TEHNIK ANALISA KROMATOGRAFI SEDERHANA

Transkripsi

1 TEHNIK ANALISA KROMATOGRAFI SEDERHANA

2 KROMATOGRAFI ADALAH SUATU TEHNIK PEMISAHAN, YG PERTAMA KALI DIPAKAI MEMISAHKAN ZAT-2 WARNA TANAMAN. KROMA= ZAT WARNA. PRINSIP YG MEMUNGKINKAN TEHNIK KROMATOGRAFI DIPAKAI DLM AHP ADALAH: MEMANIPULASI SIFAT-2 FISIK ZAT-2 YG MENYUSUN SUATU CAMPURAN PANGAN/ZAT PENYUSUN BAHAN PANGAN.

3 MANIPULASI SIFAT FISIK ZAT PENYUSUN BHN PANGANS ADL: 1. TENDENSI MOLEKUL DARI SUATU ZAT UTK LARUT DLM SUATU PELARUT/CAIRAN. 2. TENDENSI MOLEKUL DARI SUATU ZAT UTK DAPAT TERADSORPSI PADA BUTIR-2 ZAT PADAT YG HALUS DGN PEMUKAAN YG LUAS 3. TENDENSI MOLEKUL DARI SUATU ZAT UNTUK MASUK KE FASE UAP/MENGUAP.

4 KRN PERBEDAAN SATU/LEBIH DAI SIFAT-2 FISIK TADI, CAMPURAN BERBAGAI ZAT DAPAT DIPISAHKAN DALAM SUATU SISTEM YG BERGERAK SECARA KONTINYU. DPT PULA DIKATAKAN TIDAK ADA DUA ZAT ATAU LEBIH YG MEMILIKI SIFAT FISIK YG SAMA. OLEH SEBAB ITU PEMISAHAN SUATU CAMPURAN ZAT DAPAT SELALU DILAKUKAN.

5 CONTOH: GLUKOSA, FRUKTOSA DAN SUKROSA ATAU GULA SEDERHANA LAINNYA SELALU DAPAT DIPISAHKAN DLM SUATU CAMPURAN ZAT YG MENGANDUNG GULA SEDERHANA TSB DGN TEHNIK KROMATOGRAFI. DEMIKIAN PULA UTK SUATU ZAT CAMPURAN/SENYAWA CAMPURAN LAINNYA.

6 POLARITAS DLM ILMU KROMATOGRAFI ARTI POLARITAS: ADANYA PEMISAHAN KUTUB MUATAN POSITIF DAN NEGATIF DARI SUATU MOLEKUL AKIBAT TERBENTUKNYA KONFIGURASI TERTENTU DARI ATOM- 2 YG MENYUSUNNYA. POLARITAS DLM KROMATOGRAFI DIPAKAI SEBAGAI PETUNJUK SIFAT PELARUT, ADSORBEN DAN SOLUTE.

7 POLARITAS ZAT PELARUT KONSTANTE DIELEKTRIK NAMA ZAT PELARUT 1,890 PE, HEKSAN, HEPTAN 2,023 SIKLOHEKSAN 2,238 KARBON TETRAKLORIDA,TRIKLOROETILEN, TOLUEN 2,284 BENZENE, DIKLOROMETANE 4,806 KLOROFORM 4,340 ETIL ETER 6,020 ETIL ASETAT 20,700 ASETON, n.propanol 24,300 ETANOL 33,620 METANOL 80,370 AIR

8 ADSORBENT= ZAT PENYERAP/PENGIKAT ADSORBENT DAPAT BERSIFAT POLAR ATAUPUN NON-POLAR ADSORBEN POLAR: SILIKA GEL, ALUMINA NON-POLAR: ARANG ATAU CHARCOAL PROSES ADSORPSI SAMA DGN PROSES TERLARUTNYA SOLUTE DALAM PELARUT YAITU: LIKE DISSOLVES LIKE CONTOH: ALKOHOL TERIKAT > KUAT d.p. eter TERHADAP ADSORBEN SILIKA GEL, SEBALIKNYA ETER >TERIKAT KUAT PADA CHARCOAL d.p. ALKOHOL

9 KROMATOGRAFI PARISI & ADSORPSI PEMISAHAN SCR KROMATOGRAFI PARTISI ATAUPUN ADSORPSI SANGAT DIPENGARUHI OLEH: PERBEDAAN POLARITAS SOLUTE YG DIPISAHKAN.

10 CHROMATOGRAPHY PAPER

11 TLC PLATES

12 PEMISAHAN JENIS GULA PERSIAPAN SAMPEL: LAKUKAN SAMA SPT PENETAPAN GULA REDUKSI LARUTAN STD: LAR. GLUKOSA, LAKTOSA, MANNOSA DSB 1% PELARUT/FASE MOBIL:

13 PELARUT/FASE MOBIL: 1. n-butanol:asam asetat:air: 4:1:5 (v/v) 2. n-butanol:asam asetat:eter:air: 9:6:3:1 (v/v) 3. isopropanol:piridin:air:asetat:8:8:4:1 4.butanol:etanol:air:40:11:19 5.etil asetat:asetat:air:3:3:1 6.etil asetat:piridin:air:10:4:3

14 PENDETEKSI: LARUTAN ANILIN-FTALAT: LAR G ASAM 0-FTALAT &0,91 ML ANILIN DLM CAMPURAN 48 ML n-butanol, 48 ML ETER & 4 ML AIR. SEMPROTANPD KROMATOGRAM KERING, PANASKAN PADA C selama 5 7 MENIT. PEREAKSI RESORSINOL: PEREAKSI ANILIN DIFENILAMIN:

15 PENGUKURAN DGN KROMATOGRAFI KERTAS PERSIAPAN KERTAS KROM.: 25X25 CM, GARIS 3 CM DR SATU SISI, TANDAI GRS TSB DGN PENSIL JARAK 2,5 CM, BERI TANDA SPOTTING: ISI BEJANA DGN ML DGN FASE MOBIL BIARKAN BEJANA JENUH, SAMBIL NUNGGU TETESKAN SAMPEL & LAR. STD PD TITIK-2NYA.

16 LANJUTAN KROM. KERTAS BESARNYA SPOT TETESAN 2 CM BIARKAN KERING ATAU PERCEPAT KERING DGN HAIR-DRYER KERTAS DIBENTUK SILINDER, JEPIT, LETAKKAN DLM BEJANA JENUH, LAKUKAN FASE DEVELOPING. BIARKAN FASE MOBIL MEMBASAHI KERTAS SAMPAI ¾ KERTAS, ANGKAT KERTAS KERINGKAN DETEKSI & PENGUKURAN Rf SEMPROT SPOT DGN LAR. PENDETEKSI

17 DETEKSI & PENGUKURAN Rf SEMPROT SPOT DGN LAR. PENDETEKSI, KERINGKAN, WARNA SPOT TERBENTUK, KERTAS PANASKAN 105 0C, tandai bag. Tengah spot dgn pensil ukur & bandingkan dgn Rf spot std. Rf = jarak start-spot/jarak start-finish.

18 TLC ACCECORIES

19 TLC REAGENT SRP

20 F.M SPRAY BOTTLE

21 GLASS CC

22 Alat pelapis adsorben

23 Cara pengembangan

24 Hasil pengembangan ganda

25 Al.kromatografi atsorbsi

26 PRINSIP PROSEDUR ANALISA: PEMISAHAN PEWARNA MAKANAN SCR KROMATOGRAFI KERTAS PEMISAHAN ASAM AMINO DARI SAMPEL DGN CARA KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS.