2. TINJAUAN PUSTAKA Kebutuhan Oksigen dan Metabolisme Energi Selama Berolahraga Olahragawan ml O2/menit

Transkripsi

1 4 2. TINJAUAN PUSTAKA Kebutuhan Oksigen dan Metabolisme Energi Selama Berolahraga Konsumsi oksigen yang normal untuk seorang pemuda saat istirahat sekitar 250 ml/menit. Pada kondisi tertentu seperti olahraga, konsumsi oksigen dapat meningkat hingga >4000 ml/menit (Tabel 1), melebihi kemampuan paru-paru dalam menampung oksigen yang dibutuhkan. Kapasitas paru-paru manusia memiliki keterbatasan dalam menampung oksigen (Guyton dan Hall 2011, Ward et al 2007). Tabel 1 Rata-rata konsumsi oksigen pada saat berolahraga Olahragawan ml O 2 /menit laki-laki tidak terlatih 3600 laki-laki (atletik terlatih) 4000 pelari maraton 5100 Sumber: Guyton dan Hall (2011) ATP sebagai energi penggerak otot, di dalam tubuh diproduksi melalui dua proses metabolisme yaitu: (1) metabolisme yang melibatkan oksigen (aerob) dan (2) metabolisme energi tanpa kehadiran oksigen (anaerob), berupa sistem ATP- Fosfokreatin (PCr) dan sistem asam laktat. Metabolisme energi secara aerob merupakan proses yang tidak menghasilkan produk samping. Hal ini berbeda dengan sistem anaerob yang dapat menghasilkan produk samping berupa asam laktat yang akumulasinya akan membatasi efektivitas kontraksi otot yang juga dapat menimbulkan rasa nyeri. Otot rangka dalam menggunakan glukosa, asam lemak ataupun keton sebagai sumber energi (Gambar 1) bergantung oleh derajat keaktifannya (Lehninger1994), sebagai berikut: - Pada otot yang sedang beristirahat, sumber energi utama adalah asam lemak dan keton yang dibawa hati melalui darah. Asam lemak dan keton tersebut diuraikan menghasilkan asetil KoA, selanjutnya memasuki siklus asam sitrat untuk dioksidasi menjadi CO 2. Tahap selanjutnya adalah transfer elektron untuk terjadinya fosforilasi dari ADP menjadi ATP. - Pada otot yang agak aktif, sumber energi utama adalah glukosa, disamping asam lemak dan keton. Glukosa mengalami glikolisis dan diuraikan menjadi piruvat yang kemudian diuraikan lebih lanjut menjadi asetil KoA sebelum memasuki siklus asam sitrat, transfer elektron dan fosforilasi untuk membentuk energi berupa ATP yang membutuhkan oksigen. - Pada otot yang aktif secara maksimum seperti pada saat berolahraga, kebutuhan ATP sedemikian besar sehingga aliran darah tidak dapat menyediakan oksigen dalam waktu cepat. Dalam kondisi demikian, glikogen yang tersimpan di otot

2 5 digunakan. Glikogen tersebut dipecah menjadi glukosa melalui glikolisis secara anaerob menghasilkan 2 ATP per unit glukosa yang diuraikan. Otot rangka tidak memiliki cadangan glikogen cukup banyak, sehingga ada batas maksimum energi yang dapat dihasilkan. Selain itu, akumulasi asam laktat, menurunnya ph, dan meningkatnya suhu otot yang meningkat secara maksimum menimbulkan rasa lelah. Pada saat pemulihan setelah berolahraga, seseorang akan bernafas dengan terengah-engah untuk mendapatkan tambahan oksigen. Oksigen tersebut digunakan untuk mengoksidasi piruvat, laktat dan sumber energi lain untuk membentuk kembali ATP. Selama masa pemulihan, sebagaian laktat yang dibentuk di dalam otot tersebut diangkut ke hati dan mengalami reaksi glukoneogenesis untuk membentuk glukosa darah. Glukosa tersebut selanjutnya kembali ke otot dan disimpan sebagai glikogen (Lehninger,1994). Gambar 1. Metabolisme energi saat berolahraga ( Metabolisme energi secara aerob dapat menyediakan energi bagi tubuh untuk jangka waktu yang panjang sedangkan metabolisme energi anaerob mampu untuk menyediakan energi secara cepat di dalam tubuh namun hanya untuk jangka waktu yang terbatas (Gambar 2). Pada olahraga dengan intensitas rendah seperti jalan kaki atau lari-lari kecil, tubuh secara dominan akan menggunakan metabolisme aerob untuk menghasilkan energi. Apabila terjadi peningkatan intensitas olahraga hingga mencapai titik saat metabolisme energi aerob tidak lagi dapat memenuhi kebutuhan energi sesuai dengan laju yang dibutuhkan, maka energi secara anaerob akan diperoleh dari simpanan fosfokreatin (PCr) dan juga karbohidrat yang tersimpan sebagai glikogen di dalam otot. Menurut Lehninger (1994), otot rangka mengandung fosfokreatin yang dapat secara cepat mengisi gugus fosfat pada ATP, namun hanya mampu menyediakan energi selama 10 detik pada olahraga maksimal (Gambar 2). PCr dipecah menjadi fosfat dan kreatin oleh enzim kreatin kinase,

3 6 selanjutnya fosfat diikat dengan ADP menjadi ATP. Pada saat kontraksi ATP dipecah menjadi ADP dan fosfat diikat kembali oleh kreatin menjadi fosfokreatin pada saat pemulihan, dengan reaksi sebagai berikut: PCr + ADP kreatin + ATP ATP (mol/min) Gambar 2. ATP dibandingkan dengan ketahanan maksimal otot saat berolahraga ( Pembentukan energi merupakan metabolisme yang kompleks. Glukosa mengalami tahap glikolisis menjadi asam piruvat akan masuk menuju siklus Krebs. Namun sebelum itu, asam piruvat perlu dioksidasi terlebih dahulu menjadi asetil KoA. Proses ini disebut juga dekarboksilasi oksidatif karena menggunakan oksigen sebagai oksidatornya (aerob) dan berlangsung di dalam matriks mitokondria. Tahapan ini merupakan tahap penggabungan asam piruvat (3C) yang terbentuk dari proses glikolisis dengan koenzim A sehingga terbentuk asetil KoA (2C). Hasil akhir dekarboksilasi oksidatif berupa 2 molekul asetil KoA dan 2 molekul NADH, serta hasil sampingan 2 molekul CO 2. Asetil KoA kemudian masuk ke dalam rangkaian siklus Krebs atau siklus asam trikarboksilat (TCA cycle). Siklus ini dilalui sebanyak dua kali karena terdapat 2 molekul asetil KoA yang masuk melaluinya. Hasil akhir siklus ini berupa 6 molekul NADH, 2 molekul FADH 2, 2 molekul ATP, dan 4 molekul CO 2. Sebagian besar tahap glikolisis dan siklus Krebs merupakan reaksi redoks, yang terdapat enzim dehidrogenase untuk mentransfer elektron dari substrat ke NAD + menjadi NADH (Toha 2005, Lehninger 1990). Rantai transpor elektron adalah tahapan terakhir dari reaksi respirasi sel aerob yang meliputi proses perpindahan elektron dari molekul donor (seperti NADH) menuju penerima elektron terakhir, yaitu oksigen. Proses ini berlangsung pada membran bagian dalam mitokondria. Molekul yang berperan penting dalam reaksi ini adalah NADH dan FADH 2, yang telah dihasilkan pada reaksi glikolisis, dekarboksilasi oksidatif, dan siklus Krebs. Di samping itu terdapat molekul lain yang ikut berperan, yaitu molekul oksigen, koenzim Q (ubiquinone), sitokrom b, sitokrom

4 7 c, dan sitokrom a. Pertama-tama NADH dan FADH 2 mengalami oksidasi, dan elektron berenergi tinggi yang berasal dari reaksi oksidasi ini ditransfer ke koenzim Q. Energi yang dihasilkan ketika NADH dan FADH 2 melepaskan elektronnya cukup besar untuk menyatukan ADP dan fosfat anorganik menjadi ATP. Kemudian koenzim Q dioksidasi oleh sitokrom b. Selain melepaskan elektron, koenzim Q juga melepaskan 2 ion H +. Setelah itu sitokrom b dioksidasi oleh sitokrom c. Energi yang dihasilkan dari proses oksidasi sitokrom b oleh sitokrom c juga menghasilkan cukup energi untuk menyatukan ADP dan fosfat anorganik menjadi ATP. Kemudian sitokrom c mereduksi sitokrom a, dan ini merupakan akhir dari rantai transpor elektron. Sitokrom a ini kemudian akan dioksidasi oleh sebuah atom oksigen, yang merupakan zat yang paling elektronegatif dalam rantai tersebut, dan merupakan akseptor terakhir elektron. Setelah menerima elektron dari sitokrom a, oksigen ini kemudian bergabung dengan ion H + yang dihasilkan dari oksidasi koenzim Q oleh sitokrom b membentuk air (H 2 O). Oksidasi yang terakhir ini akan menghasilkan energi yang cukup besar untuk dapat menyatukan ADP dan gugus fosfat organik menjadi ATP. Jadi, secara keseluruhan ada tiga tempat pada transpor elektron yang menghasilkan ATP (Lehninger 1990). Pada reaksi glikolisis sampai siklus Krebs, dihasilkan NADH dan FADH 2 masing-masing sebanyak 10 dan 2 molekul. Pada transpor elektron, ke-10 molekul NADH dan ke-2 molekul FADH 2 tersebut mengalami oksidasi sesuai reaksi berikut. 10 NADH + 5 O 2 10 NAD H 2 O 2 FADH 2 + O 2 2 FAD + 2 H 2 O Setiap oksidasi NADH menghasilkan kira-kira 3 ATP, sedangkan oksidasi FADH 2 menghasilkan 2 ATP, sehingga transpor elektron menghasilkan 34 ATP dan H 2 O. Selain itu, ditambah dengan 4 molekul ATP hasil glikolisis dan siklus Krebs, maka secara keseluruhan reaksi respirasi seluler menghasilkan total 38 ATP dari satu molekul glukosa. Ada 2 ATP yang dibutuhkan untuk melakukan transpor aktif, maka hasil bersih dari setiap respirasi seluler adalah 36 ATP (Lehninger 1990). Oksigen yang dibawa ke dalam sel melalui sistem peredaran darah berperan penting agar proses respirasi selular secara aerob dapat berjalan secara normal. Molekul ini memegang peranan penting sebagai penerima elektron terakhir pada tahap transpor elektron. Oksigen akan bereaksi dengan 4 H + dan menghasilkan dua molekul H 2 O. Apabila tidak terdapat molekul oksigen yang menangkap elektron dari protein kompleks yang terakhir (sitokrom a), elektron akan tetap berikatan pada protein tersebut. Hal tersebut menyebabkan molekul NADH tidak dapat mentransfer elektronnya dan tetap dalam bentuk tereduksi sehingga tidak dapat melepas energinya dan tidak dapat kembali ke siklus Krebs. Oleh karena itu, siklus Krebs akan terhenti dan ATP tidak akan diproduksi lagi pada mitokondria. Akibat ketidaktersediaan oksigen, setelah proses glikolisis yang berlangsung secara anaerob (tanpa oksigen), asam piruvat sebagai hasil akhir glikolisis akan melalui tahap fermentasi laktat. Berikut merupakan skema singkat fermentasi asam laktat.

5 8 2 C 2 H 3 OCOOH + 2 NADH 2 2 C 2 H 5 OCOOH + 2 NAD Asam Piruvat Asam Laktat Hasil akhir fermentasi ini hanya menghasilkan 2 molekul ATP dari satu molekul glukosa yang diuraikan. Jumlah ini kecil jika dibandingkan dengan respirasi aerob yang menghasilkan 38 ATP. Fermentasi asam laktat ini mempengaruhi jaringan otot yang tiba-tiba harus berkontraksi kuat untuk mengeluarkan gas karbondioksida (CO 2 ) dari otot. Persediaan oksigen yang terbatas ditambah dengan pengeluaran CO 2 yang terbatas pula akan mengakibatkan asam laktat yang terbentuk semakin menumpuk. Timbunan ini akan berpengaruh terhadap penurunan ph otot sehingga kapasitas serat otot menurun dan akan membuat tubuh semakin lama menjadi pegal, terasa lelah, dan sakit, serta napas pun akan terengah-engah untuk mengatasi oksigen yang defisit selama proses anaerob berlangsung. Minuman Beroksigen dan Performa saat Berolahraga Minuman beroksigen umumnya mengandung oksigen minimal 80 ppm. Air segar dari mata air pegunungan hanya mengandung ppm oksigen dan semakin menurun menjadi 5-7 ppm pada air yang telah diolah untuk diminum (Speit et al 2002). Prinsip proses produksi air minum beroksigen serupa dengan pembuatan air minum dalam kemasan (AMDK) secara umum. Pada air minum beroksigen, terdapat penambahan O 2 terlarut yang diinjeksi ke dalam botol. Pada tahap awal pembuatan dilakukan proses pemurnian air terlebih dahulu. Proses ini menggunakan sistem UFO (Ultraviolet, Filterisasi dan Ozonisasi) yang dikombinasikan dengan sistem RO (Reverse Osmosis) atau lebih sering disebut sebagai sistem UFO-RO bertujuan untuk menghilangkan kontaminan berupa partikel kecil, seperti bakteri, lemak, protein. Selanjutnya dilakukan tahap pemurnian dan injeksi O 2. Proses injeksi tersebut dilakukan pada kondisi kedap udara, suhu rendah dan menggunakan tekanan tinggi. Ketahanan (endurance) yang mempengaruhi performa sangat penting dikelola untuk melawan kelelahan ketika berolahraga. Ketahanan berolahraga dipengaruhi oleh beberapa faktor, seperti VO 2 max, waktu mencapai ambang anaerobik dan waktu mencapai lelah.vo 2 max yang menggambarkan ketahanan kardiorespiratori adalah kemampuan maksimal seseorang untuk mengkonsumsi oksigen, biasanya dicapai ketika seseorang melakukan aktivitas sampai lelah. Adapun ambang anaerobik adalah titik permulaan dari akumulasi asam laktat (Mc Ardle et al2006). Penelitian keamanan dan manfaat minuman beroksigen terhadap performa saat berolahraga maupun pengaruhnya terhadap kadar saturasi oksigen (SpO 2 ) telah dilakukan (Tabel 2). SpO 2 adalah ukuran relatif dari jumlah oksigen, merupakan persentase hemoglobin yang mengikat oksigen dalam darah. Kadar SpO 2 normal adalah % sesuai dengan tekanan parsial oksigen (PaO 2 ) yaitu sekitar mmhg (Price dan Wilson 2006).

6 9 Penyerapan Oksigen PadaSaluranPencernaan Berbagai penelitian telah membuktikan bahwa asupan oksigen melalui saluran pencernaan dapat diserap oleh usus. Penyerapan oksigen pada saluran pencernaan diawali oleh penelitian Gurskaya dan Ivanov (1961) yang menunjukkan bahwa oksigen dapat diserap oleh usus secara difusi pasif. Forth dan Adam (2001), mengamati adanya peningkatan tekanan parsial oksigen dalam vena porta hepatica kelinci setelah diberi minum air berkadar oksigen 80 ppm, yaitu terjadi peningkatan tekanan parsial oksigen di pembuluh darah vena porta hepatica sebesar 10 mmhg dari 58 mmhg menjadi 68 mmhg. Hal ini juga membuktikan bahwa oksigen dari air minum beroksigen dapat masuk ke dalam sistem peredaran darah melalui saluran pencernaan. Kadar oksigen 80 ppm selanjutnya menjadi acuan minimal bagi industri minuman beroksigen. Adanya kekuatiran hilangnya oksigen dalam air sebelum sampai ke usus dijawab oleh Nestle et al (2004). Penelitiannya dengan teknik Magnetic Resonance Imaging (MRI) membuktikan bahwa pelepasan oksigen (outgasing) dari dalam mulut sampai ke lambung terjadi sangat lambat. Penelitian tersebut juga membuktikan bahwa meminum air beroksigen yang kandungan CO 2 yang rendah, dapat meningkatkan jumlah oksigen pada lumen oral cavity dan usus. Oksigen dari air minum beroksigen masuk melalui mulut, kerongkongan, lambung dan kemudian mengalami penyerapan di usus sebagaimana penelitian Forth dan Adam (2001). Menurut Pakdaman (1985), oksigen yang telah diserap oleh usus tersebut akan menuju vena porta lalu ke hati, kemudian diteruskan ke jantung. Oksigen dalam darah dari jantung akan disirkulasikan ke sel-sel tubuh yang selanjutnya digunakan untuk pembentukan energi berupa ATP (Gambar 3). Gambar 3 Penyerapan oksigen di dalam saluran pencernaan (Pakdaman 1985)

7 10 Tabel 2 Penelitian-penelitian minuman beroksigen terhadap performa saat berolahraga dan kesehatan No Pengarang/Judul Subyek Pengukuran Tes Intervensi Desain Hasil A. Penelitian Minuman Beroksigen terhadap Performa Saat Berolahraga 1. Duncan (1997) Fluid replacement during exercise: Physiologic and biochemical benefits of oxygenated enhanced water 2. Willmert (2001) Comparing the effects on physical performance when superoxygenated water is consumed vs. regular bottled water. 3. Willmert et al (2002) The effects of oxygenated water on exercise physiology during incremental exercise and recovery Atlet lari maraton 20 laki-laki, 5 perempuan Usia rata-rata: 39 tahun (21-54 tahun) VO 2 max rata-rata: 56,7 ml/kg/menit 8 laki-laki, 4 perempuan Usia rata-rata lakilaki: 20 tahun Usia rata-rata lakilaki: 21 tahun VO 2 max rata-rata: 47 ml/kg/menit 6 laki-laki, 6 perempuan Usia rata-rata lakilaki: 20 tahun Usia rata-rata lakilaki: 21 tahun Waktu mencapai kelelahan VO 2 max VO 2 max 5K time Treadmill (Maximal Test) Modifikasi Protokol Bruce Treadmill (Maximal Test) Protokol Bruce 400 ml (3x/hari) selama 6 hari (uji lab) 200 ml setiap 15 menit selama 90 menit tes Submax 400 ml, 15 tes 5K time 500 ml diminum 15 tes 500 ml diminum 15 tes double blind, crossover Diet, minum, dan olahraga tidak dikontrol Diet, olahraga dan waktu tidur dikontrol saat melakukan tes Puasa 12 jam sebelum tes double blind, crossover double blind, crossover Waktu mencapai kelelahan meningkat 15 detik pada pada tes lari 5K Tidak memberikan pengaruh yang signifikan pada peningkatan VO 2 max Sampel yang digunakan hanya mengandung 19,2 mmol/l oksigen (tidak sesuai dengan yang diklaim). Tidak memberikan pengaruh yang signifikan pada peningkatan VO 2 max Sampel yang digunakan hanya mengandung 19,2 mmol/l oksigen (tidak sesuai dengan yang diklaim)

8 11 No Pengarang/Judul Subyek Pengukuran Tes Intervensi Desain Hasil 4. Mielke (2004) Oxygenated water and exercise performance. 5. Fuller (2010) The Effects of Activated Stabilized Oxygen on Aerobic Endurance Division II Collegiate Male Soccer Players 8 laki-laki, 7 perempuan VO 2 max rata-rata: 55 ml/kg/menit 20 laki-laki atlet sepak bola VO 2 max VO 2 max SpO 2 Treadmill (Sub Maximal Test) Treadmill (Maximal Test) Protokol Astrand and Rodahl 600 ml diminum 15 tes 1200 ml/hari selama 3 hari sebelum tes 500 ml diminum 15 tes double blind, crossover Subyek berpuasa 3 jam sebelum tes double blind, crossover Tidak memberikan pengaruh yang signifikan pada peningkatan VO 2 max Sampel yang digunakan hanya mengandung 46% oksigen lebih tinggi dari air biasa (tidak sesuai dengan yang diklaim, yaitu mengandung oksigen 10x dari air biasa). Tidak memberikan pengaruh yang signifikan pada peningkatan VO 2 max dan SpO 2, namun dapat meningkatkan waktu mempertahankan kelelahan selama detik (p =0.072). 6. Jenkins et al (2001). Effect of Oxygenited Water on Percent Oxygen Saturation and Performance During Exercise 20 orang (10 lakilaki dan 10 perempuan) VO 2 max SpO 2 Sepeda ergometer 500 ml, diminum 15 tes Doubleblindcross-over Subyek yang meminum air beroksigen memiliki 4% SpO 2 lebih tinggi dibandingkan plasebo. Waktu kelelahan maksimal meningkat, ketika subyek yang lebih terlatih dipisahkan (V0 2 max>47ml/kg/menit)

9 12 No Pengarang/Judul Subyek Pengukuran Tes Intervensi Desain Hasil 7. Ellyana et al (2011) Perbedaan Pengaruh Air Beroksigen Tinggi dengan Air Mineral terhadap Saturasi Oksigen dan ph Urin Studi Eksperimental terhadap Sukarelawan Setelah Berolahraga. 46 laki-laki (23 orang per kelompok) 8. Pitoyo (2005) 10 perempuan, 14 laki-laki, tahun 3 kelompok: - 80 ppm : ppm : ppm : 5 SpO 2 diukur sebelum dan 20 menit sesudah perlakuan sampel VO 2 max, time to fatigue (waktu mencapai kelelahan), denyut nadi max dan tekanan darah max Lari cepat 100 m Treadmill 600 ml air minum beroksigen 80 &130 ppm, selama 12 hari Plasebo (<10 ppm), 7 hari Crossover, dengan plasebo. Crossover dilakukan pada kedua kelompok setelah 24 jam. double blinded Terdapat perbedaan SpO 2 yang bermakna (p=0,002) antara sebelum dan setelah pemberian air beroksigen tinggi, tetapi pada pemberian air mineral tidak terdapat perbedaan bermakna (p=0,059). Tidak ada peningkatan signifikan baik pada parameter VO 2 max, time to fatigue (waktu mencapai kelelahan), denyut nadi max maupun tekanan darah max. 8. Cyntia (2005) 10 perempuan, 14 laki-laki, tahun 3 kelompok: - 80 ppm : ppm : ppm : 5 NADP Deproteinasi dan pengukuran dengan spektro fotometer 80 &130 ppm, selama 12 hari Plasebo (<10 ppm), 7 hari double blinded NADP darah manusia menurun dibandingkan perlakuan plasebo. Penurunan NADP tersebut adanya kemungkinan peningkatan sintesis NADPH.

10 13 No Pengarang/Judul Subyek Pengukuran Tes Intervensi Desain Hasil B. Penelitian Keamanan Minuman Beroksigen 1. Schoenberg et al (2002) The Generation of Oxygen Radicals after Drinking of Oxygenated Water. 2. Gruber et al (2004) The Influence of Oxygenated Water on The Immune Status, Liver Enzymes, and The Generation of Oxygen Radicals: A Prospective, Randomised, Blinded Clinical Study. 3. Speit et al (2002) Oxygenated Water Does Not Induce Genotoxic Effects in the Comet Assay. 66 orang dalam 2 konsentrasi sampel (sekitar 15 orang per kelompok) 24 orang (18-63 tahun), dibagi 2 kelompok (@ 12 orang) 8 orang (23-42 tahun) Sel Tikus (V79 Chinese hamster cells) Radikal bebas (Ascorbyl radicals) Darah (hemoglobin, hematokrit, eritrosit, leukosit, trombosit, asam urat) Vitamins (A,C,E) Darah (hemoglobin, hematokrit, eritrosit, leukosit, trombosit, asam urat) Hati (ALT, AST, Gamma-GT Bilirubin, Alkaline phosphatase) Radikal bebas (Ascorbyl radicals) Sel Imun(CD3,4,8,16/56,19, 45RA/RO) Kerusakan DNA sel limfosit Metode standar Metode standar Alkaline comet assay (sel elektroforesis gel tunggal). 300 ml air beroksigen 3 kali per hari selama 21 hari (15 dan 30 mg O 2 /L) 500 ml air beroksigen 3 kali per hari selama 28 hari (190 mg O 2 /L) Manusia : 500 ml (70 mg O 2 /L) sampel diminum 30 dan 60 menit sebelum pengambilan darah blinded double blinded Manusia:Rando mized, double blinded Sampai H-21 tidak meningkatkan radikal bebas. Tidak memberikan efek yang membahayakan bagi kesehatan hati, darah dan sistem imun. Tidak berbeda signifikan antara H0 dan setelah perlakuan (H28) terhadap parameterparameter yang diteliti. Secara in vivo dan in vitro tidak memberikan bukti adanya efek genotoksik dari air beroksigen.

11 14 No Pengarang/Judul Subyek Pengukuran Tes Intervensi Desain Hasil 4. Fitriany (2005) Konsumsi Air Minum Penambah Oksigen Tidak Menyebabkan Kerusakan DNA pada Sel Limfosit Tikus dan Manusia 10 perempuan, 14 laki-lak, tahun 3 kelompok, sbb : - 80 ppm : ppm : ppm : 5 Tikus Sprague- Dowley (20ekor) Kerusakan DNA sel limfosit Alkaline comet assay (sel elektroforesis geltunggal). Manusia: 385 ml, 2 kali sehari selama 12 hari Tikus : ml/hari, O 2 sekitar 15-27%. double blinded Tanpa plasebo, dilakukan pengukuran parameter sebelum dan setelah intervensi Tidak berpengaruh nyata pada migrasi DNA (p=0.05), yang berarti tidak menginduksi timbulnya kerusakan DNA. Keterangan : - 5K : tes lari menempuh jarak 5000 m - VO 2 max : kemampuan maksimal seseorang untuk memasukkan oksigen, yang biasanya dicapai ketika seseorang melakukan aktivitas sampai lelah. - SpO 2 : saturasi oksigen, prameter tersebut mengukur persentase hemoglobin mengikat oksigen dalam aliran darah.