2 sampai homogen dan diinkubasi 37o C dalam waterbath selama 1530 menit. Berikutnya tabungtabung dipusingkan 1000 RPM selama 10 menit, supernatan dibu

Ukuran: px

Mulai penontonan dengan halaman:

Download "2 sampai homogen dan diinkubasi 37o C dalam waterbath selama 1530 menit. Berikutnya tabungtabung dipusingkan 1000 RPM selama 10 menit, supernatan dibu"

Yenny Gunardi
7 tahun lalu
Tontonan:

1 1 Lampiran 1. Prosedur Pemeriksaan Sitogenetik 1. Preparasi Kromosom Bahan yang digunakan yaitu : darah penderita 5 cc dalam heparin, media MEM, PHA, FBS, colcemid, thymidin, KCL 0.075M, larutan carnoy s. Peralatan yang digunakan yaitu : spuit, tabung Heparin, tabung falcon 10cc, laminary flow, inkubator,pipet ependrof, tip pipet, centrifuge, waterbath, pipet ukur, deck glass, mikroskop cahaya. Cara kerja : 5 tetes buffy coat dan 5 tetes darah dimasukan ke dalam tabung yang berisi 2 media yang berbeda (TC199 dan MEM) yang mengandung 10% FBS dan 100µL PHAP. Kemudian kedua tabung diinkubasi pada suhu 37o C selama 7296 jam dengan sudut kemiringan tabung ~ 45o di dalam inkubator. Sehari sebelum pemanenan, pada masingmasing tabung ditambahkan 2 tetes ethidium bromide 10mg/mL. Selanjutnya dilakukan pemanenan dengan meneteskan 3 tetes colcemid pada setiap tabung, kemudian inkubasi diteruskan selama 30 menit. Setelah itu dipusingkan selama 10 menit pada 1000 RPM. Supernatan yang terbentuk dibung, kemudian endapan (pelet) diresuspensikan dan ditambah larutan hipotonik hangat KCL 0,075 M, diresuspensikan lagi

2 2 sampai homogen dan diinkubasi 37o C dalam waterbath selama 1530 menit. Berikutnya tabungtabung dipusingkan 1000 RPM selama 10 menit, supernatan dibuang dan ditambahkan 5ml larutan fiksasi Carnoy s pelanpelan melalui dinding tabung, kemudian dikocok. Pemberian larutan fiksasi ini diulangi sebanyak 3 kali sampai didapatkan presipitat yang jernih. Residu yang terbentuk disuspensikan dengan larutan Carnoy s secukupnya sesuai dengan banyaknya pelet. Kemudian disebarkan pada gelas objek dengan meneteskan 2 tetes suspensi pada lokasi yang berbeda. 2. GTG banding (Gbanding) Pengecatan ini menggunakan reagen sebagai berikut : H2O2 30% Larutan Trypsin 1% stok dalam buffer Hanks Larutan buffer Hanks (HBSS) ph 6,87,2 Phosphate Buffer Saline (PBS) ph 6,8 Pengecatan Trypsin dilakukan tanpa penghangatan yaitu setelah membiarkan slide menjadi tua lebih kurang selama 3 5 hari kemudian dicelupkan ke dalam larutan trypsin 0,1% (yang dilarutkan dengan PBS ph 6,8) selama sekitar 1020 detik, kemudian dicuci dengan air mengalir selanjutnya dimasukkan ke dalam staining jar yang berisi cat Giemsa 10% dalam phosphate buffer selama 410 menit. Setelah dicat, slide dicuci dengan air mengalir lalu dikeringkan, kemudian siap dianalisa di bawah mikroskop.

3 3 3. CBG Banding (Cbanding) Pengecatan ini menggunakan reagen berikut: 0,2 N HCl 5% Ba(OH)2 ; 5 g Ba(OH)2 dalam 100mL aqua bidest 2 x SSC (0.3M sodium klorid, 0.03 M sodium sitrat, ph 7.0): g NaCL dan 8.82 sodium sitrat dalam 1 L aqua bidest Cat Giemsa 2% dalam buffer fosfat ph 6.8 Slide yang telah dituakan, dicuci di bawah air mengalir. Kemudian dimasukkan ke dalam wadah berisi 50 ml Ba(OH)2 5% yang dihangatkan dalam water bath 50o C, selama beberapa detik. Setelah dicuci di bawah air mengalir, slide dimasukkan ke dalam SSC selama 1 jam, kemudian dicuci kembali dengan air mengalir. Selanjutnya, dimasukkan ke dalam staining jar yang berisi cat Giemsa selama 4 10 menit.37

4 4 Lampiran 2. Hasil Preliminary Study Panjang Kromosom Y pada 20 orang lakilaki bukan penderita ambigus genitalia No. Kode Sampel Banding Level Kariotipe Panjang kromosom Y (µm) menurut program leica CW Y31 Y ,16 4, Y14 N10 N36 Y3 L KG82 N41 N2 PI02 KG20 N37 KG15 KG9 KG12 KG13 KG ,53 2,84 3,16 2,95 3,58 3,26 2,53 3,26 2,95 3,19 2, KG19 20 KG4 Minimum Maximum Rerata Simpang baku ,05 2,00 2,00 4,32 2,88 0,53

5 5 Lampiran 3. Hasil Tes Statistik perbedaan Panjang Kromosom Y antara Subyek dan Penelitian Descriptives ukuran ratarata Mean 95% Confidence Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std. Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Upper Bound Lower Bound Upper Bound 5% Trimmed Mean Median Variance Std. Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Statistic Std. Error Tests of Normality a ukuran ratarata KolmogorovSmirnov Statistic df Sig * *. This is a lower bound of the true significance. a. Lilliefors Significance Correction Statistic ShapiroWilk df Sig

6 ukuran ratarata NPar Tests MannWhitney Test Ranks ukuran ratarata Total Test Statisticsa MannWhitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2tailed) ukuran ratarata a. Grouping Variable: N 48 Mean Rank Sum of Ranks

7 7 Lampiran 4. Contoh kariotip dari metafase yang memenuhi kriteria banding level 550

dokumen-dokumen yang mirip

BAB IV METODE PENELITIAN. Penelitian ini mencakup bidang ilmu pediatri dan ilmu Genetika Dasar.

BAB IV METODE PENELITIAN. Penelitian ini mencakup bidang ilmu pediatri dan ilmu Genetika Dasar. 27 BAB IV METODE PENELITIAN 4.1 Ruang Lingkup Penelitian ini mencakup bidang ilmu pediatri dan ilmu Genetika Dasar. 4.2 Tempat dan Waktu Penelitian Penelitian ini akan dilakukan di Pusat Penelitian Biomedik