,483,2974,78 1,3,4494,3531 1,17 1,7,586,3414 1,64 2,1,733,3491 1,59 2,5,662,3227 1,58

7 nm sinkonidin 315nm inkubasi Gambar 4.1 Kurva degradasi sinkonidin dengan peningkatan sinkonidin Optimasi ketiga senyawa dilakukan dari,9 2,5 mg/ml. Dari gambar 4.8, 4.9, dan 4.1 didapat kinin dapat bereaksi secara optimum dengan suspensi enzim homogenat hati dengan,9 mg/ml, sinkonin 2,1 mg/ml dan sinkonidin 2,5 mg/ml. Dari data ketiga gambar diatas terlihat bahwa kinin dapat terdegradasi dengan yang lebih rendah dibandingkan sinkonin dan sinkonidin.