Lampiran 1. Pembuatan Media Pertumbuhan. Untuk membuat larutan f/2-si Guillard, sebelumnya terlebih dahulu disiapkan

Transkripsi

1 LAMPIRAN

2 63 Lampiran 1. Pembuatan Media Pertumbuhan a. Media f/2-si Guillard Untuk membuat larutan f/2-si Guillard, sebelumnya terlebih dahulu disiapkan larutan stok dengan komposisi seperti dalam Tabel 2. Untuk pembuatan 1 L media f/2-si Guillard, masukkan 950 ml air laut steril ke dalam labu Erlenmeyer 1000 ml, lalu tambahkan 1 ml larutan stok NaNO 3, 1 ml larutan stok Na 2 HPO 4.7H 2 O, 0,5 ml vitamin, dan 1 ml trace element. Campuran larutan diaduk, kemudian tambahkan air laut steril hingga volume larutan total menjadi 1000 ml. Tabel 2. Komposisi larutan stok media f/2-si Komposisi Na2SiO 3. 9H 2 0 NaNO 3 NaH 2 PO 4.7H 2 O Vitamin* Trace element** Larutan Stok 3 g /100 ml 7,5 g/100 ml 0,5 g/100 ml 100 ml 100 ml

3 64 Keterangan *) Pembuatan Vitamin Untuk membuat 100 ml larutan vitamin, masing-masing larutan stok dari biotin dan sianokobalamin sebanyak 0,1 ml ditambahkan pada labu erlenmeyer yang berisi 60 ml akuades. Kemudian 20 mg thiamin-hcl ditambahkan, diaduk hingga seluruh thiamin larut, setelah itu ditambahkan akuades hingga volumenya mencapai 100 ml. Tabel 3. Komposisi larutan stok untuk vitamin Komposisi vitamin Biotin (vit H) Cyanokobalamin (B12) Larutan Stok 0,1 g/100 ml 0,1 g/100 ml **) Pembuatan Trace Element Untuk pembuatan 100 ml unsur kelumit, sebanyak 60 ml akuades dalam labu ukur ditambahkan Na 2 EDTA sebanyak 0,315 g, dan FeCl 3.6H 2 O sebanyak 0,436 g. Setelah padatan larut ditambahkan larutan stok MnCl 2.4H 2 O, CuSO 4.5H 2 O, ZnSO 4.7H 2 O, CoCl 2.6H 2 O, NaMoO 4.2H 2 O masing-masing sebanyak 0,1 ml, selanjutnya ditambahkan akuades hingga volum totalnya menjadi 100 ml.

4 65 Tabel 4. Komposisi trace element Komposisi Larutan Stok Na 2 -EDTA - FeCl 3.6H 2 O - MnCl 2.4H 2 O CuSO 4.5H 2 O ZnSO 4.7H 2 O CoCl 2.6H 2 O NaMoO 4.2H g/ 100 ml 0,98 g/100 ml 2,2 g/100 ml 0,1 g/100 ml 0,63 g/100 ml b. Pembuatan Media Nutrient Agar (NA) Sebanyak 2 g NA di masukkan dalam Labu Erlenmeyer 250 ml, dilarutkan dalam akuades hingga volume 100 ml. Larutan media NA kemudian disterilisasi menggunakan autoclave pada suhu C selama 15 menit. Dalam keadaan hangat ( C), tuangkan sekitar 20 ml media steril tersebut dalam cawan petri steril lalu biarkan dingin dan memadat. Media NA siap digunakan untuk peremajaan bakteri dengan menggunakan metode penggoresan menggunakan jarum ose.

5 66 Lampiran 2. Pembuatan Pereaksi Visualisasi Uji KLT a. Pereaksi Ninhidrin Sebanyak 0.3 g ninhidrin dilarutkan dalam 100 ml n-butanol dan ditambahkan 3 ml asam asetat glasial. b. Pereaksi Serium Sulfat Larutan terdiri dari serium (IV) sulfat 10% dan asam sulfat 15% dalam pelarut akuades. Setelah disemprotkan dengan pereaksi, plat dipanaskan pada suhu 120 o C selama beberapa menit sampai bercak tampak jelas. c. Pereaksi Dragendorff Komposisi pereaksi dragendorff terdiri dari larutan a (1,7 gram bismut (III) nitrat dan 20 gram asam tartarat dilarutkan dalam 80 ml akuades) dan larutan b (16 gram KI dilarukan dalam 40 ml akuades). Larutan a dicampur dengan larutan b (1:1) sebagai larutan stok. Larutan a dan b stabil untuk beberapa bulan jika disimpan dalam lemari pendingin. Larutan untuk visualisasi KLT : 10 gram asam tartarat dilarutkan dalam 50 ml akuades kemudian ditambah dengan 10 ml larutan stok.

6 67 Lampiran 3. Spektrum NMR a. Spektrum 1 H NMR F2.2/3 (Asam Cis-eikos-9-enoat)

7 b. Spektrum 1 H NMR Asam Cis-eikos-9-enoat Prediksi ChemBio Draw Ultra

8 c. Spektrum 13 C NMR F2.2/3 (Asam Cis-eikos-9-enoat) 69

9 d. Spektrum 13 C NMR Asam Cis-eikos-9-enoat Prediksi ChemBio Draw Ultra

10 71 e. Spektrum 1 H- 1 H COSY F2.2/3 (Asam Cis-eikos-9-enoat) H 3 C III II I 2 O 1 OH 1 H- 1 H COSY

11 72 f. Spektrum HMBC F2.2/3 (Asam Cis-eikos-9-enoat) H 3 C III II I 2 O 1 OH HMBC

12 g. Konstanta Kopling Pada Ikatan Rangkap F2.2/3 (Asam Cis-eikos-9- enoat) 73

13 74 h. Perbandingan 1 H NMR Asam Cis-eikos-9-enoat (C 20 H 38 O 2 ) dan Asam Linoleat (C 18 H 34 O 2 )

14 75 Lampiran 4. Perbandingan Spektrum FTIR Asam Linoleat dan Asam Ciseikos-9-enoat Keterangan

15 Lampiran 5. Diagram Alir Prosedur Penelitian Biomassa Oscillatoria sp. - diekstraksi dengan DCM- MeOH (1-1) - dipartisi dengan air - dipekatkan Fase air Fase organik Ekstrak pekat Ekstrak bioaktif Fraksi bioaktif Senyawa target - dipekatkan Sruktur senyawa - diuji bioaktivitas terhadap E. coli resisten - difraksinasi menggunakan MPLC - tiap fraski diuji bioaktivitasnya terhadap E. coli resisten - dilakukan pemurnian lebih lanjut menggunakan kromatografi kolom dan rekristalisasi - Dikarakterisasi menggunakan spektroskopi FTIR, 1 H NMR, 13 C NMR, dan 2D NMR