TESIS. Karya tulis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Magister dari Institut Teknologi Bandung. Oleh

Transkripsi

1 EFEK EKSTRAK AIR BUAH TIN (Ficus carica L.) TERHADAP KADAR GLUKOSA DARAH PUASA TIKUS PUTIH JANTAN GALUR WISTAR (Rattus norvegicus L.) YANG DIINDUKSI ALOKSAN MONOHIDRAT TESIS Karya tulis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Magister dari Institut Teknologi Bandung Oleh H. RIJAL KAMALUDDIN HUSAENI NIM: Program Studi Kimia INSTITUT TEKNOLOGI BANDUNG

2 2008 ii

3 Surat Pernyataan Keaslian Karya Tulis Yang bertanda tangan di bawah ini: Nama : H. Rijal Kamaluddin Husaeni NIM : Adalah penulis tesis dengan judul: Efek Ekstrak Air Buah Tin (Ficus carica L.) terhadap Kadar Glukosa Darah Puasa Tikus Putih Jantan Galur Wistar (Rattus norvegicus L.) yang Diinduksi Aloksan Monohidrat di bawah bimbingan Dr. Enny Ratnaningsih dan menyatakan bahwa tesis tersebut benarbenar hasil karya tulis berdasarkan data eksperimen dan perhitungan penulis selama melakukan Tugas Akhir Magister di Program Studi Kimia ITB. Bandung, 27 Juni 2008 Penulis, H. Rijal Kamaluddin Husaeni

4 dengan menyebut nama Allah Yang Maha Pengasih lagi Maha Penyayang dan Allah telah meratakan bumi untuk makhluk-nya di bumi itu ada buah-buahan dan pohon kurma yang mempunyai kelopak mayang dan biji-bijian yang berkulit dan bunga-bunga yang harum baunya maka nikmat Tuhan kamu yang manakah yang kamu dustakan? (Q.S. al-rahman, 55: 10 12) hadiahku untuk mamah pemilik rahim yang telah berjuang demi napasku dan untuk bapa yang telah kumandangkan azan saat kuhadir di dunia juga untuk semua raka dan rayi yang tiada henti curahkan segala cinta seraya tiada henti doakan nyawaku serta untuk belahan jiwa yang setia simpan separuh napasku juga untuk bumi dan langitku beserta segenap isinya yang telah mendidikku untuk senantiasa dapat bertahan hidup

5 ABSTRAK EFEK EKSTRAK AIR BUAH TIN (Ficus carica L.) TERHADAP KADAR GLUKOSA DARAH PUASA TIKUS PUTIH JANTAN GALUR WISTAR (Rattus norvegicus L.) YANG DIINDUKSI ALOKSAN MONOHIDRAT Oleh H. Rijal Kamaluddin Husaeni NIM: Tanaman tin (Ficus carica L.) merupakan tanaman khas timur tengah yang saat ini tengah dibudidayakan di Indonesia. Meskipun tergolong masih langka, tanaman ini telah dikenal sebagai tanaman yang mempunyai khasiat sebagai antidiabetes. Tujuan penelitian ini adalah untuk menilai efek pemberian ekstrak air buah tin terhadap kadar glukosa darah puasa (GDP) tikus putih jantan galur wistar (Rattus norvegicus L.) yang telah diinduksi aloksan monohidrat sehingga menderita diabetes dan menentukan efektivitasnya jika dibandingkan dengan pemberian metformin. Sebanyak 28 ekor hewan uji dengan kadar GDP normal dibagi menjadi tujuh kelompok, yaitu K.1, K.2, K.3, K.4, K.5, K.6 dan K.7. Hewan uji pada K.1 tidak diinduksi dengan aloksan monohidrat sehingga digunakan sebagai kontrol negatif, sedangkan sisanya yaitu K.2 sampai dengan K.7 diinduksi dengan aloksan monohidrat. K.2 digunakan sebagai kontrol positif, K.3 diberi metformin 50 mg/kgbb per oral setiap hari sehingga digunakan sebagai kelompok pembanding, sementara K.4, K.5, K.6 dan K.7 digunakan sebagai kelompok pengujian dan diberi ekstrak air buah tin dengan dosis berturutturut sebesar 25, 50, 100 dan 200 mg/kgbb per oral setiap hari. Kadar GDP pasca induksi diperiksa pada T 0, T 7, T 14 dan T 21 dengan glukotester elektrik dan dengan metoda Somogyi Nelson. Dari penelitian ini diperoleh rata-rata penurunan kadar GDP pasca induksi dari T 0 hingga T 14 untuk K.1 sampai dengan K.7 berturut-turut sebesar 2,39; 67,13; 524,77; 560,49; 411,47; 487,22; dan 406,68 mg/dl. Berdasarkan data tersebut, dapat disimpulkan bahwa pemberian ekstrak air buah tin selama 14 hari dapat menurunkan kadar GDP pada hewan uji yang telah diinduksi aloksan monohidrat. Efek hipoglikemik terbaik diberikan oleh pemberian ekstrak air buah tin dengan dosis 25 mg/kgbb per oral setiap hari, dengan persentase penurunan kadar GDP sebesar 85,24%. Kata kunci: diabetes melitus, buah tin, glukosa darah puasa, Somogyi Nelson, tikus albino jantan, aloksan monohidrat i

6 ABSTRACT THE EFFECT OF FIG (Ficus carica L.) FRUIT WATER EXTRACT ON THE FASTING BLOOD GLUCOSE RATE OF STRAIN MALE RAT (Rattus norvegicus L.) INDUCEED WITH ALLOXAN MONOHYDRATE By H. Rijal Kamaluddin Husaeni NIM: The fig plant (Ficus carica L.) was typically a Middle East plant that is being cultivated in Indonesia. Though the fig plant was still rare, it has been known that this plant having special quality as antidiabetes. The purpose of this research is to assess the effect of fig fruit water extract on fasting blood glucose (FBG) rate of white mouse male rats (Rattus norvegicus L.) induceed with alloxan monohydrate. The aim of this research is to determine fig fruit water extract effectiveness compared to metphormine, a commercial diabetic drug. Twenty eight test animals with normal FBG rate were used, which were divided to seven groups designated as K.1, K.2, K.3, K.4, K.5, K.6 and K.7. Groups K.1 were used as a control, and not induceed with alloxan monohydrate, while the others, groups K.2 to K.7 were fed used alloxan monohydrate to cause diabetes. Then K.2 was applied as positive control, K.3 was given by metphormine 50 mg/kgbb per oral utilized as a comparator group, whereas K.4, K.5, K.6 and K.7 were applied as test groups which were given a fig fruit water extract with 25, 50, 100 and 200 mg/kgbb dose per oral everyday respectively. The post induction FBG rates were investigated at T 0, T 7, T 14 and T 21 utilizing electrical glucotester and Somogyi Nelson method. The result that the average of post induction FBG rate decreased between T 0 and T 14 for K.1 to K.7, which were 2.39; 67.13; ; ; ; ; and mg/dl respectively. Based on these data, it could be concluded that the fig fruit water can reduce the FBG rate on test animals within 14 days of treatment. The best hypoglycemic effect was obtained on 25 mg/kgbb fig fruit water extract dose per oral everyday, with FBG rate decrease percentage of 85.24%. Keywords: diabetes mellitus, fig fruit, fasting blood glucose, Somogyi Nelson, male white rat, alloxan monohydrate ii

7 LEMBAR PENGESAHAN EFEK EKSTRAK AIR BUAH TIN (Ficus carica L.) TERHADAP KADAR GLUKOSA DARAH PUASA TIKUS PUTIH JANTAN GALUR WISTAR (Rattus norvegicus L.) YANG DIINDUKSI ALOKSAN MONOHIDRAT Oleh H. Rijal Kamaluddin Husaeni NIM: Program Studi Kimia Institut Teknologi Bandung Bandung, 27 Juni 2008 Menyetujui, Pembimbing Dr. Enny Ratnaningsih NIP iii

8 PEDOMAN PENGGUNAAN TESIS Tesis S2 yang tidak dipublikasikan terdaftar dan tersedia di Perpustakaan Institut Teknologi Bandung, dan terbuka untuk umum dengan ketentuan bahwa hak cipta ada pada pengarang dengan mengikuti aturan HaKI yang berlaku di Institut Teknologi Bandung. Referensi kepustakaan diperkenankan dicatat, tetapi pengutipan atau peringkasan hanya dapat dilakukan seizin pengarang dan harus disertai dengan kebiasaan ilmiah untuk menyebutkan sumbernya. Memperbanyak atau menerbitkan sebagian atau seluruh tesis haruslah seizin Dekan Sekolah Pascasarjana, Institut Teknologi Bandung. iv

9 KATA PENGANTAR Bismillahirrahmanirrahim, Allahumma Shalli ala Sayyidina Muhammad, Puji beserta syukur penulis panjatkan ke hadirat Allah SWT, pemilik segala ilmu pengetahuan, yang telah mencurahkan kasih sayang serta petunjuk Nya hingga penulis dapat menyelesaikan Tesis ini dengan segala keterbatasan ilmu dan waktu. Penulisan Tesis ini merupakan salah satu syarat dalam menempuh Ujian Magister di Program Studi Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Teknologi Bandung. Salam bakti dan cinta tiada terhingga tidak lupa penulis haturkan dengan tulus kepada kedua orangtua, K.H. Yayat Ruhiyat Sirodj dan Hj. Hindun Hindayani, serta kepada seluruh kakak, adik dan semua keponakan penulis, atas segala pengorbanan, pengertian, doa dan kasih sayang yang sangat berarti bagi penulis. Ucapan terimakasih dan penghargaan yang sebesar-besarnya penulis sampaikan kepada Dr. Enny Ratnaningsih, selaku dosen pembimbing yang telah banyak membimbing, membagikan ilmu pengetahuan dan membantu penulis dalam memecahkan berbagai permasalahan yang dihadapi selama penelitian ini. Pada kesempatan ini pula penulis mengucapkan terimakasih kepada: 1. Dirjen Mapenda Departemen Agama RI yang telah memberikan kesempatan kepada penulis untuk dapat menempuh pendidikan di Program Magister Kimia Kerjasama Depag ITB. Semoga ilmu yang diperoleh melalui program beasiswa ini bermanfaat di kemudian hari. 2. Dr. Akhmaloka selaku Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, ITB. 3. Dr. Hj. Dessy Natalia selaku Ketua Program Magister dan Doktor Kimia, ITB dan seluruh staf pengajar pada Program Studi Kimia, FMIPA, ITB. v

10 4. Dr. Rukman Hertadi selaku Kepala Laboratorium Biokimia, FMIPA, ITB. 5. dr. Hj. Siti Suparti dan seluruh karyawan di Laboratorium Farmakologi Klinik Fakultas Kedokteran Unpad di RSUP Dr. Hasan Sadikin Bandung. 6. Seluruh karyawan di Program Studi Kimia ITB yang telah banyak memberikan kemudahan kepada penulis hingga dapat menyelesaikan penelitian ini. 7. Seluruh rekan kerja di Laboratorium Penelitian Biokimia yang telah berbagi wawasan dan pengertian kepada penulis. 8. Seluruh rekan mahasiswa Program Magister Kimia Kerjasama Depag ITB Angkatan 2006 yang telah menjadi sahabat terbaik penulis selama ini. 9. Semua pihak yang telah membantu penulis dari awal sampai akhir, baik langsung maupun tidak langsung, yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu. Semoga semua kebaikan yang diberikan kepada penulis mendapatkan balasan yang berlipat ganda dari Allah SWT. Penulis sadar bahwa pada tesis ini masih terdapat banyak kekurangan. Untuk itu kritik dan saran sangat penulis nantikan. Akhir kata penulis berharap semoga tesis ini dapat memberikan manfaat bagi kita semua terutama bagi kemajuan ilmu pengetahuan. Amin. Bandung, 27 Juni 2008 Penulis, vi

11 DAFTAR ISI ABSTRAK... i ABSTRACT... ii LEMBAR PENGESAHAN... iii PEDOMAN PENGGUNAAN TESIS... iv KATA PENGANTAR... v DAFTAR ISI... vii DAFTAR LAMPIRAN... x DAFTAR GAMBAR... xi DAFTAR TABEL... xiv DAFTAR SINGKATAN... xv DAFTAR LAMBANG... xvi Bab I Pendahuluan... 1 I.1 Latar Belakang Penelitian... 1 I.2 Rumusan Masalah... 5 I.3 Tujuan Penelitian... 5 I.4 Manfaat Penelitian... 5 I.5 Ruang Lingkup Penelitian... 6 Bab II Tinjauan Pustaka... 7 II.1 Tanaman Tin (Ficus carica L.)... 7 II.1.1 Taksonomi Tanaman Tin... 7 II.1.2 Morfologi Tanaman Tin... 7 II.1.3 Kandungan Nutrisi dan Khasiat Tanaman Tin... 9 II.2 Glukosa dalam Darah II.3 Diabetes Melitus II.3.1 Pengertian Diabetes Melitus II.3.2 Jenis dan Penyebab Diabetes Melitus II Diabetes Melitus Tipe II Diabetes Melitus Tipe II.4 Pengaturan Kadar Glukosa Darah II.5 Pengujian Kadar Glukosa Darah Puasa II.6 Diabetes Aloksan II.6.1 Kimia Aloksan II.6.2 Farmakologi Aloksan vii

12 II.7 Obat Hipoglikemik Oral II.7.1 Pemicu Sekresi Insulin II Sulfonilurea II Glinid II.7.2 Penambah Sensitivitas Terhadap Insulin II Biguanid II Tiazolidinedion II.7.3 Inhibitor α Glukosidase II.8 Tikus Putih Galur Wistar (Rattus norvegicus L.) Bab III Metodologi Penelitian III.1 Alat-alat Penelitian III.2 Bahan-bahan Penelitian III.2.1 Tanaman Tin dan Hewan Uji III.2.2 Bahan-bahan Kimia III.2.3 Bahan-bahan Penunjang III.2.4 Penyediaan Bahan-bahan Penelitian III Larutan Aloksan Monohidrat III Larutan Arseno Molibdat III Larutan Barium Hidroksida 0,3 N III Larutan Etanol 10% III Larutan Etanol 95% III Larutan Glukosa Standar III Larutan Indikator Fenolftalein 1% III Larutan Somogyi Nelson A III Larutan Somogyi Nelson B III Larutan Somogyi Nelson C III Larutan Zink Sulfat Heksahidrat 5% III Suspensi Metformin 5 mg/ml III.3 Waktu dan Tempat Penelitian III.4 Metoda Penelitian III.4.1 Desain Penelitian III.4.2 Definisi Konsep dan Operasi Variabel III Definisi Konsep Variabel III Definisi Operasi Variabel III.4.3 Jumlah Sampel viii

13 III.5 Prosedur Penelitian III.5.1 Pembuatan Ekstrak Air Buah Tin (Ficus carica L.) III.5.2 Analisis Fitokimia III Uji Alkaloid III Uji Saponin III Uji Steroid dan Triterpenoid III.5.3 Perlakuan Terhadap Hewan Uji III.5.4 Pemeriksaan Kadar GDP III Pemeriksaan dengan Glukotester Elektrik III Pemeriksaan dengan Metoda Somogyi Nelson III.6 Analisis Data III.7 Diagram Alir Penelitian III.7.1 Pembuatan Ekstrak Air Buah Tin (Ficus carica L.) III.7.2 Perlakuan Terhadap Hewan Uji III.7.3 Pemeriksaan Kadar GDP dengan Metoda Somogyi Nelson Bab IV Hasil dan Pembahasan IV.1 Kegiatan Pendahuluan IV.2 Pembuatan Ekstrak Air Buah Tin IV.3 Perlakuan Terhadap Hewan Uji IV.4 Pemeriksaan Kadar GDP IV.5 Hasil Pemeriksaan Kadar GDP IV.5.1 Analisis Data Hasil Pemeriksaan GDP Pra Induksi IV.5.2 Analisis Data Hasil Pemeriksaan GDP pada T IV.5.3 Analisis Data Hasil Pemeriksaan GDP pada T IV.5.4 Analisis Data Hasil Pemeriksaan GDP pada T IV.6 Penurunan Kadar GDP dari T 0 ke T IV.7 Analisis Data Penurunan Kadar GDP dari T 0 ke T Bab V Kesimpulan V.1 Kesimpulan V.1.1 Kesimpulan Umum V.1.2 Kesimpulan Khusus V.2 Saran DAFTAR PUSTAKA LAMPIRAN ix

14 DAFTAR LAMPIRAN Lampiran A Kurva Standar Glukosa 69 Lampiran B Data Berat Badan Hewan Uji.. 70 Lampiran C Hasil Pemeriksaan Kadar GDP Pra Induksi 71 Lampiran D Hasil Pemeriksaan Kadar GDP Pasca Induksi pada T Lampiran E Hasil Pemeriksaan Kadar GDP Pasca Induksi pada T Lampiran F Hasil Pemeriksaan Kadar GDP Pasca Induksi pada T Lampiran G Hasil Pemeriksaan Kadar GDP Pasca Induksi pada T Lampiran H Analisis Statistik Perbandingan Rata-rata Kadar GDP dari 7 Kelompok Perlakuan Pra Induksi 76 Lampiran I Analisis Statistik Perbandingan Rata-rata Kadar GDP dari 7 Kelompok Perlakuan Pasca Induksi pada T Lampiran J Analisis Statistik Perbandingan Rata-rata Kadar GDP dari 7 Kelompok Perlakuan Pasca Induksi pada T Lampiran K Analisis Statistik Perbandingan Rata-rata Kadar GDP dari 7 Kelompok Perlakuan Pasca Induksi pada T Lampiran L Analisis Statistik Perbandingan Rata-rata Kadar GDP dari 7 Kelompok Perlakuan Pasca Induksi pada T Lampiran M Analisis Statistik Penurunan Kadar GDP Antara T 0 dan T Lampiran N Perbandingan Luas Permukaan Tubuh Beberapa Hewan Uji. 82 x

15 DAFTAR GAMBAR Gambar II.1. Gambar II.2. Gambar II.3. Tanaman tin (Ficus carica L.): (a) pohon tin lengkap dengan daunnya yang bercuping; (b) buah tin yang masih muda (berwarna hijau); (c) buah tin yang sudah matang (berwarna ungu).. 8 Biji-biji berwarna merah yang terdapat di dalam buah tin segar yang sudah dipotong.. 8 Struktur glukosa dalam proyeksi Harworth dengan model konformasi kursi. 10 Gambar II.4. Hormon insulin manusia 11 Gambar II.4. Gambar II.5. Gambar II.6. Struktur hormon insulin: (a) model pengisi ruang; dan (b) model pita Proses pengaturan keluar masuknya glukosa ke dalam sel oleh hormon insulin 12 Nilai toleransi glukosa untuk darah normal dan darah penderita DM tipe 1 (IDDM).. 17 Gambar II.7. Struktur molekul aloksan 19 Gambar II.8. Tikus putih galur wistar (Rattus norvegicus L.). 25 Gambar III.1. Gambar III.2. Gambar III.3. Gambar III.4. Gambar III.5. Gambar III.6. Glukotester Life Scan tipe Smart Scan dari Johnson & Johnson beserta strip yang digunakan untuk pengukuran kadar GDP hewan uji. 26 Buah tin segar sebelum dikeringkan: (a) sebelum dipotong; dan (b) sesudah dipotong 27 Tikus putih jantan galur wistar (Rattus norvegicus L.) yang digunakan sebagai hewan uji dalam penelitian Proses penetesan cuplikan darah hewan uji ke atas strip glukostester elektrik Life Scan tipe Smart Scan. 35 Tampilan nilai kadar GDP yang terbaca pada layar glukotester elektrik Life Scan tipe Smart Scan Prosedur pembuatan ekstrak air buah tin (Ficus carica L.) 38 xi

16 Gambar III.7. Perlakuan terhadap hewan uji tikus putih jantan galur wistar (Rattus norvegicus L.). 39 Gambar III.8. Prosedur pemeriksaan kadar GDP dengan metoda Somogyi Nelson. 40 Gambar IV.1. Warna ungu yang terbentuk setelah ekstrak eter buah tin diuji dengan Liebermann Burchard Gambar IV.2. Ekstrak air buah tin (Ficus carical.).. 43 Gambar IV.3. Gambar IV.4. Gambar IV.5. Gambar IV.6. Gambar IV.7. Gambar IV.8. Gambar IV.9. Perbandingan GDP tikus kelompok 1 pra induksi dan pasca induksi pada T 0, T 7, T 14 dan T Perbandingan GDP tikus kelompok 2 pra induksi dan pasca induksi pada T 0, T 7, T 14 dan T Perbandingan GDP tikus kelompok 3 pra induksi dan pasca induksi pada T 0, T 7, T 14 dan T Perbandingan GDP tikus kelompok 4 pra induksi dan pasca induksi pada T 0, T 7, T 14 dan T Perbandingan GDP tikus kelompok 5 pra induksi dan pasca induksi pada T 0, T 7, T 14 dan T Perbandingan GDP tikus kelompok 6 pra induksi dan pasca induksi pada T 0, T 7, T 14 dan T Perbandingan GDP tikus kelompok 7 pra induksi dan pasca induksi pada T 0, T 7, T 14 dan T Gambar IV.10. Perbandingan GDP kelompok 1 pasca induksi pada T 0 dan T Gambar IV.11. Perbandingan GDP kelompok 2 pasca induksi pada T 0 dan T Gambar IV.12. Perbandingan GDP kelompok 3 pasca induksi pada T 0 dan T Gambar IV.13. Perbandingan GDP kelompok 4 pasca induksi pada T 0 dan T Gambar IV.14. Perbandingan GDP kelompok 5 pasca induksi pada T 0 dan T xii

17 Gambar IV.15. Perbandingan GDP kelompok 6 pasca induksi pada T 0 dan T Gambar IV.16. Perbandingan GDP kelompok 7 pasca induksi pada T 0 dan T Gambar IV.17. Perbandingan rata-rata penurunan kadar glukosa darah puasa kelompok hewan uji.. 60 xiii

18 DAFTAR TABEL Tabel II.1. Kadar nutrisi yang terkandung di dalam setiap 100 gram buah tin kering tanpa dimasak 9 Tabel II.2. Kriteria diagnosis DM Tabel II.3. Kadar glukosa darah sewaktu dan glukosa darah puasa sebagai patokan screening dan diagnosis DM (mg/dl). 14 Tabel II.4. Nilai kadar glukosa darah puasa dengan metoda FBG sebagai ukuran diagnosis DM. 18 Tabel III.1. Volume larutan standar glukosa 1 mg/ml yang digunakan pada pengenceran larutan standar.. 29 Tabel IV.1. Pemeriksaan kandungan metabolit sekunder buah tin (Ficus carica L.) melalui penapisan fitokimia. 42 Tabel IV.2. Data hasil pemeriksaan glukosa darah puasa hewan uji pra induksi dan pasca induksi pada T 0, T 7, T 14 dan T Tabel IV.3. Data penurunan kadar GDP hewan uji pasca induksi pada T 0 (pra perlakuan) dan T 14 (pasca perlakuan). 56 xiv

19 DAFTAR SINGKATAN Singkatan Nama Pemakaian pertama kali pada halaman ADA American Diabetes Association 1 ADP Adenosin difosfat 11 ATP Adenosin trifosfat 11 DM Diabetes melitus 1 FBG Fasting Blood Glucose 17 GDP Glukosa darah puasa 5 IDDM Insulin dependent diabetes melitus 2 K.1 Kelompok 1 34 K.2 Kelompok 2 34 K.3 Kelompok 3 34 K.4 Kelompok 4 34 K.5 Kelompok 5 34 K.6 Kelompok 6 35 K.7 Kelompok 7 35 LDL Low Density Lipoprotein 22 NIDDM Non insulin dependent diabetes melitus 2 ph Point of hydrogen 18 PPARγ Peroxisome proliferator activated receptor gamma 23 WHO World Health Organization 1 xv

20 DAFTAR LAMBANG Lambang Nama Pemakaian pertama kali pada halaman % persen 1 α alpha 23 β beta 11 μl mikroliter 26 A s absorbansi standar 37 A u absorbansi cuplikan 37 C s konsentrasi standar 37 C u konsentrasi cuplikan 37 D s volume akhir di mana glukosa standar diencerkan 37 D u volume akhir di mana cuplikan diencerkan 37 G gram 9 M meter 7 Mg miligram 9 mg/dl miligram per desiliter 13 mg/hari miligram per hari 23 mg/kgbb miligram per kilogram berat badan 5 ml milliliter 26 mmol/l milimol per liter 17 N normal 29 Nm nanometer 32 o C derajat Celcius 7 R jumlah sampel 43 Rpm rotation per minute 26 T jumlah perlakuan 43 T 0 waktu pengamatan pra perlakuan 34 T 7 waktu pengamatan GDP pada hari ke 7 35 T 14 waktu pengamatan GDP pada hari ke T 21 waktu pengamatan GDP pada hari ke V u volume darah hewan uji 37 xvi