AHP MINGGU KE-3. Prof. Simon B W Ph.D.

Transkripsi

1 AHP MINGGU KE-3 Prof. Simon B W Ph.D.

2 TOTAL PROTEIN PRINSIP: BHN ORGANIK DIDESTRUKSI DGN H2SO4, TERBENTUK NH4SO4, LAR. DIDESTILASI DLM NaOH, UAP NH3 DITANGKAP ASAM BORAT, NITROGEN DLM LAR. DITETAPKAN DGN HCL ENCER. METODE INI UTK SAMPEL PDT & CAIR SPT: KONSENTRAT IKAN, ISOLAT DGN PERLAKUAN PENDAHULUAN TERTENTU.

3 TAHAP DESTRUKSI/DISTILASI

4 DESTRUKSI AUTOMATIS

5 TAHAP DISTILASI PROT.

6 PROT. METODE FORMOL. PRINSIP ANALISA: FILTRAT (PROT) YG TLH DINETRALKAN, BILA DI+KAN FORMALDEHIDE + REACT WITH GUGUS BASA (LYSINE), KEASAMAN FILTRAT NAIK, DITITER LAGI DGN NaOH & INDIKATOR PP, NAIKNYA KEASAMAN TSB SEIRING DGN KDR PROT BHN. % PROT = T X 0,17

7 NON PROT-NITROGEN = ASAM AMINO TERLARUT PRINSIP ANALISA: sampel esktrak dgn air, protein endapkan dgn 5% TCA, saring filtrat isi NPN tetapkan dgn Kjeldahl.

8 ELECTRIC MANTLE

9 PENGUKURAN TVBN & TMA KHUSUS UTK Produk IKAN & Produk olahannya

10 TOTAL VOLATILE BASE NITROGEN (TVBN) & TRIMETIL AMIN (TMA) PRINSIP ANALISA: sampel ekstrak 5% TCA, filtrat distilasi dgn NaOH 2M, destilat tangkap dgn HCl 0,01M, titer destilat dgn NaOH 0,01 M, hitung TVBN. UTK TMA, destilat hsl titrasi TVBN +kan formaldehid 16%,shg slrh komponen NH2 terikat formaldehid, titer kembali dgn NaOH 0,01M, hitung TMA.

11 PRINSIP KERJA TVN: Haluskan sampel (ikan/daging) +kan TCA 5%, sentrifus, filter. Destilat kumpulkan Distilasi destilat dgn NaOH 2M, tangkap dgn HCl 0,01 M +kan bbrp tetes merah fenol dlm destilat, TITER dgn NaOH 0,01M sampai titik akhir titrasi (LAR A) Hitung: TVN (mg/100g) : 14(300 +W)X (15 V1) X 0,01 X 100/4 5 TMA: +kan 1 ml formaldehid 16% utk setiap 10 ml Lar. A, kocok, TITER lagi dgn NaOH 0,01 M sampai akhir titrasi. Hitung TMA (mg/100 g): 14(300 +W)X V2 X 0,01 X 100/4 5 NOTE: 14 = BA Nitrogen, V1 = vol NaOH, V2 = vol NaOH ke2, W = jumlah air (g) dlm bhn/sampel; M = berat sampel.

12 METODE BIURET SAMPEL CAIR/LARUTAN: KECAP, SUSU DLL PRINSIP: Cu2+ MEMBENTUK kompleks dgn ikatan peptida (-CO-NH-) suatu protein terlarut menghslkan warna ungu diukur pada absorbans maks. 540 nm.

13 Peraksi biuret: larutan CuCO4.5H2O dlm basa (NaOH) dll. Lar. Protein STD. lar. Bovine serum albumin 5 mg/ml PRINSIP KERJA: Buat lar. STD 0; 0.1;0.2;0.4;0.6;0.8 dan 1 ml lar. Prot. STD. buat sampai 4 ml dgn aquades.

14 Tahap reaksi: 6 ml lar. Biuret campur ke dlm msg-2 lar. STD & blanko Inkubasi 37oC, 10 mnt, atau suhu kamar 30 mnt. Sampai warna ungu terbentuk. Ukur ABS 540 nm SAMPEL Jika sampel berupa cairan spt. lar. Prot. Konsentrat/ isolat protein yg tdk keruh cukup pengenceran saja.

15 Bila sampel berupa cairan keruh (ada endapan glukosa dsb), bahan hrs diendapkan dgn penambahan 1 ml TCA 10%. Prot mengendap, sentrifuse 300 rpm 10 mnt, endapan protein dikumpulkan, supernatan dibuang. Endapan di+kan etil eter 2 ml, campur rata, sentrifuse lagi, buang sisa TCA dgn dibiarkan suhu kamar.

16 Endapan protein di+kan 4 ml air, campur rata. +kan 6 ml lar. Biuret lakukan spt pada lar. STD protein. Ukur pada 520 nm. INGAT PERHITUNGKAN PENGENCERAN, HITUNG KADAR PROT, SPT PADA GULA REDUKSI.

17 Analisa PROT. DGN ALAT KJELTEC. Prinsip analisa: sama dgn metode kyeldahl. Prinsip kerja: Persiapan sample: timbang tepat sampel. Tahap detruksi: sampel masukkan labu kyeldahl, + kan 2 tablet kjeldahl & as. Sulfat pekat, destruksi selama 30 mnt suhu 420 0C sampel lar. Jernih. Bila berbuih, +kan lar. H202 5 ml. panaskan lagi. CARE/HATI-2. TAHAP DESTILASI; filtrat jernih masukkan dlm labu destilasi berisi 40%NaOH, distilasi selama 4 mnt, tangkap distilate dgn asam borat 25 ml berisi indikator. Tahap titrasi: titer lar ammo. Borate dgn as. Khlorida atau as. Sulfat 0,1 M sampel t.a.t, lar. Berwarna purplish-grey- end point. Tahap perhit: % N = 0,14 X A/ w. utk titer dgn lar. HCl. % N = 0,28 X B/w utk titer dgn lar. H2SO4. %Prot = % N X 100/%Nitrogen dlm prot. Mis: % N dlm prot utk beras = 16,81; F = 100/16,81 = 5,95. F umum = 6,25.

18 Exercise: self study If you have been asking to analyse sample, like: fruit milk drinks ( banana flavoured milk drinks. How to determine the amount of its protein content. And how about which the best method to analyse a protein content of samples like cheese and meat And how about sample such as: liquid waste from fish canning manufactures, explain.